专利名称：类固醇衍生物的制作方法
背景技术：
胆固醇扮演两种主要生化角色(1)作为细胞膜之组成物质，以及(2)作为肾上腺、卵巢、睪丸与胎盘内分泌细胞中，类固醇合成过程之生物合成前体。细胞内胆固醇含量会受到胆固醇从头合成(denovo synthesis)，以及胆固醇之摄取与流失之影响。低胆固醇血症(Hypocholesterolemia)，即缺乏胆固醇，会导致某些疾病，如情绪失常等。
肝脏X受体(LXRs)，为核受体超级家族之成员，包括LXRα与遍在受体(Ubiquitous receptor，UR，亦称之为LXRβ)。数个LXRs的直接靶基因(target gene)参与胆固醇之逆向运送(reverse transport)与消耗(disposal)。这些基因范例包括编码胆固醇7α-水解酶之CYP7A基因，该水解酶为胆固醇合成胆酸之限速酶；以及编码胆固醇-脂质转移蛋白质(CETP)之ABC1基因与ABC8基因。LXR亦被认为参与胆固醇从头合成(de novo synthesis)之过程。
因此，通过施用LXR拮抗剂(antagonist)以增加胆固醇含量、降低胆固醇之逆向运送与消耗，或是加强胆固醇从头合成，皆可提供一种治疗低胆固醇血症之方法。
发明概要本发明之一方面在于提供如下式之化合物
其中每一R1、R2、R4、R4’、R7、R11、R12、R15、R16、R17与R17’皆独立为氢、羟基、氨基、羧基、氧、卤基、磺酸基、-O-磺酸基，或被任选地插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-之烷基，该烷基更任选地被羟基、卤基、氨基、羧基、磺酸基或-O-磺酸基取代；R3为X-Y-，其中X为氢、氨基、羧基、卤基、磺酸基、-O-磺酸基或烷基；Y为-S-、-NH-、-N(烷基)、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-；R5和R6一起为-O-；或R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，R7为氧；每一R8、R9、R10、R13、R14皆独立为氢、烷基、卤烷基、羟烷基、烷氧基、羟基或氨基；以及n为0、1或2。术语“烷基(alkyl)”，若置于前缀称为“烷(alk)”(如烷氧基(alkoxy))，置于字尾则称为“-烷基(-alkyl)”(如羟基烷基(hydroxyalkyl))，皆指称线形或支链状之C1至C18。术语“插入”代表一取代基，如R1或R2通过一插入基团，如上述所提及之-O-、-S-、-NH-，与一环状碳原子相连结。除非另有定义，否则所有式(1)中的环状碳原子皆为氢所饱和。
请参照式(1)，本发明化合物特征之一在于R5和R6一起为-O-，另一特征则在于R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，以及R7为氧。两个化合物范例分别为5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯，以及7-酮-胆固醇-3-硫酸酯，两种首度在人体血液与组织中发现之新物质。
上述化合物之盐类，若可应用，皆包含于本发明之范畴内。此种盐类可形成于具有羧酸基之化合物与其阳离子平衡离子(counterion)之间，例如碱金属阳离子如钠离子或钾离子，或可被有机基团取代之铵盐阳离子，如四甲基铵离子或二异丙基-乙基铵离子。此种盐类亦可形成于具有质子化氨基之化合物与其阴离子平衡离子之间，如硫酸根离子、硝酸根离子、磷酸根离子或醋酸根离子。
本发明之化合物，令人意外地，对于LXRs如LXRα与UR具有拮抗作用，可大幅增加胆固醇之从头合成，并可降低胆固醇之逆向运送与消耗，而增加细胞内胆固醇之含量。因此，本发明之另一方面在于提供一种治疗低胆固醇血症之方法。该方法包括对于有需要之主体施用有效剂量之一种或多种上述化合物。
本发明范畴亦包括一种利用上述化合物，评估某一化合物对于LXR之激动剂效应之方法。本发明范畴更进一步包含对于5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯或7-酮-胆固醇-3-硫酸酯具特异性之抗体。
本发明将以下列各实施例作详细说明。本发明之其它特征、目的与优点将如同专利申请范围中所描述。
发明详述本发明之3-硫酸酯化合物，如5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯或7-酮-胆固醇-3-硫酸酯，可首先由三乙基胺与氯化硫酸反应，得三乙基胺-硫三氧复合物。该复合物之后再与3-C有羟基取代之四环化合物(tetracyclic compound)反应，便可得该硫酸酯化合物。该二个化合物的制备分别于下列实施例1与实施例2中详述。
