专利名称：抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体及构建与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种嵌合抗体及其编码基因。
背景技术：
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是一种多功能的生长因子，以多种亚型形式存在，现今研究的bFGF的生物学活性主要是针对Mr18000的亚型。bFGF的生物学效应，除对成纤维细胞和血管内皮细胞具有显著的促增殖作用外，还参与肿瘤发生和发展，特别对肿瘤的浸润和转移具有重要作用。此外，bFGF还可能参与了矽肺的纤维化过程，研究证实，在矽肺形成的过程中，肺内的肥大细胞也可产生bFGF，而且bFGF阳性肥大细胞的分布与细胞外基质的沉积相匹配，即与纤维化的程度相关。抗bFGF单克隆抗体(mAb)还可抑制神经发生及恶性神经胶质瘤的分裂和生长，在肿瘤诊断上，用抗bFGFmAb检测肿瘤患者血清或尿中bFGF的水平，辅助诊断肾、肺、脑、胃、膀胱、乳腺和胰腺等脏器的肿瘤；1997年Coppola G.用抗bFGFmAb对肿瘤进行体内诊断及治疗的研究。发明人制备的抗rh-bFGF 1F11鼠mAb具有与rh-bFGF结合的活性和中和活性以及抑制bFGF刺激Balb/c3T3细胞生长的生物活性；用家兔矽肺实验模型证实兔源抗bFGF抗体可明显抑制其矽肺病理的形成。由于mAb的鼠源性限制了其在体内的治疗，研制抗rh-bFGF人-鼠嵌合抗体，减少了抗bFGF抗体的鼠源性，为其体内治疗的抗体药物奠定基础。因此，抗rh-bFGF人-鼠嵌合抗体，既可成为肿瘤治疗的抗体靶向药物，又可作为预防矽肺形成的抗体药物。
长期以来，鼠源性mAb被广泛地应用于科研、临床诊断和治疗，但由于鼠源性mAb可引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，从而限制其在临床中的应用。因此，进行鼠源性mAb的人源化改造实属必要。目前，实现鼠源性mAb的人源化的方法，主要通过基因工程技术制备嵌合抗体和改型抗体；通过噬菌体展示抗体库技术的强大筛选能力进行链替换，虽可将鼠源抗体的L、H链彻底人源化，但国内外众多资料表明，前述的改型抗体及完全人源化抗体对于保留亲本抗体的特异性及亲和力的效果仍然极不理想。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗人重组碱性成纤维生长因子嵌合抗体及其编码基因。
本发明所述的一种抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体，包含(1)抗人重组碱性成纤维生长因子(rh-bFGF)鼠源抗体的轻链(L链)可变区(V区)和人IgG1C的L链恒定区(C区)的L链；和(2)抗rh-bFGF鼠源抗体的重链(H链)V区和人IgG1C的H链C区的H链。
所述的L链V区含有如SEQ NO1列出的氨基酸序列。编码所述的L链V区的氨基酸序列的DNA如下SEQ NO1VL基因M K L P V R LL V L M F W I P A S S S D1 ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC CAGCAGTGAT-----------------------------------------------------------------V L M T Q T PL S L P V S L G D Q A S I61GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC TTGGAGATCA AGCCTCCATCS C R S S Q SI V H S N G N T Y L E W Y121TCTTGCAGAT CTAGTCAGAG CATTGTACAT AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTACL Q K P G Q SP K L L I Y K V S N R F S181CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCTG V P D R F SG S G S G T D F T L K I S241GGGGTCCCAG ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATCAGCR V E A E D LG V Y Y C F Q G S H V P Y301AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA TGTTCCGTACT F G GG T KL E I K R A D A A P T V361 ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAACGGGCTG ATGCTGCACC AACTGTAT所述的H链V区含有如SEQ NO2列出的氨基酸序列。