用神经肽ff受体2激动剂治疗神经痛的制作方法

专利名称：用神经肽ff受体2激动剂治疗神经痛的制作方法
技术领域：
以下描述的本发明各方面涉及使用调节神经肽FF受体亚型的活性的化合物治疗急性疼痛和慢性神经痛的方法，所述神经肽FF受体亚型介导急性伤害感受和慢性神经痛。本发明的各方面还涉及选择性地与这种受体亚型互作的化合物以及鉴定所述化合物的方法。
背景技术：
疼痛是常见的人类体验。其形式从急性到慢性；其强度从轻微到中等再到严重。在任意给定时间都有6500万美国人遭受疼痛的折磨。每年直接和间接的疼痛开销超过1200亿美元。可采用鸦片、抗炎症制剂和其他镇痛药治疗急性疼痛；通常根据其严重程度选择治疗形式。这种疼痛治疗形式的目的在于阻断携带疼痛信号的感觉信号的传导，并且控制对伤害性疼痛刺激的情感反应。
有效治疗炎症疼痛和急性疼痛的药物通常对治疗更为慢性的形式的疼痛效果不明显。一种形式的慢性疼痛是在对感觉神经造成损伤之后产生的。这种体验可从对触摸或温度的敏感性的轻度上升直到剧痛。这种类型的疼痛由于被认为涉及到神经系统功能的改变或神经系统结构的改造，所以被定义为神经性疼痛。
神经性疼痛非常普遍，并且在临床上极难处理。大约有1.5％的美国人都遭受着这类或那类的神经痛，如果将来源于神经的各种形式的背痛也包括在内的话，这一人群的数量还将扩大。所以，神经痛可以与由创伤、疾病和化学伤害引起的神经损伤相关。可缓解神经痛的化合物可能并不能有效治疗急性疼痛(例如，加巴喷丁(gapapentin)，三环抗抑郁药)。然而现有的对神经痛的治疗并不是针对这些类型的疼痛设计的，因此这些药物的效率低下和不能对所有患者起效也是意料之中的。所以，亟需更有效的和耐受性更好的治疗神经痛的方法。
发明概述本发明公开了鉴定有效治疗疼痛的化合物的方法，包括将所述化合物与NPFF2受体接触，并测定所述化合物是否与所述NPFF2受体结合。
本发明还公开了筛选能够影响NPFF2受体的一种或多种活性的化合物的方法，包括如下步骤a)将重组细胞与测试化合物接触，其中所述重组细胞包含表达所述NPFF2受体的重组核酸，假定所述细胞没有来自内源核酸的功能性NPFF2受体表达；及b)测定所述测试化合物对所述NPFF2受体的一种或多种活性的影响能力，并将所述能力与所述测试化合物对不含所述重组核酸的细胞中的NPFF2受体的一种或多种活性的影响能力进行比较；其中，所述重组核酸包括NPFF2受体核酸，所述NPFF2受体核酸选自a)SEQ ID No1的核酸，b)编码氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)编码所述NPFF2受体的上述核酸的衍生物，其中所述衍生物编码具有一种或多种所述NPFF2受体活性的受体，并且含有能在严格的杂交条件下与SEQ ID No1的至少20个连续核苷酸的互补体杂交的至少20个连续核苷酸。
本发明还公开了治疗任何类型的急性和慢性疼痛的方法，包括将有机体与有效量的至少一种化合物接触，其中所述化合物激活NPFF2受体亚型。
本发明还公开了鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将所述NPFF2受体与至少一种测试化合物接触；并测定所述NPFF2受体活性水平的任何升高，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
此外，本发明还公开了鉴定化合物是NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞或提取自所述细胞的成分与至少一种测试化合物孵育；以及测定所述NPFF2受体活性的任何升高，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
本发明还公开了治疗疼痛的方法，包括将遭受疼痛的个体与有效量的本文所述的至少一种通式I，通式II或通式III化合物接触，从而减轻所述疼痛的一种或多种症状。
本发明还公开了鉴定缓解个体的痛觉过敏或异常性疼痛的化合物的方法，包括向遭受痛觉过敏或异常性疼痛的个体提供本文所述的至少一种通式I，通式II或通式III化合物；并且测定所述至少一种化合物是否减轻所述个体的痛觉过敏或异常性疼痛。
本发明还公开了鉴定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将NPFF2受体与本文所述的至少一种通式I，通式II或通式III化合物接触；及测定所述NPFF2受体活性水平的任何升高，从而鉴定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受体激动剂。
本发明公开了鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞与本文所述的至少一种通式I，通式II或通式III化合物孵育；及测定所述NPFF2受体活性的任何升高，从而鉴定通式I，通式II或通式III化合物是所述NPFF2受体激动剂。
本发明还公开了鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将所述NPFF2受体与本文所述的至少一种通式I，通式II或通式III化合物接触；及测定所述通式I，通式II或通式III化合物是否与所述NPFF2受体结合；还公开了本文所述的通式I或通式II化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药。
还公开了本文所述的通式III化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药。
附图的简要说明

图1所示为比较爪收缩(paw withdrawal)潜伏期的柱状图。
图2所示为比较触觉阈值水平的柱状图。
图3所示为比较尾收缩(tail withdrawal)潜伏期的柱状图(以秒表示)。
图4所示为比较选择性FF2受体激动剂对福尔马林诱导的退缩(flinching)效果的柱状图。*表示与每个阶段的福尔马林注射的载体处理的对照组相比较，p≤0.05。
图5所示为比较角叉藻聚糖诱导的热痛觉过敏的剂量依赖性逆转(reversal)的柱状图。
图6所示为说明L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛的剂量依赖性逆转的柱状图。*表示与所述载体处理的对照相比较，p≤0.05。
图7所示为使用化合物3099进行L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛的剂量依赖性逆转的柱状图。*表示与所述载体处理的对照相比较，p≤0.05。
图8所示为使用dPQR酰胺进行L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛的剂量依赖性逆转的柱状图。*表示与所述载体处理的对照相比较，p≤0.05。
发明的详细说明神经肽FF(NPFF)是一族内源表达的多肽的代表，其C末端具有RF-酰胺，并作为神经递质。NPFF存在于中枢神经系统中，尤其是脊索、下丘脑、丘脑和脑干。这类多肽的功能之一就是调节疼痛。体内研究说明NPFF可在疼痛的动物模型中发挥原鸦片(pro-opioid)和抗鸦片(anti-opioid)的效果。
NPFF这些似乎相反的作用能够通过多种受体的作用进行介导。事实上，公知地存在两种被NPFF激活的G-蛋白偶合的受体。这些被定义为NPFF1和NPFF2的受体在整个机体和不同有机体中具有不同的表达。目前并不清楚这两种受体中的哪一种介导了NPFF对多种疼痛类型的作用。解剖学研究显示的在包括脊索、背根神经节、脊柱三叉神经核和丘脑的多个脑区域中的NPFF2结合位点说明，该受体可以介导两种疼痛形式中的NPFF伤害性疼痛活性。然而，在没有对NPFF受体中的一种而不是另一种具有选择性的化合物的条件下，不可能证实这一论断。
因此，与所述NPFF2受体结合的化合物可作为抗伤害性疼痛化合物深入研究的首选。本领域内对这些化合物的鉴定非常关注。
已发现了这样的化合物，相对神经肽FF1(NPFF1)和相关受体，其可选择性地激活神经肽FF2(NPFF2)受体。与所述NPFF2受体亚型互作的化合物具有此前未发现的止痛活性，并且可以有效治疗急性和慢性疼痛。这些发现具有实际的应用，即支持NPFF2受体激动剂用于治疗急性疼痛和慢性疼痛，所述疼痛是由创伤，由诸如糖尿病、带状疱疹(带状疱疹)、肠应激综合征或晚期癌症的疾病或由化学伤害引起的，如包括抗病毒药物的药物治疗的无意识后果。
因此，本发明公开的化合物和方法涉及急性和慢性疼痛的治疗。还公开了对所述NPFF2受体具有选择性的化合物。本发明还公开了治疗疼痛的方法，包括将个体与药理学活性剂量的化合物接触，所述化合物可与所述NPFF2受体亚型互作，从而达到控制疼痛的目的，而不引起不希望的副作用和剂量限制的副作用。
因此，在第一方面，本发明涉及鉴定有效治疗疼痛的化合物的方法，包括将所述化合物与NPFF2受体接触，并测定所述化合物是否与所述NPFF2受体结合。本发明还涉及NPFF2受体在鉴定与NPFF2受体结合的化合物中的用途。
在另一方面，本发明涉及筛选能够影响NPFF2受体的一种或多种活性的化合物的方法，包括如下步骤a)将重组细胞与测试化合物接触，其中所述重组细胞包含表达所述NPFF2受体的重组核酸，假定所述细胞没有来自内源核酸的功能性NPFF2受体表达；及b)测定所述测试化合物影响所述NPFF2受体的一种或多种活性的能力，并将所述能力与所述测试化合物对不合所述重组核酸的细胞中的所述一种或多种NPFF2受体活性的影响能力进行比较；其中，所述重组核酸包括NPFF2受体核酸，所述NPFF2受体核酸选自a)SEQ ID No1的核酸，b)编码氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)上述核酸的衍生物，其编码所述NPFF2受体，其中所述衍生物编码具有所述NPFF2受体的一种或多种活性的受体，并且含有至少20个连续核苷酸，且所述至少20个连续核苷酸能在严格的杂交条件下与SEQ ID No1的互补体杂交。
在某些实施方案中，所述NPFF2受体核酸编码SEQ ID No2衍生物的氨基酸序列，所述NPFF2受体核酸包含能在严格的杂交条件下与编码SEQ ID No2氨基酸序列的至少20个连续核苷酸的互补体杂交的至少20个连续核苷酸。
在一些实施方案中，所述衍生物包含能在严格的杂交条件下与编码SEQ ID No2氨基酸序列的连续核苷酸的互补体杂交的至少50、至少100、至少150、至少200、至少250、至少300、至少350、至少400、至少450、至少500、至少600、至少700、至少800、至少900、至少1000、至少1100、至少1200、至少1300、至少1400或至少1500个连续核苷酸。
在另一方面，本发明涉及治疗任何类型急性和慢性疼痛的方法，该方法包括将有机体与有效量的至少一种化合物接触，其中所述化合物激活NPFF2受体亚型。
在某些实施方案中，所述疼痛与糖尿病，病毒感染，肠应激综合征，截肢，癌症或化学伤害有关。
在其他方面，本发明涉及鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将所述NPFF2受体与至少一种测试化合物接触；并且测定所述NPFF2受体活性水平的任何提升，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
在某些实施方案中，所鉴定的激动剂激活所述NPFF2受体而不是NPFF1受体。在其他实施方案中，所鉴定的激动剂对所述NPFF2受体具有选择性。
在另一方面，本发明涉及鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞或从所述细胞提取的成分与至少一种测试化合物孵育；以及测定所述NPFF2受体活性的任何提升，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
在某些实施方案中，上述培养步骤中的细胞过量表达所述NPFF2受体。
在另一方面，本发明涉及通式I或通式II化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药， 其中
R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基和杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
在又一方面，本发明涉及通式III化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，
其中Cy1选自芳基，稠和芳基，杂芳基，稠和杂芳基，碳环，环烷基，稠和杂环和杂环；Cy2选自芳基，稠和芳基，杂芳基，稠和杂芳基，碳环，环烷基，稠和杂环和杂环；R8和R9分别出现0至6次，并独立地选自氢，任意取代的C1-C8直链或支链烷基，任意取代的C2-C8直链或支链烯基，任意取代的C2-C8直链或支链炔基，任意取代的C3-C8环烷基，任意取代的碳环，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的杂芳基，任意取代的稠和杂芳基，任意取代的杂环基，任意取代的稠合杂环基，卤代烷基，卤素，-CN，-NO2，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-S(＝O)R7，-N(R7)-S(＝O)2R7，-OR7，-OC(＝Z)R7，-SO3H，-S(＝O)2N(R7)2，-S(＝O)N(R7)2，-S(＝O)2R7，-S(＝O)R7和-SR7，其中Z是氧或硫；且其中每个R7的定义如上所述；R10选自氢，任意取代的C1-C8直链或支链烷基，任意取代的C2-C8直链或支链烯基，任意取代的C2-C8直链或支链炔基，C3-C8环烷基，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的杂芳基，任意取代的稠和杂芳基，任意取代的杂环基，任意取代的稠合杂环基，X或者不存在，或者选自氧，硫，NR7，任意取代的亚乙基，双亚乙基，其中R7的定义如上所述。
某些上述取代基含有不止一个“R”基团，但所述“R”基团被标为相同的数字，例如，N(R7)2基团有两个R7基团。应该理解两个具有相同标号的“R”基团可以相同或不同。因此，例如，甲胺、二甲胺和甲基丙基胺都可用“N(R7)2”来描述。
术语“药物可接受的盐”是指对给药后的有机体不会引起明显刺激，并且不会消除所述化合物的生物学活性和性质的化合物制剂。可可通过将本发明的化合物与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、盐酸、硝酸、磷酸的无机酸，甲磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，水杨酸等等反应得到药物可接受的盐。还可以通过将本发明的化合物与碱反应形成盐，例如铵盐，碱金属盐如钠盐或钾盐，碱土金属盐如钙盐或镁盐，诸如二环己胺，N-甲基-D-葡糖胺，三(羟甲基)甲胺的有机碱的盐，以及与诸如精氨酸，赖氨酸的氨基酸的盐，来获得药物可接受的盐。
术语“酯”是指具有通式-(R)n-COOR’的化学部分，其中R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳成键)和杂脂环(通过环碳成键)，其中n为0或1。
“酰胺”是具有通式-(R)n-C(O)NHR’或-(R)n-NHC(O)R’的化学部分，其中R和R’独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳成键)和杂脂环(通过环碳成键)，其中n为0或1。酰胺可以是连接到本发明分子上的氨基酸或肽分子，从而形成原药。
本发明化合物上的任何氨基、羟基或羧基侧链都可以酯化或酰胺化。用于获得该末端的方法和特异性基团是本领域所述技术人员公知的，并可轻而易举地从诸如Greene和Wuts，《有机合成中的保护基团》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第三版，John Wiley&Sons，New York，NY，1999年的参考资源中找到，在此将其全部引用。
“原药”是指可在体内转化成母体药物的制剂。原药通常是有用的，因为在某些情况下，它比母体药物更容易给药。例如，原药通过口服给药时是可以生物利用的，而母体药物则不行。与母体药物相比，原药还可以增加在药物组合物中的溶解度。原药的一个非限定性的例子可以是本发明的化合物，其以酯(“原药”)形式给药从而促进跨细胞膜的传输，在那里水溶性对迁移具有副作用，但一旦进入到水溶性有益的细胞内部，所述原药便被代谢水解成羧酸，即所述活性部分。另一个原药的例子可以是结合于酸基团上的短肽(聚氨基酸)，其中所述肽被代谢释放出所述活性部分。
术语“芳基”是指具有至少一个具有共轭π电子体系的环的芳基，并且包括碳环芳基(如苯基)和杂环芳基(如吡啶)。该术语包括单环或稠环(即共用相邻碳原子对的环)基团。术语“碳环”是指含有一个或多个共价闭合环结构的化合物，并且形成所述环骨架的原子都是碳原子。该术语由此将碳环和环骨架中含有至少一个非碳原子的杂环区别开来。术语“杂芳香族基”或“杂芳基”指含有至少一个杂环的芳基。
芳环的例子包括但不限于苯和取代的苯，例如甲苯、苯胺、二甲苯等等。
稠芳环的例子包括但不限于萘，取代的萘，蒽和甘菊环(azulene)。
杂环的例子包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑、异噁唑、异噻唑、噁二唑、三唑、噻二唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪， 和 其中R如本文所述。
稠和杂芳环的例子包括但不限于吲嗪、吲哚、异吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、嘌呤、喹啉、异喹啉、噌啉、酞嗪、喹噁啉、喹噁啉、萘啶、蝶啶、吖啶氮蒽、吩嗪。
术语“杂环”是指具有3-15个单位的饱和或部分不饱和的环，其中至少一个原子不是碳原子。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻碳原子对的环)基团。
杂环的例子包括但不限于吡咯啉，吡咯烷，二氧戊环，咪唑啉，咪唑烯，吡唑啉，吡唑烷，吡喃，哌啶，二噁烷，吗啉，二噻烷，硫代吗啉，哌嗪。
稠和杂环的例子包括但不限于二氢吲哚，二氢苯并呋喃，二氢苯并噻吩，咔唑，吩噻嗪，吩噁嗪，二氢吲哚类，二氢苯并咪唑。
碳环的例子包括茚，芴，金刚烷，降莰烷。
本文所用的术语“烃基”是指脂肪族烃基。所述烃基部分可以是“饱和烷基”，这是指其不含有任何的烯基部分或炔基部分。所述烃基部分还可以是“不饱和烃基”部分，指其含有至少一个烯基或炔基部分。“烯基”部分是指含有至少两个碳原子和至少一个碳碳双键的基团，“炔基”部分是指含有至少两个碳原子和至少一个碳碳三键的基团。所述烃基部分，无论是饱和的或不饱和的，都可以是支链的，直链的或环状的。
所述烃基可以含有1到20个碳原子(无论在本文中何时出现，诸如“1到20”的数值范围是指所给定范围的每一个整数；例如，“1到20个碳原子”是指所述烃基含有1个碳原子，2个碳原子，3个碳原子等等直到并且包括20个碳原子，然而本定义还覆盖了出现未指定数值范围的术语“烃基”的情况)。所述烃基也可以是具有1到10个碳原子的中等大小的烃基。所述烃基还可以是具有1到5个碳原子的较小的烃基。本发明所述化合物的烃基可被指定为“C1-C4烃基”或类似指定。示例性地，“C1-C4烃基”是指所述烃链中有1至4个碳原子，即所述烃链选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
所述烃基可以是取代或未取代的。当被取代时，所述取代基可以是一或多个单独和独立选自环烃基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烃硫基，芳硫基，氰基，卤素，羰基，硫代羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰氨基，N-酰氨基，S-磺酰氨基，N-磺酰氨基，C-羧基，O-羧基，异氰基，硫代氰基，异硫氰基，硝基，甲硅烷基，三卤代甲烷磺酰基和氨基包括单取代和二取代氨基基团，及其被保护的衍生物的基团。常见的烃基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等等。当取代基被描述为“任意取代”时，该取代基可以被上述取代基中的任意一种所取代。
单独出现且没有数字标示的取代基“R”是指选自烃基，环烃基，芳基，杂芳基(通过环碳成键)和杂脂环(通过环碳成键)基。
“O-羰基”是指RC(＝O)O-基团，其中R如本文所定义。
“C-羰基”是指-C(＝O)OR基团，其中R如本文所定义。
“乙酰基”是指-C(＝O)CH3基团。
“三卤代甲烷磺酰基”是指X3CS(＝O)2-基团，其中X是卤素。
“氰基”是指-CN基团。
“异氰基”是指-NCO基团。
“硫代氰基”是指-CNS基团。
“异硫氰基”是指-NCS基团。
“亚磺酰基”是指-S(＝O)-R基团，R如本文所定义。
“S-磺酰氨基”是指-S(＝O)2NR基团，R如本文所定义。
“N-磺酰氨基”是指RS(＝O)2NH-基团，R如本文所定义。
“三卤代甲烷磺酰氨基”是指X3CS(＝O)2NR-基团，R如本文所定义。
“O-氨甲酰基”是指-OC(＝O)-NR基团，R如本文所定义。
“N-氨甲酰基”是指ROC(＝O)NH-基团，R如本文所定义。
“O-硫代氨甲酰基”是指-OC(＝S)-NR基团，R如本文所定义。
“N-硫代氨甲酰基”是指ROC(＝S)NH-基团，R如本文所定义。
“C-酰氨基”是指-C(＝O)-NR2基团，R如本文所定义。
“N-酰氨基”是指RC(＝O)NH-基团，R如本文所定义。
术语“全卤代烃基”是指一或多个氢原子独立地被卤素原子取代的烃基基团。
当两个取代基和与它们相连的碳形成环时，是指以下结构 是下列结构的代表
在上述例子中，R1和R2以及与它们相连的碳形成了六元芳环。
除非特别指明，当取代基被认为是“任意取代的”，是指所述取代基是可以被一个或多个单独和独立选自环烃基，芳基，杂芳基，杂环基，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，烃基巯基，芳基巯基，氰基，卤素，羰基，硫代羰基，O-氨甲酰基，N-氨甲酰基，O-硫代氨甲酰基，N-硫代氨甲酰基，C-酰氨基，N-酰氨基，S-磺酰氨基，N-磺酰氨基，C-羧基，O-羧基，异氰基，硫代氰基，异硫氰基，硝基，甲硅烷基，三卤代甲烷磺酰基和氨基包括单取代和二取代的氨基基团，及其被保护的衍生物的基团。可以形成上述取代基的保护衍生物的保护基团是本领域所属技术人员公知地，并且可以在诸如上述Greene和Wuts的参考文献中找到。
在某些实施方案中，通式I或通式II化合物中的R1是氢或C1-C10的直链烃基。在一些实施方案中，R1是氢或C1-C5的直链烃基。在其他实施方案中，R1选自氢，甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基和异戊基。
在一些实施方案中，通式I或通式II化合物中的R2选自氢，羟基，硝基，氨基，卤素，-OR7和-N(R7)2，且其中R7是氢或C1-C10的直链烃基。在某些实施方案中，R2选自氢，羟基，硝基，卤素和-OR7，且其中R7是氢或C1-C3的直链烃基。在其他实施方案中，R2选自氢，羟基，硝基，氯，溴，甲氧基和乙氧基。
在某些实施方案中，通式I或通式II化合物中的R3选自氢，羟基，硝基，氨基，卤素，-OR7和-N(R7)2，且其中R7是氢或C1-C10的直链烃基。在一些实施方案中，R3选自氢，羟基，硝基，卤素和-OR7，且其中R7是氢或C1-C3的直链烃基。在其他实施方案中，R3选自氢，硝基，氯和碘。
在本发明的某些实施方案中，通式I或通式II化合物中的R4选自氢，C1-C10的直链烃基，羟基，硝基，氨基，卤素，-OR7和-N(R7)2，且其中每个R7独立地为任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烃基。在一些实施方案中，R4选自氢，C1-C3直链烃基，羟基，硝基，氨基，卤素，-OR7和-N(R7)2，且其中每个R7独立地为被芳基任意取代的C1-C3直链烃基。在其他实施方案中，R4选自氢，甲基，乙基，羟基，硝基，氨基，氯，氟，甲氧基，乙氧基，甲氨基，二甲氨基，二乙氨基和苄氧基。
在其他实施方案中，通式I或通式II化合物中的R5选自氢，C1-C10直链烃基，羟基，硝基，氨基，卤素，全卤代烃基，-OR7和-N(R7)2，且其中每个R7独立地为被芳基或杂芳基任意取代的C1-C10直链或支链烃基。在一些实施方案中，R5选自氢，C1-C3直链烃基，羟基，硝基，氨基，卤素，全卤代烃基，-OR7和-N(R7)2，且其中每个R7独立地为C1-C3直链烃基。在其他实施方案中，R5选自氢，羟基，氯，溴，三氟甲基和甲氧基。
在某些实施方案中，R6是氢。
如上所述，在一些实施方案中，R2和R3与和它们相连的碳形成了稠和芳基，杂芳基，C5-C10环烃基或杂烃环。在某些实施方案中，所述环可以是稠和芳环，其可以是苯基。
在一些实施方案中，R3和R4及与它们相连的碳形成了稠和芳基，杂芳基，C5-C10环烃基或杂烃环。所述环可以是稠和杂芳环，其可以是吡咯。
在某些实施方案中，R4和R5及与它们相连的碳形成了稠和芳基，杂芳基，C5-C10环烃基或杂烃环。所述环可以是杂烃环，其可以是1，3-二氧戊环。
在某些实施方案中，R5和R6及与它们相连的碳形成了稠和芳基，杂芳基，C5-C10环烃基或杂烃环。所述环可以是稠合芳环，其可以是苯基。
在某些实施方案中，Q选自任意取代的苯，甲苯，苯胺，萘，甘菊环，呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉，吡咯烷，噁唑、噻唑、咪唑、咪唑啉、咪唑烷(imidazolidine)、吡唑、吡唑啉、吡唑烷、异噁唑、异噻唑、三唑、噻二唑、吡喃、吡啶、哌啶，吗啉，硫代吗啉，哒嗪，嘧啶，吡嗪，哌嗪，三嗪。在某些实施方案中，Q是呋喃。
本领域所属技术人员应意识到Q是双取代的具有任意取代的苯基和氨基胍基。还应意识到所述两种取代基可以位于Q的不同位置。因此所述两种取代基可以是邻位的、间位的和对位的，即它们可以在Q上相互接近，或具有将与两个所述取代基结合的两个环原子隔开的一个或多个环原子。本发明也包括了由此得到的所有各种结构异构体。
在某些实施方案中，通式I化合物选自
或其药物可接受的盐或原药。
在某些实施方案中，通式II化合物是 或其药物可接受的盐或原药。
在某些实施方案中，所述方法也指治疗神经痛的方法。特别优选的使用本发明所述方法化合物的实施方案可由化合物1045、3027、3099、1006、1005、3093和2616代表。
本发明的某些化合物可以包括旋光异构体在内的立体异构体形式存在。本发明包括了所有立体异构体和这些立体异构体的消旋混合物，以及可根据本领域所述技术人员公知的方法拆分的单独的对映异构体。
在另一方面，本发明涉及治疗急性和慢性疼痛的方法，包括鉴定需要治疗的个体，并将所述个体与有效量的至少一种本文所述的通式I、通式II或通式III化合物接触，从而减轻所述疼痛的一种或多种症状。
本发明的另一方面是发现所公开的NPFF2化合物是所述神经肽FF2受体的特异性激动剂。因此，这些激动剂预期与所述NPFF2受体结合并诱导抗痛觉过敏和抗异常性疼痛反应。本文所述的NPFF2受体激动剂可用于治疗神经痛。
因此，在一些实施方案中，所述通式I、通式II或通式III化合物能激活所述NPFF受体。在某些实施方案中，所述化合物可选择性地激活NPFF2受体亚型而不是NPFF1受体。
在某些实施方案中，由本发明方法治疗的疼痛与糖尿病，病毒感染，肠应激综合征，截肢，癌症，炎症或化学伤害有关。在其他实施方案中，所述疼痛是神经痛。
在某些实施方案中，所述个体表现出痛觉过敏。在一些实施方案中，所述痛觉过敏是热痛觉过敏。在其他实施方案中，所述个体表现出异常性疼痛。在一些这样的实施方案中，所述异常性疼痛是触觉异常性疼痛。
另一方面，本发明涉及鉴定缓解个体的痛觉过敏或异常性疼痛的化合物的方法，包括鉴定遭受痛觉过敏或异常性疼痛的个体；为所述个体提供至少一种本文所述的通式I、通式II或通式III化合物；并测定所述至少一种化合物是否减轻了个体的痛觉过敏或异常性疼痛。
又一方面，本发明涉及鉴定通式I、通式II或通式III化合物是所述NPFF2受体的激动剂的方法，该方法包括将NPFF2受体与至少一种本发明所述的通式I、通式II或通式III化合物接触；并测定所述NPFF2受体活性水平的任何提升，从而鉴定通式I、通式II或通式III化合物是所述NPFF2受体激动剂。
在本说明书中，“激动剂”定义为提高受体基础活性的化合物(即，由所述受体介导的信号转导)。“拮抗剂”定义为阻碍激动剂对受体起作用的化合物。“部分激动剂”定义为表现出有限的，或不完全活性的激动剂，以至于其不能在体外激活受体，在体内具有拮抗剂的功能。
术语“个体”是指作为治疗，观察或实验对象的动物，优选为哺乳动物，最优选为人。
术语“治疗有效量”是指能引起所指示的生物学或临床反应的活性化合物或药物制剂的量。这样的反应可由研究人员，兽医，医生或其他医务工作者在组织，系统，动物或人类中观察到，且包括所治疗疾病的症状的缓解。
另一方面，本发明涉及鉴定化合物是NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞与至少一种本发明所述的通式I、通式II或通式III化合物孵育；并且测定所述NPFF2受体活性的任何提升，从而鉴定通式I化合物是NPFF受体激动剂。
另一方面，本发明涉及治疗个体神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I、通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物作为所述NPFF1受体的拮抗剂或较弱的部分激动剂起作用。
另一方面，本发明涉及治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体和作为NPFF1受体的拮抗剂或部分激动剂的通式I、通式II或通式III化合物与作为NPFF2受体的完全激动剂或部分激动剂的其他通式I、通式II或通式III化合物的组合物接触。
