专利名称：三唑并－依泊昔酮的制作方法
技术领域：
本发明涉及依泊昔酮(epothilone)A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物。
有关依泊昔酮的化学综述例如可参见Nicolaou，Angew.Chem.Int.Ed.1998，Vol.37，2014-2045。
因此，本发明涉及式4a或4b之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物 4aR＝H，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基4bR＝CH3，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基其中R代表H、CH3，Z代表H、烷基、芳基、杂芳基。
根据本发明的三唑并噻唑依泊昔酮是非常有效的杀真菌药和高效力的细胞生长繁殖抑制剂，并具有有利的药理学性质。
烷基是指直链或支链C1-C6烷基，其可为单或者多取代的，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。取代基例如是C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基和卤素如溴、氯、氟和碘。
芳基是指单核或者多核芳香系统，其可为单或者多取代的，例如苯基、邻甲苯基、间甲苯基、对甲苯剂、邻二甲苯基、间二甲苯基、对二甲苯基、苄基、苯乙基和萘基。取代基例如是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基和卤素如溴、氯、氟和碘。
杂芳基是指单核或者多核杂芳香系统，其可为单或者多取代的，而且芳香核中可有一个或者多个选自于N、O和S的杂原子。杂芳基例如是呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基和吲哚基。取代基例如是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基和卤素如溴、氯、氟和碘。
本发明还涉及制备根据本发明之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物的方法，包含-种或者多种所述类似物的杀真菌药物组合物及药物组合物，以及该类似物和包含该类似物的杀真菌药物组合物或者药物组合物在对抗真菌或者治疗可用细胞生长繁殖抑制剂治疗的疾病中的应用，所述疾病例如是肿瘤疾病如癌症或者细胞生长紊乱。
除活性成分外，杀真菌由药物组合物和药物组合物可包括常规载体、稀释剂或者赋形剂，例如稳定剂如UV吸收剂、抗氧剂和防腐剂。
图1是制备根据本发明之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物的合成路线图。
图2和图3是对根据本发明之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物进行光解和环加成反应的路线图。
在已公布的德国专利申请DE199 07 588以及已公布的国际专利申请WO2000/050423中描述了C21改性的依泊昔酮的制备，即、式1、2和3的醛、酮和腙。在根据本发明的方法中，氧化闭环是在通式3a和3b的腙衍生物上借助于金属氧化物(优选NiO2)、K3[Fe(CN)6]、四乙酸铅或者次氯酸钠进行的(参见Houben-Weyl，Vol.E14b，第4版，1999)。合成依泊昔酮A的三唑并噻唑类似物(式4a，Z＝H)将24.6mg(47.2μmol)的依泊昔酮A-21醛腙(式3a)溶解在1.5ml无水二氯甲烷中。在室温和搅拌下以15分钟的间隔添加三等份(每份42.8mg(472.2μmol))的过氧化镍。在Celite上过滤该混合物，并用二氯甲烷淋洗。合并的有机相浓缩，然后在高真空下干燥。用制备性HPLC纯制粗产物(流动相乙腈/水38∶62；柱Nucleosil 100 C18，7μm，21×250mm)。得到12.0mg(49％)的产物。
光谱数据与依泊昔酮A相同(参见DE 4138042 C2)，但有以下不同之处1H-NMR(400MHz，CDCl3)d＝2.25(dt，2a-H)，2.57(dd，2b-H)，4.63(m，3-H)，5.02(dd，3-OH)，1.68(m，14a-H)，2.31(dt，14b-H)，5.53(d，15-H)，6.92(bs，17-H)，7.06(s，19-H)，7.84(s，21-H)，1.08(s，22-H)，1.55(s，23-H)13C-NMR(100MHz，CDCl3)d＝73.0(3-C)，54.7(4-C)，41.4(6-C)，71.4(7-C)，32.0(14-C)，74.9(15-C)，145.1(16-C)，109.2(17-C)，129.2(18-C)，115.5(19-C)，136.4(20-C)，124.8(21-C)，15.9(C-22)，23.3(23-C)，12.7(24-C)，18.1(27-C)HRMS(DCI)C28H37N3O6S[M+NH4]+，计算537.2747，实测537.2721合成依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物(式4b，Z＝H)将8.1mg(15.1μmol)的依泊昔酮B-21醛腙(式3b)溶解在1ml无水二氯甲烷中。在室温和搅拌下在15分钟时间内添加13.7mg(151.4μmol)的过氧化镍。在Celite上过滤该混合物，并用二氯甲烷洗涤。合并的有机相浓缩，然后在高真空下干燥。用制备性HPLC纯制粗产物(流动相乙腈/水40∶60；柱Nucleosil100C18，7μm，21×250mm)。得到4.7mg(58％)的产物。
