专利名称：用作HIV整合酶抑制剂的四氢－4H－吡啶并[1,2－а]嘧啶和相关化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶、其相关化合物及其药学上可接受的盐，它们的合成、以及它们作为HIV整合酶抑制剂的应用。本发明化合物及其药学上可接受的盐在预防或治疗由HIV引起的感染和在治疗AIDS或延迟AIDS的发生中是有用的。
背景技术：
一种命名为人类免疫缺陷病毒(HIV)的逆转录病毒是包括免疫系统进行性破坏(获得性免疫缺陷综合征，AIDS)和中枢和外周神经系统变性在内的综合性疾病的病原体。这种病毒就是先前已知的LAV、HTLV-III或ARV。逆转录病毒复制的一个通常特征是将前病毒DNA病毒-编码的整合酶插入到宿主细胞基因组，这是HIV在人体T-淋巴细胞和单核细胞内复制的必需步骤。相信整合过程在三个步骤由整合酶介导由病毒DNA序列装配稳定的核蛋白质复合体；从线性前病毒DNA的3′端分裂两条核苷酸；在宿主靶位制造的错列的切口上共价结合前病毒DNA的凹进的3′OH端。过程的第四步，已形成的裂口的修复合成，可以由细胞酶完成。
HIV的核苷酸序列显示在一个开放阅读框架中存在pol基因[Ratner，L.等，Nature，313，277(1985)]。氨基酸序列同系物提供证据表明pol系列编码逆转录酶、整合酶和HIV蛋白酶[Toh，H.等，EMBO J.4，1267(1985)；Power，M.D.等，Science，231，1567(1986)；Pearl，L.H.等，Nature，329，351(1987)]。所有这些三种酶都显示对HIV的复制很重要。
已知用作HIV复制的抑制剂的某些抗病毒化合物在治疗AIDS和类似疾病方面是有效的药物，包括逆转录酶抑制剂如叠氮胸苷(AZT)和依法韦伦以及整合酶抑制剂如茚地那韦和奈非那韦。本发明的化合物是HIV整合酶抑制剂和HIV复制抑制剂。在体外对整合酶的抑制作用和HIV在细胞内的复制的抑制作用是体外在HIV感染细胞中抑制由重组的整合酶催化的链转换反应的直接结果。本发明的特别优势在于高度特异性地抑制HIV整合酶和HIV复制。
发明简述本发明涉及新的吡啶并嘧啶衍生物和相关化合物。这些化合物在抑制HIV整合酶、预防由HIV引起的感染、治疗由HIV引起的感染以及在预防、治疗AIDS和/或ARC和延迟AIDS和/或ARC的发作中是用的，不论是以化合物或者是其药学上可接受的盐或者水合物(适当的时候)，或者作为药用组合物成分，与其它的HIV/AIDS抗病毒剂、抗感染药、免疫调节剂、抗生素或疫苗一起联合使用与否。更具体地说，本发明包括式I化合物，以及其药学上可接受的盐 R1是H或NR2R5；R2是CH3；R5是1)C(O)CH2SO2CH3，2)C(O)C(O)N(CH3)2，3)SO2N(CH3)2，或4)SO2R20，其中R20是 或
或者任选R2和R5和与其连结的氮原子一起形成错误！从编辑域代码不能产生目标体，或 R3是氢；R4是1)对氟苄基，2)4-氟-3-甲基苄基，3)3-氯苄基，或4)3-氯-4-甲基苄基；R12和R14均为H，除非当R5是C(O)C(O)N(CH3)2以及R4是对氟苄基和n是1时，则R12和R14或者都是H或者都是CH3；和n为等于的0、1或2的整数。
本发明还包括含有本发明的化合物的药用组合物和制备这些药用组合物的方法。本发明还包括治疗AIDS的方法、延迟AIDS的发生的方法、预防AIDS的方法、预防由HIV引起的感染的方法，和治疗由HIV引起的感染的方法。
本发明的其它实施方案、方面和特征或者在随后的说明、实施例和附加的权利要求书中进一步加以描述或者从中体现出来。
发明详述本发明包括上述的式I化合物，及其药学上可接受的盐。这些化合物和其药学上可接受的盐是HIV整合酶的抑制剂。
本发明的一个实施方案是式I化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是NR2R5；n为等于1或2的整数；以及所有其它的变量如上述最初的定义。
本发明的另一个实施方案是式I化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是NR2R5；R2是CH3；R5是
1)C(O)C(O)N(CH3)2或2)SO2R20，其中R20是 R3是氢；R4是对氟苄基或4-氟-3-甲基苄基；R12和R14均为H，除非当R5是C(O)C(O)N(CH3)2以及R4是对氟苄基和n是1时，R12和R14或者都是H或者都是CH3；和n为等于的1或2的整数。
本发明还包括了式II化合物，或其药学上可接受的盐 其中R1是氢、NR2R5、OR2、SR2、SOR2、SO2R2、SO2NR2R5，或OC(O)NR2R5；R3是氢；R4是 R2是1)氢，2)CH3，或3) 和R5是1)C(O)CH3，2)C(O)CH2SO2CH3，3)CH3，4)C(O)C(O)N(CH3)2，5)SO2CH3，6)SO2N(CH3)2，7)C(O)CH2N(CH3)2，8)SO2CH2SO2CH3，9)C(O)CF3，10) 或12) 或R2和R5，与其连接的氮原子一起，形成选自以下的杂环 和 本发明的另一个实施方案是选自于下表1所列化合物的化合物，或其药学上可接受的盐。
本发明的其它实施方案包括如下(a)包含式I化合物和药学上可接受的载体的药用组合物。
(b)药用组合物，它包含通过组合(例如，混合)有效量的式I化合物和药学上可接受的载体制备的产品。
(c)(a)或(b)的药用组合物，它进一步包含有效治疗量的选自HIV/AIDS抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染药的HIV感染/AIDS治疗药物。
(d)(c)的药用组合物，其中的HIV感染/AIDS治疗药物是选自HIV整合酶抑制剂、非-核苷HIV逆转录酶抑制剂和核苷HIV逆转录酶抑制剂的抗病毒剂。
(e)用于抑制HIV整合酶、治疗或预防由HIV引起的感染，或预防、治疗AIDS或延迟AIDS的发生的组合，所述组合为有效治疗量的式I化合物和有效治疗量的选自HIV/AIDS抗病毒剂、免疫调节剂、抗感染药的HIV感染/AIDS治疗药物。
(f)(e)的组合，其中的HIV感染/AIDS治疗药物是选自HIV蛋白酶抑制剂、非-核苷HIV逆转录酶抑制剂和核苷HIV逆转录酶抑制剂的抗病毒剂。
(g)一种在有此需要的患者中抑制HIV整合酶的方法，该方法包括给予所述患者有效治疗量的式I化合物。
(h)一种在有此需要的患者中治疗或预防由HIV引起的感染的方法，该方法包括给予所述患者有效治疗量的式I化合物。
(i)(h)的方法，其中式I化合物是与至少一种抗病毒剂的有效治疗量联合给予的，所述抗病毒剂选自HIV蛋白酶抑制剂、非-核苷HIV逆转录酶抑制剂和核苷HIV逆转录酶抑制剂。
(j)一种在有此需要的患者中预防、治疗AIDS或延迟AIDS的发生的方法，该方法包括给予所述患者有效治疗量的式I化合物。
(k)(j)的方法，其中所述化合物是与有效治疗量的至少一种抗病毒剂联合给予的，所述抗病毒剂选自HIV蛋白酶抑制剂、非-核苷HIV逆转录酶抑制剂和核苷HIV逆转录酶抑制剂。
(l)一种在有此需要的患者中抑制HIV整合酶的方法，该方法包括给予所述患者(a)、(b)、(c)或(d)的药用组合物或者(e)或(f)的组合。
(m)一种在有此需要的患者中预防或治疗由HIV引起的感染的方法，该方法包括给予所述患者(a)、(b)、(c)或(d)的药用组合物或者(e)或(f)的组合。
(n)一种在有此需要的患者中预防、治疗AIDS或延迟AIDS的发生的方法，该方法包括给予所述患者(a)、(b)、(c)或(d)的药用组合物或者(e)或(f)的组合。
本发明还包括将本发明的化合物(i)用于，(ii)作为药物用于，或(iii)用来制备药物用于(a)抑制HIV整合酶，(b)治疗或预防由HIV引起的感染，或(c)预防、治疗AIDS或延迟AIDS的发生。在这些应用中，本发明化合物能够任选与一种或多种选自HIV/AIDS抗病毒剂、抗感染药和免疫调节剂的HIV/AIDS治疗药物联合使用。
本发明化合物可有不对称的中心，并且除了特别提到之外，可作为立体异构体的混合物或单独的非对映异构体，或对映体的混合物，且所有异构的形式均被包含在本发明中。
本发明的N-取代的羟基嘧啶酮化合物也可作为其互变异构体出现，例如以下式I化合物的互变异构体 可以理解本发明包括所有式I(或II)的羟基嘧啶酮化合物的互变异构体，包括单一的和混合的。
本发明化合物在抑制HIV整合酶、预防或治疗由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染和预防、治疗或延迟作为后果的病理疾病如AIDS的发生是有用的。预防AIDS、治疗AIDS、延迟AIDS的发生，或预防或治疗由HIV引起的感染被定义为包括，但不限于，治疗广泛的HIV感染状态AIDS，ARC(AIDS相关复症)，有症状的和无症状的，和实际的或潜在的暴露于HIV。例如，本发明化合物在治疗疑似通过诸如输血、体液交换、叮咬、意外针刺或手术中暴露于病人血液的途径而暴露于HIV后的HIV感染中是有用的。
本发明的代表性化合物的抑制作用在一项整合酶的链转移活性的测定中已经得到检验。该测定以在WO 02/30930中描述的方式进行。对于重组整合酶来说，该测定还与Wolfe，A.L.等，J.Virol.1996，701424-1432一致，除了(i)该测定使用预先装配的整合酶链转移复合物；(ii)链转移反应是在抑制剂存在下，在2.5mM MgCl2中，用0.5-5nM的3′FITC标记的靶DNA底物进行的；和(iii)使用碱性磷酸酶缀合的抗FTTC抗体和化学发光碱性磷酸酶底物检测链转移产物。在该项测定中，本发明的代表性化合物表现出链转移活性的抑制作用。例如，在下表1列出的化合物在整合酶测定中得到检验并证明IC50约为5微摩尔或更少。对使用预先装配的复合物操作该项测定的进一步的说明在Hazuda等，J.Virol.1997，717005-7011；Hazuda等，Drug Design and Discovery 1997，1517-24；和Hazuda等，Science 2000，287646-650中被发现。