编码所述的H链V区的氨基酸序列的DNASEQ NO2VH基因M G C S W V M L F LV A T A T G V H S Q1 ATGGGATGCA GCTGGGTCAT GCTCTTTTTG GTAGCAACAG CAACAGGTGT CCACTCCCAG-----------------------------------------------------------------V Q L Q Q S G A E LV K P G A S V K L S61GTCCAACTGC AGCAGTCTGG GGCTGAACTG GTGAAGCCTG GGGCTTCAGT GAAGTTGTCCC K A S G Y T F T SY Y M Y W V K Q R P121TGCAAGGCTT CTGGCTACAC CTTCACCAGC TACTATATGT ACTGGGTGAA GCAGAGGCCTG Q G L E W I G E IN P S N G G T N F N181GGACAAGGCC TTGAGTGGAT TGGAGAGATT AATCCTAGCA ATGGTGGTAC TAACTTCAATE K F K S K A T L TV D K S S S T A Y M241 GAGAAGTTCA AGAGCAAGGC CACACTGACT GTAGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTACATGQ L S S L T S E D SA V Y Y C A S Q T A301CAGCTCAGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCGGTCTATT ACTGTGCAAG CCAGACAGCTR A T W F A Y W G QG S L V T V S A A S361 CGGGCTACGT GGTTTGCTTA CTGGGGCCAA GGGAGTCTGG TCACTGTCTC TGCAGCCTCCT K G P421 ACCAAGGGCC CA
所列的SEQ NO1和SEQ NO2的序列表中，用点式下划线标记的序列是前导肽序列，用下划线标记的序列是框架区序列，斜体序列是高变区序列。
本发明应用一套设计的引物从自主构建并培养的抗rh-bFGF鼠mAb杂交瘤细胞株中克隆出了抗rh-bFGF抗体的轻链、重链的可变区基因。用生物软件VNTI8.0分析序列的结果表明，VH基因与Kabat数据库中的鼠源VH基因进行同源性比较具有较高的同源性，且保守区序列与数据库中VH基因高度一致。VL基因与Kabat数据库中的鼠源VL基因进行同源性比较具有较高的同源性，且保守区序列与数据库中VL基因高度一致，证实本发明人通过PCR技术从抗rh-bFGF鼠mAb杂交瘤细胞株中正确克隆出了抗rh-bFGF抗体的轻链、重链的可变区基因。
包含编码SEQ NO1和SEQ NO2序列的DNA的表达载体，如pEF-dhfr1a或基因工程常用的其他表达载体。
所述的DNA载体转化的宿主细胞，如CHO-dhfr-细胞或基因工程常用的其他表达细胞。
嵌合抗体真核表达的关键在于其表达的产量。为了实现嵌合抗体在真核细胞中的高表达，本研究采用了CHO-dhfr-细胞和携带dhfr基因的载体表达系统。该系统的优点是在不含有H(次黄嘌呤)、T(胸腺嘧啶)的选择培养基中，只有转化有携带dhfr基因的质粒pEF-dhfr1a的细胞才能存活，可方便的筛选出稳定表达外源基因的阳性细胞克隆。随后向培养液中加入并逐渐增加MTX，可逐渐增强dhfr及外源目的基因的表达，从而大大增加了嵌和抗体的产量。
本发明的另一目的在于提供一种生产抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体，包括以下步骤培养如前所述的宿主细胞，回收所表达的抗体。
本发明首次从抗rh-bFGF鼠mAb 1F11杂交瘤细胞株中克隆出VL和VH基因及人lgG1的C区基因，将V区基因和C区基因融合成完整的L链和H链基因，再与表达载体连接并转化CHO-dhfr-细胞，最后在真核细胞中成功地表达了抗rh-bFGF的人-鼠嵌合抗体。
本发明的另一目的在于提供含如前所述的嵌合抗体为活性成分的药物组合物。
所述的嵌合抗体可用于制备预防矽肺形成的抗体药物和肿瘤血管抑制治疗的抗体靶向药物。
