专利名称：连续分配柱层析分离紫杉醇工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺。
紫杉醇是由红豆杉科植物中分离出的一抗癌新药，其分离工艺多采用吸附柱层析或分配柱层析，即上一次分离完毕后，均需倒出柱中硅胶，洗涤、活化、工艺显得烦杂，且由于须频繁更换硅胶，成本高，在的批量生产中，更换清洗与活化脏硅胶工作量大，另一方面和紫杉醇结构相似，极难分离的三尖杉宁碱，国内外曾报道有中压柱，四氧化锇等工艺进行分离，但均不理想。英国化学家JhonMR报道用溴的氯仿液处理两者的混合物，反应时间必须在5分钟内停止，然后通过化学反应除去多余的溴，再用硅胶柱分离，可得紫杉醇纯品。如反应时间超出5分钟，即产生溴的成物，操作控制难度大。
本发明提供了一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺，采用不倒出柱中硅胶，用溶剂清洗杂质，溶剂恢复硅胶再生，同时采用瞬间溴穿越柱中硅胶样品层的技术方案，具有工艺新颖、简便、快速、节约成本、实用、利于大生产的优点。
本发明的目的是通过这样实现的本发明包括粗品柱洗脱液的分类、溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层、层析柱中硅胶的再生处理。
其具体工艺实施如下A、粗品柱洗脱液的分类粗品分离柱的洗脱液，用薄层检识只分成两类，薄层检识中点样是用含1％CMC-Na硅胶G板，氯仿一乙醇(9∶1)，显色剂用浓度为5％硫酸乙醇液喷雾，电热风显色，薄层检识后，紫杉醇斑点为一类，反之为一类，大者经结晶得含量达50％的半成品，小者重新上柱。
B、溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层取含量为50％的结晶混合物，加少量氯仿溶解，上样于硅胶柱，待样液渗入硅胶后，加入浓度为2％的溴氯仿液，待溴液渗入硅胶后，加脱脂棉封住，溴液渗入硅胶柱中形成红棕色带，在氯仿的洗脱下平行下移，3-5分钟即穿越样品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脱，48-12小时即可分离完毕，得到含量为98％紫杉醇纯品。
C、层析柱中硅胶的再生处理在粗品柱洗脱液的分类和溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层而样品分离完毕后，用6％乙醇氯仿液清洗硅胶中的杂质，然后用氯洗脱2-3小时，即可上样，如此连续分配柱层析。本发明展开剂用浓度比为9∶1∶2的氯仿一乙醇-2％溴仿液。本发明按卫生部药品标准WS-492(X-427)-97号文检验，含量大于98％。
发明采用瞬间溴穿越柱中硅胶样品层的技术方案，具有工艺新颖、简便、快速、节约成本、实用、利于大生产的优点。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
A、粗品柱洗脱液的分类粗品分离柱的洗脱液，用薄层检识只分成两类，薄层检识中点样是用含1％CMC-Na硅胶G板，氯仿一乙醇(9∶1)；显色剂用5％硫酸乙醇液喷雾，电热风显色，薄层检识后，紫杉醇斑点为一类，反之为一类。大者通过结晶得半成品，含量约达50％，小者重新上柱。
B、溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层。
取含量约为50％的混合物100g，加少量氯仿溶解，上样于100×12cm硅胶柱，待样液渗入硅胶后，加8cm厚的硅胶，再加一层滤纸，小心用直径2cm的玻管将2％溴氯仿液200ml从滤纸的中心加入，待溴液渗入硅胶后，加脱脂棉封住，压上石头(此时溴液渗入硅胶柱中形成1cm厚的红棕色带，在氯仿的洗脱下平行下移，3-5分钟即穿越样品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脱，48-12小时)即可分离完毕。
C、层析柱中硅胶的再生处理采用1.2×0.3m规格层析柱，装填硅胶40kg，待样品分离完毕后，不必倒出柱中硅胶，用6％乙醇氯仿液清洗硅胶中的杂质，然后用氯洗脱3小时，即可上样，如此连续分配柱层析，实践证明生产50％的半成品一年以上时间，均不需倒出柱中硅胶更换，分离成品的硅胶柱仍可使用10次以上。
本发明展开剂用浓度比为9∶1∶2的氯仿一乙醇-2％溴仿液。
本发明按卫生部药品标准WS-492(X-427)-97号文检验，含量大于98％。
本发明采用瞬间溴穿越柱中硅胶样品层的技术方案，具有工艺新颖、简便、快速、节约成本、实用、利于大生产的优点。
权利要求
1.一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺，其特征在于包括粗品柱洗脱液的分类、溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层、层析柱中硅胶的再生处理。
2.根据权利要求1所述的一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺，其特征在于其具体工艺实施如下A、粗品柱洗脱液的分类粗品分离柱的洗脱液，用薄层检识只分成两类，薄层检识中点样是用含1％CMC-Na硅胶G板，氯仿一乙醇(9∶1)，显色剂用浓度为5％硫酸乙醇液喷雾，电热风显色，薄层检识后，紫杉醇斑点为一类，反之为一类，大者经结晶得含量达50％的半成品，小者重新上柱。B、溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层取含量为50％的结晶混合物，加少量氯仿溶解，上样于硅胶柱，待样液渗入硅胶后，加入浓度为2％的溴氯仿液，待溴液渗入硅胶后，加脱脂棉封住，溴液渗入硅胶柱中形成红棕色带，在氯仿的洗脱下平行下移，3-5分钟即穿越样品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脱，48-12小时即可分离完毕，得到含量为98％紫杉醇纯品。
3.根据权利要求1或2所述的一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺，其特征在于层析柱中硅胶的再生处理是在粗品柱洗脱液的分类和溴穿越紫杉醇及三尖杉宁碱涨合物样品层而样品分离完毕后，用6％乙醇氯仿液清洗硅胶中的杂质，然后用氯洗脱2-3小时，即可上样，如此连续分配柱层析。
4.根据权利要求1或2所述的一种连续分配柱层析分离紫杉醇工艺，其特征在于展开剂用浓度比为9∶1∶2的氯仿一乙醇一2％溴仿液。
全文摘要
本发明采用不倒出层析柱中硅胶,而采用溶剂清洗杂质,溶剂恢复硅胶再生的方法,由1%粗品分离成含量为50%的半成品,再由半成品分离成98%以上成品,均采用连续上样的分配柱层析。对粗品柱流出含紫杉醇混合物的洗脱液,改变人们习惯系统分类的收集方式,而只分两类。对难分离物质三尖杉宁碱采用2%溴氯仿液瞬间穿越柱中混合物样品层,经和柱层原理基本相同的薄层技术检识,顺利得到紫杉醇纯品,含量大于98%。本工艺新颖、简便、快速、节约成本,利于大规模生产。
文档编号C07D305/00GK1340505SQ0011314
公开日2002年3月20日 申请日期2000年9月1日 优先权日2000年9月1日
发明者谈增毅 申请人:四川泰港生物科技(集团)股份有限公司