另一方面，本发明涉及治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I、通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2激动剂和NPFF1拮抗剂起作用。
另一方面，本发明涉及治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I、通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2部分激动剂和NPFF1拮抗剂起作用。
另一方面，本发明涉及治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I、通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2部分激动剂和NPFF1部分激动剂起作用。
另一方面，本发明涉及药物组合物，所述组合物包含上述的通式I、通式II或通式III化合物，及生理可接受的载体，稀释剂或赋型剂或其组合。
术语“药物组合物”指本发明化合物与诸如稀释剂或载体的其他化学组分的混合物。所述药物组合物能协助所述化合物对有机体的给药。本领域中现有的多种将化合物给药的技术包括口服，注射，气雾剂，胃肠外的和局部给药。可通过将化合物与无机或有机酸反应得到药物组合物，所述无机或有机酸例如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，甲磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，水杨酸等等。
术语“载体”定义为协助将化合物引入细胞或组织的化学物质。例如二甲亚砜(DMSO)是常用的载体，因为其可协助许多有机化合物摄取进入有机体的细胞或组织。
术语“稀释剂”定义为稀释于水中的可溶解兴趣化合物以及稳定所述化合物的生物活性形式的化学物质。溶解于缓冲溶液中的盐是本领域中常用的稀释剂。磷酸盐缓冲液是常用的缓冲溶液，因为其可模拟人类血液的盐条件。因为缓冲盐能控制较低浓度时溶液的pH值，所以缓冲的稀释剂几乎不会改变化合物的生物学活性。
术语“生理可接受的”是指不会消除所述化合物的生物学活性和性质的载体或稀释剂。
可将本文所述的药物组合物单独，或以与其他活性成分(如在联合治疗中)、或适合的载体或赋型剂混合的药物组合物形式对个体进行给药。将本申请所述化合物制剂和给药的技术可见于《雷明顿制药科学》″Remington′s Pharmaceutical Sciences″，Mack Publishing Co.，Easton，PA，18版，1990年。
适于给药的途径可包括，例如口服给药，直肠给药，跨粘膜给药或肠给药；肠胃外给药，包括肌肉注射，皮下注射，静脉注射，髓内注射以及鞘内注射，直接心室注射，腹膜内注射，鼻内注射或眼内注射。
可选择地，可以局部而不是系统的方式给药所述化合物，例如，通常以贮存或持续释放制剂形式将所述化合物直接注射到疼痛的区域。此外，还可以在靶药物传送系统中，例如在包被有组织特异性抗体的脂质体中，给药所述药物。所述脂质体可靶向于所述器官并选择性地被所述器官吸收。
可以公知的方式制备本发明的所述药物组合物，例如，通过常规的混合，溶解，制粒，制糖衣，研粉，乳化，胶囊，包埋(entrapping)或压片方法。
可使用包括赋型剂和助剂的一种或多种生理可接受的载体以常规方式制备按照本发明使用的药物组合物，所述生理可接受载体能够协助将所述活性化合物加工成用于制药的制剂。根据所选的给药途径来确定适当的制剂。如本领域所理解的，可以适合方式采用任意公知的技术，载体和赋型剂；例如参见上述的《雷明顿制药科学》。
为了进行注射，可将本发明的所述制剂配制成水溶液，优选为生理相容的缓冲液，比如Hank’s溶液，Ringer’s溶液或生理盐水缓冲液。为了进行跨粘膜给药，所述制剂可使用适于待渗透的屏障的渗透剂。这样的渗透剂是本领域所公知的。
为了进行口服给药，可很容易地通过将所述活性化合物与本领域公知的药物可接受载体结合来配制所述化合物。这类载体可以使本发明所述化合物配制成片剂、丸剂、糖衣、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、悬液等等，从而适于拟接受治疗个体的口服吸收。可通过将一种或多种固体赋型剂和本发明的药物组合物混合得到适于口服的药物制剂，如果需要，在加入适当的助剂之后，任意地磨碎所述混合物并且加工所述颗粒混合物，从而获得片剂或糖衣核心。适合的赋型剂是，具体有，诸如糖的填充剂，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、土豆淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或藻酸或诸如藻酸钠的藻酸盐。
提供了具有适合包被的糖衣剂核。为了这个目的，可使用浓缩的糖溶液，该溶液可任选地包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝胶、聚乙二醇和\或二氧化钛、紫胶漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了识别或标示活性化合物剂量的不同组合，可向片剂或糖衣剂包衣中加入染料或色素。
可以口服的药物制剂包括由明胶制造的推入-结合胶囊，以及由明胶和诸如甘油或山梨醇的可塑剂制成的软的、密封的胶囊。所述推入-结合胶囊可在混合物中包含所述活性成分与诸如乳糖的填充剂，如淀粉的粘合剂，和/或诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂，以及，可任选地，稳定剂。在软胶囊中，所述活性化合物可溶解于或混悬于合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡，或液体聚乙二醇。此外，可加入稳定剂。所有用于口服给药的配方的剂量应适合这样的给药。
对于口腔给药，所述组合物可以常规方式配制成片剂或锭剂形式。
对于吸入给药，本发明所用的化合物可以方便地通过加压包装或喷雾器，使用合适的推进剂以喷雾剂的形式释放，该推进剂例如是二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压气雾剂的情况下，所述剂量单位可以由提供的阀门来确定释放的测定量。可将吸入器或吹入器中使用的胶囊和诸如凝胶的药筒配制成包含所述化合物和诸如乳糖或淀粉的适合的粉末基质的粉末混合物。
可将所述化合物配制以通过诸如快速滴注或连续滴注的注射形式进行非经胃肠道给药。用于注射的制剂可以加添加防腐剂的诸如安瓿或多剂量容器的单位剂型存在。所述组合物可采取诸如油或水载体中的悬浮液、溶液或者乳液形式，以及可包含诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。
用于非经胃肠道给药的药物制剂包括水溶性形式的所述活性化合物的水溶液。另外，可将所述活性化合物的混悬液制备为适当的油状注射悬液。适当的亲脂溶剂或载体包括诸如芝麻油的脂肪油，或诸如油酸乙酯或者甘油三酯的合成脂肪酸酯，或脂质体。水状注射混悬液可以包含用于增加该混悬液的粘度的物质，例如羧甲级纤维素钠、山梨醇或者右旋糖苷。任选地，所述混悬液也可包含适当的稳定剂或者可增加化合物溶解性的以制备高浓度溶液的试剂。
可选择地，在使用前，所述活性成分可以是与诸如无菌无热原水的合适的载体组成的粉末形式。
也可将所述化合物配制成诸如栓剂或保留灌肠剂的、例如包含诸如可可脂或其它甘油酯的常规栓剂基质的直肠组合物。
除了上述制剂以外，所述化合物还可配制为长效制剂。这样的长效制剂可以通过植入(例如皮下地或者肌肉地)或肌肉注射给药。因此，例如，所述化合物可以与适当的聚合物或疏水性物质(例如作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或作为微溶性衍生物，例如，作为微溶性的盐配制。
用于本发明的疏水性化合物的药物载体是一种助溶剂系统，其包含苄醇、非极性表面活性剂、易与水混合的有机聚合物，和水相。所用的常规助溶系统为VPD共溶剂系统，其为3％重量/体积比的苄醇、8％重量/体积比的非离子表面活性剂聚山梨醇酯80TM，以及65％重量/体积比的聚乙二醇300的溶液，其在绝对乙醇中达到容积。自然地，在不破坏其溶解度及毒性特征的前提下，共溶剂系统的比例可以适当变化。此外，所述共溶剂组分的同一性可以变化例如，可以使用其它低毒性的非离子表面活性剂代替聚山梨醇酯80TM；聚乙二醇的比例可以变化；其它生物适合的聚合物可以替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；并且其它的糖类或者多糖可以替代葡萄糖。
可选择地，也可使用适于疏水性药物化合物的其它递药系统。脂质体和乳剂是公知的用于疏水性药物的输送载体或载体的例子。尽管通常以其较大的毒性作为代价，也可以使用诸如二甲基亚砜的某些有机溶剂。另外，可使用缓释系统输送所述化合物，例如包含所述治疗剂的固体疏水聚合物的半透性基质。已建立了多种缓释材料并为本领域所属技术人员所公知。根据其化学性质，缓释胶囊可以在几周到超过100天的时间里释放所述化合物。根据所述治疗剂的化学性质和生物稳定性，可采用其他的蛋白稳定化策略。
用于本发明的药物组合物的许多化合物可作为具有药物可配伍的平衡离子的盐类被提供。药物可配伍的盐类可以与许多酸成形，所述酸包括但不局限于盐酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等等。所述盐类比其相应的游离酸或碱的形式更易溶于水性溶剂或其它质子溶剂中。
适合本发明应用的药物组合物包括含有有效量的、以完成其预期目的的有效成分的组合物。更特别地，治疗有效量是指防止、缓解或改善疾病的症状或延长被治疗个体的生命力的化合物有效量。对治疗有效量的确定是本领域所属技术人员公知的，尤其是在公开了本发明提供的详细公开内容的情况下。
本发明药物组合物的确切剂型、给药途径及剂量可由各个医师根据所述患者的情况来选择(参见，例如Fingl等人，1975，《治疗学的药理学基础》(The Pharmacological Basis of Therapeutics)第1章，第1页)。通常，对患者给药的所述组合物的剂量范围可为该患者体重的大约0.5-1000mg/kg，或1-500mg/kg，或该患者体重的50-100mg/kg。所述剂量可以是在一天或数天期间，单次或一系列的两次或更多次的给药，这根据所述患者来确定。值得注意的是对于本发明公开内容提及的几乎所有的特定化合物，已确定了治疗至少某些疾病状态的人类剂量。因此，在大多数情况下，本发明使用那些相同的剂量或者大约为所确定的人类剂量的0.1％-500％，或25％-250％，或50％-100％的剂量。当人类剂量未确定时，在此情况下，对于新发现的药物组合物，合适的人类剂量可从ED50或ID50值，或源于体外或体内研究的其它适当值中来推断，正如在动物体内的毒性研究和有效性研究定量的那样。
虽然可通过在逐个药物(drug-by-drug)的基础上确定其确切剂量，但是在大多数情况下，可归纳出关于所述剂量的某些普遍性。对于成年人类患者的每天剂量方案可以是，例如，每个成分0.1mg-500mg的口服剂量，优选为1mg-250mg，例如5-200mg，或者每个成分0.01mg-100mg剂量的静脉注射、皮下注射或肌内注射，优选为0.1mg-60mg，例如以所述游离碱计算的、以每天1-4次给药的1-40mg的本发明所述药物组合物的每个成分或其药物可接受的盐。可选择地，本发明的所述药物组合物可通过连续的静脉滴注来给药，优选地以每天每个成分400mg的剂量给药。因此，每个成分口服给药的每天总剂量通常为1-2000mg，且非经胃肠道给药的每天总剂量通常为0.1-400mg。适当地，可将所述化合物进行连续治疗阶段的给药，例如一周或数周、或数月或数年。
可个别地调整剂量和给药间隔以提供足以维持所述调节作用或最低有效浓度(MEC)的所述活性部分的血浆水平。所述MEC随每个化合物得不同而变化，但是可从所述体外数据中来估计。达到所述MEC的必要剂量依赖于个体特征和给药途径。但是，也可使用HPLC分析或生物分析来确定血浆浓度。
也可应用MEC值确定给药间隔。组合物应用用药法来给药，该用药法在10-90％，优选为30-90％及更优选为50-90％的所述时间里，将血浆水平维持在MEC以上。
在局部给药或选择性吸收的情况下，所述药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
所述组合物的给药量当然依赖于治疗的所述个体、所述个体的体重、所述疾病的严重性、给药方式和开药方医生的判断。
如果需要，所述组合物可能存在于包装或配料装置中，所述装置可包含一个或多个含有所述活性成分的单位剂型。所述包装例如可包含金属箔或塑料箔，例如水泡包(blister pack)。所述包装或配料装置可带有给药说明书。所述包装或配料装置也可带有与所述容器相关的通告，该通告形式上由调整药物制造、应用或价格的政府机构来规定，该通告反映所述药物形式已由所述机构许可用于人类或牲畜给药。这样的通告，例如，可以是由美国食品与药品监督管理局许可的用于处方药的标签，或者所述许可的产品插入说明。可在恰当的容器内制备和放置包含在可配伍的药物载体中配制的本发明化合物的组合物，并将其标记为可对指定的疾病状态进行治疗。
本领域所述技术人员应当理解，在不偏离本发明的精神下，可对本发明作出众多和各异的修改。因此，应当清楚的认识到本发明仅是说明性的，而不应理解为是对本发明范围的限制。
实验的具体情况化合物的合成下述方案1是亚氨基胍合成的代表性的合成方案 方案1如方案2所示，可采用其他条件 方案2在某些实施方案中，在形成亚氨基胍基之前，需要初始的烷基化步骤，如方案3所示
方案3一般方法所使用的是96％乙醇和购买的溶剂。1H NMR光谱是在400MHz下，在Varian XL分光计中记录的。化学位移是以百万分率(ppm)报告的，并以残留质子(即CHCl3，CH3OH)占氘化溶剂的量为参考。分裂方式指定为s＝单峰、d＝双重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、br.＝宽峰、m＝多重峰。在用硅胶60F254预涂布的铝板上完成薄层色谱法(TLC)。在Isco CombiFlashSQ16x上应用以下公开的方法实施闪柱色谱法。应用来自PersonalChemistry的Smith Creator完成微波反应公析性HPLC，乙酸铵缓冲液(ZMD)系统由600E梯度泵、2700样本管理器、996光电二极管矩阵检测器和电喷射离子化界面组成的沃特斯(Waters)LC/ZMD仪器。
色谱柱反相色谱柱(XterraMS C185μm，50×4.6mm ID)。
流动相乙腈/10mM乙酸铵水溶液。
程序以10％乙腈开始梯度洗脱17分钟，经10分钟后到100％乙腈，持续1分钟，再经0.5分钟到10％乙腈，持续5.5分钟。流速为1mL/分钟。
分析性HPLC，乙酸铵缓冲液(ZQ)系统由2795分离组件、996光电二极管矩阵检测器和电喷射离子化界面组成的沃特斯联合HT/ZQ2000仪器。
色谱柱具有保护柱筒式系统的反相色谱柱(XterraMS C183.5μm，30×4.6mm ID)。
流动相乙腈/10mM乙酸铵水溶液。
程序以10％乙腈开始梯度洗脱11分钟，经7分钟到90％乙腈，再经0.5分钟到10％乙腈，持续3分钟。流速为1mL/分钟。
分析性HPLC，碳酸氢铵缓冲液(ZMD)系统由600E梯度泵、2700样本管理器、996光电二极管矩阵检测器和电喷射离子化界面组成的沃特斯(Waters)LC/ZMD仪器。
色谱柱反相色谱柱(XterraMS C185μm，50×4.6mm ID)。
流动相乙腈/5mM碳酸氢铵水溶液(调到pH 9.5)。
程序以10％乙腈开始梯度洗脱17分钟，经10分钟到100％乙腈，持续1分钟，再经0.5分钟到10％乙腈，持续5.5分钟。流速为1mL/分钟。
制备性的LC/MS方法系统沃特斯LC/ZMD仪器。具有600E梯度泵、2700样本管理器、996光电二极管矩阵检测器和电喷射离子化界面的装置。
色谱柱反相色谱柱(XterraPrep MS C185μm，19×100mm)。
流动相乙腈/10mM乙酸铵水溶液。
程序以30％乙腈开始梯度洗脱12分钟，经8.5分钟到100％乙腈，再经0.5分钟到30％乙腈，持续0.5分钟。流速为17mL/分钟。
制备性的HPLC方法系统沃特斯Prep4000仪器。具有4000 Prep泵、Prep LC控制器、2487二元吸光率检测器的装置。
色谱柱半制备柱(PhenomenexLuna C185μm，21.1×250mm)流动相乙腈/25mM乙酸铵水溶液。
程序以10％乙腈开始梯度程序45分钟，持续5分钟，再经30分钟到80％乙腈，持续10分钟、流速为20mL/分钟。
CombiFlash方法1(CF1)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅胶柱及用EtOAc(3分钟)、含0-20％MeOH的EtOAc(25分钟)、随后用含纯化20％MeOH的EtOAc(15分钟)以15mL/分钟的流速洗脱纯化。
CombiFlash方法2(CF2)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅胶柱及用庚烷(1分钟)、含0-10％EtOAc的庚烷(30分钟)、含10-15％EtOAc的庚烷(10分钟)、随后用含15％EtOAc的庚烷(5分钟)以16mL/分钟的流速洗脱纯化。
CombiFlash方法3(CF3)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅胶柱及用庚烷(3分钟)、含0-25％EtOAc的庚烷(25分钟)、随后用含25％EtOAc的庚烷(8分钟)以15mL/分钟的流速洗脱纯化。
CombiFlash方法4(CF4)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅胶柱及用庚烷(3分钟)、含0-15％EtOAc的庚烷(25分钟)、随后用含15％EtOAc的庚烷(10分钟)以15mL/分钟的流速洗脱纯化。
CombiFlash方法5(CF5)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用4g硅胶柱及用庚烷(3分钟)、含0-10％EtOAc的庚烷(25分钟)、随后用含10％EtOAc的庚烷(8分钟)以15mL/分钟的流速洗脱纯化。
CombiFlash方法6(CF6)将所述样本干燥地装填在硅藻土上，然后在所述CombiFlash上，用10g硅胶柱及用DCM(15分钟)、含0-10％MeOH的DCM(40分钟)、随后用含10％MeOH的DCM(10分钟)以15mL/分钟的流速洗脱纯化。
一般操作步骤1(GP1)
在乙醇(3mL)中，将所述醛或酮(5.0mmol)和氨基胍硝酸盐(5.0mmol，696mg)在120℃(醛)或160℃(酮)下微波加热10分钟然后冷却至室温。加入甲醇(20mL)，再加入含HCl的二噁烷(4.0M，6.0mL)并将该反应浓缩至干燥。加入甲醇，然后过滤所述混合物。加入Et2O促使所述产物的结晶。过滤该产物并高真空下干燥。
一般操作2(GP2)在EtOH(2mL)中，将所述醛或酮和氨基胍盐酸盐(0.95或1.0当量)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。过滤该反应，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗涤所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作3(GP3)在EtOH(2mL)中，将所述醛或酮和氨基胍盐酸盐(0.95或1.0当量)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。加入Et2O(2-20mL)来促使结晶。过滤该反应，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗涤所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作4(GP4)在EtOH(2mL)中，将所述醛或酮和氨基胍盐酸盐(0.95或1.0当量)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。加入Et2O但不发生结晶。加入水(20mL)，并用EtOAc(2×20mL)洗涤水层。将NaOH(2M，5mL)加入到该水层并用EtOAc(2×20mL)提取所述产品。所述有机层经MgSO4干燥、过滤并浓缩。
一般操作5(GP5)将丙酮(1mL)中的3-氯-4-羟基苯醛(1.2mmol，188mg)加入到丙酮(1mL)中的烷基卤(1.0mmol)、碳酸钾(粉末，1.2mmol，166mg)中。将所述反应在40℃加热72h，然后在55℃下加热24h。将所述反应冷却并经45μm过滤器过滤，用丙酮洗涤。
一般操作6(GP6)在EtOH(2mL)中，将所述醛或酮和氨基胍盐酸盐(0.95或1.0当量)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。加入Et2O(2-20mL)来促使结晶但产生油状物。但是，加入少量DCM产生了结晶。过滤所述沉淀物，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗涤并在高真空下干燥。
一般操作7(GP7)在EtOH(1mL/mmol)中，将所述醛和氨基胍盐酸盐(1当量)在130℃下微波加热12分钟，然后冷却至室温。过滤该反应，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗涤所述沉淀物并在高真空下干燥。
一般操作8(GP8)在EtOH(1mL/mmol)中，将所述醛和氨基胍盐酸盐(1当量)在130℃下微波加热12分钟，然后冷却至室温。随后加入Et2O(2-4mL)来促使结晶。过滤该反应，用EtOAc(2次)、DCM(2次)、Et2O(2次)洗涤所述沉淀物并在高真空下干燥。
实施例实施例11-(4-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2001)根据GP1，应用4-氟苯甲醛(5.0mmol，621mg)产生白色粉末状的所述标题化合物(2001)(534mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.85(m，2H)，7.17(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝181.1。
实施例21-[(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2002)根据GP1，应用3-(三氟甲基)苯甲醛(5.0mmol，871mg)得到白色粉末状的所述标题化合物(2002)(643mg，48％)。1H NMR(CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.17(m，1H)，8.05(m，1H)，7.74(m，1H)，7.65(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.1。
实施例31-[1-(3-溴苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(2003)
根据GP1，应用3′-溴苯乙酮(5.0mmol，995mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2003)(977mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(ap.t，J＝1.7Hz，1H)，7.84(ddd，J＝8.0，1.7，1.0Hz，1H)，7.59(ddd，J＝7.8，2.0，1.0Hz，1H)，7.35(ap.t，J＝8.0Hz，1H)，2.36(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝255.1，257.1。
实施例41-(5-氟-2-硝基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2004)根据GP1，应用5-氟-2-硝基苯甲醛(5.0mmol，846mg)产生浅褐色粉末状的所述标题化合物(2004)(989mg)。1H NMR(CD3OD)δ8.67(d，J＝1.6Hz，1H)，8.21(dd，J＝9.4，4.9Hz，1H)，8.11(dd，J＝9.4，2.9Hz，1H)，7.41(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝226.1。
实施例51-[(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)亚甲基氨基胍盐酸盐(2005)根据GP1，应用苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-醛(5.0mmol，751mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2005)(737mg，61％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.47(d，J＝1.6Hz，1H)，7.15(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H)，6.01(s，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝207.1。
实施例61-[(蒽-9-基)亚甲基氨基]胍盐酸盐(2006)根据GP1，应用9-蒽甲醛(5.0mmol，1.03g)得到黄色粉末状的所述标题化合物(2006)(133mg，9％)。1H NMR(CD3OD)δ9.26(s，1H)，8.65(s，1H)，8.48(m，2H)，8.11(m，2H)，7.61(m，2H)，7.55(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝263.2。
实施例71-(3，5-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2007)根据GP3，应用3，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)产生白色粉末状的所述标题化合物(2007)(516mg，99％)。1H NMR(CD3OD)δ8.03(s，1H)，6.97(d，J＝2.3Hz，2H)，6.57(t，J＝2.3Hz，1H)，3.82(s，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝223.3。
实施例81-(2，4-二氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2008)根据GP2，应用2，4-二氯苯甲醛(2.0mmol，350mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2008)(461mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.52(s，1H)，8.18(d，J＝8.6Hz，1H)，7.55(d，J＝2.0Hz，1H)，7.41(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.2。
实施例91-(3-氟-4-甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2009)根据GP2，应用3-氟-4-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，308mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2009)(449mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ8.04(d，J＝1.4Hz，1H)，7.71(m，1H)，7.45(m，1H)，7.14(t，J＝8.4Hz，1H)，3.92(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝211.2。
实施例101-(3-溴-4-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2010)根据GP2，应用3-溴-4-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2010)(445mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(dd，J＝6.8，2.2Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.79(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.29(t，J＝8.6Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝259.2，261.2。
实施例111-(3，4，5-三甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2011)根据GP3，应用3，4，5-三甲氧基苯甲醛(2.0mmol，392mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2011)(565mg，97％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.14(s，2H)，3.89(s，6H)，3.80(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝253.3。
