葡糖胺基聚糖(gag)模拟物的制作方法

专利名称：葡糖胺基聚糖(gag)模拟物的制作方法
技术领域：
本发明即本申请的主题属于模拟某些糖类结构的化合物领域。更特别地，本发明属于葡糖胺基聚糖(GAG)模拟物领域。
具体地说，本发明涉及包含至少一个用于模拟GAGs结构的带电基团的化合物。本发明还涉及制备化合物，包含该类化合物的组合物的方法，以及该类化合物及其组合物用于哺乳动物患者的抗血管形成，抗转移，抗炎，抗凝血，抗血栓，和/或抗微生物治疗的用途。本发明进一步涉及该类化合物及其组合物治疗患有需要使用此类药剂治疗的病症的哺乳动物患者的用途。
背景技术：
葡糖胺基聚糖(GAGs)是由大部分动物细胞所产生的直链，聚阴离子多糖，通常发现其附着于蛋白质核心[1，2]。GAGs大量存在(作为蛋白多糖)并且由细胞挤压至细胞表面并进入细胞外基质(ECM)[3]。已经认识到GAGs，尤其是那些属于硫酸乙酰肝素(HS)家族(HS-GAGs)的GAGs调节很多生理学过程。例如，HS-GAGs在细胞生长和发育，血管生成，凝血，肿瘤转移，细胞粘附，生长因子的激活，细胞因子和趋化因子的结合，以及细菌和病毒[4-6]的感染中发挥关键作用。最近几年里与GAGs相互作用的蛋白质的名单显著增加并且该名单还会持续增长。新出现的观点是细胞外GAGs的独特序列与重要的蛋白特异性结合，并经由此影响基本的生物学过程。
已经证明模拟某些GAGs结构的分子-此类分子称作“模拟物GAG”-可与GAG-结合蛋白结合并调节它们的生物活性例如，各种戊多糖对AT-III的激活作用[7，8]，或蔗糖八硫酸酯对成纤维细胞生长因子(FGFs)的激活作用[9]。相似地，已经证明GAG模拟物可对抗GAG与其目标蛋白质的结合并且由此抑制该蛋白质的生物学或疾病功能。例如，已经开发的靶向HS-结合血管原性生长因子的抗癌剂包括多磺酸化合物[10]，苏拉明和相关的suradistas[11]，以及硫酸化低聚糖[12，13]。
本发明涉及新的，小分子GAG模拟物，其与GAG-结合蛋白结合并调节它们的功能。该化合物包含至少一种与目标蛋白GAG-结合部位的带正电荷残基的残基相互作用的带负电荷的基团(优选磺基)，并且还包含一个或多个与上述结合部位的内部以及周围的其它蛋白质残基相互作用的取代基。本文所描述的化合物重要和显著的特征是它们与以前记述的多硫酸化GAG模拟物例如硫酸化低聚糖相比具有更少的磺基以及更低的分子量[12，13]。另一个重要的特征是它们的结构基于环架(例如单糖)，具有位于特异性的，预先定义的环周围的方位的磺基和其它取代基，因此，显著不同于由Kisilevsky[14]所描述的简单地，随机带电的GAG模拟物。本文所描述的化合物与HS-结合的、血管原性生长因子的选择性结合可通过表面等离子体谐振(SPR)溶液亲和力测定法来证明。另外，通过单纯性疱疹病毒证明化合物选择性抑制HS-介导的细胞感染以及细胞-与-细胞间的传播。
本发明的一方面是使用Ugi反应[15，16]来提供GAG模拟物的不同排列。论证了单个带电结构相互连接或与其它官能团连接的方式变化的能力以及模拟GAGs不同的结构变化的适用范围。正如对于本领域技术人员所显而易见的，该环架的官能化不局限于Ugi反应。例如，论证了许多其它的反应如烷基化、酰化以及环加成的使用。
发明概述本发明的目标是提供新的带电化合物，其可用作GAG模拟物。
本发明进一步的目标是提供制备主题化合物的有效合成路线。
根据本发明的第一个实施方案，提供了下式的化合物
其中n是0至2的整数；Z是N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2；X各自独立的是C，C(O)，N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2或是键；和R1至R6各自独立的是键或选自基团氢；卤素；直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代的或未取代的烷基，链烯基，炔基，芳基，或杂芳基；磷酰基例如磷酸酯，硫代磷酸酯-O-P(S)(OH)2；磷酸酯-O-P(O)(OR)2；硫代磷酸酯-O-P(S)(OR)2；膦酸酯-O-P(O)OHR；硫代膦酸酯-O-P(S)OHR；取代的膦酸酯-O-P(O)OR1R2；取代的硫代膦酸酯-O-P(S)OR1R2；-O-P(S)(OH)(SH)；和环磷酸酯；其它含磷的化合物例如亚磷酰胺-O-P(OR)-NR1R2；和氨基磷酸酯-O-P(O)(OR)-NR1R2；硫基团例如-O-S(O)(OH)，-SH，-SR，-S(→O)-R，S(O)2R，RO-S(O)2-，-O-SO2NH2，-O-SO2R1R2或磺酰胺-NHSO2NH2；氨基例如-NHR，-NR1R2，-NHAc，-NHCOR，-NH-O-COR，-NHSO3，-NHSO2R，-N(SO2R)2，和/或脒基例如-NH-C(＝NH)NH2和/或脲基例如-NH-CO-NR1R2或硫脲基例如-H-C(S)-NH2；结构I的另一个单元，通过任意位置连接，其中Z，X和R1至R6如上所定义；或基于下式基团的亚结构 其中