本发明的某些代表性化合物在一项测定T-淋巴细胞急性HIV感染的抑制作用中也已经得到检验，依照Vacca，J.P.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1994，914096中所述操作。这些化合物--包括在下表1列出的化合物--被证明IC95约为20微摩尔或更少。
本发明化合物还能够作为HIV核糖核酸酶H(RNase H)的抑制剂起作用。利用RNA-和DNA-依赖的聚合酶和RNase H酶的活性，1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶(RT)在细胞进入后催化基因组RNA转化为双链前病毒DNA。HIV-1 RT是由p66和p51多肽组成的不对称二聚体。RT的催化活性在p66亚基的离散部位上传导；即，p66的N末端催化RNA-和DNA-依赖的聚合酶活性，和在C末端的p15结构域催化RNase H的活性。RNase H对于裂解在逆转录过程中RNA:DNA异源双链中间体的RNA链是必需的。本发明化合物能够选择性地结合并抑制HIV-1RT的RNase H结构域。所述化合物的RNase H抑制活性可用本领域熟知的适当的测定方法检测，例如在Shaw-Reid等，J.Biol.Chez.2003，278(5)2777-2780中所述的测定法。因此，本发明包括在需要这样的抑制的患者中抑制HIV-1 RNase H的方法，该方法包括给予所述患者有效量的本发明化合物。本发明还包括将本发明化合物(i)用于、(ii)当作药物用于、或(iii)用来制备药物用于抑制HIV RNase H。
本发明化合物可以药学上可接受的盐的形式给药。术语“药学上可接受的盐”指的是具有母体化合物的效力的且并不是生物学的或其它方面不合需要(例如，既不是毒性也不是其它的对其接受者有害)的盐。适合的盐包括酸加成盐，其可由例如本发明化合物的溶液与药学上可接受的酸诸如盐酸、硫酸、醋酸、三氟乙酸或苯甲酸混合而成。当本发明化合物携带一个酸性部分，则其适合的药学上可接受的盐可包括碱金属盐(例如，钠或钾盐)、碱土金属盐(例如，钙或镁盐)，和与合适的有机配基形成的盐如季铵盐。还有，如果存在酸(-COOH)或醇基团，药学上可接受的酯可被用于修饰所述化合物的溶解性或水解特性。
为了抑制HIV整合酶或HIV RNase H、预防或治疗HIV感染或者预防、治疗AIDS或延迟AIDS发作的目的，本发明化合物可以口服、胃肠外(包含皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术)、通过吸入喷雾、或经直肠，以含有有效量的本发明化合物和常规的无毒的药学上可接受的载体、辅料及赋形剂的药用组合物的单位剂量的形式给予。
涉及本发明化合物的术语“给予”和其不同说法(例如，“给予”化合物)是指向需要治疗的个体提供所述化合物或化合物的前药。当本发明化合物或其前药与一种或多种活性药物(如用于治疗HIV感染或AIDS的抗病毒药)联合提供时，“给予”和其不同说法分别被理解为包括同时和序贯给予本发明化合物或其前药和其它药物。
在此使用的术语“组合物”意指包含由特定量的特定成分组成的产品，以及任何由于直接或间接地混合了特定量的特定成分而制成的产品。
“药学上可接受的”指药用组合物的成分必须彼此适配并对其接受者无害。
术语“对象”(作为选择，在此处适宜作为“患者”解)在此处使用是指被治疗、观察或试验的客体动物，优选哺乳类动物，更优选人。
在此处使用的术语“治疗有效量”意指活性化合物或药剂的剂量，其在组织、系统、动物或人引起研究者、兽医、医生或其它临床医生所探寻的生物学或医学反应，包括缓解或预防待治疗或预防的疾病和病症的症状。该术语在此还包含足够抑制HIV整合酶和/或RNase H以及因此引起正探寻的反应的活性化合物的剂量。当活性化合物(例如，活性成分)作为盐被给予时，则活性成分的剂量作为化合物的游离酸或游离碱的形式来参考。
药用组合物可以是口服的悬浮液或片剂或胶囊、鼻喷雾剂、无菌可注射制剂，例如无菌可注射的水性或油性悬浮液或栓剂的形式。这些组合物能够用本领域熟知的方法和某些赋形剂制备。适合的方法和成分在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.RGennaro编辑，Mack出版社，1990中描述，其全文通过引用结合到本文中。
本发明化合物可以按哺乳类(例如，人)体重每天0.001到1000mg/kg范围的剂量以单一剂量或分剂量口服给予。一个优选的剂量范围是按体重每天0.01到500mg/kg以单一剂量或分剂量口服。另一个优选的剂量范围是按体重每天0.1到100mg/kg单一剂量或分剂量口服。为了口服给药，组合物可以以含有1.0到500毫克的活性成分的片剂或胶囊的形式提供，具体地说，含有1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400和500毫克的活性成分，以根据症状调整被治疗的患者的剂量。对任何具体患者用量的特定剂量水平和频率可能不同并且将依多种因素不同而异，这些因素包括使用的特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用的时间长度、年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药的方式和次数、排泄速率、联合用药情况、具体病情的严重程度和接受治疗的患者情况。
如上所提到的，本发明还涉及本发明的HIV整合酶抑制剂化合物与一种或多种治疗HIV感染或AIDS有用的药物的联合应用。例如，不管是在暴露前和/或暴露后的期间，本发明化合物可以有效地与有效量的一种或多种在治疗HIV感染或AIDS上是有用的HIV/AIDS抗病毒剂、免疫调节剂、抗感染药或疫苗联合给予，例如在WO 01/38332的表1或在WO 02/30930的表中公开的那些，此两篇文献的全文通过引用结合到本文中。将会理解的是将本发明化合物与HIV/AIDS抗病毒剂、免疫调节剂、抗感染药或疫苗联合用药的范围不限于上文提到的WO 01/38332和WO 02/30930的表中所列出的那些，但是原则上包括了与任何对治疗AIDS有用的药用组合物的任何组合。HIV/AIDS抗病毒剂和其它药物将通常以其本领域报道的常规剂量范围和给药方案用于这些组合中，包括例如，在Physicians′Desk Reference，第57版，Thomson PDR，2003中描述的用量。在这些组合中本发明化合物的剂量范围与那些在上面阐明的一样。
在本说明书、尤其是流程和实施例中使用的缩写包括如下AIDS＝获得性免疫缺陷综合征，ARC＝AIDS相关复征，Bn＝苄基，CBZ(或Cbz)＝苄氧羰基，DBU＝1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯，DMAD＝乙炔二羧酸二甲基酯，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，DMSO＝二甲基亚砜，EtOAc＝乙酸乙酯，FIA-MS＝流注分析-质谱测定，h＝小时，HIV＝人类免疫缺陷病毒，HPLC＝高效液相色谱，IPA＝异丙醇，LDA＝二异丙基氨化锂，Me＝甲基，MeOH＝甲醇，NMP＝N-甲基吡咯烷酮，NMR＝核磁共振，Pd/C＝披钯碳催化剂，RP-HPLC＝反相HPLC，TFA＝三氟乙酸，THF＝四氢呋喃。
本发明化合物可按照随后的反应流程和实施例、或其修正的方法，使用易得的起始原料和试剂容易地制备。在下面显示的反应中，也可使用本身为本领域的普通专业人员所知的变量，但是没有提及过多细节。此外，按照随后的反应方案和实施例，其它制备本发明化合物的方法将容易地为本领域的普通专业人员所明白。除非另外定义，列于流程1、A、B、C或D的变量有以下含义P^是氢或保护基团，例如酯，但不限于苯甲酸酯和新戊酸酯一样的酯，或者醚，但不限于苄基醚，所述保护基团通常在使甲酯转移为酰胺所采用的条件下被除去或者用不同的步骤除去。保护基团典型地用于合成和/或纯化理由。
R^是氢或C1-6烷基。
Y是氢或NRsaRsb。
Rsa是C1-6烷基、C(O)Rsc、C(O)C(O)NRscRsd、SO2Rsc、SO2NRscRsd、C(O)CH2SO2Rsc、C(O)CH2NRscRsd、SO2CH2SO2Rsc、或CH(CH3)Rsc或者Rsa和Rsb，与它们连接的氮原子一起，形成含1或2个杂原子的杂环。
Rsb是氢、C1-6烷基，或C(O)CF3、或Rsa和Rsb，与它们连接的氮原子一起，形成含1或2个杂原子的杂环。
Rsc是C1-6烷基、芳基、未取代的或被C1-6烷基、C(O)CH2SO2C1-6烷基或(CH2)1-6芳基取代的5-或6-元杂芳基环。
Rsd是C1-6烷基。
Rs5是Rsc、C(O)NRscRsd、CH2SO2Rsc、CH2NRscRsd、NRscRsd或CH2SO2Rsc。
Rs1是氢。
Rs2是CH2Rse，其中Rse是未取代的芳基或被卤素取代的芳基。
本发明化合物能够通过使适当的胺与合适取代的下列物质偶合制备，这些物质是3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸烷基酯(或羧酸或卤化物)或3-羟基-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸烷基酯(或羧酸或卤化物)或3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸烷基酯(或羧酸或卤化物)或3-羟基-4-氧代-6，7，8，9，10，11-六氢-4H-嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸烷基酯(或羧酸或卤化物)，如流程1所示。
