苯基取代的三唑及其作为选择性alk5激酶抑制剂的用途的制作方法

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专利名称:苯基取代的三唑及其作为选择性alk5激酶抑制剂的用途的制作方法
技术领域
本发明涉及苯基取代的三唑,该三唑为转化生长因子(″TGF″)-β信号通道的抑制剂,特别是I型或活化素样激酶(″ALK″)-5受体对smad2或smad3磷酸化的抑制剂,其制备方法,以及其医学应用。
TGF-β1为包括TGF-β、活化素、抑制素、骨形成蛋白及Müllerian抑制物质的细胞因子家族的原型成员,其信号经由一族单层跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体转导。这些受体可分为两类,I型或活化素样激酶(ALK)受体及II型受体。ALK受体与II型受体的区别在于ALK受体(a)缺乏富含丝氨酸/苏氨酸的细胞内尾部,(b)具有丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,I型受体之间该结构域高度同源及(c)拥有称为GS结构域的共同基序,该序列由富含甘氨酸及丝氨酸残基的区域组成。GS结构域位于细胞内激酶结构域的氨基端,对由II型受体引起的激活非常关键。数项研究表明TGF-β的信号转导同时需要ALK及II型受体。具体而言,II型受体在TGF-β的存在下磷酸化TGF-β的I型受体-ALK5的GS结构域。ALK5随后磷酸化位于细胞质的蛋白质smad2及smad3的两个羧基端丝氨酸。一般而言,据信在许多物种中,II型受体调节细胞增殖及I型受体调节基质生成。因而,本发明优选的化合物可选择性地抑制I型受体,进而抑制基质生成,而不影响II型受体介导的增殖。
TGF-β1轴的活化及细胞外基质的扩张为慢性肾病及血管疾病发生发展的早期及持续性因素。Border W.A.,Noble N.A.,N.Engl.J.Med.,Nov.10,1994;331(19)1286-92。此外,通过TGF-β1受体ALK5对smad3的磷酸化作用,TGF-β1在形成纤维连接蛋白、血纤维蛋白溶酶原激活因子抑制剂-1,巩膜沉积物的成分的形成中发挥作用。Zhang Y.,Feng X.H.,Derynck R.,Nature,Aug.27,1998;394(6696)909-13;Usui T.,Takase M.,Kaji Y.,SuzukiK.,Ishida K.,Tsuru T.,Miyata K.,Kawabata M.,Yamashita H.,Invest.Ophthalmol. Vis.Sci.,Oct.1998;39(11)1981-9。
肾脏及心血管系统的进行性纤维化是罹病及死亡主要原因,也是医疗成本增加的重要原因。TGF-β1与许多肾脏纤维化疾病有关。Border W.A.,Noble N.A.,N.Engl.J.Med.,Nov 10,1994;331(19)1286-92。TGF-β1在下述疾病中升高急慢性肾小球肾炎,Yoshioka K.,Takemura T.,Murakami K.,Okada M.,Hino S.,Miyamoto H.,Maki S.,Lab.Invest.,Feb.1993;68(2)154-63,糖尿病肾病,Yamamoto,T.,Nakamura,T.,Noble,N.A.,Ruoslahti,E.,Border,W.A.,(1993) PNAS 901814-1818,同种异体移植物排斥,HIV肾病及血管紧张素诱导的肾病,Border W.A.,Noble N.A.,N.Engl.J.Med,Nov.10,1994;331(19)1286-92。在这些疾病中,TGF-β1的表达水平与细胞外基质的生成是一致的。三方面的证据表明了TGF-β1与基质生成的因果关系。第一,在体外,外源性TGF-β1可诱导正常的肾小球、肾小球系膜细胞及非肾细胞生成细胞外基质蛋白,并抑制蛋白酶的活性。第二,对抗TGF-β1抗体的中和可阻止患肾病大鼠细胞外基质的累积。第三,TGF-β1转基因小鼠或将TGF-β1基因转染入正常大鼠肾脏内将导致肾小球硬化的快速产生。KoppJ.B.,Factor VM.,Mozes M.,Nagy P.,Sanderson N.,Bottinger E.P.,KlotmanP.E.,Thorgeirsson S.S.,Lab Invest,June 1996;74(6)991-1003。因而,抑制TGF-β1的活性被视为慢性肾病的一种治疗措施。
TGF-β1及其受体水平在损伤血管壁中增加,并在气囊血管成形术后的新内膜形成中得到体现。Saltis J.,Agrotis A.,Bobik A.,Clin Exp PharmacolPhysiol,Mar.1996;23(3)193-200。此外,TGF-β1为平滑肌细胞(″SMC″)体外迁徙的强大促进因素,并且SMC在动脉壁上的迁徙促进了动脉粥样硬化及瓣膜术后再狭窄的病理进程。此外,在内皮细胞产物与总胆固醇关系的多变量分析中,TGF-β受体ALK5与总胆固醇相关(P<0.001),Blann A.D.,Wang J.M.,Wilson P.B.,Kumar S.,Atherosclerosi,Feb.1996;120(1-2)221-6。此外,源自人动脉粥样硬化损伤的SMC具有升高的ALK5/TGF-β的II型受体的比例。由于TGF-β1在纤维增生的血管损伤中过度表达,受体不同的细胞将以一种缓慢但不可控的方式生长,同时生成过量的细胞外基质成分,McCaffrey T.A.,Consigli S.,Du B.,Falcone D.J.,Sanborn T.A.,Spokojny A.M.,Bush H.L.,Jr.,J Clin Invest,Dec.1995;96(6)2667-75。TGF-β1被免疫聚集到活性基质合成的动脉粥样硬化损伤的非泡沫状巨噬细胞,表明在动脉粥样硬化重构过程中,非泡沫状巨噬细胞可能以TGF-β依赖性的机制参与调节基质基因的表达。因而,在动脉粥样硬化及再狭窄中,也体现了抑制TGF-β1对ALK5的作用。
TGF-β也体现在损伤修复中。在一些模型上使用中和TGF-β1的抗体表明,在痊愈过程中通过限制过度的疤痕形成,抑制TGF-β1的信号转导对损伤后功能的恢复是有益的。例如,在大鼠中,中和TGF-β1及TGF-β2的抗体减少了疤痕形成,改善了新皮细胞结构,该过程是通过降低单核细胞及巨噬细胞的数量,同时降低表皮纤维连接蛋白及胶原沉积实现的,Shah M.,J.Cell.Sci.,1995,108,985-1002。此外,TGF-β抗体也促进了兔角膜损伤的痊愈,Moller-Pedersen T.,Curr.Eye Res.,1998,17,736-747,促进了大鼠胃溃疡损伤的愈合,Ernst H.,Gut,1996,39,172-175。这些信息强烈地表明,在许多组织中限制TGF-β的活性将是有益的,同时也表明,在任何伴有长期TGF-β升高的疾病中,通过抑制smad2及smad3的信号转导通道将是有益的。