Y是键或选自基团直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代或未取代的烷基；直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代或未取代的酰基；和芳基，取代的芳基，杂芳基；和R7至R11各自独立地是至少一个根据式I的结构，或根据式II的结构；条件是当Z是O，X是O或键时，R1至R5都不是H或CH2OH；或当Z是N并且X是O或键时，R1至R6都不是H。
根据本发明的第二个实施方案，提供了用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的药物或兽医学组合物。该组合物包含至少一种根据第一个实施方案的化合物和对于所述的至少一种化合物而言药学上或兽医学上可接受的载体或稀释剂。
根据本发明的第三个实施方案，提供了根据第一个实施方案的化合物在制备用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染引起的疾病的药物中的用途。
根据本发明的第四个实施方案，提供了用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的方法，该方法包含对患者施用有效量的至少一种根据第一个实施方案的化合物，或包含所述至少一种化合物的组合物。
在本发明的其它实施方案中，提供了合成如上述定义的根据第一个实施方案化合物的方法。
进一步考虑第一个实施方案化合物，除非另有说明，烷基，芳基和其它取代基与它们在本领域通常的含意一致。例如，烷基和芳基通常具有1至10个碳原子。另外，R1至R5的两个基团可相互连接形成二环结构；或式I的环状结构可包含双键，即两个邻近的XR1至XR5基团可以是键。
本发明优选的化合物具有通式III-VI的通用结构，如以下表1-4所定义。
为了使本发明更容易地理解和实现，现在将通过举例描述一种或多种优选的实施方案。
优选实施方案详述本文使用以下缩写GAG 葡糖胺基聚糖HS 硫酸乙酰肝素FGF 成纤维细胞生长因子aFGF酸性成纤维细胞生长因子(或FGF-1)bFGF碱性成纤维细胞生长因子(或FGF-2)VEGF血管内皮生长因子SPR 表面等离子体谐振HSV 单纯疱疹病毒本发明人发现使用在以下实施例中举例说明的很多不同的策略可以合成宽范围的具有GAG模拟物特性的化合物。这些化合物可用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，微生物感染，凝血或血栓形成引起的疾病。这种应用由化合物调节负责疾病过程的GAG-结合蛋白活性的能力而产生。
如上文所指出的，可使用很多不同的路线，包括Ugi反应，在该方法中通常引入磺化作用，来合成本发明的GAG模拟物。
根据如上定义的本发明第一个实施方案的优选化合物包括通用结构I和II所包含的那些以及在下表1-4所包括的那些。
如上文所指出，根据本发明的化合物可用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，微生物感染，凝血或血栓形成所引起的疾病。该化合物可特别用于治疗人类的上述疾病。该化合物典型地作为如以下段落中所描述的药物组合物的组分来施用。
用于口服施用的药物组合物可以是片剂，胶囊，粉末或液体形式。片剂可以包括固体载体例如明胶或佐剂或惰性稀释剂。液体药物组合物通常包括液体载体例如水，石油，动物或植物油，矿物油或合成油。可包括生理盐水溶液，或二醇例如乙二醇，丙二醇或聚乙二醇。此类组合物和制剂通常将包含至少0.1wt％的化合物。
肠胃外施用包括通过以下途径施用静脉内，表皮或皮下，鼻，肌内，眼内，经上皮，腹腔内和局部。局部施用包括皮肤，眼部，直肠，鼻，以及通过吸入剂或通过气溶胶的方式施用。对于静脉内，表皮或皮下注射，或在需要治疗部位的注射，活性成分为肠胃外可接受的水溶液形式，其不含有热原并且具有适宜的pH，等渗性和稳定性。本领域的那些技术人员将能够很好地制备出适宜的溶液，例如，使用主题化合物或其衍生物的溶液。
除至少一种化合物和载体或稀释剂之外，根据本发明的组合物可进一步包括药学上或兽医学上可接受的赋形剂，缓冲剂，稳定剂，等渗调节剂，防腐剂或抗氧剂或任何其它为本领域那些技术人员所熟知的材料。技术人员将会理解此类材料应该无毒并且不干扰化合物的疗效。任何添加剂的准确特征取决于组合物的施用途径即组合物是口服施用还是肠胃外施用。关于缓冲剂，含水的组合物典型地包括此类物质以便于维持该组合物接近于生理的pH或至少在大约pH5.0至大约pH8.0范围之内。