流程1 化合物1使羧酸衍生物与胺偶合形成甲酰胺的方法为本领域所熟知。适合的方法已有描述，例如在Jerry March，Advanced Organic Chemistry，第3版，John Wiley & Sons，1985，pp.370-376中。式1-2的胺可用在Richard Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH出版公司，1989，pp 385-438中描述的方法，或其常规变化的方法来制备。
流程A描述了酰胺(carboxamide)A-5的通用合成法。在适当的温度(如从20到150℃下)，在诸如DMF、甲醇、乙醇、甲苯、NMP的溶剂中，甲酯A-4可与胺1-2反应，生成最终化合物A-5。甲酯A-4可通过三个合成途径之一的方法被合成。在第一个途径中，在碱的存在下，盐酸脒A-1a(sX＝H；sY＝H)可与2-(苄氧基)-3-氧代琥珀酸二甲酯反应，得到保护的甲酯中间体A-2，后者能够容易地去保护得到甲酯A-4。在第二个途径中，从苄氧基氨基甲酸叔丁基酯经三个步骤得到的amidoxine A-1b(sX＝OH；sY＝H)可与DMAD反应得到环状的中间体A-3a，后者能够在适当的溶剂(如二甲苯)中经过加热重排获得甲酯A-5。在第三条途径，amidoxyme A-1c(sX＝H；sY＝OH)可以在适当的溶剂(如乙腈)中与DMAD反应得到中间体A3-b，后者经过在适当的溶剂(如二甲苯)中加热重排获得甲酯A-4。所有这三种途径都能够适用于包含环状取代基的脒和amidoxymes。
流程A在实施例1中被作为例证。
流程A 流程B显示了制备本发明化合物的方法，这些化合物在3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺核的9-位上含有胺、醚、硫醚、亚砜或砜基团。从甲酯A-4开始，通过先用适合的保护基团保护在A-4上的羟基基团(如转化为苯甲酸酯或新戊酸酯或者转化为苄氧基)，然后用溴化剂(如NBS)与被保护的A-4接触，可得到溴代衍生物B-1。然后溴代衍生物B-1可用亲核试剂(″Nu″；如胺、硫醇或醇化物)处理后得到(分离或不分离)甲酯中间体B-2，其与所需的胺反应得到终产物B-3。如果亲核试剂是硫醇或包含可氧化的硫，获得亚砜或砜的氧化步骤可能包括在流程中。如果亲核试剂包含酯，该酯在合成B-3后采用常规化学方法转化为酰胺。流程B在实施例2中被作为例证。
流程B 流程C描述了含有脂肪族环取代基诸如酰胺、磺酰胺、磺酰脲、氨基甲酸酯或脲的衍生物C-3或C-4的通用合成法。溴代衍生物B-1可被苄胺C-1处理，然后氢化或直接与胺C-1a反应得到中间体C-2，然后后者可用胺1-2处理(分离或不分离)，再与羧酸偶合或者与碳酰氯(或磺酰氯或氨磺酰氯)或异氰酸酯反应得到终产物C-3。如果C-3包含Rs4＝Rs3O(CO)CO，则它能够进一步与诸如胺的亲核试剂反应得到产物C-4。流程C在实施例3、4和6中被作为例证。最后两个步骤可以颠倒。
流程C 流程D显示了纯手性的化合物C-3、C3a，b和C-4的合成。溴代衍生物B-1被手性胺D-1置换生成非对映异构体混合物，随后或同时移去保护基团。在9-位的氨基基团被醛或酮D-2还原性地烷基化生成中间体D-3。非对映异构体混合物用结晶法或色谱法能够被分离生成单一的非对映异构体D-3a，b。Rs6能够被氢化去除得到纯手性的C-2a，b中间体。随后与胺1-2反应和与羧酸偶合或用酰氯(或磺酰氯或氨磺酰氯)或异氰酸酯处理，得到最终的纯手性产物C-3a，b。当在流程C中存在外消旋化合物C-3的情况下，能够实施附加的步骤以产生纯手性的C-4化合物。流程D在实施例5和7中被作为例证。
流程D P^＝H或保护基团Rs6＝手性烷基残基(例如(S)-a-甲基苄基)Rsp，Rsq＝H或C1-6烷基Rs4＝Rs5CO或Rs5SO2或Rs5(Rs6)NSO2或Rs5OCO，Rs3O(CO)CORs5(Rs6)NCOsX＝Cl或Br或OH以下的实施例仅用作说明本发明和其实践。这些实施例不被解释为对本发明在范围或精神上的限制。
实施例1N-(4-氟代苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺步骤1a苄氧基(4-氰基丁基)氨基甲酸叔丁基酯(Bergeron，R.J.，McManis，J.S.，Tetrahedron 45(16)，4939-4944(1989)。
向苄氧基氨基甲酸叔丁基酯的无水二甲基甲酰胺的溶液中加入5mol％的碘化钠并分批加入1.36当量氢化钠(60％分散于矿物油中)。混合物于室温下搅拌15min后加入1.05当量4-氯戊腈。将混合物加热至85℃并搅拌3.5h。混合物冷却至室温后，用水淬灭并以乙醚萃取。浓缩合并的有机相，用半饱和的含水硫代硫酸钠、水和盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。使用石油醚洗去油性残余物，在高真空下干燥，得到淡黄色油状的苄氧基(4-氰基丁基)氨基甲酸叔丁基酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38(m，5H)，4.84(s，2H)，3.45(t，J＝6.4Hz，2H)，2.34(t，J＝6.8Hz，2H)，1.70(m，4H)，1.52(s，9H).MS m/z271(M+H)+.
步骤2a1-(苄氧基)哌啶-2-亚胺盐酸盐将苄氧基(4-氰基丁基)氨基甲酸叔丁基酯溶解于4M HCl的1，4-二氧六环溶液中，将该混合物在室温搅拌18h。减压下除去溶剂，残余物用乙酸乙酯和乙醚处理。形成的固体用乙醚洗涤、过滤并在高真空下干燥，得到浅黄色固体状的1-(苄氧基)哌啶-2-亚胺盐酸盐盐酸盐。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.53(s，1H)，8.97(s，1H)，7.57-7.41(m，5H)，5.05(s，2H)，3.67(t，J＝6.0Hz，2H)，2.64(t，J＝6.4Hz，2H)，1.90-1.84(m，2H)，1.69-1.63(m，2H).MS m/z205(M+H)+.
步骤3a2-亚氨基哌啶-1-醇盐酸盐将(1-苄氧基)哌啶-2-亚胺盐酸盐的甲醇溶液(包含披钯碳(10％w/w))在氢气压下搅拌3h。滤掉催化剂，溶液在减压下浓缩至干燥。残余物用乙醚研研、过滤并在高真空下干燥，得到浅黄色固体状的2-亚氨基哌啶-1-醇盐酸盐。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.76(s，1H)，8.82(s，1H)，8.49(s，1H)，3.63(t，J＝6.0Hz，2H)，2.63(t，J＝6.0Hz，2H)，1.87(m，2H)，1.66(m，2H).13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)δ159.06，50.92，25.76，22.01，17.22.
MS m/z115(M+H)+.
步骤4a2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-5，6，7，8-四氢-2H-[1，2，4]噁二唑并[2，3-a]吡啶-2-羧酸甲酯向2-亚氨基哌啶-1-醇盐酸盐的氯仿溶液中加入三乙胺。该混合物在室温下搅拌5分钟，然后冷却至0℃并在搅拌中滴加1.2当量乙炔二羧酸二甲基酯。移去冷浴并在室温下搅拌该混合物1小时。减压除去溶剂，使该溶液在乙酸乙酯和半饱和的氯化铵水溶液之间分配。水相进一步用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥且通过硅胶过滤。在真空中去除溶剂得到淡黄色油状的2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-5，6，7，8-四氢-2H-[1，2，4]噁二唑并[2，3-α]吡啶-2-羧酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.82(s，3H)，3.70(s，3H)，3.51(m，1H)，3.36(m，1H)，3.31(d，J＝16.6Hz，1H)，2.98(d，J＝16.6Hz，1H)，2.53(m，2H)，1.94(m，2H)，1.74(m，2H).13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ169.15，168.88，164.97，103.27，55.71，52.97，51.84，42.26，26.06，23.49，22.83.
MS m/z257(M+H)+.
步骤5a3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯将2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-5，6，7，8-四氢-2H-[1，2，4]噁二唑并[2，3-a]吡啶-2-羧酸甲酯的无水邻二甲苯溶液放入双颈圆底烧瓶中。烧瓶上装有温度计并用隔膜封闭。加热该混合物至148-150℃达5h。移去热浴并将混合物在室温放置16h。向含有沉淀物的该混合物中加入乙醚。5分钟后滤去沉淀物，用乙醚洗涤并在真空中干燥。得到淡棕色固体状的产物3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.03(s，1H)，3.86(t，J＝6.0Hz，2H)，3.80(s，3H)，2.75(t，J＝6.8Hz，2H)，1.90-1.70(m，4H).13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)δ165.81，158.65，148.60，143.10，127.07，51.98，42.87，30.32，20.91，18.40.