TGF-β也体现在腹膜粘连上,Saed G.M.,et al,Wound Repair Regeneration,1999 Nov-Dec,7(6),504-510。ALK5抑制剂将有助于防治外科手术后的腹膜及皮下纤维化粘连。
TGFβ1-抗体可防止移植于裸鼠肾肿瘤的生长,该过程的机制据认为是抗血管生成,Ananth,et al,Journal Of The American Society Of NephrologyAbstract,9433A(Abstract)。然而,肿瘤自身对TGF-β并不敏感,是肿瘤周围组织对TGF-β敏感并通过分泌TGF-β的肿瘤促新血管的生成支持肿瘤的生长。因而,拮抗TGF-β通道应当可以阻止肿瘤的转移以降低癌症的风险。
令人吃惊的是,现已发现一类苯基取代的三唑,其为ALK5激酶的选择性非肽类强抑制剂,因而,其可用于防治各种经由ALK5机制介导的疾病,如慢性肾病、急性肾病、创伤愈合、关节炎、骨质疏松、肾病、充血性心力衰竭、溃疡、眼病、角膜损伤、糖尿病型肾病、神经机能受损、阿耳茨海默氏病、动脉粥样硬化、腹膜及皮下粘连、任何以纤维化为主要特征的疾病,包括但不限于肺纤维化、肝纤维化及再狭窄。
以纤维化为主要特征的疾病的实例,包括但不限于乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、酒精诱导的肝炎、血色素沉着病及原发性胆汁性硬化。
本发明提供了式(I)的化合物或其可药用盐
其中R1为萘基或苯基,其任选被一或多个选自卤素、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-O-(CH2)n-Ph、-S-(CH2)n-Ph、氰基、苯基及CO2R的取代基取代,其中R为氢原子或C1-6烷基,n为0、1、2或3;或R1为与5-7员的芳香环或非芳香环相稠合的苯基或吡啶基,其中,该环系任选包含多达3个杂原子,该杂原子独立地选自N、O及S,且N可进一步任选被C1-6烷基取代,及其中环系可任选被=O取代;R2及R3独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、NH(CH2)n-Ph、NH-C1-6烷基、卤素、CN、NO2、CONHR及SO2NHR;X1、X2及X3中的两个为N,另一个为NR4,其中R4为氢原子、C1-6烷基、C3-7环烷基、-(CH2)p-CN、-(CH2)p-CO2H、-(CH2)p-CONHR5R6、-(CH2)pCOR5、-(CH2)q(OR7)2、-(CH2)pOR5、-(CH2)q-CH=CH-CN、-(CH2)q-CH=CH-CO2H、-(CH2)p-CH=CH-CONHR5R6、-(CH2)pNHCOR8或-(CH2)pNR9R10;R5及R6独立地为氢原子或C1-6烷基;R7为C1-6烷基;R8为C1-7烷基,或任选取代的芳基、杂芳基、芳基C1-6烷基或杂芳基C1-6烷基;R9及R10独立地选自氢原子、C1-6烷基、芳基及芳基C1-6烷基;p为0-4;及q为1-4。
在式(I)化合物的三唑环中,很明显,双键应在两个未取代的氮原子处。
当R1为与5-7员的芳香环或非芳香环相稠合的吡啶基时,吡啶环的氮原子可处于稠合点。优选地,R1为任选取代的萘基或苯基。更优选地,R1为任选被一或多个选自卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基及苯基取代的苯基;或R1为与5-7员的芳香环或非芳香环相稠合的苯基或吡啶基,其中,该环系任选包含多达3个杂原子,该杂原子独立地选自N、O及S,且N可进一步任选被C1-6烷基取代,及其中的环系可任选被=O取代;例如R1表示苯并[1,3]二氧环戊烯基、2,3-二氢苯并[1,4]二氧杂环己烯基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并[1,2,5]噁二唑基、苯并[1,2,5]噻二唑基、喹噁啉基、二氢苯并呋喃基、苯并咪唑基、C1-6烷基苯并咪唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、苯并[1,4]噁嗪-3-酮、苯并噁唑基-2-酮或苯并[1,4]噁嗪。最优选地,R1表示4-甲氧苯基、3-氟-4-甲氧苯基、3-氯苯基、3-氟-4-甲氧苯基或3-氯-4-甲氧苯基、或R1表示苯并[1,2,5]噻二唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢苯并[1,4]二氧杂环己烯基、苯并咪唑基、C1-6烷基苯并咪唑基、苯并[1,4]噁嗪-3-酮或苯并[1,4]噁嗪基。
优选地,R2位于与三唑连接点的间位,R2优选为卤素,例如氯,C1-6烷基或NO2。更优选地,R2为卤素。
R3优选为氢原子或卤素。
优选地,本发明方法应用的化合物分子量小于800,更优选地,小于600。
本发明可能提及的具体化合物包括下列化合物及其可药用盐6-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(3-氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(3-硝基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(3-甲基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(4-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(4-氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(4-甲基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(3,4-二氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(2-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶;6-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮;5-[5-(3-氯苯基)-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑;5-[5-(3-氟苯基)-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑;5-[5-(3-溴苯基)-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑;4-(3-氯苯基)-5-(4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑;4-(3-氟苯基)-5-(4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑;4-(3-氯苯基)-5-(3-氟-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑;4-(3-氟苯基)-5-(3-氟-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑;