光谱数据与依泊昔酮B相同(参见DE4138042 C2)，但有以下不同之处1H-NMR(400MHz，CDCl3)d＝2.25(dt，2a-H)，2.59(dd，2b-H)，4.69(m，3-H)，5.02(dd，3-OH)，1.76(m，14a-H)，2.31(dt，14b-H)，5.53(d，15-H)，6.91(bs，17-H)，7.06(s，19-H)，7.85(s，21-H)，1.08(s，22-H)，1.56(s，23-H)13C-NMR(100MHz，CDCl3)d＝71.3(3-C)，54.9(4-C)，41.0(6-C)，72.4(7-C)，33.1(14-C)，75.2(15-C)，145.3(16-C)，108.9(17-C)，129.2(18-C)，115.5(19-C)，136.5(20-C)，124.9(21-C)，15.7(C-22)，23.2(23-C)，12.0(24-C)，18.1(27-C)MS(ESI)[M+H]+＝534
药理学活性式示于下表中。
使用恶性细胞培养物的生长试验
制备21-O-乙酰基-依泊昔酮E(5a，R′＝CH3)将2ml(35.0mmol)的冰乙酸添加至3.2mg(6.2mmo1)三唑并-依泊昔酮A在250ml二氯甲烷中的溶液内，然后在室温下搅拌过夜。在反应混合物中添加水，然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相浓缩，然后在高真空下干燥。得到2.8mg(82％)的21-O-乙酰基-依泊昔酮E。
光谱数据与依泊昔酮A相同(参见DE 4138042 C2)，但有以下不同之处1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝6.60(bs，17-H)，7.14(s，19-H)，5.34(s，21-H2)，2.14(s，2′-H3)13C-NMR(100MHz，CDCl3)137.8(C-16)，119.6(C-17)，152.5(C-18)，118.0(C-19)，163.7(C-20)，62.5(C-21)，170.2(C-1′)，20.9(C-2′)Rf(CH2Cl2/MeOH95/5)0.45HRMS(EI)C28H41NO8S[M]+计算551.2553，实测551.2519制备依泊昔酮E-21-O-(3′-甲氧基羰基)丙酸酯(5a，R′＝CH3OOC-C2)将7.0mg(55.0mmol)的丙炔酸单甲基酯添加至5.1mg(9.8mmol)三唑并-依泊昔酮A在400ml二氯甲烷中的溶液内。反应混合物在室温下搅拌过夜，向其中添加水，然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相浓缩，然后在高真空下干燥。在PLC(CH2Cl2/甲醇95/5)纯制后得到3.6mg(59％)的依泊昔酮E-21-O-(3′-甲氧基羰基)丙酸酯。
光谱数据与依泊昔酮A相同(参见DE 4138042 C2)，但有以下不同之处1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.45(dd，15-H)，6.60(bs，17-H)，7.20(s，19-H)，5.49(bs，21-H2)，3.85(s，5′-H3)13C-NMR(100MHz，CDCl3)76.5(C-15)，138.2(C-16)，119.5(C-17)，153.0(C-18)，118.8(C-19)，161.2(C-20)，64.2(C-21)，151.1(C-1′)，152.0(C-4′)，53.6(C-5′)Rf(CH2Cl2/MeOH95/5)0.32MS(DCI)[M+NH4]+＝637三唑并-依泊昔酮A光解形成21-O-甲基-依泊昔酮A(5a，Nu-H＝CH3OH)9.7mg(18.7mmol)的三唑并-依泊昔酮A溶解在1ml甲醇中，然后在冷却(浴温0℃)下暴露于光4小时，其中使用汞蒸汽灯(DEMA公司制造，HPK-125)。除去溶剂，然后通过制备性HPLC(CH3CN/H2O40/60)分离反应混合物。分离出2.1mg(24％)的21-甲氧基-依泊昔酮A。
光谱数据与依泊昔酮A相同(参见DE 4138042 C2)，但有以下不同之处
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝6.61(bs，17-H)，7.13(s，19-H)，4.71(s，21-H2)，3.49(s，1′-H3)13C-NMR(75MHz，CDCl3)137.5(C-16)，120.0(C-17)，152.2(C-18)，117.3(C-19)，167.8(C-20)，71.5(C-21)，59.1(C-1′)Rf(CH2Cl2/MeOH95/5)0.33HRMS(EI)C27H41NO7S[M]+计算523.2604，实测523.2609丙炔酸二甲酯和三唑并依泊昔酮A的1，3-双极性环加成形成吡唑衍生物6a将1.8mg(3.5mmol)的三唑并-依泊昔酮A溶解在200ml二氯甲烷中。在4小时内，添加三等份丙炔酸二甲酯，每份为4.3ml(34.7mmol)，并在室温下搅拌。略微浓缩反应混合物，然后通过PLC(CH2Cl2/甲醇95/5)进行分离。得到2.0mg(87％)的环加成产物。
光谱数据与依泊昔酮A相同(参见DE 4138042 C2)，但有以下不同之处1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝5.49(dd，15-H)，6.63(bs，17-H)，7.29(s，19-H)，3.97(s，4′-H3)，3.95(s，6′-H3)Rf(CH2Cl2/MeOH95/5)0.17HRMS(EI)C32H43N3O10S[M+H]+计算662.2742，实测662.2778
权利要求