MS m/z225(M+H)+.
下面的过程是合成3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯的备选途径。
步骤1b2-(苄氧基)-3-氧代琥珀酸二甲酯将(苄氧基)乙酸甲酯(1eq)和草酸二甲酯(1.2eq)在干燥的THF中的溶液冷却至-78℃并滴加入LDA(2M在THF-庚烷中，1.2eq)。搅拌一小时后移去冷浴，并且继续再搅拌一小时。于0℃通过倒入冷的1N HCl水溶液猝灭反应，水相用EtOAc萃取；有机相用盐水洗涤，干燥并浓缩得到无须进一步纯化即可使用的粗品。
步骤2b3-(苄氧基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯于室温往在步骤1b制备的氧代琥珀酸酯(1eq)的MeOH溶液中加入商业上可获得的2-亚氨基哌啶盐酸盐(1.5eq)。在另外滴加纯的DBU(4.5eq)后，搅拌反应混合物2天。蒸发掉溶剂得到残余物，使其溶于EtOAc中并且用1N HCl和盐水洗涤；有机相在Na2SO4上干燥，去除溶剂。粗品无须进一步纯化即可使用。
用快速色谱法(石油醚/EtOAc 1∶2到1∶5)纯化该产物的分析用样品，并且得到以下光谱数据1H-NMR(400Mz，CDCl3)δ7.49-7.30(m，5H)，5.25(s，2H)，4.00(t，J＝6.2Hz，2H)，3.86(s，3H)，2.94(t，J＝6.6Hz，2H)，2.01-1.95(m，2H)，1.92-1.87(m，2H).
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ164.1，159.3，154.1，141.1，140.6，136.0，128.1，127.8，127.7，73.8，52.2，42.7，30.9，21.0，18.4.
MS m/z315(M+H)+.
步骤3b3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯将在步骤2b制备的中间体3-(苄氧基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯溶解于MeOH中并于室温下向其中加入有催化作用的10％Pd/C。在H2气下搅拌混合物3.5小时。滤过催化剂并蒸发掉甲醇得到残余物，于后者中加入乙醚；过滤得到淡棕色固体状的3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯，其光谱特性与在步骤5a中描述的化合物相同。
步骤6N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺将在步骤3b或步骤5a中得到的3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯溶液和4-氟代苄胺(2当量)的甲醇溶液进行搅拌并加热到65℃达22h。减压除去溶剂并用制备型RP-HPLC，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)得到标题产物。冻干合并的产物部分，获得蓬松的白色物质样的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.12(s，1H)，9.35(m，1H)，7.36(m，2H)，7.15(m，2H)，4.44(m，2H)，3.84(t，J＝6.4Hz，2H)，2.80(t，J＝6.8Hz，2H)，1.90-1.73(m，4H).MS m/z318(M+H)+.
实施例2N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-吗啉-4-基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺盐酸盐步骤13-(苯甲酰氧基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯往3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯(按照实施例1所得到的)的吡啶溶液中加入苯甲酸酐(1.55当量)。将该混合物在室温中搅拌16h。减压除去溶剂，使该残余物在乙酸乙酯和0.5M含水HCl之间分配。水相用乙酸乙酯萃取以及合并的有机相用0.5M含水HCl、水和盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥、过滤和在真空中浓缩至干。用快速色谱法(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯，1∶2)得到无色固体状的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.07(m，2H)，7.78(m，1H)，7.62(m，2H)，3.86(t，J＝6.0Hz，2H)，3.74(s，3H)，2.92(t，J＝6.4Hz，2H)，1.93-1.81(m，4H).MS m/z329(M+H)+.
步骤23-(苯甲酰氧基)-9-溴代-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯将3-(苯甲酰氧基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯、N-溴代-琥珀酰亚胺(1.2当量)和联苯甲酰基过氧化物(70％，0.13当量)在四氯化碳中的混合物在回流下搅拌一小时。将该混合物冷却至室温，滤去琥珀酰亚胺，在减压下除去溶剂。快速色谱法(洗脱剂石油醚/乙酸乙酯，1∶1)后得到浅黄色油状的3-(苯甲酰氧基)-9-溴代-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.08(m，2H)，7.79(m，1H)，7.63(m，2H)，5.58(m，1H)，4.24(m，1H)，3.77(s，3H)，3.72(m，1H)，2.43-2.35(m，1H)，2.30-2.05(m，3H).MS m/z409/407(M+H)+.
步骤3N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-吗啉-4-基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺。
向3-(苯甲酰氧基)-9-溴代-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯的DMF溶液中加入吗啉(3当量)，将该混合物在室温搅拌1h。在减压下除去溶剂，残余物用乙醚研磨。将该粗制物质溶解于甲醇中，加入4-氟代-苄胺(3当量)，将该混合物在65℃搅拌1.5h。在减压下除去溶剂，用制备型RP-HPLC提纯产物，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分，并再溶解于1N HCl中。在减压下除去溶剂，使残余物从水/乙腈中冻干得到淡粉红色的蓬松物质样的N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-吗啉-4-基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺盐酸盐。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.34(s，1H)，10.99(s，1H)，10.47(s，1H)，7.44(m，2H)，7.16(m，2H)，4.85(m，1H)，4.60-4.40(m，3H)，4.10-3.85(m，4H)，3.60-3.05(m，5H被水信号掩盖)，2.35-2.15(m，2H)，2.03-1.80(m，2H).MS m/z403(M+H)+.
实施例3(+/-)-9-[[(二甲氨基)磺酰基](甲基)氨基]-N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺C-3步骤19-[苄基(甲基)氨基]-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯盐酸盐往搅拌的溴代衍生物3-(苯甲酰氧基)-9-溴代-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯(在实施例2，步骤2中获得)的无水二甲基甲酰胺的溶液中加入N-苄基-N-甲胺(3当量)。将该混合物于室温搅拌1.5h，之后加入乙醚和2M HCl的乙醚溶液。搅拌该混合物5分钟，过滤形成的沉淀物以及溶液在减压下被浓缩至干。得到浅黄油状的标题粗产物，其包含过量的N-苄基-N-甲胺盐酸盐，无须进一步纯化即可使用。
MS m/z344(M+H)+。
步骤23-羟基-9-(甲基氨基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯将步骤1所得的粗品的甲醇溶液(包含披钯碳(10％w/w))在氢气压下搅拌达3h。滤去催化剂且溶液在减压下被浓缩至干。残余物用乙醚研磨，过滤并在高真空下干燥，得到黄色固体样粗品，其无须进一步纯化即可使用于下一步骤。
MS m/z254(M+H)+。
步骤3N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-(甲基氨基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺往在步骤2所得的粗品的无水甲醇溶液中加入过量的三乙胺。在减压和然后在高真空下除去溶剂。使油性残余物溶解于无水甲醇并加入4-氟代-苄胺(3.1当量th.)。搅拌该混合物并加热至60℃过夜。在冷却至室温后在减压下除去溶剂。残余物用乙醚研磨，在高真空下放置15min。得到黄色固体样标题粗产物，其包含过量的4-氟代-苄胺(约3.5当量)并无须进一步纯化即可使用。
MS m/z347(M+H)+。
步骤4(+/-)-9-[[(二甲氨基)磺酰基](甲基)氨基]-N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺往在步骤3所得的粗品化合物在2∶1四氢呋喃和2M氢氧化钠水溶液的混合物中的溶液中加入N，N-二甲基氨磺酰氯(4.6当量)。将该混合物于室温搅拌16h。在减压下浓缩该混合物，产物由制备型RP-HPLC分离，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分，获得蓬松的、淡粉红色物质的标题化合物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ11.95(s，1H)，9.13(m，1H)，7.38(m，2H)，7.04(m，2H)，4.98(m，1H)，4.56(m，2H)，4.36(m，1H)，3.62(m，1H)，2.84(s，6H)，2.57(s，3H)，2.38-1.85(m，4H).
13C-NMR(100MH.z，CDCl3)δ167.53，162.55，160.11，157.74，145.76 144.11，132.70，128.89，128.81，124.82，114.60，114.39，58.06，42.93，41.53，37.00，29.03，23.89，20.09.
MS m/z454(M+H)+.
实施例4(+/-)-N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺(ethanediamide)步骤1(+/-)-N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺往搅拌的粗品N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-(甲基氨基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺(如在实施例3，步骤3中所述合成)的二氯甲烷溶液中加入6当量三乙胺和6当量氯代氧代乙酸甲基酯。于室温下搅拌该混合物2h，在减压下除去溶剂，使残余物溶解于二甲胺(2M)的四氢呋喃溶液中。将该混合物在57℃搅拌过夜。冷却至室温后，在减压下除去溶剂，用制备型RP-HPLC分离产物，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分，得到淡粉红色的蓬松物质样的标题化合物。经NMR检测该产物为旋转异构体的混合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(s，0.2H)，11.89(s，0.8H)，9.21(m，0.8H)，8.74(m，0.2H)，7.40-7.28(m，2H)，7.20-7.10(m，2H)，5.17(m，0.8H)，4.63-4.35(m，2.2H)，4.13-4.00(m，1H)，3.65-3.53(m，部分被水信号掩盖)，2.95-2.75(m，9H)，2.15-1.80(m，4H).13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ167.87，167.73，165.92，165.46，164.51，164.30，162.42，160.01，157.50，157.41，146.27，146.18，145.76，145.49，134.44，129.43，129.35，129.08，129.00，125.17，125.05，115.07，114.85，57.47，53.60，43.14，41.37，36.49，35.95，32.92，32.64，32.36，28.19，23.88，22.12，19.67，19.35.
MS m/z446(M+H)+.