本发明之其它化合物亦可以类似方式制备，惟不同之处在于须选用除了三乙基胺-硫三氧复合物之外的适合反应试剂，与四环化合物反应。此种适用试剂之范例包括(1)为了于3-C接入-(C＝O)-O-连结之甲基碳酸镁，以及(2)酰胺、三苯磷化氢，与二甲基偶氮二羧酸盐，亦用于将-NH-C(＝O)-接入3-C。
本发明之化合物对于LXRs如LXRα与UR具有拮抗作用，可降低胆固醇之逆向运送与消耗，并可增加胆固醇之从头合成，而增加细胞内胆固醇之含量。因此，本发明之另一方面在于提供一种治疗低胆固醇血症之方法，通过对于有需要之主体施用有效剂量之本发明之化合物(或其盐类)。该“有效剂量”一般指的是该化合物对于治疗主体可达到治疗效果之量。动物与人体之间剂量的相互关系(以每一平方米体表面积施予多少毫克为准)，已描述于Freireich等人所著之CancerChemother.Rep.，1966，50，219。该体表面积可大约由病患之高度与重量推估。请见如Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardley，NY.，1970，537所述。有效剂量亦依据，如本领域人员所认知，施用来源、赋形剂之使用，以及与其它治疗，包括抗低胆固醇血症之药物一并使用等因素而不同。一有效剂量之化合物是与一医药可接受之载体配制形成一药物组合物，在对须治疗低胆固醇血症之主体施用之前。
该药物组合物亦可经由非肠胃方式施用，如皮肤局部、皮下、腹膜内、肌内与静脉内给药。该非肠胃方式之药剂形式范例包括该活性化合物之水溶液，或是包含于等张生理食盐水、5％葡萄糖或其它任何已知医药上可接受之载体中。助溶试剂(solublizing agent)，如环糊精，或其它本领域人员所熟知的助溶试剂，亦可包含于该药物组合物中。该活性物质可配制成用于其它施用方式之药剂形式(如口服、粘膜吸收、经表皮吸收、或嗅吸方式)，利用现有之技术。该药物组合物可配制成，例如胶囊、凝胶(gel seal)，或药锭等口服施用之药剂形式。该胶囊包括任何已知之医药可接受材料，如明胶或纤维素衍生物。该药锭可依据一般方法配制，将该活性物质、固状载体与润滑剂压缩成锭。该固状载体之范例包括淀粉或糖类胶质粘土(bentonite)。该化合物亦可以硬壳药锭或胶囊方式施用，其包含如作为粘着剂之乳糖或甘露糖醇、一般填料以及药锭成形剂。
本发明范畴亦包括一种包含该化合物之药物组合物，以及该化合物用于制造治疗低胆固醇血症药剂之应用。
该化合物可针对治疗低胆固醇血症之药物进行药效之预先筛选，通过一种或多种体外试验一化合物对于LXR如LXRα与UR之拮抗效应可通过体外报告基因转录活化(in vitro reporter gene transactivation)试验进行评估。例如，将萤光酶报告基因(luciferase reporter gene)(其包含人类c-fos最小启动子)与LXR一同转染到肾脏细胞中。将该经转染之细胞与待测之化合物一同培养，测量该萤光酶(luciferase)之活性以测定该报告基因之转录活化程度。
该化合物对于LXR如LXRα与UR之拮抗效应亦可通过体内共活化剂辅助结合(co-activator recruitment)试验评估。例如，将LXR与谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase，GST)融合蛋白质培养于谷胱甘肽琼脂糖微珠上。该微珠之后再与经放射线标示之共活化剂、待测化合物，并选择性地与LXR显效剂一同培养。已结合至微珠上之蛋白质以缓冲溶液冲提下来，之后再以胶分离，以放射自显影(autoradiography)定量出共活化剂与UR之间的辅助结合程度。
该化合物对于加强胆固醇从头合成之效应，可通过监测培养细胞中[2-14C]醋酸吸附至胆固醇上之方式评估。例如，将肾脏细胞接种至一培养基中，并与待测之化合物以及经放射线标示之醋酸一同培养。将细胞与培养基分离后，细胞与培养基中所含的脂质皆萃取出。萃取中之不溶物质可溶解于水溶液中，以测定总蛋白质量。测量经放射线标示胆固醇之放射线，以测定胆固醇之含量。
体内试验筛选可以下述现有技术进行。
本发明亦涉及一种筛选LXR显效剂之方法，在一种或多种上述化合物存在情况下，以下段所述之试验方式进行。本发明之任一化合物对于LXR皆具有拮抗作用，使用于该筛选方法可降低该试验之背景值，而提供一个更明确的激动剂效应观察。由此所选出的LXR显效剂便可用于治疗胆固醇含量过高之相关疾病，如动脉硬化，通过降低内生性胆固醇含量而达到。
本发明更进一步涉及一对于5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯或7-酮-胆固醇-3-硫酸酯具特异性之多克隆或单克隆抗体。为了制造该抗体，请见如Harlow等人所着之AntibodiesA Laboratory Manual，冷泉港出版社，1988年，纽约冷泉港。该抗体可用于免疫试验如放射线免疫试验(radioimmuno assay)与酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunoabsorbent assay)，测定内生性5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯或7-酮-胆固醇-3-硫酸酯之含量。请参照Coligan等人所着之CurrentProtocols in Immuology，John Wiely & Sons出版社，1998年，纽约州纽约市。此类化合物的不正常含量可作为胆固醇相关疾病之指针。