根据本发明的组合物还可包括除至少一种化合物之外的活性成分。此类成分将主要根据它们的功效如作为抗血管生成，抗转移，抗炎症，抗凝血，抗血栓形成，抗微生物药剂来选择，但是还可根据它们对抗任何联合病症的效力来选择。
可以将根据本发明的药物或兽医学组合物以所考虑的特定情况所必需的预防有效量或治疗有效量给患者施用。经由组合物施用的至少一种化合物的实际用量，比例以及施用的时间过程，将取决于所治疗或需要预防的病症的性质和严重性。治疗的处方例如剂量等的决定将是在负责患者治疗的执业医师或兽医师的技能的范围内。然而典型地，给人类患者施用的组合物要包括每千克体重大约0.01至100mg的化合物，更优选大约0.1至10毫克/Kg体重。
在组合物中包括的化合物可以为其药学上或兽医学上可接受的衍生物。如本文所用，化合物的“衍生物”包括盐，与金属铁例如Mn2+和Zn2+的配位络合物，酯例如体内可水解的酯，游离酸或碱，水合物，或前药。具有酸性基团例如磷酸根或硫酸根的化合物可以与碱性或碱土金属例如Na，K，Mg和Ca，以及与有机胺例如三乙胺和三(2-羟乙基)胺形成盐。具有碱性基团的例如胺的化合物，也可以与无机酸例如盐酸，磷酸或硫酸，或有机酸例如乙酸，柠檬酸，苯甲酸，富马酸，或酒石酸形成盐。同时具有酸性和碱性基团的化合物可形成内盐。
可以通过使用本领域那些技术人员众所周知的技术在化合物中存在的羟基或羧基与适当的羧酸或醇反应配偶体之间形成酯。
本发明化合物的前药衍生物可以在体内或体外转化成母体化合物。典型地，在化合物的前药形式中可抑制母体化合物的至少一种生物活性，并且可以通过将前药转化为母体化合物或其代谢物来激活。前药的实例是糖脂衍生物，其中一种或多种脂质部分在该部分作为取代基来提供，通过用具有磷脂酶活性的酶裂解使化合物的游离形式释放。本发明化合物的前药包括使用保护基，保护基可在体内除去以释放活性化合物或用于抑制该药的清除。适宜的保护基是本领域技术人员所公知的，包括乙酸酯基团。
还如上文所指出的，根据本发明的化合物可用于制备预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染所引起的疾病的药物。制备此类药物的方法是本领域那些技术人员所公知的，包括制备上述药物组合物的方法。
已发现属于本发明范围内的化合物可与生长因子结合。特别地，已经确定该化合物对aFGF，bFGF和VEGF具有亲合力。因此该化合物在对哺乳动物患者包括人的治疗中可用作抗血管生成剂，抗转移剂和/或抗炎剂。该化合物的用途包括治疗血管生成-依赖性疾病例如与实体肿瘤生长有关的血管生成、增生性视网膜病以及治疗炎性疾病和病症如类风湿性关节炎。该化合物还可激活生长因子并且因此能用于心血管的治疗。
如上文进一步所指出的，本发明的化合物还可用作抗凝血剂或抗血栓形成剂。该化合物因此可用于预防和治疗许多血栓形成性和心血管的疾病，这些疾病中最突出的是深部静脉血栓形成，肺栓塞，血栓性中风，周围动脉血栓形成，不稳定心绞痛和心肌梗塞。由于带电的氨基酸化合物的组合物可以经口服输送，因此该化合物可有吸引力地替代华法林，其是一种广泛使用的具有严重副作用的口服抗凝血剂。
另外已经发现本发明的化合物可抑制病毒感染，因此可用作抗病毒剂治疗或预防多种病毒感染。本发明的化合物特别地适用于治疗或预防由利用HS作为连接物/入口受体的病原体引起的感染[6]，例如，HSV，HIV，登革热病毒，黄热病毒，巨细胞病毒和丙型肝炎病毒。相似地，本发明的化合物还适用于治疗或预防由利用HS作为连接物/入口的非-病毒性微生物病原体引起的感染，例如，疟原虫(疟疾)。最显著的是通过本发明的化合物抑制HSV-1和HSV-2的细胞-至-细胞间的传播。
已经对本发明进行了广泛地描述，将参考本说明书以下部分简短描述的附表给出化合物，它们的合成，以及它们的生物活性的非限制性实例。
一般过程二醇烷基化和脱保护的一般过程将在DMF中的二醇(1当量)逐滴地加入在DMF中的冷却的(0°)，搅拌的预先洗涤(己烷)的NaH(5当量)的混悬液中。一旦添加完成后，继续搅拌(0°→室温，20min)。将混合物冷却(0°，5min)，在持续搅拌状态下(0°→室温，o/n)逐滴地加入卤代烷(2当量)。将混合物再次冷却(0°)，在持续搅拌下(5min)加入MeOH(5mL)。蒸发溶剂，将残留物进行处理(workup)(EtOAc)，经快速色谱法纯化(TLC)。将残渣共蒸发(2×10mL MeCN)。将在MeOH/MeCN(1∶1)中的粗制混合物和p-TsOH·H2O(50mg)加热回流(1h)。将混合物冷却(室温)，蒸发溶剂前加入Et3N(100μL)。将残留物经快速色谱(EtOAc/己烷)得到二醇。