实施例5(+)-N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺步骤1(+)3-羟基-2-(甲氢羰基)-N-甲基-4-氧代-N-[(1S)-1-苯乙基]-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-铵三氟乙酸盐于-30℃，向含(1S)-1-苯乙胺(4.5当量)的7∶3(v/v)的甲醇和水的混合物中加入溴代衍生物3-(苯甲酰氧基)-9-溴代-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-羧酸甲酯(如在实施例2，步骤2中所述合成)(1.0当量)。将该混合物于-30℃剧烈搅拌1.5h。移去冷浴，在室温下继续搅拌1h。用乙酸调节pH至约5后加入37％的含水甲醛(11.5当量)和氰基氢硼化钠(3.25当量)。于室温下搅拌20分钟后，在减压下将体积减少至约1/4。过滤形成的白色沉淀物，滤液用三氟乙酸酸化至pH 2-3。将该溶液施用于阳离子交换树脂柱(Varian MEGA BONDELUTE SCX)上，以甲醇洗涤柱，粗产物被2M氨水的甲醇液洗脱。将合并的洗脱液在减压下浓缩至干，使油状残余物溶解于甲醇中，用三氟乙酸中和。除去溶剂后得到油状残余物。生成的1∶3比率的非对映异构体通过制备型RP-HPLC纯化分离(柱C18)，洗脱剂为水(0.1％TFA)，乙腈(0.1％TFA)。主要的非对映异构体作为第二峰被洗脱，冻干后得到淡粉红色固体样的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，吡啶-d5)δ7.53(m，2H)，7.39(m，2H)，7.29(m，1H)，4.45(m，1H)，4.38(m，1H)，4.14(m，1H)，3.91(s，3H)，3.80(m，1H)，2.13(s，3H)，1.95-1.82(m，3H)，1.70-1.60(m，1H)，1.49(d，J＝6.4Hz，3H).
MS m/z358(M+H)+.
步骤2(-)-3-羟基-2-(甲氧羰基)-N-甲基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-铵三氟乙酸盐将(+)3-羟基-2-(甲氧羰基)-N-甲基-4-氧代-N-[(1S)-1-苯乙基]-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-三氟乙酸铵的甲醇溶液(包含披钯碳(10％w/w))在氢气压下搅拌1.5h。滤去催化剂且溶液在减压下被浓缩至干，得到淡粉红色油状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ4.41(m，1H)，4.14(m，1H)，3.99(s，3H)，3.91(m，1H)，2.86(s，3H)，2.50(m，1H)，2.26(m，1H)，2.08(m，1H)，1.86(m，1H).
MS m/z254(M+H)+.
步骤3(+)-N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺将(-)-3-羟基-2-(甲氧羰基)-N-甲基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-铵三氟乙酸盐、对-氟代苄胺(2.2当量)和三乙胺(1.3当量)的甲醇溶液搅拌并加热至65℃ 3h。在真空下除去溶剂，将残余物溶解于无水二氯甲烷中。加入氯代氧代乙酸甲基酯(5当量)和三乙胺(5当量)，将该混合物在室温搅拌50min。在减压下除去溶剂，且将残余物溶解于2M二甲胺的四氢呋喃溶液中。将该混合物在57℃搅拌过夜。冷却至室温后，在减压下除去溶剂，用制备型RP-HPLC分离产物，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分，得到蓬松的白色物质样的标题化合物(ee94.4％)。
将该化合物溶解于乙酸乙酯/庚烷(3∶2.5(v/v)混合物)中并且放置在室温下四天。倒掉形成沉淀的上清液，在减压下浓缩，自水/乙腈中冻干残余物，得到对映体纯(enantiopure)的标题产物e.e.100％(e.e.由手性HPLC Chiralpak AS检测，流动相0.2％TFA正-Hex/IPA)，其光谱特性与在实施例4、步骤1中描述的化合物相同。20D＝+36.5±2.5°(c＝0.63于乙醇中)。
实施例6(+/-)-N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺标题化合物按照在实施例4中描述的，但有以下变化的合成顺序制备。
步骤11-(苄氧基)氮杂庚环-2-亚胺将叔丁基-(苄氧基)-(5-氰基戊基)-氨基甲酸酯(按照在实施例1-步骤1a中描述的方法从6-溴己腈开始合成)溶解于HCl的EtOH饱和溶液并搅拌此混合物45分钟。向溶液中鼓泡通入氮气以去除过剩的HCl。在减压下除去溶剂，且将溶解于1，4-二氧六环中的残余物用三乙胺处理以调节pH到10。去除乙醇，含有过量的氯化三乙铵和6-[(苄氧基)氨基]己酸乙酯的标题化合物不需进一步纯化即可被使用。用制备型RP-HPLC来纯化分析用样品，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ9.39(s，1H)，8.81(s，1H)，7.61-7.52(m，2H)，7.48-7.38(m，3H)，5.03(s，2H)，4.02-3.93(m，2H)，2.70-2.59(m，2H)，1.69-1.54(m，6H).
MS m/z219(M+H)+.
步骤2(+/-)-N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺向搅拌的粗品N-(4-氟苄基)-3-羟基-10-(甲基氨基)-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-甲酰胺(从1-(苄氧基)氮杂庚环-2-亚胺开始，按照在实施例3-步骤3中类似6-元系列使用的方法合成)的二氯甲烷溶液中加入3当量三乙胺、2eq的(二甲氨基)(氧代)醋酸钾、2.2当量1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和2.2当量1-羟基苯并三唑。将该混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，使残余物在乙酸乙酯和1M HCl水溶液之间分配。水相用乙酸乙酯提取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩至干。标题产物通过制备型RP-HPLC分离，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分，获得蓬松的、白色物质样的标题化合物。经1H NMR检测该产物为旋转异构体的混合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ12.29(bs，0.1H)，11.95(bs，0.9H)，9.30(bs，0.9H)，8.45(bt，0.1H)，7.38(dd，J＝8.33，5.5Hz，1.8H)，7.33(dd，J＝8.33，5.5Hz，0.2H)，7.15(t，J＝9.0Hz，2H)，5.45-5.25(m，0.9H)，4.94(dd，J＝14,5.7Hz，1.0H)，4.84-4.79(m，0.1H)，4.57-4.43(m，2H)，3.54(dd，J＝14,11Hz，0.9H)，3.28-3.18(m，0.1H)，3.05(s，0.3H)，2.92(s，2.7H)，2.90(s，5.4H)，2.81(s，0.3H)，2.76(s，0.3H)，2.19-1.78(m，5H)，1.41-1.27(m，1H).
MS m/z460(M+H)+.
实施例7(-)-N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基)-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺步骤1(2E)-2-[(氮杂庚环-2-亚基(azepan-2-ylidene)氨基)氧基]丁-2-烯二酸二甲酯和(2Z)-2-[(氮杂庚环-2-亚基氨基)氧基]丁-2-烯二酸二甲酯搅拌下，往氮杂庚环-2-酮肟的乙腈混悬液中滴加入1.1当量乙炔二羧酸二甲酯。将该混合物于室温搅拌1小时。在减压下除去溶剂，得到(2E)-2-[(氮杂庚环-2-亚基氨基)氧基]丁-2-烯酸二甲酯和(2Z)-2-[(氮杂庚环-2-亚基氨基)氧基]丁-2-烯酸二甲酯比例为8/1的黄色油状的混合物。为了更好地对标题化合物进行特征鉴定，用制备型RP-HPLC纯化少量的粗品，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱剂(柱C18)。冻干合并的产物部分。
异构体E1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ7.08(bs，1H)，5.63(s，1H)，3.77(s，3H)，3.59(s，3H)，3.19-3.11(m，2H)，2.29-2.21(m，2H)，1.66-1.42(m，6H).
13C-NMR(125MHz，DMSO-d6，300K)δ166.20，162.81，161.90，161.61，92.38，52.42，50.92，42.28，29.84，29.32，28.81，25.40.
MS m/z271(M+H)+.
异构体Z1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)6.66(bs，1H)，5.63(s，1H)，3.74(s，3H)，3.61(s，3H-3，3.24-3.16(m，2H)，2.20-2.12(m，2H)，1.65-1.44(m，6H).
13C-NMR(125MHz，DMSO-d6，300K)δ165.01，163.01，161.45，154.11，101.09，52.32，51.05，42.24，29.93，29.31，28.45，25.14.
MS m/z271(M+H)+.
步骤23-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯将比例为8/1的(2E)-2-[(氮杂庚环-2-亚基氨基)氧基]丁-2-烯酸二甲酯和(2Z)-2-[(氮杂庚环-2-亚基氨基)氧基]丁-2-烯酸二甲酯的混合物溶解于邻二甲苯中并回流。16h后在减压下除去溶剂，用NaHCO3在水中的饱和溶液提取溶解于乙酸乙酯中的残余物。加入6M HCl水溶液将水相的pH调节至约3，该溶液用二氯甲烷提取。有机相经硫酸钠干燥和浓缩。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ10.12(s，1H)，4.29-4.16(m，2H)，3.80(s，3H)，2.95-2.78(m，2H)，1.79-1.41(m，6H).
13C-NMR(100MHz，DMSO-d6，300K)6165.79，158.54，153.41，143.55，126.61，52.04，43.02，35.75，28.76，26.94，24.58.
MS m/z239(M+H)+.
步骤33-(苯甲酰氧基)-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯向3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯的嘧啶溶液中，加入苯甲酸酐(1.1当量)和催化量的二甲基氨基吡啶。将该混合物于室温搅拌3h。在减压下除去溶剂，使残余物分配于二氯甲烷和1M HCl水溶液之间。水相用二氯甲烷提取，合并的有机相用1M HCl水溶液和盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥、过滤和在真空浓缩至干。经过快速色谱法(洗脱液石油醚/乙酸乙酯，6∶4)后得到棕色固体样的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ8.07(dd，J＝8.6，1.3Hz，2H)，7.78(t，J＝7.5Hz，1H)，7.62(t，J＝7.9Hz，2H)，4.31-4.29(m，2H)，3.74(s，3H)，3.06-3.04(m，2H)，1.82-1.65(m，6H).