6-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑;4-(3-氯苯基)-5-(3-氯-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑;及4-(3-氟苯基)-5-(3-氯-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑。
式(I)化合物合适的可药用盐包括但不限于无机酸盐,如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐及硝酸盐,包括有机酸盐,如苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、棕榈酸盐、水杨酸盐及硬脂酸盐。
本发明一些化合物可经水或有机溶剂结晶或重结晶。有时可能形成溶剂合物。在此范围内,本发明包括化学计量的溶剂合物,包括水合物以及诸如冷冻干燥过程中形成的包含不定量水的化合物。
式(I)一些化合物可以光学异构体的形式存在,例如非对映异构体以及各种比率的异构体混合物,例如消旋混合物。本发明包括所有这些形式,尤其包括纯净的异构体形式。不同异构体形式可以常用的方法将彼此分离或拆分,或任何既定异构体可以常用的合成方法或以立体定向合成方法或以不对称合成方法得到。
由于式(I)化合物欲用于药物组合物,易于理解它们都应该达到基本纯净的形式,例如纯度至少为60%,更优选至少75%,及优选至少85%,尤其至少98%(%为重量百分含量)。制备的不纯化合物可用于制备用于药物组合物的更纯净形式;这些不纯化合物应当包含至少1%,更优选至少5%及优选至少10%的式(I)化合物或其可药用盐。
此处使用的术语″C1-6烷基″,无论是其自身或为较大基团的一部分,例如C1-6烷氧基,指1~6碳原子的直链或支链基团,除链长另有限制,包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基及叔丁基。
C1-6卤代烷基可包括一或多个卤原子,尤其C1-6卤烷基,可提及一个具体实例为CF3。
此处使用的术语″卤″或″卤素″均指由卤原子氯、氟、碘,溴衍生的基团。
此处使用的术语″环烷基″指环状基团,优选包含3~7个碳,包括但不限于环丙基、环戊基及环己基。
此处使用的术语″ALK5抑制剂″指一种化合物,并非指抑制性的smads,例如smad6及smad7,与抑制p38或II型受体相比其更优选地选择性地抑制ALK5受体。
此处使用的术语″ALK5介导的疾病″指任何由ALK5介导(或调节)的疾病状态,例如通过抑制TGF-β1信号转导通道中的smad2/3的磷酸化而调节的疾病。
此处使用的术语″溃疡″包括但不限于糖尿病溃疡、慢性溃疡、胃溃疡及十二指肠溃疡。
式(I)化合物可以本技术领域公认地工艺方法由已知的或商品化的起始原料制备。若起始原料无法购得,可由此处所述的方法合成或由已知工艺制备。
具体而言,式(I)化合物的制备如方案1所示在碘化亚铜的存在下,使用钯催化剂将芳基溴(I)与三甲基甲硅烷基乙炔偶合,然后碱性条件下用碳酸钾消除三甲基硅基,将未保护的末端乙炔(II)在钯催化下与溴苯(III)反应。将生成的二取代乙炔(IV)以三甲基叠氮硅烷处理得到三唑(V),其可在碳酸钾存在条件下被合适的烷基化试剂L-R3烷基化,其中L为离去基团,如I。所得的异构体可以层析的方法分离。
方案1 制备式(I)化合物的细节见实施例。
在制备化合物(I)的过程中,中间体的活泼官能团,例如羟基、羧基及氨基应当被保护。各种活泼官能团的保护方法及最终保护的衍生物的保护基的离去方法的详细讨论可参见如Protective Groups in OrganicChemistry,T.W.Greene及P.G.M.Wut,(Wiley-Interscience,New York,2ndedition,1991)。
式(I)化合物可以单独制备或制备成至少包括2个化合物,如5~1,000化合物的化合物库,更优选包括10~100个式(I)的化合物。式(I)化合物库可以组合的分离及混合(′split及mix′)方法,或以多重平行的液相或固相化学合成的方法,利用本领域熟知的技术进行制备。
因而,本发明另一方面提供了包括至少2个式(I)化合物或其可药用盐的化合物库。
本发明另一方面提供了一种治疗哺乳动物中由ALK5受体介导的疾病的方法,包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明另一方面提供了一种用于治疗的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明另一方面提供了式(I)化合物或其可药用盐在用于制备治疗哺乳动物中由ALK5受体介导的疾病的药物中的用途。
ALK5机制介导的疾病,包括但不限于慢性肾病、急性肾病、创伤愈合、关节炎、骨质疏松、肾病、充血性心力衰竭、溃疡、眼病、角膜损伤、糖尿病型肾病、神经机能受损、阿耳茨海默氏病、动脉粥样硬化、腹膜及皮下粘连、任何以纤维化为主要特征的疾病,包括但不限于肺纤维化、肝纤维化、例如乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、酒精诱导的肝炎、血色素沉着病及原发性胆汁性硬化及再狭窄。
术语“治疗”指预防新或治疗性治疗。
本发明另一方面提供了一种抑制哺乳动物TGF-β信号转导通道的方法,例如抑制以I型或活化素样激酶ALK-5受体介导的smad2或smad3的磷酸化,该方法包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明另一方面提供了一种通过抑制哺乳动物TGF-β信号转导通道抑制基质形成的方法,例如抑制以I型或活化素样激酶ALK-5受体介导的smad2或smad3的磷酸化,该方法包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