醇磺化的一般过程将在DMF中的醇与SO3·三甲胺的混合物(每羟基2当量)(60°，o/n)加热。使用MeOH处理冷却的(室温)反应混合物，然后通过加入Na2CO3(10％w/w)使其成碱性(至pH＞10)。将混合物过滤，将滤液蒸发，共蒸发(H2O)。在需要硫酸化产物进行脱酰基的情况下，将粗制产物在水中溶解，加入1M NaOH(每酰基2当量)。当脱保护完成，将产物保存至下一阶段。将在水中的粗制硫酸化材料经过分子排阻色谱。将精制的部分蒸发，共蒸发(H2O)，然后冻干(H2O)得到硫酸化产物。当需要时，冻干后将产物通过离子-交换树脂柱(AG_-50W-X8，Na+形式，1×4cm，去离子水，15mL)以使产物均一地转化为钠盐形式。将收集的溶液蒸发，冻干得到终产物，为无色玻璃状或白色粉末。
分子排阻色谱在Bio-Gel P-25×100cm柱上进行分子排阻色谱(SEC)，0.1MNH4HCO3流速2.8mL/min，收集2.8min时的级分(7.8mL)。通过TLC(炭化)分析该级分碳水化物的含量和/或通过二甲基亚甲蓝试验分析多电(polycharged)种类，然后通过毛细管电泳(CE)分析纯度，将那些认为是不含盐的组分集中并冻干。
在未硫酸化的(undersulfated)副产物或其它盐杂质存在的情况下(通常仅有少量，但经常被检出)，可使用LH20 SEC步骤(2×95cm，去离子水，1.2mL/min，每瓶3.5min)完全去除它们。
二甲基亚甲蓝试验二甲基亚蓝(DMB)试剂是通过将16mg的DMB溶解在1L包含3.04g甘氨酸，2.37g NaCl的去离子水中进行制备。加入0.1M HCl(95ml)调节pH至3.0。在室温下将储备溶液储存于棕色瓶中。(该溶液在此条件下至少3个月内是稳定的)。
向96-孔微量滴定板的每孔中加入10μL的级分溶液。向所使用的每个孔中加入55μL的DMB储备液。从蓝色至粉红色的瞬间颜色变化表明多电种类的存在，例如，硫酸化产物级分。
NIS糖基化的一般过程在加入1.3当量的NIS和1滴TfOH之前，将糖基受体(1当量)，硫糖苷供体(1.1当量)，500mg新近激活的3_分子筛粉末和10mL干燥的DCM在-20°搅拌20min。加入400μL的Et3N之前在-20°持续搅拌直至通过TLC检查反应完成(～1小时)。在硅胶上(真空)蒸发，经快速色谱得到糖基化产物。
Ugi四部分反应的一般过程将酸(1当量)，胺(1当量)，羰基化合物(1当量)和胩(1当量)在MeOH、MeOH-THF(各种比例)或CHCl3中的溶液转入反应瓶中(终浓度0.1-0.5M)。当酸性组分为D-葡糖醛酸时，其以固体加入。在二酸，二胺，二醛或二胩的情况时，其量为0.5当量。将混合物在室温或60℃下搅拌或振摇1小时至5天。通过TLC监控反应过程。将混合物蒸发，将残留物经由快速色谱纯化或在高真空下完全干燥，随后直接完全乙酰化并通过快速色谱纯化。
羟基乙酰化的一般过程将相应的醇溶解在包含DMAP(0.42mol％)的DCM-吡啶(15∶1v/v，0.15M)中。加入醋酸酐(每羟基2当量)，将混合物在室温o/n下搅拌。将混合物倒入冰冻的0.5M HCl中，使用CHCl3进行萃取。分离有机相，使用冷的0.5M HCl(x2)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)。将溶液过滤，蒸发。通过快速色谱(使用己烷-EtOAc进行梯度洗脱)将残留物纯化得到纯化产物。
Zemplén脱乙酰基/脱苄基的一般过程使用在MeOH中的甲醇钠(1.35M，0.2-0.6当量)溶液处理在无水MeOH中醋酸酯/苯甲酯溶液(0.1M)。将混合物在室温下搅拌1-3小时(通过TLC监控)。加入酸性树脂AG_-50W-X8(H+形式)调节pH至6-7，将混合物过滤，使用MeOH淋洗树脂。将合并的滤液和淋洗液在真空中蒸发，彻底干燥得到多元醇产物。
苄基醚通过氢解脱保护的一般程序向在MeOH或EtOH(2mL)中的苄基醚保护的化合物(0.03mmol)的溶液中加入5％的Pd/C或20％的炭载Pd(OH)2(30mg或过量)。将混合物装入miniclave(Büchi AG，Uster/Switzerland)中，在氢气氛下(50psi)搅拌2-10小时。可选地，混合物使用氢气鼓泡1小时，然后在室温1个大气压的氢气下搅拌1-5天。通过TLC监控反应(EtOAc或MeCN-水10∶1)。将混合物过滤，使用MeOH，或EtOH淋洗。蒸发滤液并在高真空下干燥，通过1H NMR进行检查，冷冻干燥，直接用于磺化。
羟基的甲基化将干燥的多元醇在氩气下溶解于无水DMF(0.04M)中，与NaH(在矿物油中60％的混悬液，每羟基1.2当量)在室温下搅拌1小时。加入碘甲烷(每羟基1.2当量)，持续搅拌o/n。加入甲醇后，在二氧化硅上蒸发，通过快速色谱纯化混合物。