13C-NMR(75MHz，DMSO-d6，300K)δ162.78，162.65，162.43，157.01，140.29，135.23，134.18，129.63，128.86，127.59，52.46，43.13，36.07，28.47，26.12，23.68.
MS m/z343(M+H)+.
步骤43-(苯甲酰氧基)-10-溴代-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氧嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯将3-(苯甲酰氧基)-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯、N-溴代-琥珀酰亚胺(2当量)和α，α′-偶氮异丁腈(0.45当量)在四氯化碳中的混合物于回流下搅拌14小时。使该混合物冷却至室温，过滤琥珀酰亚胺，在减压下除去溶剂。经过快速色谱法(洗脱液为石油醚/乙酸乙酯，8∶2)后得到浅黄色固体样的3-(苯甲酰氧基)-10-溴代-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，300K)δ8.07(dd，J＝8.3，0.9Hz，2H)，7.79(t，J＝7.5Hz，1H)，7.63(t，J＝7.9Hz，2H)，5.63(dd，J＝5.9，2.2Hz，1H)，4.98(dd，J＝14.3，6.1Hz，1H)，3.97(dd，J＝14.3，11.0Hz，1H)，3.76(s，3H)，2.31-2.13(m，2H)，2.10-1.79(m，3H)，1.-1.61-1.48(m，1H).
13C-NMR(75MHz，DMSO-d6，300K)δ162.65，162.14，157.22，157.10，139.45，136.59，134.37，129.72，128.94，127.36，53.56，52.67，42.37，31.52，25.78，24.40.
MS m/z423/421(M+H)+.
步骤53-羟基-4-氧代-10-{[(1R)-1-苯乙基]氨基}-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯将3-(苯甲酰氧基)-10-溴代-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯(1.0当量)加入到溶解于N，N-二甲基甲酰胺的(1R)-1-苯乙基胺(2.2当量)和三乙胺(1当量)的溶液中。将该混合物在室温剧烈搅拌2小个时，然后在50℃再搅拌30分钟。在减压下除去溶剂，得到无需进一步纯化即可使用的标题粗产物(1∶1非对映异构体的混合物)。在另一个备选的方法(步骤5A)中，于-30℃，将固体3-(苯甲酰氧基)-10-溴代-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯(1.0当量)加入到溶解于7∶3甲醇/水混合物的(1R)-1-苯乙基胺溶液(4.5当量)中。反应进行过夜，然后将温度提升至室温，浓缩溶剂，得到白色固体，将其过滤并弃去。用二氯甲烷从母液中提取标题化合物(为7∶3非对映异构体的混合物)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
MS m/z358(M+H)+。
步骤6N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-10-{[(1R)-1-苯乙基]氨基}-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-甲酰胺将对氟代苄胺(3当量)加入到溶解于甲醇中的3-羟基-4-氧代-10-{[(1R)-1-苯乙基]氨基}-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-羧酸甲酯(如在步骤5或步骤5A中所述制备)中。将该混合物在70℃搅拌过夜，然后冷却至室温，以直接用于步骤7。在备选方法(步骤6A)中，在减压下除去溶剂，使粗产物从乙腈结晶数次，得到单一的为4-氟代苄铵盐的d.e.＞95％的标题化合物非对映异构体。
步骤7(+)N-(4-氟苄基)-3-羟基-10-{甲基[(1R)-1-苯乙基]氨基}-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-甲酰胺将在步骤6中得到的N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-10-{[(1R)-1-苯乙基]氨基}-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-2-甲酰胺溶解于甲醇并且用乙酸调节其pH至约5，然后加入37％含水甲醛(6当量)和氰基氢硼化钠(6.25当量)。于室温搅拌该混合物过夜。在减压下除去溶剂，残余物(溶解于最少量的甲醇中)用三氟乙酸酸化至pH 2-3。将该溶液施加于阳离子交换树脂柱(Varian MEGA BOND ELUTE SCX)上，以甲醇洗涤柱，用2M氨的甲醇溶液洗脱粗产物。合并的洗脱液在减压下被浓缩至干得到油状的残余物。该产物，非对映异构体的混合物，由制备型RP-HPLC纯化分离((柱C18)，洗脱液为水(0.1％TFA)、乙腈(0.1％TFA)。标题非对映异构体在第一峰时洗脱，冻干后得到白色固体样的标题化合物(TFA盐)。
在备选的方法(步骤7A)中，使步骤6A的产物以如同步骤6的产物相同的方式反应，得到不用HPLC分离的单一非对映异构体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6-TFA，300K)δ9.42(t，J＝6.2Hz，1H)，9.20(bs，1H)，7.60(bd，J＝7.3Hz，2H)，7.51-7.29(m，5H)，7.21(t，J＝8.9Hz，2H)，4.98-4.75(m，3H)，4.69(dd，J＝15.5，6.9Hz，1H)，4.47(dd，J＝15.5，5.5Hz，1H)，3.66(t，J＝12.8Hz，1H)，2.94-2.81(m，3H)，1.97-1.81(bm，2H)，1.79-1.33(m，7H).
MS m/z465(M+H)+.20D＝+62±2(c＝0.1于氯仿中)。
步骤8(-)2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-N-甲基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-铵三氟乙酸盐将步骤7(或7A)产物的TFA盐的甲醇溶液(含披钯碳(10％，w/w))于氢气压下搅拌4h。滤掉催化剂，将该溶液在减压下浓缩至干，得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6-TFA，300K)δ9.88(bs，1H)，9.56(bs，1H)，9.14(bs，1H)，7.41(dd，J＝8.6，5.7Hz，2H)，7.17(t，J＝8.8Hz，2H)，4.92(dd，J＝14.6，4.6Hz，1H)，4.72(bm，1H)，4.58-4.44(m，2H)，3.51(dd，J＝13.9，11.7Hz，1H)，2.66(t，J＝4.9Hz，3H)，2.29(d，J＝13.3Hz，1H)，2.02-1.57(m，4H)，1.45-1.27(m，1H).
MS m/z361(M+H)+.20D＝-4±2(c＝0.4于甲醇中)。
步骤9(-)N-(-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺将氯代氧代乙酸甲酯(2-6当量)和N-乙基二异丙基胺(4当量)加入到步骤8的化合物三氟醋酸铵的氯仿溶液中。将该混合物在室温中搅拌1小时。在减压下除去溶剂，使溶解于2M二甲胺的甲醇溶液中的残余物在室温中搅拌6小时。在减压下除去溶剂，使溶解于二氯甲烷中的残余物用1M HCl的水溶液洗涤。有机相在无水Na2SO4上被干燥，在减压下除去溶剂。用制备型RP-HPLC分离标题化合物，使用水(0.1％TFA)和乙腈(0.1％TFA)作为洗脱液(柱C18)。冻干合并的产物部分，获得99.5％对映体过量(e.e.由手性HPLC检测，Chiralpak AD，流动相0.2％TFA 正-Hex/0.2％TFA乙醇(含3％甲醇))的标题化合物。将溶解于乙腈的化合物用含水KOH处理，然后冷冻干燥得到标题化合物的非晶形钾盐。
1H-NMR光谱与在实施例6中描述的化合物的一样。
13C-NMR(100MHz，DMSO-d6，300K)δ168.01，165.80，165.03，161.30(d，JC-F＝243Hz)，157.68，149.67，145.94，134.59，129.56(d，JC-F＝8.5Hz)，124.72，115.10(d，JC-F＝21Hz)，55.88，42.42，41.56，36.24，32.79，32.34，28.83，27.10，26.15.
MS m/z460(M+H)+.20D＝-72±2(c＝0.1于氯仿中)。
实施例8外旋转的N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺步骤1ω-羟基N-甲基氨基腈3的制备
原料MW 当量 摩尔 Wt.(g)Vol.(mL)密度DHP 84.1210.250021.10 22.93 0.925％H2SO498.080.1220.0305 60mL40％MeNH231.060.2440.06104.74 5.3 0.902MeNH2.HCl 67.5151.250 84.4NaCN49.0110.250012.25IPAc 900于20-35℃，向5％H2SO4水溶液中加入3，4-二氢-2H-吡喃(DHP；21.1g)。生成的溶液在20-35℃中老化1h。将该反应混合物冷却至0-5℃，并且用40％的含水甲胺中和至pH＝6-7。分别向该反应混合物中加入盐酸甲胺和氰化钠。生成的溶液在室温中老化36h。用IPAc(6×150mL)萃取该反应混合物。浓缩合并的有机层，得到总体积约150mL(检测产率约91％)，可用于下一步骤。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.81(m，1H)，3.45(m，2H)，2.47(s，3H)，1.90-1.40(m，6H).
步骤2ω-羟基N-甲基N-Boc-氨基腈4的制备 原料M W 当量摩尔 Wt.(g) Vol.(mL)氨基腈3142.20 1 0.210629.95(Boc)2° 218.25 1.050.221148.35％NH2OH/ 351O％NH4ClIPAc 80于室温下，向ω-羟基N-甲基氨基腈3(0.2106摩尔)的IPAc(来自步骤1)的溶液中加入(Boc)2O(48.3g)。将生成的溶液在30-35℃中老化2h(100％转化，经1H NMR分析)。将该反应混合物冷却至0-5℃，并加入5％NH2OH/10％NH4Cl(35mL)。将该反应混合物在10-20℃中老化3h。相分离后，水层用IPAc(80mL)萃取，合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，然后浓缩并且溶剂换成为IPA(总体积230mL)，将其用于下一步骤。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.18(m，1H)，3.64(q，J＝5.7Hz，2H)，2.88(s，3H)，1.88-1.75(m，3H).1.65-1.61(m，2H)，1.49-1.46(m，1H)，1.18(s，9H).