于此所公开之内容皆为熟习此技术领域者可充分运用，以下不再赘述。所有列出之出版物，其完整内容皆并于参考资料中。因此，下列特定范例描述各化合物之合成方法与生物测试，仅供具体说明而已，并不局限本发明之范畴。
实施例15α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯(ECHS)之合成将0.5M之氯化硫酸于2小时内滴入以置于冰水浴中，且正在搅拌之200毫升氯化甲烷中，其含有1.0M之三乙基胺。所得之溶液以冰水简单清洗，再以无水硫酸镁干燥并过滤。将滤液于负压下浓缩至约100毫升，加热至沸腾，再滴入150毫升正在搅拌之乙醚中得一溶液。由此得到之溶液冷却至室温，之后再置于4℃下4小时，以制造出一结晶状三乙基胺-硫三氧复合物。
在含有0.05mM5α，6α-环氧基-3β-羟基-胆甾烷之1.0毫升二甲基甲醛中加入0.55mM之三乙基胺-硫三氧复合物。所得之溶液于室温下混合1小时，加入两滴水，并于40℃再搅拌一小时。将该溶液倒入20毫升搅拌中之冰冷无水乙醚中。将该混合物置于4℃下4小时，以制造出结晶状ECHS。
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)0.602(3H，s，18-CH3)，2.869(1H，s，6-H)，以及4.565(1H，m，3-H)。
实施例27-酮-胆固醇-3-硫酸酯(KCHS)之合成KCHS系以如实施例1中所述之方法制备，惟不同之处在于使用-3β-羟基-ΔΔ5-胆固醇基-7-酮取代5α，6α-环氧基-3β-羟基-胆甾烷。
实施例3报告基因转录活化试验人类胚胎肾脏293细胞接种于48孔培养皿中，每一孔皆具有105个细胞，培养于补充有10％胎牛血清蛋白之DMEM中。培养24小时之后，以磷酸盐共沉淀法将250ng之pGL3/UREluc报告基因、40ng之pSG5/hRxRα、40ng之pSG5/rUR或CMX/hLXRα、10ng之pSG5/hGripl、0.4ng之CMV/R-luc(转染正常化指针，Promega出品)，以及250ng之载体DNA转染至每一孔细胞中，其中该pGL3/UREluc报告基因系由三段AGGTCAagccAGGTCA组成，其接合至人类c-fos启动子之-56至+109核苷酸片段上，为质粒基础基因pGL3(Promega，Madison，WI出品)之萤火虫萤光酶基因之前。继续培养12至24小时，以磷酸缓冲溶液(PBS)清洗该细胞，之后重新提供补充有4％脱脂胎牛血清之DMEM。将两倍量含有待测化合物(如ECHS三乙基铵或KCHS三乙基铵)之乙醇溶液加入DMEM细胞培养中，使该化合物最终浓度为1至10μM，乙醇之最终浓度为0.2％。继续培养24至48小时，将该细胞收获下来并以购得之试剂盒(Pormega Dual luciferaseII)，于单光萤光仪(Becton Dickenson，Mountain View，CA)下测定其萤光酶活性。结果显示ECHS与KCHS皆为LXRα与UR之基础报告基因转录活化之强效抑制剂。
实施例4共活化剂之辅助结合试验(Co-activator recruitment assay)将GST-rUR融合蛋白质表达至大肠杆菌BL21菌株中，使用表达质粒pGEX(Pharmacia，Uppsala，Sweden出品)。将该细胞以一次冻融(freeze-thaw)与超音波震荡循环破菌。该悬浮液，45,000xg离心一小时后得之，于4℃下置于谷胱甘肽-琼脂糖中10分钟。该琼脂糖以含有HEPES(20mM)、EDTA(10mM)、Na2MoO4(10mM)、β-巯基乙醇(1mM)、DTT(1mM)、PMSF(0.5mM)与抑酶肽(aprotinin，2μg/ml)，pH 7.5之结合缓冲溶液(binding buffer)清洗。清洗之后随即加入5α-胆脂酸甲基醚(CAM)与LXR显效剂，至最终浓度为0.1至10μM。
人类Grip 1，一种共活化剂，以[35S]甲硫氨酸制造与标示，通过使用兔子网状细胞裂解液之体外翻译方式。含有[35S]甲硫氨酸之网状细胞裂解液(2μL)加入结合有GST-rUR之琼脂糖微珠于100μL结合缓冲溶液中，之后再加入含有待测化合物(如ECHS或KCHS)之乙醇溶液，至最终浓度为1至10μM。将该化合物置于室温下30分钟。以结合缓冲溶液清洗该琼脂糖微珠。已结合之蛋白质以SDS-PAGE加载溶液冲提下，并以8％ SDS-PAGE分离。将该含有蛋白质之胶干燥，并进行放射自显影。Grip 1之放射量系以STORM phosphoimager(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)测得，以定量共活化剂之辅助结合情况。结果显示，ECHS与KCHS皆会抑制活化剂之辅助结合。