Huisgen环加成的一般过程将硫酸化的糖叠氮化物溶解于水中(0.75M)，加入在叔丁醇中的乙炔溶液(0.9M，1当量)。向混合物中加入硫酸铜(II)溶液(在水中0.3M，5mol％)和抗坏血酸钠溶液(1M，在水中，20mol％)。在室温下将混合物在微型混合器上振摇过夜(o/n)，通过柱色谱(二氧化硅1×18cm，使用50∶2∶1，20∶2∶1至10∶2∶1的EtOAc-MeOH-H2O进行梯度洗脱)得到相应的三唑产物。
实施例1PG2038步骤a3，4，6-三-O-乙酰基-2-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
使用95mg(422μmol)NIS使2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯[17](150mg，322μmol)，3，4，6-三-O-乙酰基-2-O-苯甲基-1-硫-β-D-吡喃半乳糖苷甲酯[18](151mg，354μmol)以及200mg的3_分子筛经过一般的NIS糖基化过程。快速色谱(用20∶80至25∶75的EtOAc∶己烷进行梯度洗脱)得到274mg的部分脱乙酰的物质。向混合物中加入10mL的DCM，200μL的醋酸酐，200μL的Et3N和2mg的DMAP，在蒸发前将溶液搅拌1小时，经快速色谱(用25∶75至30∶70的EtOAc∶己烷进行梯度洗脱)得到180mg(66％)标题化合物，为无色玻璃状物。1Hn.m.r.(400MHz，CDCl3)δ7.05-7.35(m，20H，4×Ph)，5.74(d，1H，J1，2＝4.0，H1II)，5.29(dd，1H，J3，4＝3.2，J4，5＝1.2，H4II)，5.23(dd，1H，J2，3＝10.8，H3II)，4.92(d，1H，Jgem＝12.0，PhCH2)，4.85(d，1H，Jgem＝10.8，PhCH2)，4.55-4.69(m，4H，PhCH2)，4.42(AB，1H，Jgem＝12.0，PhCH2)，4.40(AB，1H，PhCH2)，4.32(d，1H，J1，2＝7.6，H1I)，4.10(d t，1H，J5，6＝6.8，H5II)，3.88-3.96(m，H，H5I+H6I)，3.82(dd，1H，Jgem＝11.1，H6II)，3.70-3.76(m，4H，H2×H6I+H2II+H3I)，3.56(s，3H，OMe)，3.5-3.6(m，1H，H4I)，3.45(dd，1H，J2，3＝9.0，H2I)，2.02(s，3H，Ac)，1.93(s，3H，Ac)，1.88(s，3H，Ac)。13C n.m.r.(100MHz，CDCl3)δ170.17，170.06，169.87，138.82，138.20，138.13，137.68，128.33，128.25，128.19，128.04，127.61，127.57，127.49，127.46，127.01，126.39，104.42，97.12，84.49，82.26，74.46，74.27，73.69，73.31，73.28，73.02，69.47，69.17，68.35，66.60，61.62，56.96，20.69，20.63，20.58。
步骤b3，4，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
将Pearlman′s催化剂(20mg)和20μL乙酸加到在10mL甲醇中的90mg(106μmol)的3，4，6-三-O-乙酰基-2-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯的溶液中。应用3次真空净化的氢气氛，将混悬液搅拌3天。过滤后，蒸发，与PhMe共蒸发，将残留物残渣经过快速色谱(用100∶0至100∶3的EtOAc∶MeH进行梯度洗脱)得到47mg(91％)的标题化合物。1Hn.m.r.(400MHz，CD3OD)δ5.39(br d，1H，J3，4＝3.0，H4II)，5.32(d，1H，J1，2＝3.8，H1II)，5.10(dd，1H，J2，3＝10.6，H3II)，4.38(br t，1H，J5，6＝6.8，H5II)，4.20(d，1H，J1，2＝7.8，H1I)，4.09(appd(ABX)，2H，J5，6＝6.5，H6II)，4.00(dd，1H，H2II)，3.92(dd，1H，J5，6A＝1.7，Jgem＝12.2，H6AI)，3.80(dd，1H，J5，6B＝4.8，H6BI)，3.62(dis t，1H，J2，3～3，4＝9.1，H3I)，3.56(部分obs t，1H，J3，4～4，5＝9.3，H4I)，3.53(s，3H，OMe)，3.42(ddd，1H，J4，5＝9.4，H5I)，3.22(dd，1H，J2，3＝9.1，H2I)，2.10(s，3H，AcO)，2.05(s，3H，AcO)，2.00(s，3H，AcO)。