步骤3羟基脒5的制备 原料 MW 当量摩尔 Wt.(g)Vol.(mL) 密度N-Box-氨基- 242.31 1 0.210651.03腈450％NH2OH 33.03 1.250.263317.40 16.20 1.078IPA 180MeOH 600于室温下，向N-Box-氨基腈4(0.2106摩尔)的IPA溶液(总体积230mL)中加入50％羟基胺(16.2mL)。将生成的溶液在60℃中老化3h。然后浓缩该反应混合物，将该溶剂换成为甲醇溶液(总体积230mL)，将其用于下一步骤。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.53(br s，1H)，4.84(br s，2H)，4.64(t，J＝7.1Hz，1H)，3.71-3.62(m，2H)，2.72(s，3H)，2.00(br s，1H)，1.92-1.82(m，1H)，1.76(1.55(m，3H)，1.49(s，9H)，1.42-1.23(m，2H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间偕胺肟-6.152分钟和6.256分钟(两个异构体)。
步骤4O-烯偕胺肟6的制备 原料 MW 当量摩尔 Wt.(g) Vol.(mL)密度羟基脒5275.35 1 0.210657.93DMAD 142.11 1.050.221131.4227.10 1.16MeOH异丙基苯 500于室温下，向羟基脒5(约0.2106摩尔)的甲醇溶液(总体积230mL)中加入乙炔二羧酸二甲酯(27.10mL)。将生成的溶液在室温中老化16h。浓缩该反应混合物，于40-60℃将溶剂换成为异丙基苯溶液(总体积430mL)。该溶液被用于下一步骤。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.82(s，0.28H)，5.73(s，0.72H)，5.44(br s，1.77H)，5.25(br s，0.56H)，4.61(m，1H)，3.89(s，0.84H)，3.84(s，2.16H)，3.72(s，2.16H)，3.68(s，0.84H)，3.65-3.58(m，2H)，2.73(s，0.84H)，2.71(s，2.16H)，1.90-1.52(m，4H)，1.47(s，9H)，1.43-1.30(m，2H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，1090至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间偕胺肟6-12.051分钟、12.315分钟，比率约3.6∶1。
步骤5嘧啶7的制备 原料 MW 当量 摩尔 Wt.(g)Vol.(mL)密度O-烯 417.45 10.210687.91amidoxime6异丙基苯 430(总)5％NaHCO384.11.44 0.3032 510EtOAc 750盐水 150THF将O-烯偕胺肟6(约0.2106摩尔)的异丙基苯溶液(总体积430mL)于120℃(内温)加热12h。然后将该反应混合物冷却至60℃、浓缩至总体积250mL，然后用EtOAc(250mL)稀释，并冷却至25-35℃。然后缓慢加入5％碳酸氢钠(330mL，约1当量)，将生成的溶液在25-35℃老化0.5h。相分离后，用5％碳酸氢钠(180mL)再次提取有机相。合并的水提物用5N HCl酸化至pH＝2-3，并用EtOAc(3×250mL)提取。用盐水(150mL)洗涤合并的有机层。浓缩该有机溶液，将溶剂换成为THF(总收率约30-40％，KF约100-150ppm)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ10.66(br s，2H)，4.77(m，1H)，4.01(s，3H)，3.72-3.67(m，2H)，2.77(s，3H)，2.20-1.55(m，5H)，1.48(s，9H)，1.43-1.35(m，1H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间嘧啶7-9.905分钟步骤6双甲磺酰基-嘧啶8的制备 原料MW当量 摩尔 Wt.(g) Vol.(mL)密度嘧啶7385.4110.09029 43.5(80％)TEA 101.1930.270927.437.80.726MsCl114.5530.270931.021.01.480THF 575K2CO3138.2110.09029 12.5MeOH 200EtOAc400于0-5℃，用1h，往嘧啶7(43.5g，纯度约80％，0.09029摩尔)的THF(275mL)溶液中同时缓慢加入TEA(37.8mL)和MsCl(21.0mL)。将生成的溶液在同样的温度下老化4h。滤去固体物，用THF(3×100mL)洗涤。浓缩合并的滤液，将溶剂换成为甲醇(总体积200mL)。于10-20℃，往三甲磺酰基-嘧啶的甲醇溶液中加入碳酸钾(12.5g，0.09029摩尔)。将生成的溶液在同样的温度下老化6-10h(用HPLC监测)。用5N HCl中和该反应混合物至pH＝6-7，并浓缩至总体积约100mL。加入16％盐水(100mL)，并用EtOAc(3×100mL)提取生成的溶液。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层、浓缩，将溶剂换成为DMF。由选择性地水解三甲磺酰基-嘧啶产生1当量的副产物(MeSO3Me)，可通过与DMF在60-65℃共沸去除(用1H NMR监测，直到＜10摩尔％)。双甲磺酰基-嘧啶8的DMF的浓度为约0.3M(总体积300mL)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ11.00(br s，1H)，4.78(d，J＝7.8Hz，1H)，4.24-4.15(m，2H)，3.95(s，3H)，3.50(s，3H)，2.99(s，3H)，2.81(s，3H)，2.12-2.11(m，1H)，1.90-1.76(m，2H)，1.46(s，9H)，1.43-1.35(m，2H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间三甲磺酰基-嘧啶-14.140分钟；双甲磺酰基-嘧啶-12.760分钟。
步骤7七元环-嘧啶甲磺酸酯9的制备 原料 MW当量摩尔 Wt.(g)Vol.(mL)双甲磺酰基-541.591 0.09029 48.90嘧啶8Cs2CO3325.821.2 0.108335.30DMF于室温下，向双甲磺酰基-嘧啶8(0.09029摩尔)的DMF(总体积300mL)溶液中加入碳酸铯(35.30g)。将生成的浆液在55℃老化2-3h(转化76％，经HPLC检测)。中和至pH＝7后，该反应混合物用250mL水稀释、用IPAc(2×250mL)提取。用盐水(2×200mL)洗涤合并的有机层。浓缩有机层得到粗产物。将粗产物一半经过短柱(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)纯化得到所需产物9(6.00g，纯度98A％)，和9a(2.3g，纯度40A％)。从DHP到环化的产物的总收率经校正后约13％。
1H NMR(CDCl3，400MHz)对于化合物9
δ5.34(m，1H)，5.22(m，1H)，3.93(s，3H)，3.51(s，3H)，3.47(m，1H)，2.97(s，3H)，2.20-2.05(m，3H)，1.90-1.65(m，2H)，1.44(s，9H)，1.24(m，1H).
对于化合物9a11.86(br s，1H)，7.90-7.55(br s，1H)，7.31(dd，J＝8.5，5.4Hz，2H)，7.06(t，J＝8.5Hz，2H)，5.40-4.90(m，2H)，4.53-4.40(m，2H)，3.45-3.23(m，1H)，2.23-2.05(m，3H)，1.86-1.76(m，1H)，1.74-1.64(m，1H)，1.47-1.37(m，1H)，1.30(s，9H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％ aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间七元环-嘧啶甲磺酸酯913.969分钟；七元环-嘧啶9a13.141分钟。
使用LiH的备选方法也被采用于室温下，向双甲磺酰基-嘧啶8(65mg)的二氧六环(1mL)溶液中加入LiH粉末。将生成的混合物在65℃老化4h。然后，将该反应混合物冷却至室温，加入1N HCl猝灭过量的LiH。溶液用EtOAc(2×5mL)提取。合并的有机层用盐水洗涤，然后浓缩。用快速层析(硅胶，己烷∶EtOAc＝2∶1)纯化残余物得到七元环-嘧啶甲磺酸酯9(45.6mg，85％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.34(m，1H)，5.22(m，1H)，3.93(s，3H)，3.51(s，3H)，3.47(m，1H)，2.97(s，3H)，2.20-2.05(m，3H)，1.90-1.65(m，2H)，1.44(s，9H)，1.24(m，1H).