式(I)化合物及可药用盐可以常用剂型施用,该剂型的制备方法为根据本领域熟知的常用方法,将式(I)化合物与标准的药学载体或稀释剂相组合。这些方法包括混合、制粒及压制或将合适的成分溶解以制备理想制剂。
本发明另一方面提供了一种包括式(I)化合物或其可药用盐及可药用载体或稀释剂的药物组合物。
本发明的药物组合物可配制成适合以任何途径向包括人的哺乳动物给药的形式,并包括适于口服、局部或胃肠外给药的形式。
本发明的组合物可以制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、乳膏剂或液体制剂,如口服、无菌的胃肠外给药的溶液或悬液。
本发明局部使用的制剂可以是诸如软膏剂、乳膏剂或洗液、眼膏、滴眼液或滴耳液、浸渍敷料及气雾剂,并可包含适当的常用添加剂,如防腐剂,药物穿透促进剂及膏剂和乳剂中使用的润滑剂。
制剂也可包含一些可合用的常用载体,如乳剂或膏剂基质,用于洗液的乙醇或油醇。这些载体的比例为制剂的1%~98%,更常为约80%。
口服使用的片剂及胶囊剂可制成单位剂量的给药形式,可包含常用的辅料,如粘合剂,如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮;填充剂,如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸;制片润滑剂,如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇或硅石;崩解剂,如马铃薯淀粉;或可接受的润湿剂,如十二烷基磺酸钠。片剂可按照正常的熟知的制药方法包衣。口服液体制剂可制成诸如水或油的悬液、溶液、乳液、糖浆剂或酏剂形式,或制成干燥产品,用前以水或其它合适的介质重构。这些液体制剂可包含常用的添加剂,如助悬剂,如山梨醇、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪,乳化剂,如卵磷脂、单油酸山梨聚糖或阿拉伯胶;非水介质(可包括食用油),如杏仁油、油脂如甘油、丙二醇或乙二醇;防腐剂,如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸,及必要时可加入常用的矫味剂或着色剂。
栓剂包括常用的栓剂基质、如可可豆油或其它甘油酯。
不经肠胃给药的制剂,使用化合物及无菌介质,优选以水制成流体单位剂型。视使用的基质及浓度,化合物可混悬或溶解于介质里。制备溶液时,将化合物溶解于注射水中,在装瓶或安培及封口前,过滤除菌。
有利地,诸如局部麻醉剂、防腐剂及缓冲剂能够溶于介质中。为了提高稳定度,组合物装瓶后冷冻,再于真空下除去水分,然后将冷冻干燥的粉末封装,附带一瓶注射用水用于使用前的液体的配制。胃肠外给药的悬液的制备基本相同,除化合物是混悬在介质中而不是溶解于其中,且不能过滤除菌。这些化合物的灭菌可在将其混悬于无菌介质前将其暴露于环氧乙烷氛围处理。有利地,组合物包含表面活性剂或润湿剂以有利于化合物的均匀分散。
视不同给药方法,组合物可包含0.1%重量,优选10-60%重量的活性物质。此处组合物包含单位剂量,每个剂量单位优选包括50-500mg的活性物质。用于成人治疗的剂量优选每天100~3000mg,例如视给药途径及给药频率每天1500mg。该剂量相当于每天1.5~50mg/kg。合适的剂量范围为每天5~20mg/kg。
本领域熟练的技术人员应当明白式(I)化合物的最佳质量及单次给药间隔将视不同的疾病及严重程度、制剂、给药途径及部位、具体受治的哺乳动物而定,并且通过常规技术决定这些最佳值。本领域熟练的技术人员也应当明白,最佳疗程即式(I)化合物在既定时间内每日的给药次数可经该领域熟练疗程规范的技术人员利用常规的疗程决定测试确定。
当式(I)化合物或其可药用衍生物在上述剂量范围内使用时,无毒理学现象产生。
所有出版物,包括但不限于本说明书引用的专利及专利申请,其在此处引入作为参考,一如各自单独具体引入此处作为参考一样公开充分。
下列实施例仅用于阐释本发明,不能从任何方面限制本发明的范围。在实施例中,质谱利用带有化学电离(CI)技术的Hitachi Perkin-ElmerRMU-6E以及带有电喷雾质谱(ES)技术的Micromass Platform II进行测定。
简写CuI 碘化亚铜DMF 二甲基甲酰胺EtOAc乙酸乙酯MgSO4硫酸镁NaHCO3碳酸氢钠Na2SO4硫酸钠Pd(PPh3)4四(三苯基磷)钯(O)THF 四氢呋喃TMEDA 四甲基乙二胺制备1N'-(5-溴-2-氨基吡啶)-N,N-二甲基甲脒
在氩气保护下,将5-溴-2-氨基吡啶(9.8g,56.6mmol,1当量)溶于干燥DMF(20ml)及二甲基甲酰胺二甲基缩醛(20ml)溶液中。将溶液于130℃下回流16小时,冷却后除去溶剂。所得粗品不经纯化直接用于下一步;m/z[APCIMS]228.0/230.0[M+H]+。
制备26-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 在氩气保护下,将N'-(5-溴-2-氨基吡啶)-N,N-二甲基甲脒(16.2g,~56.6mmol,1当量)溶于甲醇(90ml)及吡啶(10ml)混合溶液中,冷却至0℃。搅拌下,加入羟胺-O-磺酸(7.3g,75.2mmol,1.3当量)得紫色溶液。升至室温,搅拌16小时。除去溶剂后,将所得粗品悬于碳酸氢钠水溶液(200ml)中,以乙酸乙酯萃取(2×200ml)。有机层以水和食盐水(各100ml)洗涤后干燥(MgSO4),除去溶剂。以硅胶快速层析纯化,梯度洗脱初始洗脱比例为40-60℃石油醚乙酸乙酯2∶1~直至40-60℃石油醚乙酸乙酯1∶1洗脱得淡黄色固体(5g,44.6%);1H NMR(250MHz;CDCl3)δ8.77(1H,s),8.34(1H,s),7.69(1H,d),7.65(1H,d);m/z[APCIMS]198.0/200.0[M+H]+。
制备36-三甲基甲硅烷基乙炔基-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 将6-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(5g,25.26mmol,1当量)溶于THF(50ml)种,向溶液中充氩气5分钟。加入碘化亚铜(0.46g,2.53mmol,0.1当量)、二氯双(三苯基)膦(0.36g,0.51mmol,0.02当量),及三甲基甲硅烷基乙炔(7.14ml,4.96g,50.52mmol,2当量)。滴加入二异丙胺(6.78ml,5.1g,50.52mmol,2当量),将所得深红色悬液于氩气下搅拌24小时。以硅藻土过滤,以大量乙酸乙酯洗涤,除去溶剂。将所得粗品悬于水(200ml)中,以乙酸乙酯萃取(2×200ml),合并有机层,水和食盐水洗(各100ml),干燥(MgSO4),除去溶剂。以硅胶快速层析纯化,3∶1的40-60℃石油醚∶乙酸乙酯洗脱得淡黄色固体(2.9g,53.3%)。1HNMR(400MHz;CDCl3)δ8.72(1H,s),8.36(1H,s),7.69(1H,d),7.54,(1H,d),0.28(9H,s);m/z[APCIMS]216[M+H]+。