实施例121-(4-氟-3-甲基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2012)根据GP3，应用4-氟-3-甲基苯甲醛(2.0mmol，276mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2012)(433mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.75(m，1H)，7.63(m，1H)，7.10(t，J＝9.2Hz，1H)，2.31(d，J＝2.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝295.2。
实施例131-(3-氯-4-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2013)根据GP2，应用3-氯-4-氟苯甲醛(2.0mmol，317mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2013)(391mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.08(s，1H)，8.06(dd，J＝7.2，2.2Hz，1H)，7.74(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.32(ap.t，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝215.2，217.2。
实施例141-(3-溴-4-甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2014)根据GP2，应用3-溴-4-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，430mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(2014)(568mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(d，J＝2.2Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.11(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.69(d，J＝8.6Hz，1H)，3.93(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝271.2，273.2。
实施例151-(2，5-二氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2015)根据GP2，应用2，5-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2015)(377mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.31(d，J＝2.0Hz，1H)，7.92(m，1H)，7.23(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝199.2。
实施例161-(2，4-二氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2016)根据GP3，应用2，4-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2016)(418mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.30(s，1H)，8.16(m，1H)，7.07(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝199.2。
实施例171-(2，3-二氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2017)根据GP2，应用2，3-二氯苯甲醛(2.0mmol，350mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2017)(441mg，82％)。1H NMR(CD3OD)δ8.60(s，1H)，8.13(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.37(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.2、233.2、235.2。
实施例181-(4-溴-2-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2018)根据GP2，应用4-溴-2-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2018)(441mg，74％)。1H NMR(CD3OD)δ8.30(s，1H)，8.04(m，1H)，7.46(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝259.2，261.2。
实施例191-(4-苯基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2019)根据GP2，应用4-联苯基醛(2.0mmol，364mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2019)(440mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.15(s，1H)，7.88(m，2H)，7.71(m，2H)，7.66(m，2H)，7.46(m，2H)，7.38(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝239.3。
实施例201-(4-苯氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2020)根据GP4，应用4-苯氧基苯甲醛(2.0mmol，396mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡粉红色粉末状的所述标题化合物(2020)(384mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.67(m，2H)，7.36(m，2H)，7.13(m，1H)，7.01(m，2H)，6.96(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝255.3。
实施例211-(3-苯氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2021)根据GP4，应用3-苯氧基苯甲醛(2.0mmol，396mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡粉红色粉末状的所述标题化合物(2021)(301mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)；7.30-7.43(m，4H)，7.10(m，1H)，7.00(m，2H)，6.90(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝255.3。
实施例221-(3，5-二-叔丁基-2-羟基苯亚甲基氨基)胍(2022)根据GP4，应用3，5-二-叔丁基-2-羟基苯甲醛(2.0mmol，469mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡黄色/棕色粉末状的所述标题化合物(2022)(501mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.19(s，1H)，7.28(d，J＝2.5Hz，1H)，7.07(d，J＝2.5Hz，1H)，1.44(s，9H)，1.30(s，9H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝。
实施例231-(2，3，5-三氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2023)根据GP2，应用2，3，5-三氯苯甲醛(2.0mmol，419mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2023)(410mg，68％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(s，1H)，8.26(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(d，J＝2.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝265.1、267.1、279.1。
实施例241-(3，5-二溴-4-羟基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2024)根据GP2，应用3，5-二溴-4-羟基苯甲醛(2.0mmol，560mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(2024)(701mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.98(s，2H)，7.96(s，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝335.1、337.1、339.1。
实施例251-(4-异丙氧基苯亚甲基氨基)胍(2025)根据GP4，应用4-异丙氧基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得膏粉状的所述标题化合物(2025)(295mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ7.98(s，1H)，7.59(m，2H)，6.88(m，2H)，4.62(sept，J＝6.0Hz，1H)，1.31(d，J＝6.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝221.2。
实施例261-(3，4-二乙氧基苯亚甲基氨基)胍(2026)根据GP4，应用3，4-二乙氧基苯甲醛(2.0mmol，388mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2026)(355mg，71％)。1H NMR(CD3OD)δ7.95(s，1H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H)，7.11(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11(q，J＝7.0Hz，2H)，4.09(q，J＝7.0Hz，2H)，1.42(t，J＝7.0Hz，3H)，1.41(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝251.1。
实施例271-(3，5-二氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2027)根据GP2，应用3，5-二氟苯甲醛(2.0mmol，284mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色结晶状的所述标题化合物(2027)(412mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.47(m，2H)，7.03(tt，J＝9.0，2.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝199.1。
实施例281-(3.4-二氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2028)根据GP2，应用芴-2-醛(2.0mmol，388mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(2028)(559mg，97％)。1HNMR(CD3OD)δ8.16(s，1H)，8.01(br.s，1H)，7.85(m，2H)，7.77(m，1H)，7.57(m，1H)，7.38(m，1H)，7.34(dt，J＝7.4，1.2Hz，1H)，3.93(s，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝251.1。
实施例291-(3，4-二溴苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3093)根据GP2，应用3，4-二溴苯甲醛(2.0mmol，528mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3093)(655mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝318.8、320.8、322.8。
实施例301-(4-氯-3-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2030)根据GP2，应用4-氯-3-氟苯甲醛(2.0mmol，317mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色结晶状的所述标题化合物(2030)(466mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.81(m，1H)，7.56(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝215.0，217.0。
实施例311-(3-氯-4-羟基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2031)根据GP2，应用3-氯-4-羟基苯甲醛(2.0mmol，313mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(2031)(468mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.97(s，1H)，7.84(d，J＝2.1Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.4，2.1Hz，1H)，6.94(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝213.1，215.0。
实施例321-(4-氟-3-硝基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2032)根据GP2，应用2-氟-5-甲酰基苄腈(2.0mmol，298mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色结晶状的所述标题化合物(2032)(452mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ8.32(dd，J＝6.2，2.2Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.14(ddd，J＝8.8，5.2，2.2Hz，1H)，7.45(t，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝206.1。
实施例331-(3，5-二甲基-4-羟基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2033)根据GP2，应用3，5-二甲基-4-羟基苯甲醛(2.0mmol，300mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(2033)(462mg，95％)。1H NMR(CD3OD)δ7.94(s，1H)，7.39(s，2H)，2.24(s，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝207.1实施例341-(4-甲氧基-2，3-二甲基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2034)根据GP2，应用4-甲氧基-2，3-二甲基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(2034)(461mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，3.85(s，3H)，2.37(s，3H)，2.17(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝221.1。
实施例351-[4-氯-3-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2035)根据GP2，应用4-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2035)(524mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.24(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.04(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.69(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝265.0，267.0。
实施例361-(3-溴-4，5-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3099)根据GP3，应用3-溴-4，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，490mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3099)(588mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.56(d，J＝1.9Hz，1H)，7.52(d，J＝1.9Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.85(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝300.9，302.9。
实施例371-[3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]二氧七环(dioxepin)-7-基)亚甲基氨基]胍盐酸盐(2038)根据GP3，应用3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]二氧七环(dioxepin)-7-醛(1.0mmol，178mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2038)(206mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.43(d，J＝2.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.4，2.2Hz，1H)，6.99(d，J＝8.4Hz，1H)，4.23(t，J＝5.6Hz，2H)，4.21(t，J＝5.6Hz，2H)，2.19(pent，J＝5.6Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝235.1。
实施例38[(环己基苯基亚甲基氨基]胍(2039)根据GP4，应用苯甲酰基环己烷(2.0mmol，377mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上应用方法CF1纯化所述粗品，获得膏粉状的所述标题化合物(2039)(109mg，22％)。1H NMR(CD3OD)δ7.42(m，2H)，7.35(m，1H)，7.18(m，2H)，2.48(m，1H)，1.85(m，2H)，1.77(m，2H)，1.67(m，1H)，1.14-1.39(m，5H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝245.2。
实施例391-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁英-6-基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(2040)根据GP3，应用1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁英-6-基)乙基酮(2.0mmol，356mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(2040)(492mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ7.42(d，J＝2.2Hz，1H)，7.37(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，6.86(d，J＝8.6Hz，1H)，4.27(m，4H)，2.30(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝235.1。
实施例401-(4-苄氧基-3-氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2041)根据GP5，应用溴苄(1.0mmol，171mg)，并用CF2纯化所述粗品，产生白色粉末状的4-苄氧基-3-氯苯甲醛(224mg，91％)。1H NMR(CDCl3)δ9.86(s，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.32-7.48(m，5H)，7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，5.26(s，2H)。
根据GP3，应用4-苄氧基-3-氯苯甲醛(0.91mmol，224mg)和氨基胍盐酸盐(0.86mmol，95mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2041)(238mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.98(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.47(m，2H)，7.37(m，2H)，7.34(m，1H)，7.19(d，J＝8.6Hz，1H)，5.24(s，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝303.0，305.0。
实施例411-(4-烯丙氧基-3-氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2042)根据GP5，应用烯丙基溴(1.0mmol，121mg)，并用CF2纯化所述粗品，产生淡黄色结晶状的4-烯丙氧基-3-氯苯甲醛(181mg，92％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.06(ddt，J＝17.2，10.6，5.1Hz，1H)，5.49(m，1H)，5.36(m，1H)，4.71(dt，J＝5.1，1.7Hz，2H)。
根据GP3，应用4-烯丙氧基-3-氯苯甲醛(0.92mmol，181mg)和氨基胍盐酸盐(0.87mmol，96mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2042)(189mg，71％)。1H NMR(CD3OD)δ7.97(s，1H)，7.96(d，J＝2.0Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，6.08(ddt，J＝17.4，10.6，5.1Hz，1H)，5.47(ap.dq，17.4，1.6Hz，1H)，5.32(ap.dq，J＝10.6，1.6Hz，1H)，4.70(dt，J＝5.1，1.6Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝304.9，306.9。
实施例421-3-氯-4-甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2043)根据GP5，应用碘甲烷(1.0mmol，142mg)，并用CF2纯化所述粗品，产生白色固体状的3-氯-4-甲氧基苯甲醛(182mg，100％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，3.99(s，3H)。
根据GP2，应用3-氯-4-甲氧基苯甲醛(1.0mmol，182mg)和氨基胍盐酸盐(0.95mmol，104mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2043)(219mg，83％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.6Hz，1H)，3.94(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝227.1，229.0。
实施例431-[3-氯-4-(4-氰基丁氧基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2044)根据GP5，应用5-溴戊腈(1.0mmol，162mg)，并用CF3纯化所述粗品，得到无色油状的5-(2-氯-4-甲酰基苯氧基)-戊腈(151mg，63％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.17(t，J＝5.8Hz，2H)，2.52(t，J＝7.0Hz，2H)，2.07(m，2H)，1.95(m，2H)。
根据GP3，应用5-(2-氯-4-甲酰基苯氧基)-戊腈(0.63mmol，151mg)和氨基胍盐酸盐(0.60mmol，66mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(2044)(161mg，77％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.97(d，J＝2.2Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(t，J＝5.9Hz，2H)，2.59(t，J＝7.0Hz，2H)，2.01(m，2H)，1.90(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝294.0，296.0。
实施例441-[3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2045)根据GP5，应用3-(溴丙氧基)苯(1.0mmol，215mg)，并用CF4纯化所述粗品，得到白色粉末状的3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯甲醛(140mg，48％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.75(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.06(d，J＝8.6Hz，1H)，6.93(m，3H)，4.34(t，J＝6.0Hz，2H)，4.22(t，J＝6.0Hz，2H)，2.30(pent，J＝6.0Hz，2H)。
根据GP3，应用3-氯-4-(3-苯氧基丙氧基)苯甲醛(0.48mmol，140mg)和氨基胍盐酸盐(0.46mmol，50mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2045)(159mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.25(m，2H)，7.15(d，J＝8.6Hz，1H)，6.92(m，3H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，4.21(t，J＝6.0Hz，2H)，2.30(pent，J＝6.0Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝347.0，349.0。