步骤8七元环-嘧啶酰胺化合物10的制备
原料 MW当量 摩尔 Wt.(g) Vol.(mL)密度七元环-445.491 0.01347 6.000嘧啶94-氟苄胺 125.153 0.04041 5.060 5.221.09EtOH 80向七元环-嘧啶甲磺酸酯9(6g)的EtOH(80mL)溶液中加入4-氟代苄胺(5.060g)。将生成的溶液回流8h(经HPLC检测100％转化)。将该反应混合物浓缩至总体积约20mL，并加入80mL的EtOAc。往生成的溶液中加入20％的盐水(15mL)、4N HCl(15mL)和水(10mL)。相分离后，水层用EtOAc(25mL)反提取。合并的有机层用4NHCl∶20％盐水(1∶1，3×15mL)、盐水(15mL)洗涤。有机溶液被浓缩至总体积约30mL。用1h往该溶液中缓慢加入正己烷(70mL)。将生成的浆液于0-5℃老化1h。滤掉结晶固体，用正己烷∶EtOAc(4∶1，50mL)洗涤，在用氮清扫的真空下干燥得到七元环-嘧啶酰胺化合物10(5.30g，86％，HPLC＞97A％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ11.85(br s，1H)，7.84(br s，0.5H)，7.68(br s，0.5H)，7.31(m，2H)，7.04(m，2H)，5.404.90(m，2H)，4.53(m，2H)，3.38(m，1H)，2.87(s，3H)，2.20-2.15(m，3H)，1.90-1.40(m，3H)，1.37(s，9H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间七元环-嘧啶10-15.467分钟。
步骤9七元环-嘧啶酰胺盐酸盐11的制备
原料 MW 当量摩尔 gmL 密度七元的460.50 1 0.001846 0.8500嘧啶氨基化合物10HCl(气) 36.468 0.014780.5389EtOAc 3.5于-30到-20℃，向乙酸乙酯(3.5mL)溶液中鼓泡通入HCl气体(0.5389g)。于-30到-20℃，将N-Boc-七元环-嘧啶酰胺10(结晶固体)加入HCl-EtOAc溶液中。用2.5h将生成的溶液缓慢温暖至室温，并在室温中老化0.5h(经HPLC检测100％转化)。用EtOAc(7mL)稀释该反应混合物。将生成的浆液于0-5℃老化1h。滤掉结晶固体，用EtOAc、正己烷洗涤，在用氮清扫的真空下干燥得到所需产物11(分离收率98％，纯度＞97A％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ12.35(s，1H)，9.96(t，J＝6.3Hz，1H)，9.51(br s，1H)，9.19(br s，1H)，7.42(dd，J＝8.5，5.6hz，2H)，7.19(t，J＝8.5Hz，2H)，4.92(dd，J＝14.5，5.1Hz，1H)，4.71(m，1H)，4.57-4.45(m，2H)，3.52(t，J＝14.5Hz)，2.65(t，J＝5.0HZ，3H)，2.30(br d，J＝12.6Hz，1H)，1.99-1.92(m，1H)，1.90-1.75(m，2H)，1.68-1.60(m，1H)，1.41-1.33(m，1H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间七元环-嘧啶盐酸盐118.118分钟。
步骤10外旋转的N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺14的制备
原料MW当量 摩尔 Wt.(g) Vol.(mL) 密度酸12(纯96％) 117.1051.0000.122氯甲酸乙酯 125.154.8 0.9600.1040.092 1.1354-NMM 101.154.8 0.9600.0971 0.106 0.9200THF 3嘧啶396.8410.2000.0794盐酸盐11二甲胺 45.07 6.25 1.2500.1410.158 0.89002N HCl于0-5℃，往酸12(122mg)的THF(3mL)溶液中加入氯代甲酸乙酯(92μl)。然后，于0-5℃，往该反应混合物中缓慢加入4-NMM(106μl)。将反应混合物在同样的温度下老化2h。于0-5℃，将作为固体的嘧啶盐酸盐11(79.4mg)加入到混合的酐溶液中，并在同样的温度下老化5h，然后于5-10℃再老化2h(经HPLC检测100％转化)。将二甲胺水溶液(40％，158μl)加入反应混合物中，将该混合物于10-15℃老化1h，期间用HPLC监测反应来确认完全转化。于5-15℃，用2N HCl调节pH＝3-4来酸化反应混合物，分别加入EtOAc(6mL)和盐水(2mL)。相分离后，有机层用1N HCl(2mL)、盐水(2×2mL)洗涤。浓缩有机层至总体积1mL。在0.5h的时间内缓慢加入正己烷(5mL)。将生成的浆液于0-5℃老化1h。滤掉结晶固体，用正己烷/EtOAc(5∶1)、MTBE洗涤，在用氮清扫的真空下干燥，得到标题化合物14(75.6mg，82％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ12.13(s，1H)，9.41(br s，1H)，7.38(dd，J＝8.5，5.4Hz，2H)，7.00(t，J＝8.5Hz，2H)，5.40(br s，1H)，5.29(dd，J＝14.5，6.0Hz，1H)，4.60(dd，J＝14.5，6.6Hz，1H)，4.52(dd，J＝14.5，6.3Hz，1H)，3.35(dd，J＝14.5，11.6Hz，1H)，3.04(s，3H)，3.01(s，3H)，2.98(s，3H)，2.23-2.12(m，3H)，1.95-1.81(m，2H)，1.58-1.49(m，1H).
HPLC条件柱Zorbax，Rx C8 250×4.6mm；温度30℃；于210nm检测；流动相0.1％aq H3PO4(A)/MeCN(B)；梯度90∶10(A)/(B)至10∶90经过15min，10∶90保留5min，10∶90至90∶10(A)/(B)经过10秒；流速1mL/min。保留时间标题化合物1412.191分钟。
下表1列出了已经制备的本发明化合物。表中提供了每一个化合物的结构和名称、经过FIA-MS测定的分子离子加1(M+)或分子离子减1(M-)的质量以及制备化合物的合成流程。
前述说明书告知了本发明的原则，及提供旨在说明的实施例，本发明的实践包括所有通常的变化、改进和/或修饰，这些都在附属的权利要求书的范围内。
权利要求
1.一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐 R1是H或NR2R5；R2是CH3；R5是1)C(O)CH2SO2CH3，2)C(O)C(O)N(CH3)2，3)SO2N(CH3)2，或4)SO2R20，其中R20是 或 或者任选R2和R5与它们连结的氮原子一起形成错误！从编辑域代码不能产生目标体，或者 R3是氢；R4是1)对氟苄基，2)4-氟代-3-甲基苄基，3)3-氯苄基，或4)3-氯代-4-甲基苄基；R12和R14均为H，除非当R5是C(O)C(O)N(CH3)2和R4是对氟苄基以及n是1时，则R12和R14或者都是H或者都是CH3；和n为等于的0、1或2的整数。
2.一种按照权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是NR2R5；和n为1或2。
3.一种按照权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1是NR2R5；R2是CH3；R5是C(O)C(O)N(CH3)2，或SO2R20，其中R20是 R3是氢；R4是对氟苄基或4-氟代-3-甲基苄基；R12和R14均为H，除非当R5是C(O)C(O)N(CH3)2和R4是对氟苄基以及n是1时，则R12和R14或者都是H或者都是CH3；和n为等于1或2的整数。
4.一种式II化合物，或其药学上可接受的盐 其中R1是氢、NR2R5、OR2、SR2、SOR2、SO2R2、SO2NR2R5，或OC(O)NR2R5；R3是氢；R4是 R2是1)氢，2)CH3，或3) 和R5是1)C(O)CH3，2)C(O)CH2SO2CH3，3)CH3，4)C(O)C(O)N(CH3)25)SO2CH3，6)SO2N(CH3)2，7)C(O)CH2N(CH3)28)SO2CH2SO2CH3，9)C(O)CF3，10) 11) 或12) 或R2和R5，和与其连结的氮原子一起，形成选自以下的杂环 和
5.一种按照权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，它选自N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-吗啉-4-基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；9-[[(二甲氨基)磺酰基]-(甲基)氨基]-N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]-羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺；(+)-N1-(2-{[(4-氟苄基)氨基]-羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N1，N2，N2-三甲基乙二酰胺；(-)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(甲基磺酰基)乙酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(2-{[(3-氯代-4-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(2-{[(3-氯苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-(6-甲基-1，1-二氧化-1，2，6-噻二嗪烷-2-基(thiadiazinan-2-yl))-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(-)-N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(+)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-(6-甲基-1，1-二氧化-1，2，6-噻二嗪烷-2-基)-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-[甲基(吡咯烷-1-基磺酰基)氨基]-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；9-[(氮杂环丁烷-1-基磺酰基)(甲基)氨基]-N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(-)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-[甲基(吗啉-4-基磺酰基)氨基]-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(+)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-[甲基(吗啉-4-基磺酰基)氨基]-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(+)-9-[(氮杂环丁烷-1-基磺酰基)(甲基)氨基]-N-(4-氟苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(-)-9-[{[(二甲氨基)磺酰基]乙酰基}(甲基)氨基]-N-(4-氟代-3-甲基苄基)-3-羟基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(-)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(+)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(-)N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(+)N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(+)-N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(-)-N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-8，8-二甲基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺。
6.一种按照权利要求5的化合物，或其药学上可接受的盐，它选自；N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(+)-N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(-)-N-(2-{[(4-氟代-3-甲基苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(-)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；(+)-N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(4-氟苄基)-3-羟基-9-{甲基[(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基]氨基}-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-甲酰胺；N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-8，8-二甲基-4-氧代-6，7，8，9-四氢-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(-)N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺；(+)N-(2-{[(4-氟苄基)氨基]羰基}-3-羟基-4-氧代-4，6，7，8，9，10-六氢嘧啶并[1，2-a]氮杂-10-基)-N，N’，N’-三甲基乙二酰胺。
7.一种药用组合物，它包含治疗有效量的依照权利要求1到6中任何一项的化合物，或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
8.依照权利要求1到6中任何一项的化合物，或其药学上可接受的盐在有此需要的患者中抑制HIV整合酶的应用。
9.依照权利要求1到6中任何一项的化合物，或其药学上可接受的盐在制备用于在有此需要的患者中抑制HIV整合酶的药物中的用途。
10.依照权利要求1到6中任何一项的化合物，或其药学上可接受的盐在制备用于在有此需要的患者中预防或治疗由HIV引起的感染，或者用于预防、治疗AIDS或者延迟AIDS发生的药物中的用途。
全文摘要
本发明描述了作为HIV整合酶的抑制剂和HIV复制的抑制剂的四氢－4H－吡啶并[1，2－a]嘧啶和式(I)的相关化合物，其中n为等于的0、1或2的整数，以及R
文档编号C07DGK1753892SQ200380109921
公开日2006年3月29日 申请日期2003年12月18日 优先权日2002年12月27日
发明者B·克雷申齐, O·金策尔, E·穆拉利亚, F·奥尔维托, G·佩斯卡托雷, M·劳利, V·苏马 申请人:P·安杰莱蒂分子生物学研究所