制备46-乙炔基-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 将6-三甲基甲硅烷基乙炔基-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(2.9g,13.47mmol,1当量)溶于甲醇中,然后加入碳酸钾(5.6g,40.4mmol,3当量)。将悬液搅拌2小时,除去溶剂。将粗品悬于水(100ml)中,以乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并有机层,分别以水及食盐水(各50ml)洗涤,干燥(MgSO4),除去溶剂得呈微桔红色的固体(1.8g,95%),不用纯化直接用于下一步反应。m/z[APCIMS]144.1[M+H]+。
制备56-(3-氯苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 在搅拌条件下,将6-乙炔基-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(693mg,4.846mmol)的TMEDA(15ml)及THF(15ml)溶液以氩气脱气。加入Pd(PPh3)4(0.253mg,0.219mmol,0.05当量)、CuI(100mg,0.524mmol,0.1当量)及3-氯碘苯(2.311g,9.69mmol,2当量)。在氩气条件下,升温至50℃反应16小时。真空除去溶剂,将粗品在乙酸乙酯(3×70ml)与饱和的NaHCO3水溶液(70ml)之间分配。合并乙酸乙酯层,干燥(Na2SO4),过滤,减压浓缩至干。硅胶层析纯化,以比例为(4∶6)的乙酸乙酯∶石油溶剂洗脱得(824mg,67%)黄色固体;CIMS254.1[M+H]+。
制备65-溴苯并[1,2,5]噻二唑 向4-溴苯-1,2-二胺(17g,91mmol)中加入氯化亚砜(200ml)。然后加入一滴DMF。氩气保护下升温至80℃,回流反应过夜。将反应液冷却至室温,并分批加入到装有在大烧杯中的冰中并以固体碳酸钾中和。将混合物在乙酸乙酯与水溶液中分配。合并乙酸乙酯层,干燥(MgSO4),减压浓缩除去溶剂。目标化合物以硅胶层析分离,以比例为90%乙酸乙酯/10%甲醇洗脱得(12g,62%)。1HNMR(250MHz,CDCl3)δ7.61(1H,dd,J=9,2Hz),7.82(1H,d,J=9Hz),8.16(1H,s)。
制备7(4-溴-2-硝基苯氧基)乙酸乙酯 室温搅拌下,向4-溴-2-硝基酚(3.71g,17.0mmol,1.0当量)的DMF(80ml)溶液中加入K2CO3(4.70g,34.0mmol,2.0当量)固体。将混合物在40℃加热3小时,冷却至室温后在EtOAc和水中分配。水相以乙酸乙酯多次萃取,并将合并的有机层,分别以水及食盐水洗涤,干燥(MgSO4)。浓缩得到黄色固体(5.01g,97%),无需纯化直接用于下一步。1HNMR(250MHz;CDCl3)δ8.00(1H,d),7.62(1H,dd),6.90(1H,d),4.76(H,s),4.26(2H,q),1.29(3H,t)。
制备86-溴-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮 室温搅拌条件下,向(4-溴-2-硝基苯氧基)乙酸乙酯(4.01g,13.2mmol,1.0当量)的冰乙酸(70ml)溶液中加入铁粉(14.70g,264.0mmol,20.0当量)。将混合物于60℃剧烈搅拌4小时后,冷却至室温。将混合物滤过Kieselguhr垫,乙酸乙酯洗涤,将溶液浓缩至干。将残留物在乙酸乙酯(3×70ml)与饱和的NaHCO3水溶液(70ml)中分配。水相以乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯层,水洗、干燥(MgSO4),浓缩得白色的目标化合物(2.90g,97%),无需纯化直接用于下一步反应。1HNMR(250MHz;CDCl3)δ10.79(1H,br.s)7.09-7.01(2H,m),6.91(1H,d),4.59(2H,s)。
实施例实施例16-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶
在氩气保护条件下,以叠氮三甲基硅烷(0.32ml,2.42mmol)处理搅拌的6-(3-氯苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(制备5)(205mg,0.807mmol)的DMF(1.1ml)溶液,并在130℃加热9小时。真空浓缩除去DMF,并将混合物在EtOAc和食盐水中分配。乙酸乙酯层经干燥(Na2SO4),过滤,浓缩至干。残留物以硅胶层析纯化,以比例为(2∶1)的石油溶剂∶乙酸乙酯至乙酸乙酯洗脱得类白色固体(83mg,35%)。1HNMR(250MHz;CDCl3)δ8.97(1H,S),8.42(1H,s),7.84(1H,d),7.74(1H,dd),7.62(1H,d),7.46(3H,m);没有观察到NH;m/z[ESMS]297[M+H]+。
实施例26-[5-(3-氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(3-氟苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(171mg,0.722mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz;d6-DMSO,游离碱)δ15.49(NH,br.s),9.03(1H,s),8.57(1H,s),7.93(1H,d),7.70(1H,d),7.48-7.27(4H,m);m/z[ESMS]281[M+H]+。
实施例36-[5-(3-硝基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(3-硝基苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(213mg,0.807mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz;d6-DMSO,游离碱)δ15.74(NH,br.s),9.15(1H,s),8.59(1H,s),8.40(1H,s),8.27(1H,d),7.95(2H,br.s),7.73(2H,br.s);m/z[ESMS]308[M+H]+。