实施例451-[3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2046)根据GP5，应用2-溴乙苯(1.0mmol，185mg)，并用CF4纯化所述粗品，得到无色油状的3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯甲醛(146mg，56％)。1H NMR(CDCl3)δ9.83(s，1H)，7.89(d，J＝2.0Hz，1H)，7.72(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.33(m，4H)，7.27(m，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，1H)，4.30(t，J＝6.9Hz，2H)，3.20(t，J＝6.9Hz，2H)。
在EtOH(2mL)中，将3-氯-4-(2-苯乙氧基)苯甲醛(0.56mmol，146mg)和氨基胍盐酸盐(0.55mmol，58mg)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。加入Et2O来促使结晶以及将所述沉淀物(其为起始物氨基胍盐酸盐)滤过并弃去。在所述滤液中出现新沉淀物，因此过滤该滤液并用1∶1DCM∶EtOAc(2次)、Et2O(2次)洗涤并在高真空下干燥，获得白色粉末状的所述标题化合物(2046)(70mg，35％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.34(m，2H)，7.29(m，2H)，7.22(m，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.30(t，J＝6.7Hz，2H)，3.13(t，J＝6.7Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝317.0，319.0。
实施例461-(3-氯-4-己氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2047)根据GP5，应用1-碘己烷(1.0mmol，212mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-己氧基苯甲醛(208mg，86％)。1H NMR(CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.12(t，J＝6.5Hz，2H)，1.87(m，2H)，1.51(m，2H)，1.37(m，4H)，0.91(m，3H)。
根据GP3，应用3-氯-4-己氧基苯甲醛(0.86mmol，208mg)和氨基胍盐酸盐(0.82mmol，90mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2047)(141mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.83(m，2H)，1.53(m，2H)，1.39(m，4H)，0.93(m，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝297.1，299。
实施例471-(3-氯-4-丙氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2048)根据GP5，应用1-碘丙烷(1.0mmol，170mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-丙氧基苯甲醛(211mg，100％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.09(t，J＝6.5Hz，2H)，1.91(m，2H)，1.09(t，J＝7.4Hz，3H)。
在EtOH(2mL)中，将3-氯-4-丙氧基苯甲醛(1.0mmol，211mg)和氨基胍盐酸盐(0.95mmol，104mg)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。加入Et2O来促使结晶以及将所述沉淀物(其为起始物氨基胍盐酸盐)滤过并弃去。在所述滤液中出现新沉淀物，因此过滤该滤液以及用EtOAc(2次)、Et2O(2次)洗涤并在高真空下干燥，获得白色粉末状的所述标题化合物(2048)(70mg，24％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.07(t，J＝6.3Hz，2H)，1.85(m，2H)，1.09(t，J＝7.4Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝297.1，299.1。
实施例481-[3-氯-4-(9-甲基丙氧基)苯亚甲基氨基]胍醋酸盐(2049)根据GF5，应用1-溴-2-甲基丙烷(1.0mmol，137mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到无色油状的3-氯-4-(2-甲基丙氧基)苯甲醛(5mg，2％)。1HNMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.00(d，J＝8.4Hz，1H)，3.88(d，J＝6.4Hz，2H)，2.20(m，1H)，1.09(d，J＝6.8Hz，6H)。
在EtOH(1mL)中，将3-氯-4-(2-甲基丙氧基)苯甲醛(0.02mmol，5mg)和氨基胍盐酸盐(0.04mmol，4mg)在70℃下摇动18小时，然后在真空中浓缩。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并经制备的LC/MS纯化。将含有所需要的化合物的所述部分在真空中浓缩，获得白色粉末状的所述标题化合物(2049)(6mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.94(d，J＝2.2Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.09(d，J＝8.6Hz，1H)，3.88(d，J＝6.5Hz，2H)，2.13(m，1H)，1.94(s，3H)，1.08(d，J＝6.7Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝269.1，271.1。
实施例491-[3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2050)根据GP5，应用1-溴-4-甲基戊烷(1.0mmol，165mg)，并用CF4纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯甲醛(162mg，67％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.10(d，J＝6.6Hz，2H)，1.87(m，2H)，1.63(m，1H)，1.38(m，2H)，0.93(d，J＝6.7Hz，6H)。
根据GP3(但不用DCM洗涤所述沉淀物)，应用3-氯-4-(4-甲基戊氧基)苯甲醛(0.67mmol，162mg)和氨基胍盐酸盐(0.64mmol，70mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2050)(132mg，58％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.10(d，J＝6.4Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.64(m，1H)，1.42(m，2H)，0.95(d，J＝6.7Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝297.1，299.1。
实施例501-[3-氯-4-(4-环己基甲氧基)苯亚甲基氨基)胍醋酸盐(2051)根据GP5，应用溴甲基环己烷(1.0mmol，177mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-(4-环己基甲氧基)苯甲醛(6mg，2％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，3.91(d，J＝5.9Hz，2H)，1.84-1.95(m，3H)，1.68-1.82(m，3H)，1.21-1.39(m，3H)，1.05-1.20(m，2H)。
在EtOH(1mL)中，将3-氯-4-(4-环己基甲氧基)苯甲醛(0.02mmol，6mg)和氨基胍盐酸盐(0.04mmol，4mg)在70℃下摇动18小时，然后在真空中浓缩。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并经制备的LC/MS纯化。将含有所需要的化合物的所述部分在真空中浓缩，获得无色油状的所述标题化合物(2051)(3mg，40％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.93(d，J＝2.2Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.08(d，J＝8.6Hz，1H)，3.91(d，J＝5.9Hz，2H)，1.94(s，3H)，1.55-1.95(m，6H)，1.23-1.41(m，3H)，1.09-1.22(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝309.1，311.1。
实施例511-[3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯亚甲基氨基]胍醋酸盐(2052)根据GP5，应用1-溴-2-乙基丁烷(1.0mmol，165mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到无色油状的3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯甲醛(13mg，5％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，4.01(d，J＝5.7Hz，2H)，1.77(m，1H)，1.47-1.59(m，4H)，0.96(t，J＝7.4Hz，6H)。
在EtOH(1mL)中，将3-氯-4-(2-乙基丁氧基)苯甲醛(0.05mmol，13mg)和氨基胍盐酸盐(0.10mmol，10mg)在70℃下摇动18小时，然后在真空中浓缩。用CH3CH∶H2O(3∶7，300μL)溶解所述粗品并经制备的LC/MS纯化。将含有所需要的化合物的所述部分在真空中浓缩，获得白色粉末状的所述标题化合物(2052)(5mg，27％)。1H NMR(CD3OD)δ8.02(s，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，7.11(d，J＝8.6Hz，1H)，4.02(d，J＝5.7Hz，2H)，1.94(s，3H)，1.72(m，1H)，1.54(m，4H)，0.97(t，J＝7.5Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝297.1，299.1。
实施例521-(3-氯-4-辛氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2053)根据GP5，应用1-碘辛烷(1.0mmol，240mg)，并用CF5纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-辛氧基苯甲醛(229mg，85％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.86(m，2H)，1.51(m，2H)，1.25-1.41(m，8H)，0.89(m，3H)。
根据GP3(但不用DCM洗涤所述沉淀物)，应用3-氯-4-辛氧基苯甲醛(0.85mmol，229mg)和氨基胍盐酸盐(0.81mmol，89mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2053)(196mg，63％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.95(d，J＝2.2Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，4.11(t，J＝6.5Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.53(m，2H)，1.26-1.45(m，8H)，0.91(m，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝325.1，327.1。
实施例531-[3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯亚甲基氨基]胍醋酸盐(2054)
根据GP5，应用1-溴-2-乙氧基乙烷(1.0mmol，153mg)，并用CF4纯化所述粗品，得到白色固体状的3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯甲醛(28mg，12％)。1H NMR(CDCl3)δ9.84(s，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，4.27(m，2H)，3.87(m，2H)，3.64(q，J＝7.0Hz，2H)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)。
在EtOH(1mL)中，将3-氯-4-(2-乙氧基-乙氧基)苯甲醛(0.12mmol，28mg)和氨基胍盐酸盐(0.12mmol，12mg)在70℃下摇动18小时，然后在真空中浓缩。用CH3CH∶H2O(3∶7，600μL)溶解所述粗品并经制备的LC/MS纯化。将含有所需要的化合物的所述部分在真空中浓缩，获得淡黄色油末状的所述标题化合物(2054)(22mg，52％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.94(d，J＝2.2Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.14(d，J＝8.6Hz，1H)，4.24(m，2H)，3.85(m，2H)，3.64(q，J＝7.0Hz，2H)，1.22(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝285.0，287.0。
实施例541-(2-苯基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2055)根据GP6，应用联苯-2-醛(2.0mmol，364mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，209mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2055)(440mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8.22(m，1H)，8.05(s，1H)，7.41-7.54(m，5H)，7.30-7.39(m，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝239.1。
实施例551-(3，4-二氯苯基)-(亚丙基氨基胍)盐酸盐(2056)根据GP6，应用1-(3，4-二氯苯基)丙-1-烷(2.0mmol，406mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，209mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2056)(534mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(d，J＝2.2Hz，1H)，7.80(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.58(d，J＝8.6Hz，1H)，2.82(q，J＝7.7Hz，2H)，1.19(t，J＝7.7Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝259.0、261.0、263.0。
实施例561-[4-(2-氟苯基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2057)在EtOH(2mL)中，将2′-氟-联苯基-4-醛(0.144mmol，36mg)和氨基胍盐酸盐(0.13mmol，14mg)在120℃下微波加热10分钟，然后冷却至室温。加入水(20mL)和NaOH(2M，5mL)并用EtOAc(2×20mL)提取所述产物。用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤所述有机层，经MgSO4干燥并过滤。加入含有HCl的乙醚(2M，0.5mL)并浓缩所述溶液。从MeOH/Et2O中重结晶得到膏粉状的所述标题化合物(2057)(12mg，25％)；1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.90(m，2H)，7.64(m，2H)，7.52(m，1H)，7.40(m，1H)，7.28(m，1H)，7.21(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝257.1。
实施例571-[3-(2-三氟甲基苯基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2058)在EtOH(2mL)中，将2′-三氟甲基-联苯基-3-醛(0.132mmol，33mg)和氨基胍盐酸盐(0.12mmol，13mg)在120℃下微波加热10分钟，然后冷却至室温。加入水(20mL)和NaOH(2M，5mL)并用EtOAc(2×20mL)提取所述产物。用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤所述有机层，经MgSO4干燥并过滤。加入含有HCl的乙醚(2M，0.5mL)并浓缩所述溶液。从MeOH/Et2O中重结晶得到白色粉末状的所述标题化合物(2058)(9mg，19％)；1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.86(m，1H)，7.79(m，2H)，7.67(m，1H)，7.58(m，1H)，7.51(m，1H)，7.41(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝307.1。
实施例581-(5-氯-2，3-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(2059)根据GP3，应用5-氯-2，3-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，401mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2059)(449mg，80％)。1H NMR(CD3OD)δ8，38(d，J＝0.4Hz，1H)，7.69(dd，J＝2.5，0.4Hz，1H)，7.11(d，J＝2.5Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝257.0，259.0。
实施例591-[2-氟-4-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2060)根据GP3，应用2-氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2060)(478mg，88％)。1H NMR(CD3OD)δ8.38(s，1H)，8.33(m，1H)，7.57(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例601-[2，4-二(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2061)根据GP3，应用2，4-二(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，484mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2061)(566mg，89％)。1H NMR(CD3OD)δ8.61(m，1H)，8.52(m，1H)，8.05(m，1H)，8.02(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝299.0。
实施例611-[2，3-二氟-4-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2062)根据GP3，应用2，4-二氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，420mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2062)(520mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.36(s，1H)，8.09(m，1H)，7.55(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝267.0。
实施例621-[3-氟-4-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2063)根据GP3，应用3-氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2063)(469mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.15(s，1H)，7.92(m，1H)，7.71-7.79(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例631-[3-硝基-4-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2064)根据GP2，应用3-硝基-4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，438mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(2064)(493mg，83％)。1H NMR(CD3OD)δ8.66(s，1H)，8.50(m，1H)，8.42(m，1H)，8.07(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝276.0。
实施例641-[2-氟-3-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2065)根据GP2，应用2-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2065)(500mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.41(m，1H)，8.39(s，1H)，7.80(m，1H)，7.44(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例651-[2-氟-5-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2066)根据GP3，应用2-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2066)(410mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(dd，J＝6.5，2.2Hz，1H)，8.38(s，1H)，7.81(m，1H)，7.42(ap.t，J＝9.5Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例661-[3-氟-5-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2067)根据GP3，应用3-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2067)(458mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，7.98(br.s，1H)，7.95(m，1H)，7.55(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例671-[4-氟-3-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2068)根据GP3，应用4-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，384mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2068)(459mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.21(dd，J＝6.7，2.2Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.11(ddd，J＝8.6，4.7，2.2Hz，1H)，7.43(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝249.0。
实施例681-[2-氯-5-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2069)根据GP3，应用2-氯-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2069)(486mg，85％)。1H NMR(CD3OD)δ8.60(s，1H)，8.55(m，1H)，7.73(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.69(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝265.0，267.0。
实施例691-[2-氯-3-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2070)根据GP3，应用2-氯-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，417mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2070)(518mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.67(s，1H)，8.44(dd，J＝7.9，1.6Hz，1H)，7.88(dd，J＝7.9，1.0Hz，1H)，7.57(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝265.0，267.0。
实施例701-[3-氯-2-氟-5-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2071)根据GP3，应用3-氯-2-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，453mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2071)(527mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(m，1H)，8.37(s，1H)，7.95(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝283.0，285.0。
实施例711-[(4-氟-1-萘-1-基)亚甲基氨基]胍盐酸盐(2072)根据GP3，应用4-氟-1-萘醛(2.0mmol，348mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2072)(439mg，86％)。1H NMR(CD3OD)δ8.84(s，1H)，8.54(m，1H)，8.18(m，1H)，8.14(dd，J＝8.2，5.7Hz，1H)，7.74(m，1H)，7.67(m，1H)，7.30(dd，J＝10.2，8.2Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.0。
实施例721-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2073)根据GP3，应用4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，408mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2073)(313mg，55％)。1H NMR(CD3OD)δ8.09(s，1H)，8.08(d，J＝2.2Hz，1H)，8.00(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，3.97(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝261.0.