1.式4a或4b之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物 4aR＝H，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基4bR＝CH3，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基其中R代表H或CH3，Z代表H、烷基、芳基或杂芳基。
2.如权利要求1所述的依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑衍生物，其中烷基是指直链或支链C1-C6烷基，其可为单或者多取代的，和/或芳基是指单核或者多核芳香系统，其可为单或者多取代的，和/或杂芳基是指单核或者多核杂芳香系统，其可为单或者多取代的。
3.如权利要求2所述的依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑衍生物，其中烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基，它们任选被C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基或卤素取代，特别是被溴、氯、氟或碘取代，和/或芳基是苯基、邻甲苯基、间甲苯基、对甲苯剂、邻二甲苯基、间二甲苯基、对二甲苯基、苄基、苯乙基或萘基，它们任选被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基或卤素取代，特别是被溴、氯、氟或碘取代，和/或杂芳基是呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基或吲哚基，它们任选被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6酰基、羟基或卤素取代，特别是被溴、氯、氟或碘取代。
4.制备如前述任一权利要求所述的依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑衍生物的方法，其中氧化闭环是在通式3a和3b的依泊昔酮A和依泊昔酮B的腙衍生物上借助于金属氧化物、K3[Fe(CN)6]、四乙酸铅或者次氯酸钠进行的 3aR＝H，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基3bR＝CH3，Z＝H、烷基、芳基、杂芳基其中R和Z与权利要求1中的定义相同。
5.如权利要求4所述的方法，其中金属氧化物是NiO2。
6.药物组合物，其包含一种或者多种如权利要求1-3之一所述的依泊昔酮A或依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物以及药物学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.如权利要求1-3之一所述的依泊昔酮A或依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物或者如权利要求6所述的药物组合物在治疗肿瘤疾病和细胞生长紊乱中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其中所述肿瘤疾病是癌症。
9.杀真菌药物组合物，其包含或者由一种或者多种如权利要求1-3之一所述的依泊昔酮A或依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物以及药物学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组成。
10.制备依泊昔酮A和/或依泊昔酮B的C-21酯的方法，其中三唑并-依泊昔酮A和/或三唑并-依泊昔酮B(图2，B)与式R′COOH的羧酸反应(图2，B)反应除去氮，形成依泊昔酮A和/或依泊昔酮B的C-21酯，然后回收反应产物，其中R′代表H、烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。
11.如权利要求10所述的方法，其中在式R′COOH中，作为烷基、芳基或杂芳基的R′基团与权利要求2中的定义相同。
12.如权利要求10所述的方法，其中在式R′COOH中，R′基团代表C2-8烯基或C2-8炔基，它们的多重键可在任意的位置处。
13.光解方法，其中三唑并-依泊昔酮A或三唑并-依泊昔酮B在亲核试剂存在下进行光解反应，然后回收所得的产物(图2，C)。
14.1，3-双极性环加成反应，其中按照本领域已知的方法用双键体系或者叁键体系使三唑并-依泊昔酮A或三唑并-依泊昔酮B进行1，3-双极性环加成反应，然后回收所形成的杂环环加成产物(图2，D)。
15.如权利要求14所述的1，3-双极性环加成反应，其中使用丙炔酸酯、特别是丙炔酸二酯作为叁键体系。
16.如权利要求14或15所述的1，3-双极性环加成反应，其中环加成反应是按照以下文献进行的B.Eister等人，Houben-Weyl，Stickstoff-Verbindungen 1/Teil 4，Diazoverbindungen，第482-894页，Thieme-Verlag，Stuttgart，1968。
17.如权利要求10-16之一所述的方法或环加成反应的产物作为细胞毒性活性物质的应用。
18.如权利要求10-16之一所述的方法或环加成反应的产物在生化分析中的应用。
19.如权利要求13所述的光解方法的产物在生化分析、特别是光亲和性标记中应用。
20.根据权利要求10-16之一所述的方法或环加成反应得到的产物。
全文摘要
本发明涉及4a或4b之依泊昔酮A和依泊昔酮B的三唑并噻唑类似物。
文档编号C07D519/00GK1462274SQ01816113
公开日2003年12月17日 申请日期2001年9月21日 优先权日2000年9月22日
发明者格哈德·赫夫勒, 妮科尔·格拉泽 申请人:生物技术研究有限公司(Gbf)