实施例5对于胆固醇从头合成之影响噬菌体J774与肾脏293细胞接种于6孔培养皿中，培养于CompleteTM培养基中(Cellgro，Mediatech公司，Herndon，VA)，该培养基不含血清、胆固醇与胆固醇受器(acceptor)。培养24小时后，将ECHS加入细胞培养中。继续培养24小时后，将1 mCi的[2-14C]醋酸加入每一孔中。继续培养24小时，移出培养基，并将培养基中的脂质以氯仿/甲醇(体积比2∶1)混合溶液萃取出。贴附至培养皿上之细胞以甲烷/异丙醇(体积比2∶1)混合溶剂萃取三次。萃取后之不溶物先溶解于1.0 N之NaOH溶液中，用以测定蛋白质总量，该定量方式系依据Bradford，Anal.Biochem.，1976，72248-254。萃取出之脂质以薄层层析法分离，且每一部份(fraction)之放射量以STORM 860phosphoimager(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)测量。该胆固醇部分之性质系以胆固醇标准品确认。结果显示ECHS出乎意料地可增进胆固醇之从头(de novo)合成，达50％至10倍。
其它具体实施例从以上叙述，本领域人员能够简易地确定本发明之基本特征，不远离其精神和范围，能够作各种本发明之改变和修正使其适用于各种用途和环境。例如，可通过以含有本发明化合物之饲料喂养牛或猪，以提高该牛或猪之胆固醇含量。换句话说，本发明之化合物可用于治疗牛或猪之“低胆固醇血症”(就生理学而言，胆固醇含量为正常，但对于某些贪食者而言，其量却太低了)。因此，其它具体实施例亦在申请专利范围内。
权利要求
1.一种如式(1)之化合物 其中每一R1、R2、R4、R4’、R7、R11、R12、R15、R16、R17与R17’皆独立为氢、羟基、氨基、羧基、氧(oxo)、卤基、磺酸基、-O-磺酸基，或被任选地插入-NH-、-N(烷基)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-之烷基，该烷基更任选地被羟基、卤基、氨基、羧基、磺酸基或-O-磺酸基取代；R3为X-Y-，其中X为氢、氨基、羧基、卤基、磺酸基、-O-磺酸基或烷基；Y为-S-、-NH-、-N(烷基)、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-；R5和R6一起为-O-；或R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，R7为氧；每一R8、R9、R10、R13、R14皆独立为氢、烷基、卤烷基、羟烷基、烷氧基、羟基或氨基；以及n为0、1或2。
2.权利要求1的化合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
3.权利要求1的化合物，其中R5和R6一起为-O-。
4.权利要求3的化合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
5.权利要求4的化合物，其中X为氢，Y为-SO3。
6.权利要求3的化合物，其中-O-位于C-5与C-6之α位置上。
7.权利要求6的化合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
8.权利要求7的化合物，其中X为氢，Y为-SO3。
9.权利要求8的化合物，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
10.权利要求9的化合物，其中该化合物为5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯(5α，6α-epoxycholesterol-3-sulfate)。
11.一种对权利要求10的化合物具特异性之抗体。
12.权利要求1的化合物，其中该R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，以及R7为氧。
13.权利要求12的化合物，其中该X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
14.权利要求13的化合物，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
15.权利要求14的化合物，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