实施例731-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2074)将2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，408mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)在70℃下摇动18小时，然后冷却至室温。用最小量的MeOH溶解所述粗品，加入Et2O并经过两天后所述标题化合物以白色晶体状(2074)结晶(477mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(s，1H)，8.37(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(ddd，J＝8.8，2.4，0.8Hz，1H)，7.25(d，J＝8.8Hz，1H)，3.98(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝261.0。
实施例741-[萘-2-基-亚甲基氨基]胍盐酸盐(2075)根据GP2，应用2-萘醛(2.0mmol，312mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2075)(428mg，90％)。1H NMR(CD3OD)δ8.27(s，1H)，8.12(br.s；1H)，8.08(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，7.85-7.95(m，3H)，7.55(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝213.1。
实施例751-[5-溴-2-乙氧基苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2076)根据GP6，应用5-溴-2-乙氧基苯甲醛(2.0mmol，458mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2076)(363mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，8.21(d，J＝2.5Hz，1H)，7.51(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz，1H)，4.13(q，J＝6.9Hz，2H)，1.44(t，J＝6.9Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝285.0，287.0。
实施例761-[2，4-二甲基苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2077)根据GP3，应用2，4-二甲基苯甲醛(2.0mmol，368mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(2077)(342mg，，79％)。1H NMR(CD3OD)δ8.40(s，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.07(m，2H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝191.1。
实施例771-[4-氯-3-硝基苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(2078)根据GP2，应用4-氯-3-硝基苯甲醛(2.0mmol，371mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(2078)(487mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.44(d，J＝2.0Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.02(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝242.0，244.0。
实施例781-(4-苄氧基-2-羟基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3001)根据GP7，应用4-苄氧基-2-羟基苯甲醛(2.0mmol，456mg)和氨基胍盐酸盐(1.9mmol，210mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3001)(358mg，64％)。1H NMR(CD3OD)δ8.39(s，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，7.48-7.34(m，5H)，6.63(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.57(d，J＝2.4Hz，1H)，5.14(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝285.2。
实施例791-[(1H-吲哚-5-基)亚甲基氨基]胍盐酸盐(3002)根据GP8，应用吲哚-5-醛(2.0mmol，290mg)获得红色粉末状的所述标题化合物(3002)(266mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.23(s，1H)，7.95(d，J＝1.4Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.6，1.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.6Hz，1H)，7.34(d，J＝3.1Hz，2H)，6.57(dd，J＝3.1，0.8Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝202.2.
实施例801-(4-丁氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3003)根据GP7，应用4-丁氧基苯甲醛(2.0mmol，356mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3003)(355mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.78(m，2H)，7.01(m，2H)，4.04(t，J＝6.4Hz，2H)，1.80(m，2H)，1.55(m，2H)，1.03(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝235.2。
实施例811-(4-氰基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3004)根据GP8，应用4-氰基苯甲醛(2.0mmol，262mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3004)(343mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ8.25(s，1H)，8.05(m，2H)，7.86(m，2H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝188.1。
实施例821-(2，5-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3005)根据GP7，应用2，5-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(3005)(355mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.53(s，1H)，7.64(dd，J＝2.3，0.6Hz，1H)，7.06(m，2H)，3.90(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝223.2。
实施例831-(2-苄氧基-3-甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3006)根据GP7，应用2-苄氧基-3-甲氧基苯甲醛(2.0mmol，484mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3006)(460mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.35(s，1H)，7.63(dd，J＝6.8，2.3Hz，1H)，7.47-7.35(m，5H)，7.19(m，2H)，5.13(s，2H)，3.98(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝299.3。
实施例841-[1-(2-甲氧基-萘-1-基)亚甲基氨基]胍盐酸盐(3007)根据GP7，应用2-甲氧基-1-萘醛(2.0mmol，372mg)获得淡绿色粉末状的所述标题化合物(3007)(275mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.94(d，J＝8.6Hz，1H)，8.88(s，1H)，7.99(d，J＝8.9Hz，1H)，7.86(d，J＝7.9Hz，1H)，7.62(m，1H)，7.45(m，2H)，4.03(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝243.2。
实施例851-(4-羟基-3-甲氧基-5-硝基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3008)根据GP7，应用4-羟基-3-甲氧基-5-硝基苯甲醛(2.0mmol，394mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(3008)(509mg，88％)。1H NMR(DMSO)δ7.69(s，1H)，7.43(s，1H)，7.36(s，1H)，3.50(s，3H)，2.97(m，3H，Nh)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝254.2。
实施例861-(3，4-二羟基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3009)根据GP8，应用3，4-二羟基苯甲醛(2.0mmol，276mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3009)(375mg，81％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.30(d，J＝1.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.2，1.9，1H)，6.85(d，J＝8.2，1H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝195.1。
实施例871-(3-溴苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3010)根据GP8，应用3-溴苯甲醛(2.0mmol，370mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3010)(363mg，66％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，8.12(ap.t，J＝1.6Hz，1H)，7.78(ap.dt，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.64(ddd，J＝8.0，2.0，1.0Hz，1H)，7.41(ap.t，J＝8.1Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝241.1，243.1。
实施例881-(3，5-二溴苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3011)根据GP7，应用3，5-二溴苯甲醛(2.0mmol，527mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3011)(488mg，68％)。1H NMR(CD3OD)δ8.11(s，1H)，8.08(d，J＝1.7Hz，2H)，7.86(ap.t，J＝1.7Hz，1H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝271.2，273.2。
实施例891-[1-(3，4-二氯苯基)亚乙基氨基)胍盐酸盐(3012)根据GP2，应用3，4-二氯苯乙酮(2.0mmol，378mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3012)(368mg，66％)。1H NMR(CD3OD)δ8.16(ap.t，J＝1.5Hz，1H)，7.85(dt，J＝8.6，2.1Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，1.5Hz，1H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝245.1、247.1、249.1。
实施例901-(4-n-己氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3013)根据GP7，应用4-n-己氧基苯甲醛(2.0mmol，412mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3013)(386mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.78(dd，J＝6.9，1.9Hz，2H)，7.02(dd，J＝6.8，1.9Hz，2H)，4.08(t，J＝6.4Hz，2H)，1.84(m，2H)，1.54(m，2H)，1.43(m，4H)，0.99(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝263.3。
实施例911-(3，4-二苄氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3014)根据GP7，应用3，4-二苄氧基苯甲醛(2.0mmol，636mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3014)(583mg，72％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.67(d，J＝1.9Hz，1H)，7.52-7.45(m，4H)，7.41-7.31(m，6H)，7.27(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，5.20(s，2H)，5.19(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝375.3。
实施例921-[(6-溴苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)亚甲基氨基)胍盐酸盐(3015)根据GP8，应用6-溴胡椒醛(2.0mmol，458mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3015)(539mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ8.52(s，1H)，7.76(s，1H)，7.18(s，1H)，6.13(s，2H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝285.2，287.2。
实施例931-[1-4-溴苯基)亚乙基氨基)胍盐酸盐(3016)根据GP3，应用4-溴苯乙酮(2.0mmol，398mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3016)(455mg，79％)。1H NMR(CD3OD)δ7.88(m，2H)，7.63(m，2H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝255.1，257.1。
实施例941-[1-(3-甲基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3017)根据GP2，应用3-甲基苯乙酮(2.0mmol，268mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3017)(316mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.78(br.s，1H)，7.72(m，1H)，7.36(ap.t，J＝7.6Hz，1H)，7.31(m，1H)，2.45(s，3H)，2.42(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝191.2。
实施例951-(3-甲基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3018)根据GP7，应用3-甲基苯甲醛(2.0mmol，240mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3018)(259mg，62％)。1H NMR(CD3OD)δ8.16(s，1H)，7.70(br.s，1H)，7.63(d，J＝7.6Hz，1H)，7.37(ap.t，J＝7.5Hz，1H)，7.32(m，1H)，2.43(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝177.2。
实施例961-(3，4-二甲基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3019)根据GP7，应用3，4-二甲基苯甲醛(2.0mmol，268mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3019)(355mg，78％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.65(br.s，1H)，7.55(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H)，7.25(d，J＝7.6Hz，1H)，2.37(s，3H)，2.36(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝191.2。
实施例971-[1-(4-乙基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3020)根据GP2，应用4-乙基苯乙酮(2.0mmol，296mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3020)(209mg，44％)。1H NMR(CD3OD)δ7.86(m，2H)，7.32(m，2H)，2.74(q，J＝7.6Hz，2H)，2.41(s，3H)，1.30(t，J＝7.6Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝205.3。
实施例981-[1-(3，4-二甲基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3021)根据GP2，应用3，4-二甲基苯乙酮(2.0mmol，296mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3021)(415mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ7.74(br.s，1H)，7.64(m，1H)，7.23(d，J＝8.0，1H)，2.39(s，3H)，2.37(s，3H)，2.35(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝205.3。
实施例991-(4-正-戊基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3022)根据GP8，应用4-正-戊基苯甲醛(2.0mmol，362mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3022)(247mg，47％)。1H NMR(CD3OD)δ8.17(s，1H)，7.76(m，2H)，7.32(d，J＝8.2Hz，2H)，2.70(t，J＝7.5Hz，2H)，1.69(m，2H)，1.40(m，4H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝233.3。
实施例1001-[1-(4-正-庚基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3023)根据GP3，应用4-正-己基苯乙酮(2.0mmol，408mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3023)(162mg，29％)。1H NMR(CD3OD)δ7.86(m，2H)，7.30(d，J＝8.6Hz，2H)，2.71(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42(s，3H)，1.69(m，2H)，1.44-1.35(m，6H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝261.3。
实施例1011-[1-(5，6，7，8-四氢萘-2-基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3024)根据GP2，应用6-乙酰基-1，2，3，4-四氢萘(2.0mmol，348mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3024)(374mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.64(m，1H)，7.62(br.s，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，2.89-2.82(m，4H)，2.39(s，3H)，1.89-1.82(m，4H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝231.3。
实施例1021-(4-乙基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3025)根据GP7，应用4-乙基苯甲醛(2.0mmol，268mg)获得淡黄色油状的所述标题化合物(3025)(272mg，60％)。1H NMR(CD3OD)δ8.13(s，1H)，7.74(d，J＝8.2Hz，2H)，7.31(d，J＝8.3Hz，2H)，2.71(q，J＝7.6Hz，2H)，1.27(t，J＝7.6Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝191.2。
实施例1031-[1(2-溴苯基)亚乙基氨基)胍盐酸盐(3026)根据GP2，应用2-溴苯乙酮(2.0mmol，398mg)获得淡粉红色粉末状的所述标题化合物(3026)(355mg，61％)，两个异构体混合物的比例为7∶3。主要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.71(dd，J＝8.0，0.8Hz，1H)，7.49(m，2H)，7.39(m，1H)，2.43(s，3H)；次要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.84(dd，J＝8.0，0.9Hz，1H)，7.62(ap.dt，J＝7.4，0.8Hz，1H)，7.51(m，1H)，7.37(m，1H)，2.39(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝255.2，257.2(两个异构体共同洗脱出)。
实施例1041-{1-[3-(三氟甲基)苯基]亚乙基氨基}胍盐酸盐(3027)根据GP3，应用3-(三氟甲基)苯乙酮(2.0mmol，376mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3027)(356mg，64％)。1H NMR(CD3OD)δ8.24(br.s，1H)，8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(dd，J＝7.6，0.7Hz，1H)，7.69(dt，J＝7.8，0.6Hz，1H)，2.48(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝245.2。
实施例1051-{1-[3，5-二-(三氟甲基)苯基]亚乙基氨基}胍盐酸盐(3028)根据GP3，应用3，5-二-(三氟甲基)苯乙酮(2.0mmol，512mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3028)(606mg，87％)。1H NMR(CD3OD)δ8.54(s，2H)，8.08(s，1H)，2.53(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝313.2。
实施例1061-[1-(2，5-二甲氧基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3029)根据GP2，应用2′，5′-二甲氧基苯乙酮(2.0mmol，360mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3029)(402mg，75％)，两个异构体混合物的比例大约为4∶1。主要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.07-7.03(m，3H)，3.88(s，3H)，3.84(s，3H)，2.37(s，3H)；次要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.16(br.s，1H)，7.13(d，J＝3.1Hz，1H)，6.81(d，J＝2.9Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.85(s，3H)，2.33(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝237.3(两个异构体共同洗脱出)。
实施例1071-[1-(2-羟基-4-甲氧基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3030)根据GP3，应用2′-羟基-4′-甲氧基苯乙酮(2.0mmol，332mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3030)(473mg，92％)，两个异构体混合物的比例为9∶1。主要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.49(d，J＝8.8Hz，1H)，6.49(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.45(d，J＝2.5Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.38(s，3H)；次要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.78(d，J＝8.9Hz，1H)，6.49(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.41(d，J＝2.5Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.54(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝223.3(两个异构体共同洗脱出)。
实施例1081-[1-(4-苄氧基-2-羟基-3-甲基苯基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3031)根据GP3，应用4′-苄氧基-2′-羟基-3′-甲基苯乙酮(2.0mmol，512mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(3031)(586mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ7.50(m，3H)，7.45(m，2H)，7.38(m，1H)，6.71(d，J＝9.0Hz，1H)，5.21(s，2H)，2.49(s，3H)，2.22(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝313.3。
实施例1091-[1-(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基)亚乙基氨基]胍盐酸盐(3032)根据GP3，应用3′，4′-(亚甲二氧基)苯乙酮(2.0mmol，328mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3032)(478mg，93％)。1H NMR(CD3OD)δ7.60(d，J＝1.7Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.2，1.7Hz，1H)，6.91(d，J＝8.2Hz，1H)，6.06(s，2H)，2.38(s，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝221.2。
实施例1101-(3，4-二氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(1045)根据GP7，应用3，4-二氯苯甲醛(4.0mmol，700mg)获得白色粉末状的所述标题化合物(1045)(695mg，65％)。1H NMR(CD3OD)δ8.09(s，1H)，8.05(d，J＝1.9Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.4，1.9Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.1、233.1、235.1。
实施例1111-[1-(4-二甲基氨基苯基)亚戊基氨基]胍(3035)根据GP8，应用1-(4-二甲基氨基苯基)-戊-1-酮(0.5mmol，102mg)得到粗混合物，该粗混合物经制备HPLC纯化。浓缩所需要的组合部分，用20％Na2CO3溶液稀释并用EtOAc提取。所述有机层经Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩，获得白色粉末状的所述标题化合物(3035)(32mg，25％)，两个异构体混合物的比例大约为3∶1。主要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.31(m，2H)，6.84(m，2H)，3.02(s，6H)，2.63(t，J＝7.2Hz，2H)，1.52-1.34(m，4H)，0.94(t，J＝7.2Hz，3H)；次要的异构体1H NMR(CD3OD)δ7.69(m，2H)，6.79(m，2H)，3.30(m，2H)，3.01(s，6H)，1.50-1.35(m，4H)，0.97(t，J＝7.2Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝262.3(两个异构体共同洗脱出)。
实施例1121-{4-[乙基-(2-羟乙基)氨基]-2甲基苯亚甲基氨基}胍盐酸盐(3036)根据GP7，应用4-[乙基-(2-羟乙基)氨基]-2甲基苯甲醛(2.0mmol，415mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上应用方法CF6纯化所述粗品，获得黄色粉末状的所述标题化合物(3036)(256mg，44％)。1H NMR(CD3OD)δ8.32(s，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，6.68(dd，J＝8.8，2.7Hz，1H)，6.60(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(t，J＝6.5Hz，2H)，3.55(t，J＝6.2Hz，2H)，3.54(q，J＝7.0Hz，2H)，2.48(s，3H)，1.23(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(碳酸氢铵)[M+H]+＝264.3。
实施例1131-(4-二乙基氨基-2-羟基苯亚甲基氨基}胍盐酸盐(3037)根据GP7，应用4-二乙基氨基-2-羟基苯甲醛(2.0mmol，386mg)获得粉红色粉末状的所述标题化合物(3037)(538mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ8.25(s，1H)，7.46(d，J＝8.9Hz，1H)，6.37(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，6.21(d，J＝2.5Hz，1H)，3.47(q，J＝7.0Hz，4H)，1.24(t，J＝7.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝250.2。
实施例1141-(4-二乙基氨基苯亚甲基氨基}胍盐酸盐(3038)根据GP8，应用4-二乙基氨基苯甲醛(2.0mmol，354mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3038)(285mg，53％)。1H NMR(CD3OD)δ8.01(s，1H)，7.65(d，J＝8.4Hz，2H)，6.78(d，J＝8.1Hz，2H)，3.50(q，J＝7.0Hz，4H)，1.24(t，J＝7.0Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝234.2。
实施例1151-[1-(4-哌啶-1-基-苯基)]亚乙基氨基}胍盐酸盐(3039)根据GP3，应用4′-哌啶子基苯乙酮(2.0mmol，406mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3039)(493mg，84％)。1H NMR(CD3OD)δ7.83(d，J＝8.8Hz，2H)，7.01(d，J＝8.9Hz，2H)，3.35(m，4H)，2.37(s，3H)，1.76-1.70(m，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝260.2.