与现有的抗rh-bFG改型抗体及完全人源化抗体相比，本发明所述的嵌合抗体更能够较为理想地保留亲本抗体的特异性及亲和力。因而，从临床应用的实际出发，嵌合抗体比改型抗体及完全人源化抗体更具有应用价值。已有研究证明，本发明所述的嵌合抗体在临床包括肿瘤等疾病的治疗中已取得较好的效果。美国FDA近年批准的抗体类生物制剂中，嵌合抗体占有较重要的位置。本发明所述的抗rh-bFGF人-鼠嵌合抗体可作为预防矽肺形成的抗体药物和肿瘤血管抑制治疗的抗体靶向药物，本研究为其临床应用的研究奠定重要的基础。进一步的工作将通过MTX增加嵌合抗体的表达量，或通过弱化载体DHFR基因来提高嵌合抗体的表达量，筛选高表达的细胞株，进行抗体功能和相关活性与稳定性的研究。
图1是mAb 1F11VL基因PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析图；图中1是DL2000 Marker，2是Negative control(负对照)，3、5、7为Positiveresults(正结果)，4、6为Negative results(负结果)。
图2是mAb 1F11VH基因PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析图；图中17是DL2000 Marker，2、5、6、7为Positive results(正结果)，1、3、4及8-16为Negative results(负结果)。
图3是重组质粒pEF-dhfr1aL的酶切及PCR扩增鉴定图；图中1为DL15000 marker，2为plasmid pEF-dhfr1aL，3为pEF-dhfr1aL/EcoRI，4为pEF-dhfr1aL/EcoRl+SaII，5PCR扩增产物；6为DL2000 marker。
图4是重组质粒pEF-dhff1aH的酶切及PCR扩增鉴定图；图中1为DL15000 marker，2为pEF-dhfr1a/EcoRI，3为质粒pEF-dhfr1aH，4为pEF-dhfr1aH/EcoRI+NotI，5为PCR扩增产物；6为DL2000 marker。
图5是纯化嵌合抗体的SDS-PAGE分析图；图中1为Protein marker，2为嵌合抗体的纯化产物，3为IgG1。
具体实施例方式
本实施例所选用的分泌抗rh-bFGF鼠mAb 1F11杂交瘤细胞株为发明人所构建并保存。CHO-dhfr-细胞、质粒pMDHC、pMDLC及表达载体pEF-dhfr1a，均由军事医学科学院微生物流行病研究所应用分子生物学实验室提供。ExTaq DNA聚合酶购自TaKaRa公司。质粒提取试剂盒购自Omega公司。内切酶购自Promega公司。Trizol试剂盒，细胞培养和转染试剂，购自GibcoBRL公司。所用抗体均购自Sigma公司。
本实施例中，VL代表L链V区，VH代表H链V区，CL代表L链C区，CH代表H链C区。
(一)引物的设计与合成扩增VL基因上游引物LL15′-GGGGCTAGCCACAATGGAGACAG ACACACTCCTGCTAT-3′；LL25′-GGGGCTAGCCACCATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAG-3′；LL35′-GGGGCTAGCCACCATGGAGWCACAKWCTCAGGTCTTTRTA-3′；LL45′-GGGGCTAGCCACCATGKCCCCWRCTCAGYTYCTKGT-3′；LL55′-GGGGCTAGCCACCATGAAGTTGCCTGTTAGGCTTG-3′；划线处NheI的酶切位点；扩增VL基因下游引物KC5′-TGGATGGT GGGAAGATGG-3′；JCK5′-GACAGATGGTGCAGCCACAGTCCGTTTTATTTCCAGCTTAGTC CC-3′；扩增VH基因上游引物VHL15′-GGGGCTAGCCACCATGGRATGSAGCTGKGTMATS CTCTT-3′；VHL25′-GGGGCTAGCCACCATGRACTTCGGGYTGAGCTKGGTTTT-3′；VHL35′-GGGGCTAGCCACCATGGCTGCCTTGGGGCTGCTGTTCT-3′；VHL45′-GGGGCTAGCCACCATGATRGTGTTRAGTCTTYTGTRCCTG-3′；划线处NheI的酶切位点；扩增VH基因下游引物JCH15′-TGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGTGACCATGGTCCC-3′；JCH25′-TGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGTGCC-3′；JCH35′-TGGGCCCTTGGTGGAGGCTGCAGAGACAGTGACCAGACTCCC-3′；JCH45′-TGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGTGACTGAGGTCCC-3′；扩增人IgG1C区基因扩增引物扩增CL基因上游引物HuCK55′-ACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTC-3′；扩增CL基因下游引物HuCK35′-GGGGTCGACCT ATTAACACTCTCCCCTGTTG-3′；划线处为SaII酶切位点。扩增CH基因上游引物HuCH55′-GCCTC CACCAAGGGCCCATCGGTC-3′；扩增CH基因因下游引物HuCH35′-GGGGCGGCCGCACTC ACCTGAGGAGACTGGTGAG-3′；划线处为NotI酶切位点。