实施例46-[5-(3-甲基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(3-甲基苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(188mg,0.805mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(250MHz,CDCl3,游离碱)δ9.16(1H,s),8.43(1H,s),7.79(2H,d),7.41-7.28(4H,m),2.38(3H,s);没有观察到NH;m/z[ESMS]277[M+H]+。
实施例56-[5-(4-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(4-氯苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(102mg,0.40mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(250MHz;CD3OD,游离碱)δ8.83(1H,s),8.35(1H,s),7.73(1H,d),7.69(1H,d),7.45(2H,d),7.36(2H,d),没有观察到NH;[ESMS]297[M+H]+。
实施例66-[5-(4-氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶
使用实施例1类似的方法,以6-(4-氟苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(195mg,0.821mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz;CDCl3,游离碱)δ13.45(NH,br.s),9.12(1H,s),8.44(1H,s),7.83(1H,d),7.74(1H,d),7.57-7.51(2H,m)7.17-7.10(2H,m);m/z[ESMS]281[M+H]+。
实施例76-[5-(4-甲基苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(4-甲基苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(180mg,0.773mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz;DMSO,游离碱)δ15.33(NH,br.s),8.97(1H,s),8.54(1H,s),7.91(1H,d),7.70(1H,d),7.44(2H,d)7.27(2H,br.s),2.45(3H,s);m/z[ESMS]277[M+H]+。
实施例86-[5-(3,4-二氟苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶 使用实施例1类似的方法,以6-(3,4-二氟苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(139mg,0.545mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(250MHz;CDCl3,游离碱)δ9.01(1H,s),8.43(1H,s),7.83(1H,d),7.70(1H,d),7.49-7.40(1H,m),7.19-7.30(2H,m),没有观察到NH;m/z[ESMS]299[M+H]+。
实施例96-[5-(2-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶
使用实施例1类似的方法,以6-(2-氯苯基乙炔基)-[1,2,4]三唑并[1,5-α]吡啶(189mg,0.746mmol)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz;d6-DMSO,游离碱)δ15.63(1H,br.s),8.74(1H,s),8.51(1H,s),7.91(1H,d),7.68-7.52(5H,m),m/z[ESMS]297[M+H]+。
实施例106-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮 搅拌条件下,向6-(3-氯苯基乙炔基)-4H-苯并[1,4]噁嗪-3-酮(0.311g,1.15mmol,1.0当量)的干燥DMF(1.5ml)溶液中,加入(三甲基硅烷基)叠氮化合物(0.397g,3.45mmol,3.0当量)。混合物以氩气脱气5分钟,然后于密封管中在110℃共加热72个小时。24小时后,再加入(三甲基硅烷基)叠氮化合物(0.397g,3.45mmol,3.0当量)。混合物冷却后,在乙酸乙酯与水溶液中分配。水相以乙酸乙酯多次萃取后,合并乙酸乙酯层,分别以水及食盐水洗涤,干燥(MgSO4)。浓缩得到固体,再经硅胶快速层析分离,以50%EtOAc-石油醚至EtOAc梯度洗脱得黄色固体产物(0.063g,17%)。1HNMR(250MHz;DMSO-d6)(NMR,在室温非常宽)δ10.80(1H,br.s),7.55-7.35(4H,m),7.20-6.90(3H,m),4.63(2H,s),没有观察到三唑的NH;m/z[ESMS]327.2[M+H]+。
实施例115-[5-(3-氯苯基-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑
使用实施例10类似的方法,以5-(3-氯苯基乙炔基)-苯并[1,2,5]噻二唑制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)8.22(1H,s),8.01(1H,d),7.80(1H,d),7.37(3H,m),7.17(1H,t),没有观察到NH。
实施例125-[5-(3-氟苯基-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑 使用实施例10类似的方法,以5-(3-氟苯基乙炔基)-苯并[1,2,5]噻二唑制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)8.24(1H,s),8.04(1H,d),7.84(1H,d),7.35(3H,m),7.15(1H,t),没有观察到NH。