步骤c甲基2-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷，四钠盐(PG2038)将上述的二糖(32.2mg，0.667mmol)，经过常规的磺化和脱乙酰过程得到标题化合物，为白色泡沫状物(4.0mg，7.8％，纯度96％，CE7.18min)。1H NMR(D2O，400MHz)5.473(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.833(d，1H，J1I-2I＝2.8，H1I)，4.60(与水重叠，1H，H3I)，4.551(m，1H，H2I)，4.306(dd，1H，J2II-3II＝10.2，H2II)，4.17-4.06(m，4H，H4I，H5I和H6I)，3.902(d，1H，J3II-4II＝3.6，H4II)，3.867(dd，1H，H3II)，3.616(dd，1H，J6axII-6eqII＝12.0，J5II-6axII＝7.2，H6axII)，3.564(dd，1H，J5II-6eqII＝5.2，H6eqII)，3.363(dd，1H，H5II)，3.343(s，3H，CH3O)。
实施例2PG2046和PG2047步骤a2-叠氮基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖在氩气氛下在活化的分子筛(300mg的3_粉末)存在的情况下将在1，2-DCE(5mL)中的3，4，6-三-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖基-三氯亚氨基乙酸酯(acetimidate)[19](201mg，0.453mmol)和1，6-脱水-2-叠氮基-3-O-苯甲基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖[20](84mg，0.302mmol)的溶液搅拌(室温，30min)。在持续搅拌下(10min)将混合物冷却(-20°)，滴入TBDMSOTf(21μL，0.091mmol)，维持搅拌(-20°，10min)。加入Et3N(100μL)，将混合物过滤并蒸发。将残留物经过加水处理(aqueous workup)(EtOAc)，经快速色谱(10-40％的EtOAc/己烷)得到淡黄色的油状物(130mg)。将残留物共蒸发(2×10mL MeCN)，然后经过Zemplén脱乙酰的一般过程。将产物经过加水处理(aqueous workup)(EtOAc)得到无色的油状物(98mg)。将残留物共蒸发(2×10mL MeCN)。向在1，2-DCE(3mL)中的粗制产物(0.302mmol，最大)与吡啶(2mL)的溶液中加入BzCl(210μL，1.81mmol)，搅拌合并的混合物(室温，o/n)。将混合物冷却(0°)，在蒸发和共蒸发(甲苯)溶剂前，在持续搅拌下(0°→室温，2min)加入MeOH(2mL)。将残留物经过加水处理(aqueous workup)(EtOAc)，经快速色谱(10-30％的EtOAc/己烷)得到两种化合物。
首先，标题化合物为无色泡沫状物(101mg，46％，3个步骤)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.11(s，1H；H-2I)，3.41(dd，1H，J1，23.7，J2，310.7Hz；H-6I)，3.61(s，1H；H-3I)，3.39(s，1H；H-4I)，4.05(d，1H，J6，67.3Hz；H-6I)，4.41-4.49(m，2H；H-6II)，4.55，4.68(AB四重峰，JA，B11.9Hz；CH2Ph)，4.79(ddd，1H，J4，510.3，J5，62.9，5.9Hz；H-5II)，4.91(br d，1H，J5，65.5Hz；H-5I)，5.08(d，1H，J1，23.6Hz；H-1II)，5.51(dd，1H，J3，49.5，J4，510.2Hz，H-4II)，5.60(s，1H，；H-1I)，6.10(dd，1H，J2，310.7，J3，49.3Hz；H-3II)，7.29-7.55，7.89-8.03(2m，20H；ArH)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ58.74，61.47，63.30，64.84，69.19，69.49，70.52，73.17，74.62，78.12，79.57(11C；C-2I-6I，C2II-6II，CH2Ph)，100.71，101.16(2C；C-1I，C-1II)，128.10，128.42，128.57，128.61，128.64，128.81，128.88，129.15，129.86，129.90，130.06，130.17，133.43，133.53，133.74，137.48(Ar)，165.61，165.62，166.26(3C；C＝O)。