(二)mAb V区基因的克隆及序列测定从杂交瘤细胞1F11中提取总RNA，进行RT-PCR扩增，扩增产物回收纯化，纯化后的产物插入载体pMD-T中，分别取VH及VL基因的各2个克隆菌株送TaKaRa公司进行测序。
(三)人IgG1C区基因的克隆及序列测定以质粒pMDHC为模板，PCR扩增CH基因，以质粒pMDLC为模板，PCR扩增CL基因，扩增产物回收纯化，纯化后的产物插入载体pGEM-T中，分别取CH及CL基因的各2个克隆菌株送TaKaRa公司进行测序。
(四)mAb 1F11 VL和VH基因的克隆和序列读定用VL基因的5个上游引物和3个下游引物及VH基因的4个上游引物和4个下游引物，从杂交瘤细胞1F11的总RNA中，用RT-PCR分别扩增出VL和VH基因片段，其中，VL的3个引物对LL1-KC、LL3-KC及LL5-KC，扩增出400bp左右的基因片段，其琼脂糖凝胶电泳分析如图1所示；VH的4个引物对VHL1-JCH2、VHL1-JCH3、VHL1-JCH4及VHL2-JCH3，扩增出420bp左右的基因片段，其琼脂糖凝胶电泳分析如图2所示。将PCR产物连接到载体pMD-T中，进行序列测定，测序后，经与Kabat数据库的数据比较及用生物软件VNTl8.0分析，可确定只有LL5-KC引物扩增出的418bp的VL基因片段和VHL1-JCH3引物扩增出的432bp的VH基因片段是正确的，VL基因的序列为336bp，其前方有57bp的前导肽序列，Vκ属于VKII家族；VH基因的序列为357bp，其前有57bp的前导肽序列，VH属于VHIIB。
(五)人-鼠嵌合抗体表达质粒的构建VL、CL与VH、CH基因经过融合PCR，形成完整的嵌合轻链基因VLCL和完整的嵌合重链基因VHCH。将VLCL基因用NheI/Sa/I双酶切后，克隆到XbaI/Sa/I双酶切的表达载体pEF-dhfr1a上，构建L链表达载体pEF-dhfr1aL，基因VHCH用NheI/NotI双酶切后，连接到XbaI/NotI双酶切的表达载体pEF-dhfr1a上，即可得到H链表达载体pEF-dhfr1aH。
L链表达载体pEF-dhfr1aL和H链表达载体pEF-dhfr1aH都以EF1-α为启动子，并有筛选基因dhfr(二氢叶酸还原酶)，在CHO-dhfr-细胞中，可通过撤去培养基中的次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)进行选择阳性克隆，还可用MTX加压筛选表达量高的单克隆细胞株。L链及H链表达质粒的PCR产物及酶切鉴定如图3和图4所示。
(六)CHO细胞的转染和阳性克隆的加压筛选接种1×105个CHO-dhfr-细胞于24孔细胞培养板中，用含100mL/L透析胎牛血清、0.03mmol/L次黄嘌呤(H)、0.003mmol/L胸腺嘧啶脱氧核苷(T)及1×105U/L青链霉素的IMDM培养基，于50mL/LCO2、37℃培养36h。采用Lipofect AMINETM2000试剂转化。转化后的细胞先采用不含H、T的选择培养基培养进行筛选，待克隆形成后，再逐次采用含1×10-8mol/L及1×10-7mol/L的MTX的选择培养基进行筛选。
(七)表达产物的ELISA检测以2mg/L羊抗人IgG Fc按每孔100μL的量包被酶标板，依次加入转化细胞的培养上清、羊抗人IgG Fc-HRP孵育，显色后，读取A490的值。对于阳性克隆，再加HRP-羊抗人κC抗体孵育，显色后，读取A490的值。挑选双阳性反应的克隆，以2mg/L的rh-bFGF包被酶标板，每孔100μL。依次加入双阳性反应克隆的细胞培养上清及羊抗人IgG Fc-HRP孵育，显色后，读取A490的值。