实施例135-[5-(3-溴苯基-2H-[1,2,3]-三唑-4-基]-苯并[1,2,5]噻二唑 使用实施例10类似的方法,以5-(3-溴苯基乙炔基)-苯并[1,2,5]噻二唑制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)8.24(1H,s),8.02(1H,d),7.80(1H,s),7.56(1H,d),7.45(1H,d),7.26(1H,t),没有观察到NH;m/z[APCIMS]358/360[M+H+]。
实施例144-(3-氯苯基)-5-(4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑 使用实施例10类似的方法,以3-(4-甲氧苯基乙炔基)氯苯制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)7.61(1H,m),7.46(3H,m),7.30(2H,m),6.93(2H,m),3.84(3H,s),没有观察到NH;m/z[APCIMS]286.2[M+H+]。
实施例154-(3-氟苯基)-5-(4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑
使用实施例10类似的方法,以3-(4-甲氧苯基乙炔基)氟苯制备得到目标化合物。1HNMR(250MHz,CDCl3)7.47(2H,d),7.35(3H,m),6.95(1H,m),6.92(2H,d),3.85(3H,s),没有观察到NH;m/z[APCIMS]270.2[M+H+]。
实施例164-(3-氯苯基)-5-(3-氟-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑 使用实施例10类似的方法,以3-(3-氟-4-甲氧苯基乙炔基)氟苯制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(1H,s),7.37(5H,m),6.97(1H,t),3.92(3H,s),没有观察到NH;m/z[APCIMS]304.1[M+H+]。
实施例174-(3-氟苯基)-5-(3-氟-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑 使用实施例10类似的方法,以3-(3-氟-4-甲氧苯基乙炔基)-氟苯制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(5H,m),7.09(1H,m),6.97(1H,t),3.93(3H,s),没有观察到NH;m/z[APCIMS]288.2[M+H+]。
实施例186-[5-(3-氯苯基)-1H-[1,2,3]三唑-4-基]-1-甲基-1H-苯并咪唑
使用实施例10类似的方法,以6-(3-氯苯基乙炔基)-1-甲基-1H-苯并咪唑制备得到目标化合物。1HNMR(HCl盐,400MHz,MeOH)δ9.45(1H,s),8.13(1H,s),7.89(1H,d),7.76(1H,d),7.55(1H,s),7.44-7.37(3H,m),4.12(3H,s),没有观察到NH);m/z[APCIMS]267[M+H+]。
实施例194-(3-氯苯基)-5-(3-氯-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑 使用实施例10类似的方法,以3-(3-氯-4-甲氧苯基乙炔基)氯苯制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(1H,d),7.50(1H,d),7.34(4H,m),6.93(1H,t),3.92(3H,s),没有观察到NH。
实施例204-(3-氟苯基)-5-(3-氯-4-甲氧苯基)-2H-[1,2,3]三唑 使用实施例10类似的方法,以3-(3-氯-4-甲氧苯基乙炔基)氟苯(500mg,1.92mmol,1当量)制备得到目标化合物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(1H,d),7.46(1H,dd),7.25(3H,m),7.1(1H,t),6.94(1H,d),3.93(3H,s),没有观察到NH。
生物学数据本发明化合物的生物活性可采用下述方法测定评估ALK5激酶磷酸化smad3的方法向Basic Flash-Plates(NEN Life Sciences)中吸入100微升0.1摩尔碳酸氢钠(pH7.6)溶液,每100微升包被缓冲液包括150纳克谷胱甘肽-S-转移酶-smad3融合蛋白。将板封闭,于室温温育10-24小时。然后将板以200微升包被缓冲液(0.1摩尔碳酸氢钠)洗涤两次,空气中干燥2-4小时。
向磷酸化反应的各孔中加入90微升包含50毫摩尔HEPES缓冲液(pH7.4);5毫摩尔MgCl2;1毫摩尔CaCl2;1毫摩尔二硫苏糖醇;100微摩尔三磷酸鸟苷;0.5微Ci/孔γ33P-三磷酸腺苷(NEN Life Sciences)及400纳克融合蛋白,谷胱甘肽-S-转移酶位于ALK5激酶结构域氮端(GST-ALK5)。背景计数时不加入任何GST-ALK5。在不同的化合物存在下,通过测定酶活性评估ALK5抑制剂。板于30℃温育3小时。温育后,吸出除去测定缓冲液,各孔皆以200微升冷10毫摩尔焦磷酸盐的磷酸盐缓冲溶液洗涤3次,洗涤完毕将板吹干。然后,利用Packard Top Count计数。
荧光各向异性激酶结合测定将激酶、荧光配体及各种浓度的测试化合物一起温育,直至达到热力学平衡,条件为在无测试化合物条件下,荧光配体显著地为酶结合的(>50%),在足够浓度(>10×Ki)的强效抑制剂存在条件下,测得未结合的荧光配体的各向异性与结合值不同。
激酶浓度优选≥1×Kf。所需的荧光配体浓度视使用的仪器及荧光以及物理化学性质而定。使用的浓度必须低于激酶的浓度,优选低于激酶浓度的一半。常规的方法为将所有组分溶于组成为50mM HEPE,pH7.5、1mM CHAP、1mM DTT、10mM MgCl2、2.5%DMSO缓冲溶液中。
ALK5酶浓度4nM荧光配体浓度1nM测试化合物浓度0.1nM-100uM将组分在10ul微升终体积中在LJL HE 384 B型黑色微量滴定板中温育直至达到平衡(5-30分钟)。
在LJL Acquest中读取荧光各向异性。
定义Ki=抑制剂结合的离解常数Kf=荧光配体结合的离解常数荧光配体为下列化合物 其衍生自5-[2-(4-氨基甲基苯基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-4-基]-2-氯苯酚及若丹明绿。