实施例1161-{4-[甲基-(2-氰基乙基)氨基]苯亚甲基氨基}胍盐酸盐(3040)根据GP7，应用3-[(4-甲酰苯基)-甲氨基]丙腈(2.0mmol，376mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3040)(509mg，91％)。1H NMR(CD3OD)δ8.07(s，1H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，6.88(d，J＝8.4Hz，2H)，3.84(t，J＝6.4Hz，2H)，3.15(s，3H)，2.79(t，J＝6.5Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝245.2。
实施例1171-4-[甲基-(2-羟乙基氨基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(3041)根据GP7，应用4-[甲基-(2-羟乙基)氨基]苯甲醛(2.0mmol，358mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(3041)(320mg，59％)。1H NMR(CD3OD)δ8.00(s，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，2H)，6.82(d，J＝8.0Hz，2H)，3.78(t，J＝6.4Hz，2H)，3.59(t，J＝6.4Hz，2H)，3.11(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝236.2。
实施例1181-(4-二-n-丁基氨基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3042)根据GP7，应用4-二-n-丁基氨基苯甲醛(2.0mmol，466mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(3042)(458mg，70％)。1H NMR(CD3OD)δ7.99(s，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，6.72(d，J＝8.8Hz，2H)，3.40(t，J＝7.6Hz，4H)，1.65-1.59(m，4H)，1.46-1.39(m，4H)，1.02(t，J＝7.2Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝290.2。
实施例1191-(2-甲氧基-4-N，N-二乙基氨基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(3043)根据GP8，应用2-甲氧基-4-N，N-二乙基氨基苯甲醛(1.0mmol，207mg)获得黄色粉末状的所述标题化合物(3043)(152mg，57％)，两个异构体混合物的比例大约为9∶1。主要异构体1H NMR(CD3OD)δ8.38(s，1H)，7.86(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(m，1H)，6.26(s，1H)，3.92(s，3H)，3.51(q，J＝6.8Hz，4H)，1.19(t，J＝7.0Hz，6H)；次要异构体1H NMR(CD3OD)δ7.63(s，1H)，7.34(d，J＝8.6Hz，1H)，6.44(m，1H)，6.28(s，1H)，3.96(s，3H)，3.51(q，J＝7.2Hz，4H)，0.92(t，J＝7.3Hz，6H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝264.2(两个异构体共同洗脱出)。
实施例1201-(3-氰基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4001)根据GP3，应用3-氰基苯甲醛(2.0mmol，260mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4001)(250mg，56％)。1H NMR(CD3OD)δ8.26(t，J＝1.5Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.07(m，1H)，7.77(m，1H)，7.62(t，J＝7.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝188.1。
实施例1211-[(4-(三氟甲基)苯亚甲基氨基]胍盐酸盐(4002)根据GP3，应用4-(三氟甲基)苯甲醛(2.0mmol，250mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4002)(400mg，75％)。1H NMR(CD3OD)δ8.23(s，1H)，8.01(br.d，J＝8.2Hz，2H)，7.72(br.d，J＝8.3Hz，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝231.1。
实施例1221-(2，4-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4003)根据GP3，应用2，4-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4003)(300mg，58％)。1H NMR(CD3OD)δ8.39(s，1H)，7.95(m，1H)，6.59(m，2H)，3.87(s，3H)，3.85(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝223.1。
实施例1231-(2，3-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4004)根据GP3，应用2，3-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，332mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4004)(370mg，72％)。1H NMR(CD3OD)δ8.45(s，1H)，7.62(m，1H)，7.11(m，2H)，3.88(s，3H)，3.87(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝223.1。
实施例1241-(4-乙氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4005)根据GP3，应用4-乙氧基苯甲醛(2.0mmol，300mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4005)(290mg，60％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.71(m，2H)，6.96(m，2H)，4.08(q，J＝7.0Hz，2H)，1.40(t，J＝7.0Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝207.2。
实施例1251-(4-正-丙氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4006)根据GP3，应用4-正-丙氧基苯甲醛(2.0mmol，328mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4006)(250mg，49％)。1H NMR(CD3OD)δ8.05(s，1H)，7.72(m，2H)，6.96(m，2H)，3.99(t，J＝6.5Hz，2H)，1.80(dt，J＝7.4，6.7Hz，2H)，1.05(t，J＝7.4Hz，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝221.1。
实施例1261-(2，3，6-三氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4007)根据GP3，应用2，3，6-三氯苯甲醛(2.0mmol，209mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4007)(470mg，78％)。1H NMR(CD3OD)δ8.20(s，1H)，7.81(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(d，J＝7.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝265.0。
实施例1271-(4-氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4008)根据GP3，应用4-氯苯甲醛(2.0mmol，281mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4008)(380mg，82％)。1H NMR(CD3OD)δ8.12(s，1H)，7.79(m，2H)，7.44(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝197.1。
实施例1281-(5-溴-2-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4009)根据GP3，应用5-溴-2-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4009)(410mg，69％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(dd，J＝6.5，2.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.60(ddd，J＝8.8，4.7，2.6，1H)，7.15(dd，J＝10.2Hz，J＝8.8Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝259.0。
实施例1291-(2-溴-5-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4010)根据GP3，应用2-溴-5-氟苯甲醛(2.0mmol，406mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4010)(450mg，76％)。1H NMR(CD3OD)δ8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.98(dd，J＝9.8，3.1Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.9，5.2Hz，1H)，7.15(ddd，J＝8.9，7.93.1，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝259.0。
实施例1301-(3-氯苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4011)根据GP3，应用3-氯苯甲醛(2.0mmol，281mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4011)(370mg，79％)。1H NMR(CD3OD)δ8.11(s，1H)，7.92(s，1H)，7.68(d，J＝6.5Hz，1H)，7.43(m，2H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝197.1。
实施例1311-(3-氟苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4012)根据GP3，应用3-氟苯甲醛(2.0mmol，248mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4012)(230mg，53％)。1H NMR(CD3OD)δ8.14(s，1H)，7.66(d，J＝9.9Hz，1H)，7.55(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝13.8，7.7Hz，1H)，7.17(m，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝181.1。
实施例1321-(2，3，4-三甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4013)根据GP3，应用2，3，4-三甲氧基苯甲醛(2.0mmol，392mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4013)(330mg，57％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(s，1H)，7.78(d，J＝8.9Hz，1H)，6.86(d，J＝9.0Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.90(s，3H)，3.84(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝253.1。
实施例1331-(3，5-二-三氟甲基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4014)根据GP3，应用3，5-二-三氟甲基苯甲醛(2.0mmol，484mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4014)(360mg，54％)。1H NMR(CD3OD)δ8.47(s，2H)，8.30(s，1H)，8.02(s，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝299.0。
实施例1341-(5-溴-2，4-二甲氧基苯亚甲基氨基)胍盐酸盐(4015)根据GP3，应用5-溴-2，4-二甲氧基苯甲醛(2.0mmol，490mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)获得粉末状的所述标题化合物(4015)(450mg，67％)。1H NMR(CD3OD)δ8.34(s，1H)，8.20(s，1H)，6.69(s，1H)，3.95(s，3H)，3.93(s，3H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝303.0。
实施例1351-[5-(2-(三氟甲基)苯基)-呋喃-2-基)-亚甲基氨基]胍盐酸盐(2616)根据GP8，应用5-(2-(三氟甲基)苯基)-2-呋喃醛(2.0mmol，480mg)和氨基胍盐酸盐(2.0mmol，220mg)。在所述CombiFlash上应用CF6方法纯化所述粗品，获得淡黄色粉末状的所述标题化合物(137FB59-8-HCl)(318mg，48％)，两个异构体混合物的比例为9∶1。主要异构体1H NMR(CD3OD)δ8.07(s，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(dd，J＝8.0，0.6Hz，1H)，7.67(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.6Hz，1H)，7.05(d，J＝3.7Hz，1H)，6.82(d，J＝3.6Hz，1H)；次要异构体1H NMR(CD3OD)δ7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(t，J＝7.4Hz，1H)，7.61(t，J＝7.6Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.25(d，J＝3.7Hz，1H)，6.86(d，J＝3.7Hz，1H)；HPLC-MS(乙酸铵)[M+H]+＝297.3(两个异构体共同洗脱出)。
化合物的测试实施例136受体选择和扩增技术分析将所述功能性受体分析、受体选择及扩增技术(R-SAT)用于研究公知的和新NPFF激动剂的药理性质。R-SAT公开于美国专利号第5,707,798号、第5,912,132号和第5,955,281号，在此将其全部内容，包括任何附图作为参考全文引用。
简而言之，将NIH3T3细胞在96孔的组织培养皿中生长至70-80％汇合。按照制造商的方案，应用Polyfect(Qiagen Inc.)和质粒DNA转染细胞16-20h。通常用40ng/孔受体和20ng/孔的β-半乳糖苷酶质粒DNA来实施R-SATs。所用过的全部受体和G-蛋白构建体都存在于如先前所述的pSI衍生的哺乳动物表达载体(Promega Inc)中。通过PCR，从精巢cDNA中应用基于所述公开序列(GenBank登录号AF257210)的寡聚脱氧核苷酸引物扩增所述NPFF受体基因。对于大规模的转染，将细胞转染16-20h，然后胰蛋白酶消化并在DMSO中冷冻。随后将冷冻的细胞解冻，将所述细胞以大约20,000细胞/孔的浓度接种在含有药物的96半面积孔的平板上。然后利用两种方法，将细胞在有5％环境CO2的潮湿气氛中生长五天。随后将培养基从所述平板中除去，并通过加入所述β-半乳糖苷酶的底物o-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG，，在含有0.5％NP-40的PBS中)来检测标记基因的活性。在分光光度平板读数器中(Titertek Inc.)，在420nm下检测所得到的比色反应。应用所述计算机程序XLFit(IDBSm)对所有数据进行分析。有效性是与对照化合物(例如，关于NPFF2的NPFF)引起的最大效应相比较的最大效应百分比。pEC50是log(EC50)的负数，其中EC50是以摩尔计算的、产生50％最大效应的浓度。
这些实验为经过最具有意义的受体，所述NPFF1和NPFF2受体亚型的这些因子中的每一种因子提供了分子特征谱，或指纹图谱。如表1中所见，相对于NPFF1受体，某些化合物选择性地激活NPFF2受体。
表1
NA＝在最高剂量测试中未检测到活性(20μM)NT＝未测试ND＝未测定有效性与内源性配体相关实施例137CCI/热痛觉过敏在无菌和加热状态下，用异氟烷将大鼠麻醉。将左侧四头肌去毛并用碘溶液彻底地清洗。将坐骨神经暴露在坐骨三叉神经远端的坐骨切迹水平上。在未损伤神经的情况下，将所述坐骨神经非常小心地从下面的肌肉和连接的组织中分离。应用4-0铬肠线缝合材料，环绕该坐骨神经系四个半松的结，从最接近的水平开始、接着所述坐骨切迹、以大约1mm间隔并终止于接近该坐骨三叉神经。在放大的情况下，将所述结系紧直到在所述动物的左爪或所述神经周围的肌肉组织处观察到轻微的颤搐。用4-0丝线缝合材料将肌肉的切口闭合，以及用缝合夹将所述皮肤夹住。密切地观察所述动物直到其完全地从麻醉中恢复。所述外科手术同样用于痛觉过敏和异常性疼痛实验。
对于痛觉过敏试验，将大鼠放置在透明玻璃上的带色彩的塑料盒内，其具有透明的玻璃顶部，调节温度的底部，将温度维持在31℃±1℃。所述底部包含局部的辐射热源(卤素发射灯，CXL/CXP，50W，8v，USHIO，东京)。所述热源可在所述玻璃下移动，且其具有直径大约为3mm的辐射光线，该辐射光线可定位在该大鼠后爪的跖面下。
为了开始所述试验，将大鼠放置在彩色盒内，并允许10-20分钟以适应新环境。然后将所述辐射热源定位在后爪的跖面下。所述热源激活时，同时触发计时器。后爪反射性运动时，激活运动传感器，停止所述计时器并失活所述热源。调整所述热辐射源使得未损伤动物的平均反应潜伏期不超过20秒。每只大鼠都有两天的手术前的基线潜伏期测量，在该基线潜伏期中，将左后爪的跖面测量3至4次。在给予所述处理之前和之后，进行两至三次左侧的手术后基线潜伏期的测量。手术后的第2天和第4天产生最大程度的痛觉过敏，因此其可应用于所述分析中。每只动物试验两次并且每次试验至少间隔48小时。
正如缩足反射潜伏期中对热刺激的减少所证明的，在外科手术处理的左爪中，热痛觉过敏发展。在手术后处理的第2天至第4天发生最大的痛觉过敏。所述外科手术处理的左侧的缩足反射潜伏期经手术后5-12天的过程逐渐地恢复到基线水平。正如12天试验期中自始至终相似的缩足反射潜伏期所证明的，外科手术未处理的右爪未显著地受外科手术影响。
每组中的载体给药没有改变所述热痛觉过敏。相反，所述NPFF2选择性激动剂化合物1剂量依赖性地逆转了这些外科手术处理的大鼠中的热痛觉过敏；在10mg/kg剂量水平时达到了统计学显著性(图1)。
实施例138CCI/触觉异常性疼痛在如上所述的相同手术操作后，CCI手术后显著的机械异常性疼痛发作和持续时间大约为10-14天并维持大约2个月。在该异常性疼痛时帧内，且对于每个特定的异常性疼痛实验，利用七根yon Frey毛发进行药物给药前和给药后的测量，所述七根von Frey毛发由[log(10*弯曲毛发所需要的力，mg)]指定且范围是2-26克(#′s 4.31-5.46)。用足够的力量将每根毛发垂直地压靠在左侧损伤的足底中后爪表面上以引起轻微的弯曲，并持续6-8秒，用最细的标准毛发开始并逐渐达到最粗的毛发。当所受伤的爪急剧撤回时，记录阳性反应，并通过下一根最粗的标准毛发对相同反应的测试，证实该反应为阳性。只有当观察到两次反应时，所述得分被认可。如果达到26克最大限度的力时依然没有反应，则认为此为异常性疼痛行为峰阈值的中止并记录所述得分。当手术后的基线测量结果为6克及以下时，认为该动物是异常性疼痛。利用每天发生的一轮周期试验进行两天的基线测量。在药物检测当天，进行一轮基线测量，利用腹腔内注射给药进行恰当的预处理并记录第二轮测量结果。每只动物应用于多重试验，每次实验进行一次处理并在每次实验之间进行适当的消除期。
在第8天开始观察到显著的触觉异常性疼痛，并自始至终地持续到手术后的第35天。在化合物1的给药后，在这些手术后时间点内实施触觉响应度的评估。在所述载体处理组中，损伤后预处理得分与基线相比没有统计学上的显著性差异。化合物1剂量依赖性地逆转了这些外科手术处理的大鼠中的触觉异常性疼痛；在3.0和10.0mg/kg剂量时达到统计学显著性(图2)。