嵌合抗体基因的表达产物C区的ELISA检测各取1μg L、H链嵌合抗体基因表达载体，转化CHO-dhfr-细胞。约10d后，可见克隆生长，计数共约185个克隆。以2mg/L羊抗人IgG Fc抗体包被酶标板，依次加入185个克隆的培养上清及羊抗人IgG Fc抗体-HRP，根据A490的值，得到表达H链的阳性克隆为120个，其中高表达克隆为50个；再以2mg/L的羊抗人IgG Fc抗体包被酶标板，依次加入H链高表达的50个克隆的培养上清及HRP-羊抗人κC抗体，根据A490的值，得到表达L、H链的阳性克隆为32个，其中高表达的克隆为15个；在15个L、H链高表达的阳性克隆中，有的克隆L链表达量远高于H链的表达量，而有的克隆恰相反，考虑到一个克隆中L、H链的表达量的匹配性，只得到5个较好的克隆株(I-67、I-348、I-786、VII-572、VII-863)，5个克隆中，在检测表达的H链时，读取的A490的值，分别为0.845、1.052、0.981、0.758及0.936，明显高于阴性对照的A490值(0.068)；在检测表达的L链时，读取的A490的值，分别为1.120、1.357、1.268、0.926及1.184，也明显高于阴性对照的A490值(0.072)，以上结果说明，嵌合抗体的C区得到了表达，并且其C区是人源的。
嵌合抗体的活性检测以2mg/L rh-bFGF包被酶标板，加5株杂交瘤细胞(I-67、I-348、I-786、VII-572、VII-863)的混合培养上清，羊抗人IgGFc-HRP抗体为二抗(因为检测的一抗Fc部分为人源的)，以mAb1F11作为阳性对照，羊抗鼠IgG-HRP抗体为二抗(因为检测的一抗为鼠源的)，显色后，读取A490的值。样品孔、阳性孔及阴性孔分别为0.312、0.378及0.065，结果表明表达的嵌合抗体与抗原有结合活性。
(八)嵌合抗体的纯化收集转化细胞的无血清培养上清约100mL，用400g/L饱和硫酸铵溶液沉淀过夜，以12000g离心30min，弃上清，加0.1mol/L磷酸盐缓冲液溶解沉淀，并装入透析袋中对0.1mol/L磷酸盐溶液透析48h。以0.45μm的滤膜过滤后，超滤浓缩至10mL。并用Protein A亲和层析柱，从2mL正常人血清中纯化人源IgG1作为对照。
(九)嵌合抗体的SDS-PAGE分析分别取纯化的嵌合抗体和对照样品人源性IgG1后，进行还原性SDS-PAGE，用考玛斯亮蓝R-250染色。
将阳性细胞克隆用1×10-7mol/L的MTX的选择培养基培养，待细胞长满培养瓶后，改成无血清培养基，培养10d后，用400g/L的饱和硫酸铵溶液沉淀后，透析，再用超滤柱浓缩到10mL，进行还原SDS-PAGE，分析结果如图5所示，在还原SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50000(重链)，另1条Mr为29000(轻链)。
(十)序列表(用Patent-In Version 3.2生成)SEQUENCE LISTINGSEQNO1-DNA<110>暨南大学<120>抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体及构建与用途<130>
<141>2004-03-08<160>1<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>418<212>DNA<213>小鼠
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<141>2004-03-08<160>1<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>139<212>PRT<213>小鼠<400>1Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala1 5 10 15Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val20 25 30
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile35 40 45Val His Ser Asn Gly Asn Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro50 55 60Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser65 70 75 80Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr85 90 95Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys100 105 110Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu115 120 125Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val130 135SEQUENCE LISTINGSEQNO2-DNA<110>暨南大学<120>抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体及构建与用途<130>