基质标记物的抑制Northern Blot方法酶测定中确定的活性数据按照如下得到A498肾上皮肿瘤细胞系自ATCC处获得,生长于EMEM培养基,该培养基加有10%胎牛牛血清、青霉素(5units/ml)及链霉素(5ng/ml)。当A498细胞在100mm皿中生长接近融合时,24小时不加入血清,以化合物预处理4小时后,加入10ng/ml TGF-β(R&D System,Inc.,Minneapolis MN)。将细胞接触TGF-β124小时后,以酸苯酚/氯仿提取细胞RNA(Chomczynski及Sacchi,1987)。将10微克的总RNA以琼脂糖凝胶电泳分离后,转移至尼龙膜(Gene Screen,NEN Life Science,Boston MA)上。将膜用32P标记cDNA探针(Stratagene,LaJolla,CA)检测纤维连接蛋白mRNA。将膜暴露于磷显影板,所观察的带以Image Quant软件(MolecularDynamic,Sunnyvale,CA)定量。
基质标记物的抑制Western Blot方法酶测定中确定的活性数据按照如下得到当细胞在瓶中接近融合时,不加血清过夜,以TGF-β及化合物处理。处理24小时或48小时后以冰冷的磷酸缓冲盐溶液洗涤,然后向板中加入500微升2X载样缓冲液,刮擦下的细胞收集于微离心管中。(2X载样缓冲液100mM Tris-Cl,pH6.8、4%十二烷基磺酸钠、0.2%溴酚蓝、20%甘油、5%β-巯基乙醇)。将细胞在管中裂解并涡旋。样品煮沸10分钟后,将20微升样品加入至7.5%聚乙酰胺凝胶(BioRad)并电泳。
通过半干印迹将在凝胶上大小分离的蛋白质转移至硝基纤维素膜上。将膜在含5%奶粉的磷酸缓冲液(PBS)及Tween-20中4℃封闭过夜。以PBS/Tween洗涤膜3次后,室温下以一级抗体温育4小时。以PBS/Tween洗涤膜3次后,室温下以二级抗体温育1小时。最后,以Amersham的ECL检测试剂盒使信号显色。
本发明化合物一般显示出调节ALK5受体的活性,IC50值为0.0001~10μM。
权利要求
1.式(I)的化合物或其可药用盐 其中R1为萘基或苯基,其任选被一或多个选自卤素、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-O-(CH2)n-Ph、-S-(CH2)n-Ph、氰基、苯基及CO2R的取代基取代,其中R为氢原子或C1-6烷基,n为0、1、2或3;或R1为与5-7员的芳香环或非芳香环相稠合的苯基或吡啶基,其中,该环系任选包含多达3个杂原子,该杂原子独立地选自N、O及S,且N可进一步任选被C1-6烷基取代,及其中环系可任选被=O取代;R2及R3独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、NH(CH2)n-Ph、NH-C1-6烷基、卤素、CN、NO2、CONHR及SO2NHR;X1、X2及X3中的两个为N,另一个为NR4,其中R4为氢原子、C1-6烷基、C3-7环烷基、-(CH2)p-CN、-(CH2)p-CO2H、-(CH2)p-CONHR5R6、-(CH2)pCOR5、-(CH2)q(OR7)2、-(CH2)pOR5、-(CH2)q-CH=CH-CN、-(CH2)q-CH=CH-CO2H、-(CH2)p-CH=CH-CONHR5R6、-(CH2)pNHCOR8或-(CH2)pNR9R10;R5及R6独立地为氢原子或C1-6烷基;R7为C1-6烷基;R8为C1-7烷基,或任选取代的芳基、杂芳基、芳基C1-6烷基或杂芳基C1-6烷基;R9及R10独立地选自氢原子、C1-6烷基、芳基及芳基C1-6烷基;p为0-4;及q为1-4。
2.权利要求1所述的化合物,其中R1为任选被卤素取代的苯基,或R1为与5-7员的芳香环或非芳香环相稠合的苯基或吡啶基,其中,该环系任选包含多达3个杂原子,该杂原子独立地选自N、O及S,且N可进一步任选被C1-6烷基取代,及其中的环系可任选被=O取代。
3.权利要求2所述的化合物,其中,R1表示4-甲氧苯基、3-氟-4-甲氧苯基、3-氯苯基、3-氟-4-甲氧苯基或3-氯-4-甲氧苯基,或R1表示苯并[1,2,5]噻二唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢苯并[1,4]二氧杂环己烯基、苯并咪唑基、C1-6烷基苯并咪唑基、苯并[1,4]噁嗪-3-酮或苯并[1,4]噁嗪基。
4.前述权利要求中任何一项所述的化合物,其中,R2位于与三唑连接点的间位。
5.前述权利要求中任何一项所述的化合物,其中,R2为卤素、C1-6烷基或NO2。
6.实施例1~20中任何一例所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
7.一种药物组合物,其包括前述权利要求中任何一项所述的化合物,或其可药用盐及可药用载体或稀释剂。
8.权利要求1~6中任何一项所述的式(I)化合物,或其可药用盐或溶剂合物,其用于治疗。
9.权利要求1~6中任何一项所述的式(I)化合物或其可药用盐在制备治疗哺乳动物中由ALK5受体介导的疾病的药物中的用途。
10.一种抑制哺乳动物TGF-β信号转导通道的方法,包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用治疗有效剂量的权利要求1~6中任何一项所述的式(I)化合物或其可药用盐。
11.一种治疗疾病的方法,包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用治疗有效剂量的权利要求1~6中任何一项所述的式(I)化合物或其可药用盐,所述疾病选自慢性肾病、急性肾病、创伤愈合、关节炎、骨质疏松、肾病、充血性心力衰竭、溃疡、眼病、角膜损伤、糖尿病型肾病、神经机能受损、阿耳茨海默氏病、动脉粥样硬化、腹膜及皮下粘连、任何以纤维化为主要特征的疾病,包括但不限于肺纤维化、肝纤维化、例如乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、酒精诱导的肝炎、血色素沉着病及原发性胆汁性硬化及再狭窄。
12.一种抑制哺乳动物的基质形成方法,包括向需要接受此种治疗的哺乳动物使用治疗有效剂量的权利要求1~6中任何一项所述的化合物或其可药用盐。
全文摘要
本发明公开了式(1)所述的苯基取代的三唑及其盐和溶剂化物,其中R
文档编号C07D413/04GK1608065SQ02825914
公开日2005年4月20日 申请日期2002年11月14日 优先权日2001年11月15日
发明者拉拉米·M·加斯特, 约翰·D·哈林, 杰格·P·希尔, 托马斯·D·海特曼, 安德鲁·H·佩恩 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司
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