实施例139急性热镇痛将体重大约为20g-30g的雄性小鼠适应所述的测试仪器。在进行所述实验当天，将每只小鼠放置在玻璃平台上的塑料制动器内。将来自所述玻璃平台下面的热源集中在距离尾部尖端大约1英寸的位置。开启所述热源(IR 45)并逐渐地增强，直到该小鼠摇动其尾远离该热源。记录直到所述小鼠摇动其尾巴的时间量。如果该动物在20秒内未反应，则实验者关掉所述热源并记录其为最大得分。收集一轮的基线测量结果。将测试化合物给药，并在适当的预处理间隔后，重复所述操作。图3中显示了化合物1对急性伤害感受的作用。化合物1在10.0mg/kg剂量时产生显著的抗伤害感受(图3)。
实施例140NPFF受体结合分析应用以下试剂、辅助材料和方法，在受体结合分析中可容易地测定本发明所述化合物结合所述NPFF受体的能力1.在24孔培养皿中的合适的生长培养基中生长NPFFS受体转染的COS细胞(或非内源性表达所述NPFF受体的其它转染细胞系可以被代替)。
2.通过将245μL的0.25nM[125I]NPFF工作液与5μL以下试剂(每种溶液中一种)混合制备放射标记的分析溶液50μM未标记的NPFF工作液、0.25nM[125I]NPFF工作液、仅HEPES缓冲液或50×测试化合物。
3.应用附加真空源的巴斯德吸管从24孔板中吸出培养基。不洗涤细胞。
4.将来自步骤2的250μL放射标记的分析溶液加入到每个分析孔中，并在室温(大约22℃)，在定轨摇床上以低速孵育平板60分钟。
5.用24孔Brandel细胞采集器抽吸所述放射性溶液以终止孵育。用所述细胞采集器，使用0.5mL冰冷的HEPES缓冲液洗涤所述孔三次。
6.用微量移液器从所述孔中抽吸所述溶液，并转移至12×75-mm聚苯乙烯试管中。用伽玛计数器(Packard，Cobra II)进行分析。
7.测定特异性结合并计算解离常数Kd。
实施例142其它实验鞘内给药的NPFF在52℃水弹尾试验中的评价大鼠被植入可以使化合物运送到腰部脊索的长期留置的鞘内导管(PE-10；7.5cm)。作为阳性对照，用多个剂量的吗啡处理大鼠(3、10和30μg)。吗啡产生剂量相关性抗伤害感受，使得计算的A50为9.8μg(8.1-12.0；95％CI)。NPFF的给药(100μg)没有引起抗伤害感受。
鞘内给药的化合物1045在52℃水弹尾试验中的评价大鼠被植入可以使化合物运送到腰部脊索的长期留置的鞘内导管(PE-10；7.5cm)。化合物1045的给药(11.6或115.5μg)没有引起抗伤害感受。
鞘内给药的1DME在52℃水弹尾试验中的评价大鼠被植入可以使化合物运送到腰部脊索的长期留置的鞘内导管(PE-10；7.5cm)。为了排除NPFF未产生抗伤害感受的可能性是由于所述肽的降解，我们对大鼠给药1DME(稳定的NPFF类似物)。1DME在试验剂量(5.6、55.6或556.0μg)的给药没有引起抗伤害感受全身给药的dPQR对化合物2616诱导的触觉异常性疼痛的作用为了证实化合物2616的前伤害性活动是经NPFF1受体介导的，我们实施了药理学试验，我们对用化合物2616处理的大鼠给药dPQR(丹磺酰-脯氨酰-谷氨酰胺酰-精氨酸肽，一种已报道的NPFF拮抗物，由PhoenixPharmaceuticals按客户要求合成)。在自然大鼠中获得基线的缩足反射阈值。测试后，所述大鼠接受载体或化合物2616(10mg/kg，腹腔注射)。然后在注射后，对大鼠进行75分钟的测试，与接受载体的那些大鼠比较，接受化合物2616的大鼠的所述缩足反射阈值显著地降低。随后对一半接受化合物2616的大鼠注射载体或dPQR(30mg/kg，腹腔注射)。dPQR的给药显著地减弱了由化合物2616引起的触觉超敏性，这说明该化合物的前伤害性活动是经所述NPFF1受体介导的。
全身给药的化合物2616在热板试验中的评价用载体或10mg/kg化合物2616(腹腔注射)对大鼠进行注射，然后应用所述52℃热板试验，评定其对有害热刺激的灵敏性方面的可能变化。与载体处理的大鼠比较，化合物2616产生显著降低的所述热板潜伏期，这表明存在热痛觉过敏。
脑室内给药的NPFF在旋转桶中的评价在化合物3093及化合物3099给药后(30mg/kg，腹腔注射)，大鼠表显一种或多种的以下行为固定不动和凝视、运动失调、张开后肢、身体摇摆、躺在一旁且痉挛的肢外展，以及身体扭曲。这些行为通常先于“滚桶”发作。
已报导了NPFF的ICV给药(60g)引起桶-旋转反应。(参见Panula，P.，A.A.Aarnisalo和K.Wasowicz，《神经肽FF，具有多重功能的哺乳动物的神经肽》(Neuropeptide FF，a mammalian neuropeptide with multiple)ProgNeurobiol，1996.48(4-5)p.461-87)。鉴于这是唯一提及关于NPFF和桶-旋转反应的文献，我们应用植入ICV插管的自然大鼠尝试重复该结果。简而言之，在60、120和150μg的NPFF分别ICV给药后，在三只大鼠中的零只、两只大鼠中的一只、五只大鼠中的三只中证实了滚桶发作。
实施例143福尔马林退缩试验用测试化合物对自然雄性斯普拉-道来氏(Sprague-Dawley)大鼠(175-200g)进行注射，随后将50μl的5.0％福尔马林溶液注射进其后爪的背面，然后将大鼠放置在单独的塑料笼中进行观察。在福尔马林注射后，在60分钟期间内计算疼痛反应的数量(即，缩足/舔足/咬足)。用载体或用10mg/kg(腹腔注射)的吗啡、化合物3093或化合物3099处理大鼠。化合物是在福尔马林注射前15分钟给药的。在图4中描述了所述结果。
全身给药的化合物3099在福尔马林模型中的评价通过将5.0％福尔马林溶液(50μl)注射给药进后爪的背面，然后将大鼠放置在单独的塑料笼内进行观察，在大鼠体内创建紧张性疼痛模型。在60分钟期间内，计数缩足/舔足/咬足。在福尔马林注射前15分钟，大鼠接受载体或化合物3099(10mg/kg，腹腔注射)。化合物3099经过阶段I时无活性(福尔马林注射后0-10分钟)，这表明该NPFF2受体选择性化合物不是急性镇痛剂。该发现与我们早先的数据一致。相反，经过阶段II(福尔马林注射后15-60分钟)时，化合物3099显著地减弱了(大约67.1％抑制作用)福尔马林诱导的退缩。该发现表明选择性的NPFF2受体激动剂在慢性疼痛(即，神经性的和/或炎症的)状态下有效。
全身给药的化合物3093在福尔马林模型中的评价通过将5.0％福尔马林溶液(50μl)注射给药进后爪的背部表面，然后将大鼠放置在单独的塑料笼内进行观察，在大鼠体内创建紧张性疼痛模型。在60分钟期间内，计数缩足/舔足/咬足。在福尔马林注射前15分钟，大鼠接受载体或化合物3093(10mg/kg，腹腔注射)。化合物3093经过阶段I时无活性(福尔马林注射后0-10分钟)，这表明该NPFF2受体选择性化合物不是急性镇痛剂。该发现与我们早先的数据一致。相反，经过阶段II(福尔马林注射后15-60分钟)时，化合物3093显著地减弱了(大约62.1％抑制作用)福尔马林诱导的退缩。该发现表明选择性的NPFF2受体激动剂在慢性疼痛(即，神经性的和/或炎症的)情况下有效。
实施例144角叉藻聚糖诱导的热痛觉过敏使用自然雄性斯普拉-道来氏(Sprague-Dawley)大鼠(175-200g)来评价其对有害的热刺激的反应性。应用所述热板试验测定反应潜伏期。将大鼠放置在恒温控制金属板上的有机玻璃箱内，该恒温控制金属板维持在52℃。时间流逝直到所述动物表现了明显的疼痛反应(即，跳跃、舔、跺脚、抬起后爪)时测定该时间。测试后，通过将100μl的2％λ-角叉藻聚糖离子注射进后爪内，创建急性炎症疼痛的动物模型。在注射角叉藻聚糖三小时后，再次获得热板潜伏期。所述热板潜伏期的显著减少解释为存在热痛觉过敏。用化合物或载体对大鼠进行注射，然后在药物给药后在不同的时间点进行试验。数据通过所述公式转换为最大可能作用百分比(％MPE)，％MPE＝((试验的-炎症疼痛后的)/(自然的-炎症疼痛后的))*100，其中所述试验得分是化合物给药后获得的所述热板潜伏期，所述炎症疼痛后得分是角叉藻聚糖注射后3小时获得的平均反应，且自然的得分是处理前获得的平均反应。另外，在测试后测量爪的厚度(用千分尺)以量化水肿。虽然所测试的化合物一个也没有逆转角叉藻聚糖诱导的水肿形成(数据未显示)，但是这些化合物产生了角叉藻聚糖诱导的热痛觉过敏剂量相关性逆转。在图5中显示所述结果。
全身给药的化合物1045在角叉藻聚糖模型中的评价用100μl的2％角叉藻聚糖或载体(dH2O)对大鼠进行注射(经爪注射)以产生急性炎症疼痛状态。在角叉藻聚糖给药而不是载体给药后3小时，给药的大鼠表显出了对有害热刺激的敏感性显著增加(即，减少所述热板潜伏期)。然后用不同剂量的化合物1045处理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小时期间内，测试热板潜伏期。在所述角叉藻聚糖处理的大鼠中，化合物1045产生了热痛觉过敏剂量相关性逆转。该化合物完成57.6％最大效力，其计算的A50为7.8mg/kg(3.9-16.0；95％CI)。化合物1045对载体处理的大鼠的给药并未显著改变其对有害热刺激的敏感性，即不镇痛。该化合物也并未显著改变由角叉藻聚糖产生的后爪中的水肿形成。
另外，在化合物1045的盐酸盐的给药后(10mg/kg，腹腔注射)，大鼠表现扭体行为和出现昏睡。这些效应维持了15-20分钟。这些效应在接受小于10mg/kg的剂量的大鼠中未观察到。
全身给药的化合物3093在角叉藻聚糖模型中的评价用100μl的2％角叉藻聚糖或载体(dH2O)对大鼠进行注射(经爪注射)以产生急性炎症疼痛状态。在角叉藻聚糖给药而不是载体给药后3小时后，大鼠表显出了对有害热刺激的敏感性显著增加(即，减少所述热板潜伏期)。然后用不同剂量的化合物3093处理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小时期间内，测试热板潜伏期。化合物3093产生了由2％角叉藻聚糖诱导的热痛觉过敏剂量的相关性逆转。在给药后30-60分钟时，观察到化合物3093的峰效应，且其计算的A50为1.6mg(1.1-2.3；95％CI)。化合物3093(10mg/kg)并未显著改变载体处理的大鼠的所述热板潜伏期。
全身给药的化合物3099在角叉藻聚糖模型中的评价用100μl的2％角叉藻聚糖或载体(dH2O)对大鼠进行注射(经爪注射)以产生急性炎症疼痛状态。在角叉藻聚糖给药而不是载体给药后3小时后，大鼠表显出了对有害热刺激的敏感性显著增加(即，减少所述热板潜伏期)。然后用不同剂量的化合物3099处理大鼠(1、3和10mg/kg，腹腔注射)，并在三小时期间内，测试热板潜伏期。化合物3099产生了由2％角叉藻聚糖诱导的热痛觉过敏剂量的相关性逆转。在给药后30-60分钟时，观察到化合物3099的峰效应，且其计算的A50为1.1mg(0.7-1.6；95％CI)。化合物3099(10mg/kg)并未显著改变载体处理的大鼠的所述热板潜伏期。
实施例145L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛由Kim和Chung开发了神经痛模型(参见Kim SH，Chung JM.，“在大鼠中通过分段的脊神经结扎产生外周神经病的实验模型”(Anexperimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinalnerve ligation in the rat)Pain，1992Sep；50(3)355-63)。该模型要求结扎位于脊索和坐骨神经内进入点之间的L5和L6脊神经。在SNL手术七至十四天后，再评价大鼠对机械刺激的效应阈值。为了评价缩足反射阈值，将大鼠在有机玻璃箱内放置大约20分钟以适应新环境。将一系列的校准的von Frey发丝(1.56-15.0g，具有对数间隔的)应用于受伤后爪的足底面直到引起反应。根据先前所述方法测定缩足反射阈值(参见Chaplan SR，Bach FW，Pogrel JW，Chung JM，Yaksh TL.，“定量评价大鼠足中的触觉异常性疼痛”JNeurosci Methods，1994Jul，53(1)55-63)。在手术前，然后化合物给药后在多重时间点前和多重时间点上，以最接近0.1g测定缩足反射阈值。所述缩足反射阈值的显著减少解释为存在触觉异常性疼痛。在图6中显示所述结果。
这些数据表明所述选择性FF2受体激动剂(例如化合物3093和3099)剂量依赖性地逆转了由L5和L6脊神经结扎诱导的触觉异常性疼痛。此外，对FF1受体具有较大活性的化合物(例如化合物1045和2616)表现了极低的有效性或加强了触觉异常性疼痛。化合物2616在模拟手术的大鼠中也产生触觉异常性疼痛。在图7中显示所述结果。
为了研究外周神经损伤后所述NPFF系统的内源活性，在神经痛模型中评定了FF1受体拮抗剂dPQR的活性。在该模型中，位于脊索和坐骨神经内进入点之间的L5和L6脊神经被结扎(Kim和Chung，1992)。在SNL手术七至十四天后，再评价大鼠对机械刺激的效应阈值。为了评价缩足反射阈值，将大鼠在有机玻璃箱内放置大约20分钟以适应新环境。将一系列校准的von Frey发丝(1.56-15.0g，具有对数间隔的)应用于受伤后爪的足底面直到引起反应。根据先前所述方法测定缩足反射阈值(Chaplan et al.，1994)。在手术前，然后化合物给药后在多重时间点前和多重时间点上，以最接近0.1g测定缩足反射阈值。所述缩足反射阈值的显著减少解释为存在触觉异常性疼痛。在图8中显示所述结果。
dPQR的给药产生了L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛剂量依赖性逆转。这些数据说明外周神经损伤后，可能存在脊髓上的FF1受体激活的不恰当水平，这可能加速神经痛。
根据所述文献，NPFF的脊柱给药引起急性抗伤害性疼痛。但是，在ICV给药后，NPFF导致前伤害性疼痛。已证实FF2受体位于脑和脊髓中，而FF1受体位于脑中但不位于脊髓中。综上所述，这些数据显示NPFF的前伤害性疼痛行为是经脊髓上的FF1受体介导的。
因此，第一次证实了选择性的FF2受体激动剂(例如化合物3093和3099)有效地针对炎性痛觉过敏和神经损伤诱导的异常性疼痛。另外，还显示出当本发明公开的所述化合物对所述FF1受体的活性增加时，其对疼痛的缓解作用降低。此外，本发明公开的诸如化合物2616的所述FF1激动剂的给药导致对无害触觉刺激的敏感性(即，触觉异常性疼痛)增加。通过用所述FF1拮抗剂dPQR的处理完全阻滞了所增加的敏感性。这些数据第一次为脊髓上的FF1和FF2受体的相反作用提供了直接证据。
广泛地的认为神经肽在CNS中的作用是对内源性系统进行调控。认为NPFF调节痛觉，因此，在正常情况下，FF1和FF2受体间的相反作用可能负责设置基线感觉阈。在此显示出内源性的NPFF性的系统逐渐变得有效，这使得在关键位点的FF1受体活性增强。所增加的FF1受体激活作用在行为上显示为异常疼痛状态。该结论由实验支持，该实验在自然大鼠体内外源性地给药FF1激动剂，化合物2616。通过以下实验在概念上提供了另外的支持应用dPQR(FF1拮抗剂)阻断内源性FF1受体活动，这导致感觉阈的正常化。
此外，FF1拮抗剂和FF2激动剂的组合以协同作用方式阻断慢性疼痛。因为a)外周神经损伤后，脊髓上的FF1受体出现活性增加；b)脊髓上的FF1受体对抗脊髓上的FF2受体的活动以及c)触觉异常性疼痛是经脊髓机制介导的，脊髓上FF1受体的阻断允许FF2受体无竞争的活性不被屏蔽。
全身给药的化合物1045在SNL模型中的评价通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后7-14天，接受SNL，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物1045(1、3和10mg/kg，腹腔注射)处理大鼠，并在2小时期间内，测试缩足反射阈值。化合物1045在所述SNL大鼠体内产生触觉异常性疼痛剂量相关性逆转。该化合物完成37.9％最大效应。化合物1045对模拟手术的大鼠的给药并未显著改变对无害机械刺激的敏感性。
此外，在化合物1045的给药(10mg/kg，腹腔注射)后，大鼠表现扭体行为和出现昏睡。这些效果持续15-20分钟，并且模拟手术的大鼠和SNL大鼠都显示出所述效果。在接受小于10mg/kg剂量的大鼠中未观察到这些效果。
全身给药的化合物1045(30mg/kg)在SNL模型中的评价为了增加化合物1045在所述SNL模型中的效力，我们对SNL大鼠以30mg/kg剂量给药。化合物1045的给药最初在30分钟时间点时有效，但是经过60分钟及直到所述测试终点，该化合物具有显著减少的所述缩足反射阈值，其水平低于在SNL载体处理的大鼠中获得的水平，这说明触觉异常性疼痛增强。
另外，在30mg/kg化合物1045给药后，记录到与接受10mg/kg大鼠中观察到的相似的副作用。但是，这些作用较强且有较长的持续时间(60-90分钟)。记录新副作用的数量，该新副作用包括上睑下垂、拖着脚走/跺脚及咬前肢和后肢。
全身给药的化合物2616在SNL模型中的评价通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后7-14天，接受脊神经结扎手术(SNL)，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物2616(1、3和10mg/kg，腹腔注射)处理大鼠，并在2.5小时期间内，测试缩足反射阈值。化合物2616在所述SNL大鼠体内产生触觉异常性疼痛的剂量相关性逆转。此外，10mg/kg的该化合物显著减少模拟手术大鼠的缩足反射阈值。
此外，在化合物2616的给药(10mg/kg，腹腔注射)后，大鼠表现扭体行为和出现昏睡。这些效果持续60-90分钟，并且模拟手术大鼠和SNL大鼠都显示出所述效果。在接受小于10mg/kg剂量的大鼠中未观察到这些效果。
全身给药的dPQR在SNL模型中的作用通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后7-14天，接受脊神经结扎手术(SNL)，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物dPQR(3、10和30mg/kg，腹腔注射)处理大鼠，并在3小时期间内测试缩足反射阈值。dPQR的给药导致所述SNL大鼠体内触觉异常性疼痛剂量相关性逆转。该化合物完成76.7％最大效力，且计算的A50为12.3mg(8.0-18.9；95％CI)。dPQR对模拟手术大鼠的给药(30mg/kg，腹腔注射)不显著改变对无害机械刺激的敏感性。在任何接受dPQR的大鼠中未观察到明显的不良副作用。
全身给药的化合物3099在SNL模型中的评价通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后7-14天，接受脊神经结扎手术(SNL)，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物3099(1、3和10mg/kg，腹腔注射)处理大鼠，并在3小时期间内测试缩足反射阈值。选择性的NPFF2受体激动剂，化合物3099产生L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛剂量相关性逆转。在给药后30分钟观察到化合物3099的峰效应，且所计算的A50为4.1mg(3.0-5.5；95％CI)。在接受的10mg/kg大鼠中只注意到上睑下垂和昏睡的副作用。
全身给药的化合物3093在SNL模型中的评价通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后7-14天，接受脊神经结扎手术(SNL)，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物3093(1、3、10和30mg/kg，腹腔注射)处理大鼠，并在3小时期间内测试缩足反射阈值。选择性的NPFF2受体激动剂，化合物3093产生L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛剂量相关性逆转。在给药后30分钟观察到化合物3093的峰效应，且所计算的A50为6.2mg(4.5-8.1；95％CI)。
全身给药的化合物3099(30mg/kg)在SNL模型中的评价为了增加化合物3099在所述SNL模型中的效力，我们对SNL大鼠以30mg/kg剂量给药(腹腔注射)。虽然在逆转SNL诱导的触觉异常性疼痛中有近乎完全的有效性，化合物3099(30mg/kg，i.p.)也产生与所报导的化合物3099的作用相似的作用。特异地，大鼠表现出一种或多种以下行为固定不动和凝视、运动失调、张开后肢、身体摇摆、躺在一旁且痉挛的肢外展，以及身体扭曲。此外，这些行为是偶然的，及其不干扰所述行为的测定。另外，这些行为也是暂时的，因此，通过测定期的结束，出现的这些效果已解决。
口服给药的化合物3099在SNL模型中的评价通过所述L5和L6脊神经的紧紧结扎在大鼠体内创建神经性疼痛模型。手术后14-28天，接受脊神经结扎手术(SNL)，但不是模拟手术的大鼠显示出对无害机械刺激的敏感性显著增加(即缩足反射阈值的减少)。然后用不同剂量的化合物3099(6、60和200mg/kg，p.o.)处理大鼠，并在3小时期间内测试缩足反射阈值。选择性的NPFF2受体激动剂，化合物3099产生L5/L6SNL诱导的触觉异常性疼痛剂量相关性逆转。在给药后60-90分钟时观察到化合物3099的峰效应，且所计算的A50为50.5mg(22.1-115.5；95％CI)。
实施例146cAMP分析利用用一种基因转染的大多数细胞可同时用其它基因转染的事实，在瞬时转染的细胞中建立了测定cAMP的分析。因此，所述NPFF1和NPFF2受体与Gs-轭合受体(EP2)一起以5∶1的比例被转染。在未转染的HEK-T细胞中，在10μM的高剂量时没有对PGE2(对EP2的激动剂)的反应。在大约300nM时用PGE2常规地刺激所述细胞，该300nM是PGE2在EP2受体的EC50值(170nM)的两倍。在某些情况下，当用AC5以1/2-1/5的所研究的Gi-轭合受体的DNA量共转染细胞时，也检测到所述分析的灵敏度的改进。
该装置常规地用于利用NPFF1和NPFF2受体对HEK-T细胞的转染。48小时后，在白色底板中，在不同浓度的所述NPFF配体和300Nm EP2的存在下，应用DiscoveRx分析方案和利用混悬液中转染的细胞建立所述cAMP分析。在37℃下细胞孵育15分钟。在孵育结束后，将细胞溶解并按照DiscoveRx方案实施所述分析的剩余部分。
对于拮抗剂分析，在按顺序加入激动剂然后加入PGE2之前，在37℃下用拮抗剂将所述细胞预孵育15分钟。在37℃下将细胞再孵育15分钟后，随后将所述细胞溶解并按照试剂盒方案处理。