16.权利要求15的化合物，其中该化合物为7-酮-胆固醇-3-硫酸酯(7-keto-cholesterol-3-sulfate)。
17.一种针对权利要求16的化合物具特异性之抗体。
18.一种治疗低胆固醇血症(Hypocholesterolemia)之方法，包含对于有需要之主体施用有效剂量之如下式(1)之化合物 其中每一R1、R2、R4、R4’、R7、R11、R12、R15、R16、R17与R17’皆独立为氢、羟基、氨基、羧基、氧、卤基、磺酸基、-O-磺酸基，或被任选地插入-O-、-S-、-NH-、-N(烷基)-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-之烷基，该烷基更任选地被羟基、卤基、氨基、羧基、磺酸基或-O-磺酸基取代；R3为X-Y-，其中X为氢、氨基、羧基、卤基、磺酸基、-O-磺酸基或烷基；Y为-S-、-NH-、-N(烷基)、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-；R5和R6一起为-O-；或R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，R7为氧；每一R8、R9、R10、R13、R14皆独立为氢、烷基、卤烷基、羟烷基、烷氧基、羟基或氨基；以及n为0、1或2。
19.权利要求18的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
20.权利要求18的方法，其中R5和R6一起为-O-。
21.权利要求20的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
22.权利要求21的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
23.权利要求20的方法，其中-O-位于C-5与C-6之α位置上。
24.权利要求23的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
25.权利要求24的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
26.权利要求25的方法，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
27.权利要求26的方法，其中该化合物为5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯。
28.权利要求18的方法，其中R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，以及R7为氧。
29.权利要求28的方法，其中该X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
30.权利要求29的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
31.权利要求30的方法，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
32.权利要求31的方法，其中该化合物为7-酮-胆固醇-3-硫酸酯。
33.一种药物组合物，包含如下式(1)之化合物 其中每一R1、R2、R4、R4’、R7、R11、R12、R15、R16、R17与R17’皆独立为氢、羟基、氨基、羧基、氧、卤基、磺酸基、-O-磺酸基，或被任选地插入-O-、-S-、-NH-、-N(烷基)-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-之烷基，该烷基更任选地被羟基、卤基、氨基、羧基、磺酸基或-O-磺酸基取代；R3为X-Y-，其中X为氢、氨基、羧基、卤基、磺酸基、-O-磺酸基或烷基；Y为-S-、-NH-、-N(烷基)、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-；R5和R6一起为-O-；或R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，R7为氧；每一R8、R9、R10、R13、R14皆独立为氢、烷基、卤烷基、羟烷基、烷氧基、羟基或氨基；n为0、1或2；以及一医药可接受之载体。
34.权利要求33的组合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
35.权利要求33的组合物，其中R5和R6一起为-O-。
36.权利要求35的组合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
37.权利要求36的组合物，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