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<141>2004-03-08<160>1<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>144<212>PRT<213>小鼠<400>1Met Gly Cys Ser Trp Val Met Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly TyT Thr Phe35 40 45Thr Ser Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu50 55 60Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn65 70 75 80Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser85 90 95Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Ser Gln Thr Ala Arg Ala Thr Trp Phe Ala Tyr Trp115 120 125Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro130 135 140
权利要求
1.一种抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体，其特征在于包含(1)抗人重组碱性成纤维生长因子(rh-bFGF)鼠源抗体的轻链(L链)可变区(V区)和人IgG1C的L链恒定区(C区)的L链；和(2)抗rh-bFGF鼠源抗体的重链(H链)V区和人IgG1C的H链C区的H链。
2.根据权利要求1所述的嵌合抗体，其特征在于所述的L链V区含有如SEQ NO1列出的氨基酸序列，SEQ NO1氨基酸序列如下M K L PV R LL V LM F W IP A SS S DV L M TQ T PL S LP V S LG D QA S IS C R SS Q SI V HS N G NT Y LE W YL Q K PG Q SP K LL I Y KV S NR F SG V P DR F SG S GS G T DF T LK I SR V E AE D LG V YY C F QG S HV P YT F G GG T KL E IK R A D A A PT V。
3.根据权利要求1所述的嵌合抗体，其特征在于所述的H链V区含有如SEQ NO2列出的氨基酸序列，SEQ NO2氨基酸序列如下M G C SW V ML F LV A T AT G VH S QV Q L QQ S GA E LV K P GA S VK L SC K A SG Y TF T SY Y M YW V KQ R PG Q G LE W IG E IN P S NG G TN F NE K F KS K AT L TV D K SS S TA Y MQ L S SL T SE D SA V Y YC A SQ T AR A T WF A YW G QG S L VT V SA A ST K G P。
4.编码如权利要求2所述的L链V区的氨基酸序列的DNA。
5.编码如权利要求3所述的H链V区的氨基酸序列的DNA。
6.包含如权利要求4或5所述的DNA的表达载体。
7.用权利要求6所述的DNA载体转化的宿主细胞。
8.一种生产抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤培养用包含如权利要求7所述的宿主细胞，回收所表达的抗体。
9.含如权利要求1所述的嵌合抗体为活性成分的药物组合物。
10.如权利要求1所述的嵌合抗体用于制备预防矽肺形成的抗体药物和肿瘤血管抑制治疗的抗体靶向药物的用途。
全文摘要
本发明公开了一种抗人重组碱性成纤维生长因子嵌合抗体及其编码基因。本发明所述的一种抗人重组碱性成纤维生长因子的嵌合抗体，包含抗人重组碱性成纤维生长因子(rh－bFGF)鼠源抗体的轻链(L链)可变区(V区)和人IgG1C的L链恒定区(C区)的L链；和抗rh－bFGF鼠源抗体的重链(H链)V区和人IgG1C的H链C区的H链。本发明所述的嵌合抗体可用于制备预防矽肺形成的抗体药物和肿瘤血管抑制治疗的抗体靶向药物。
文档编号C07K19/00GK1560082SQ20041001558
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月8日 优先权日2004年3月8日
发明者向军俭, 邓宁, 李洪庆, 杨红宇 申请人:暨南大学