如实施例136中所描述的进行R-SAT分析。
所述结果如以下表2中所示。单一化合物的多重条目表示不同的试验批次。
表2
序列表<110>奥德拉·L·斯库利罗伯特·E·戴维斯金伯利·E·瓦努韦尔路易斯·罗伯托·加德尔耶尔韦和·拉梅赫尼古拉斯·迈克尔·凯利法布里奥·贝尔托齐<120>用神经肽FF受体2激动剂治疗神经痛<130>ACADIA.038VPC<150>60/508,008<151>2003-10-02<150>60/506,130<151>2003-09-25<160>2<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>1560<212>DNA<213>Homo sapiens<400>1tgcctctgcc cacctcttct cttctgcttc catattacag gttcatcatg aatgagaaat 60gggacacaaa ctcttcagaa aactggcatc ccatctggaa tgtcaatgac acaaagcatc 120atctgtactc agatattaat attacctatg tgaactacta tcttcaccag cctcaagtgg 180cagcaatctt cattatttcc tactttctga tcttcttttt gtgcatgatg ggaaatactg 240tggtttgctt tattgtaatg aggaacaaac atatgcacac agtcactaat ctcttcatct 300taaacctggc cataagtgat ttactagttg gcatattctg catgcctata acactgctgg 360acaatattat agcaggatgg ccatttggaa acacgatgtg caagatcagt ggattggtcc 420agggaatatc tgtcgcagct tcagtcttta cgttagttgc aattgctgta gataggttcc 480agtgtgtggt ctaccctttt aaaccaaagc tcactatcaa gacagcgttt gtcattatta 540tgatcatctg ggtcctagcc atcaccatta tgtctccatc tgcagtaatg ttacatgtgc 600aagaagaaaa atattaccga gtgagactca actcccagaa taaaaccagt ccagtctact 660
ggtgccggga agactggcca aatcaggaaa tgaggaagat ctacaccact gtgctgtttg 720ccaacatcta cctggctccc ctctccctca ttgtcatcat gtatggaagg attggaattt 780cactcttcag ggctgcagtt cctcacacag gcaggaagaa ccaggagcag tggcacgtgg 840tgtccaggaa gaagcagaag atcattaaga tgctcctgat tgtggccctg ctttttattc 900tctcatggct gcccctgtgg actctaatga tgctctcaga ctacgctgac ctttctccaa 960atgaactgca gatcatcaac atctacatct acccttttgc acactggctg gcattcggca 1020acagcagtgt caatcccatc atttatggtt tcttcaacga gaatttccgc cgtggtttcc 1080aagaagcttt ccagctccag ctctgccaaa aaagagcaaa gcctatggaa gcttatgccc 1140taaaagctaa aagccatgtg ctcataaaca catctaatca gcttgtccag gaatctacat 1200ttcaaaaccc tcatggggaa accttgcttt ataggaaaag tgctgaaaaa ccccaacagg 1260aattagtgat ggaagaatta aaagaaacta ctaacagcag tgagatttaa aaagagctag 1320tgtgataatc ctaactctac tacgcattat atatttaaat ccattgcttt ttgtggcttt 1380gcacttcaaa tttttcaaag aatgttctaa ataaaacatt tactgaaagc cctctctggc 1440aaaaaaatta aaaataaaca aaaatggtca taagatcata aacaatctta tgttgtataa 1500aaatacgtag agtgacttag acatgtttgc atgaataaat atatttctag agaacagtta 1560<210>2<211>420<212>蛋白质<213>H0mo sapiens<400>2Met Asn Glu Lys Trp Asp Thr Asn Ser Ser Glu Asn Trp His Pro Ile1 5 10 15Trp Asn Val Asn Asp Thr Lys His His Leu Tyr Ser Asp Ile Asn Ile20 25 30Thr Tyr Val Asn Tyr Tyr Leu His Gln Pro Gln Val Ala Ala Ile Phe35 40 45Ile Ile Ser Tyr Phe Leu Ile Phe Phe Leu Cys Met Met Gly Asn Thr50 55 60Val Val Cys Phe Ile Val Met Arg Asn Lys His Met His Thr Val Thr65 70 75 80Asn Leu Phe Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Val Gly Ile85 90 95Phe Cys Met Pro Ile Thr Leu Leu Asp Asn Ile Ile Ala Gly Trp Pro100 105 110Phe Gly Asn Thr Met Cys Lys Ile Ser Gly Leu Val Gln Gly Ile Ser115 120 125Val Ala Ala Ser Val Phe Thr Leu Val Ala Ile Ala Val Asp Arg Phe130 135 140Gln Cys Val Val Tyr Pro Phe Lys Pro Lys Leu Thr Ile Lys Thr Ala145 150 155 160Phe Val Ile Ile Met Ile Ile Trp Val Leu Ala Ile Thr Ile Met Ser
165 170 175Pro Ser Ala Val Met Leu His Val Gln Glu Glu Lys Tyr Tyr Arg Val180 185 190Arg Leu Asn Ser Gln Asn Lys Thr Ser Pro Val Tyr Trp Cys Arg Glu195 200 205Asp Trp Pro Asn Gln Glu Met Arg Lys Ile Tyr Thr Thr Val Leu Phe210 215 220Ala Asn Ile Tyr Leu Ala Pro Leu Ser Leu Ile Val Ile Met Tyr Gly225 230 235 240Arg Ile Gly Ile Ser Leu Phe Arg Ala Ala Val Pro His Thr Gly Arg245 250 255Lys Asn Gln Glu Gln Trp His Val Val Ser Arg Lys Lys Gln Lys Ile260 265 270Ile Lys Met Leu Leu Ile Val Ala Leu Leu Phe Ile Leu Ser Trp Leu275 280 285Pro Leu Trp Thr Leu Met Met Leu Ser Asp Tyr Ala Asp Leu Ser Pro290 295 300Asn Glu Leu Gln Ile Ile Asn Ile Tyr Ile Tyr Pro Phe Ala His Trp305 310 315 320Leu Ala Phe Gly Asn Ser Ser Val Asn Pro Ile Ile Tyr Gly Phe Phe325 330 335Asn Glu Asn Phe Arg Arg Gly Phe Gln Glu Ala Phe Gln Leu Gln Leu340 345 350Cys Gln Lys Arg Ala Lys Pro Met Glu Ala Tyr Ala Leu Lys Ala Lys355 360 365Ser His Val Leu Ile Asn Thr Ser Asn Gln Leu Val Gln Glu Ser Thr370 375 380Phe Gln Asn Pro His Gly Glu Thr Leu Leu Tyr Arg Lys Ser Ala Glu385 390 395 400Lys Pro Gln Gln Glu Leu Val Met Glu Glu Leu Lys Glu Thr Thr Asn405 410 415Ser Ser Glu Ile420
权利要求
1.鉴定有效治疗疼痛的化合物的方法，包括将所述化合物与NPFF2受体接触，并测定所述化合物是否与所述NPFF2受体结合。
2.筛选能够影响NPFF2受体的一种或多种活性的化合物的方法，包括如下步骤a)将重组细胞与测试化合物接触，其中所述重组细胞包含表达所述NPFF2受体的重组核酸，假定所述细胞没有来自内源核酸的功能性NPFF2受体表达；及b)测定所述测试化合物影响所述NPFF2受体的一种或多种活性的能力，并将所述能力与所述测试化合物对不含所述重组核酸的细胞中的所述一种或多种NPFF2受体活性的影响能力进行比较；其中，所述重组核酸包括NPFF2受体核酸，所述NPFF2受体核酸选自a)SEQ ID No1的核酸，b)编码氨基酸SEQ ID No2的核酸，c)上述核酸的衍生物，其编码所述NPFF2受体，其中所述衍生物编码具有所述NPFF2受体的一种或多种活性的受体，并且含有至少20个连续核苷酸，且所述至少20个连续核苷酸能在严格的杂交条件下与SEQ ID No1的至少20个连续核苷酸的互补体杂交。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述NPFF2受体核酸编码SEQID No2衍生物的氨基酸序列，所述NPFF2受体核酸包含至少20个连续核苷酸，且所述至少20个连续核苷酸能在严格的杂交条件下与编码SEQ ID No2氨基酸序列的至少20个连续核苷酸的互补体杂交。
4.治疗任何类型的急性和慢性疼痛的方法，该方法包括将有机体与有效量的至少一种化合物接触，其中所述化合物激活NPFF2受体亚型。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述疼痛与糖尿病，病毒感染，肠应激综合征，截肢，癌症或化学伤害有关。
6.鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将所述NPFF2受体与至少一种测试化合物接触；及测定所述NPFF2受体活性水平的任何升高，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
7.如权利要求6所述的方法，其中所鉴定的激动剂激活所述NPFF2受体而不是NPFF1受体。
8.如权利要求6所述的方法，其中所鉴定的激动剂对所述NPFF2受体具有选择性。
9.鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞或从所述细胞提取的成分与至少一种测试化合物孵育；及测定所述NPFF2受体活性的任何升高，从而鉴定检测化合物是所述NPFF2受体激动剂。
10.如权利要求7所述的方法，其中所述培养步骤中的细胞过量表达所述NPFF2受体。
11.治疗疼痛的方法，包括将遭受疼痛的个体与有效量的至少一种通式I或通式II化合物接触；从而减轻所述疼痛的一种或多种症状；其中所述通式I或通式II化合物具有如下结构 或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基和杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
12.如权利要求1所述的方法，还包括在所述接触步骤前鉴定需要疼痛治疗的个体的步骤。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述通式I或通式II化合物选择性地激活所述NPFF2受体亚型。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述疼痛与糖尿病，病毒感染，肠应激综合征，截肢，癌症或化学伤害有关。
15.如权利要求11所述的方法，其中所述疼痛是神经痛。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述个体表现出痛觉过敏。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述个体表现出异常性疼痛。
18.鉴定缓解个体的痛觉过敏或异常性疼痛的化合物的方法，包括向遭受痛觉过敏或异常性疼痛的个体供给至少一种通式I或通式II化合物；及测定所述至少一种化合物是否减轻了所述个体的痛觉过敏或异常性疼痛；其中所述通式I或通式II化合物具有如下结构 或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基和杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
19.如权利要求18所述的方法，还包括在所述供给步骤前鉴定遭受痛觉过敏或异常性疼痛的个体的步骤。
20.如权利要求18所述的方法，其中所述至少一种化合物对所述NPFF2受体而不是NPFF1受体具有选择性。
21.如权利要求18所述的方法，其中所述痛觉过敏是热痛觉过敏。
22.如权利要求18所述的方法，其中所述异常性疼痛是触觉异常性疼痛。
23.鉴定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受体激动剂的方法，所述方法包括将NPFF2受体与至少一种通式I或通式II化合物接触；及测定所述NPFF2受体活性水平的任何升高，从而鉴定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受体激动剂；其中所述通式I或通式II化合物具有如下结构 或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基和杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
24.鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括培养表达所述NPFF2受体的细胞；将所述细胞与至少一种通式I或通式II化合物孵育；及测定所述NPFF2受体活性的任何升高，从而鉴定通式I或通式II化合物是所述NPFF2受体激动剂；其中所述通式I或通式II化合物具有如下结构 或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基和杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
25.如权利要求24所述的方法，其中所鉴定的激动剂激活所述NPFF2受体而不是NPFF1受体。
26.如权利要求24所述的方法，其中所鉴定的激动剂对所述NPFF2受体具有选择性。
27.鉴定化合物是的NPFF2受体激动剂的方法，该方法包括将所述NPFF2受体与至少一种通式I或通式II化合物接触；及测定所述通式I或通式II化合物是否与所述NPFF2受体结合；其中所述通式I或通式II化合物具有如下结构 或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药，其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基，取代的或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基或杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
28.如权利要求21所述的方法，其中所鉴定的通式I或通式II化合物对所述NPFF2受体具有选择性。
29.通式I或通式II化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药， 其中R1选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基；R2，R3，R4，R5和R6中每一个都独立地选自氢，C1-C10直链或支链烷基，C2-C10直链或支链烯基，C2-C10直链或支链炔基和C3-C10环烷基，取代或未取代的芳基或杂芳基，羟基，卤代醚，硝基，氨基，卤素，全卤代烷基，-OR7，-N(R7)2，-CN，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-OC(＝Z)R7和-SR7其中Z是氧或硫；且其中每个R7独立地选自氢，任意被芳基或杂芳基取代的C1-C10直链或支链烷基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链烯基，任意被芳基或杂芳基取代的C2-C10直链或支链炔基，C3-C10环烷基，C5-C10环烯基，芳基或杂芳基；或R2和R3及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R3和R4及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R4和R5及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；或R5和R6及其所连接的碳形成稠和芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环；且Q选自芳基，杂芳基，C5-C10碳环或杂环。
30.通式III化合物，或其药物可接受的盐、酯、酰胺或原药， 其中Cy1选自芳基，稠和芳基，杂芳基，稠和杂芳基，碳环，环烷基，稠和杂环和杂环；Cy2选自芳基，稠和芳基，杂芳基，稠和杂芳基，碳环，环烷基，稠和杂环和杂环；R8和R9分别出现0至6次，并独立地选自氢，任意取代的C1-C8直链或支链烷基，任意取代的C2-C8直链或支链烯基，任意取代的C2-C8直链或支链炔基，任意取代的C3-C8环烷基，任意取代的碳环，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的杂芳基，任意取代的稠和杂芳基，任意取代的杂环基，任意取代的稠合杂环基，卤代烷基，卤素，-CN，-NO2，-C(＝Z)R7，-C(＝Z)OR7，-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)2，-N(R7)-C(＝Z)R7，-N(R7)-C(＝Z)N(R7)2，-N(R7)-S(＝O)R7，-N(R7)-S(＝O)2R7，-OR7，-OC(＝Z)R7，-SO3H，-S(＝O)2N(R7)2，-S(＝O)N(R7)2，-S(＝O)2R7，-S(＝O)R7和-SR7，其中Z是氧或硫；且其中每个R7的定义如上所述；R10选自氢，任意取代的C1-C8直链或支链烷基，任意取代的C2-C8直链或支链烯基，任意取代的C2-C8直链或支链炔基，C3-C8环烷基，任意取代的芳基，任意取代的稠和芳基，任意取代的杂芳基，任意取代的稠和杂芳基，任意取代的杂环基，任意取代的稠合杂环基，X或者不存在，或者选自氧，硫，NR7，任意取代的亚乙基，双亚乙基，其中R7的定义如上所述。
31.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与所述NPFF1受体拮抗剂接触，其中所述拮抗剂是通式I，通式II或通式III化合物。
32.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与所述NPFF1受体的较弱的部分激动剂接触，其中所述较弱的部分激动剂是通式I，通式II或通式III化合物。
33.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体和作为NPFF1受体的拮抗剂或部分激动剂的通式I，通式II或通式III化合物与作为NPFF2受体的完全激动剂或部分激动剂的其他通式I，通式II或通式III化合物的组合物接触。
34.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I，通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2激动剂和NPFF1拮抗剂。
35.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I，通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2部分激动剂和NPFF1拮抗剂。
36.治疗个体的神经痛或炎症疼痛的方法，包括将所述个体与通式I，通式II或通式III化合物接触，其中所述化合物同时作为NPFF2部分激动剂和NPFF1部分激动剂。
全文摘要
本发明公开了介导急性伤害感受和慢性神经痛的神经肽FF受体亚型，选择性与这种受体亚型互作的化合物，以及治疗急性疼痛和慢性神经痛的方法。
文档编号C07C279/36GK1875271SQ200480032231
公开日2006年12月6日 申请日期2004年9月24日 优先权日2003年9月25日
发明者奥德拉·L·斯库利, 罗伯特·E·戴维斯, 金伯利·E·瓦努韦尔, 路易斯·罗伯托·加德尔, 耶尔韦和·拉梅赫, 尼古拉斯·迈克尔·凯利, 法布里奥·贝尔托齐, 弗拉迪米尔·舍伯克基 申请人:阿卡蒂亚药品公司