其次，2-叠氮基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖，为无色油状物(27mg，12％，3个步骤)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.19(s，1H；H-2I)，3.74(dd，1H，J5，66.2，J6，67.1Hz；H-6I)，3.79-3.88(m，2H；H-2II，H-3I)，3.88(ddd，J4，59.2，J5，63.1，4.7Hz；H-5II)，3.95(br s，1H；H-4I)，4.10(d，1H，J6，67.3Hz；H-6I)，4.34(dd，1H；J5，64.9，J6，612.2Hz；H-6II)，4.50(dd，1H，J5，63.1，J6，612.3Hz，H-6II)，4.52，4.59(AB四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，4.65(d，1H，J1，27.9Hz；H-1II)，4.69(br d，1H，J5，65.5Hz；H-5I)，5.44(t，1H，J2，3＝3，49.7Hz；H-3II)，5.49(br s，1H；H-1I)，5.51(t，1H，J3，4＝4，59.6Hz；H-4II)，7.23-7.50，7.84-7.96(2m，20H；ArH)。
步骤b2-脱氧-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-脱氧-2-磺酰胺基-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖，二钠盐(PG2046)在氩气下将在2∶1MeOH∶EtOAc(7mL)中的2-叠氮基-3，4，6-三-O-苯甲酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷(127μmol)，Pearlman′s催化剂(11mg)，和甲酸铵(300mg)的混合物加热到65°，直到TLC检查反应完。将混合物冷却至室温，过滤(0.2μm)和蒸发。通过SPE(300mg C18 Waters cartridge，用5∶95的MeOH∶H2O平衡，用5∶95至100∶0的MeOH∶H2O进行梯度洗脱)将粗制的胺纯化得到53mg二胺(58％)。没有进行进一步纯化，向二胺中加入DMF(5mL)，SO3·Me3N(41mg，295μmol)和NaHCO3(40mg，475μmol)中。将混合物加热到60°1小时，然后冷却至室温，用冰和Na2CO3(饱和水溶液)使混合物淬灭。将混悬液在-18°o/n贮存，将样品过滤。将滤液蒸发。加入水(1mL)和NaOH(250μL，1M)，将溶液搅拌过夜然后直接装载到SEC柱上(一般过程)得到22mg标题化合物(三个步骤28％)。1H NMR(400MHz，D2O，溶剂抑制)δ7.35-7.21(m，5H，ArH)，5.43(br s，1H，H1I)，5.18(d，1H，J1-2＝3.6，HIII)，4.72-4.691(m，1H，H5I)，4.54-4.521(m，2H，ArCH2)，4.05(d，1H，Jgem＝7.9，H6AI)，3.85(br s，1H，H3I)，3.76-3.58(m，5H)，3.51(dd，1H，J2-3＝10.4，J3-4＝9.1，H3II)，3.34(t，1H，J3-4～4-5＝9.2，H4II)，3.23(brs，1H，H2I)，3.12(dd，1H，H2II)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ133.3，124.8，124.6，124.4，96.9，95.1，72.7，71.5，70.8，68.3，68.2，67.2，66.0，61.0，56.6，54.0，49.8。
步骤c2-脱氧-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-脱氧-2-磺酰胺基-β-D-吡喃葡萄糖苷，二钠盐(PG2047)将在纯水中的2-脱氧-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脱水-2-脱氧-2-磺酰胺基-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷，二钠盐(12.9mg，20.8μmol)和Pearlman′s催化剂(5mg)的混合物(2ml)于50psi H2下过夜。将混合物过滤，冻干得到10.7mg(98％)的标题化合物。1H NMR(400MHz，D2O)δ5.47(br s，1H，H1I)，5.20(d，1H，J1-2＝3.5，H1II)，4.68(br d，1H，J5-4＝5.5，H5)，4.07(d，1H，Jgem＝7.6，H6AI)，3.98(br s，1H，H3I)，3.75-3.64(m，4H)，3.52(t，1H，J2-3～3-4＝9.3，H3II)，3.34(t，1H，J3-4～4-5＝9.3，H4II)，3.13(obs.dd2，1H，H2II)，3.11(br s，1H，H2I)。