38.权利要求35的组合物，其中-O-位于C-5与C-6之α位置上。
39.权利要求38的组合物，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
40.权利要求39的组合物，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
41.权利要求40的组合物，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
42.权利要求41的组合物，其中该化合物为5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯。
43.权利要求33的组合物，其中该R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，以及R7为氧。
44.权利要求33的组合物，其中该X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
45.权利要求44的组合物，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
46.权利要求45的组合物，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’，皆独立为烷基。
47.权利要求46的化合物，其中该化合物为7-酮-胆固醇-3-硫酸酯。
48.一种评估一化合物对于肝脏X受体之激动剂效应之方法，其包含将待评估之化合物，在如下式(1)之化合物存在下，与肝脏X受体接触 其中每一R1、R2、R4、R4’、R7、R11、R12、R15、R16、R17与R17’皆独立为氢、羟基、氨基、羧基、氧、卤基、磺酸基、-O-磺酸基，或被任选地插入-O-、-S-、-NH-、-N(烷基)-、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-之烷基，该烷基更任选地被羟基、卤基、氨基、羧基、磺酸基或-O-磺酸基取代；R3为X-Y-，其中X为氢、氨基、羧基、卤基、磺酸基、-O-磺酸基或烷基；Y为-S-、-NH-、-N(烷基)、-SO-、-SO2-、-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-；R5和R6一起为-O-；或R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，R7为氧；每一R8、R9、R10、R13、R14皆独立为氢、烷基、卤烷基、羟烷基、烷氧基、羟基或氨基；n为0、1或2；以及评估待评估之化合物对于肝脏X受体之激动剂效应。
49.权利要求48的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
50.权利要求48的方法，其中R5和R6一起为-O-。
51.权利要求50的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
52.权利要求51的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
53.权利要求50的方法，其中-O-位于C-5与C-6之α位置上。
54.权利要求51的方法，其中X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
55.权利要求54的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
56.权利要求55的方法，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
57.权利要求56的方法，其中该化合物为5α，6α-环氧基胆固醇-3-硫酸酯。
58.权利要求48的方法，其中该R5和R6一起为在C-5与C-6间的双键，以及R7为氧。
59.权利要求48的方法，其中该X为氢或氨基，Y为-O-SO2-、-SO2-O-、-SO3-O-、-CO-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NH-、-CO-N(烷基)、-NH-CO-，或-N(烷基)-CO-。
60.权利要求59的方法，其中X为氢，Y为-SO3-O-。
61.权利要求60的方法，其中R1、R2、R4、R4’、R7、R8、R9、R11、R12、R14、R15、R16与R17皆为氢；以及每一R10、R13、R17’皆独立为烷基。
62.权利要求61的方法，其中该化合物为7-酮-胆固醇-3-硫酸酯。
全文摘要
一种如式(1)之化合物其中每一R
文档编号C07J41/00GK1498222SQ02807008
公开日2004年5月19日 申请日期2002年2月7日 优先权日2001年2月8日
发明者廖述宗, 宋庆 申请人:芝加哥大学