实施例3PG2039和PG2037步骤a3，4-二-O-乙酰基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯使用181mg(803μmol，1.3当量)的NIS，使2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(287mg；618μmol)，302mg(618μmol)的3，4-二-O-乙酰基-2，6-O-联苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯[21]和700mg的3_分子筛经过一般的NIS糖基化过程。经快速色谱(2.5×20cm，用1∶5至1∶3的EtOAc∶己烷进行梯度洗脱)得到标题化合物，为无色树胶状物(176mg，32％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，400MHz)7.40-7.12(m，25H，Ph)，5.818(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，5.481(d，1H，J4II-3II＝3.2，H4II)，5.309(dd，1H，J3II-2II＝10.8，J3II-4II＝3.2，H3II)，4.980(d，1H，Jgem＝11.6，a-PhCH2)，4.904(d，1H，Jgem＝11.2，b-PhCH2)，4.748(d，1H，Jgem＝11.6，a-PhCH2)，4.67-4.57(m，3H，b-PhCH2和c-PhCH2)，4.479(d，1H，Jgem＝12.8，d-PhCH2)，4.443(d，1H，Jgem＝12.8，d-PhCH2)，4.415(d，1H，Jgem＝11.6，e-PhCH2)，4.360(d，1H，J1I-2I＝8.0，H1I)，4.201(d，1H，Jgem＝12.6，e-PhCH2)，4.153(t，1H，J5II-6axII＝7.2，J5II-6eqII＝6.0，H5II)，4.072(t，1H，J4I-3I＝9.0，J4I-5I＝9.0，H4I)，3.858(dd，1H，J2II-3II＝10.8，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.82-3.76(m，3H，H3I，H6axI和H6eqI)，3.597(s，3H，OMe)，3.62-3.57(m，1H，H5I)，3.507(t，1H，J2I-3I＝8.4，J2I-1I＝8.0，H2I)，3.347(dd，1H，J6eqII-6axII＝9.2，J6eqII-5II＝6.0，H6eqII)，3.291(dd，1H，J6axII-6eqII＝9.2，J6axII-5II＝7.2，H6axII)，1.958(s，3H，OAc)，1.930(s，3H，OAc)。13C NMR(100MHz，CDCl3，100MHz)169.94(CO)，169.78(CO)，138.88，138.35，138.24，137.73和137.64(5x ipso-Ph)，128.25，128.22，128.21，128.15，128.12，128.00，127.80，127.57，127.52，127.46，127.41，127.37，126.93，126.37，104.40，97.16，84.63，82.31，74.42，74.30，73.70，73.25，73.16，73.14，72.98，69.73，69.07，68.89，67.64，67.50，56.86，20.71，20.55。
步骤b3，4-二-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
根据标准的脱苄基过程，将3，4-二-O-乙酰基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(88mg，98.8μmol)脱保护得到标题化合物，为无色粉末(42mg，97％)。1H NMR(D2O，400MHz)5.394(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，5.294(d，1H，J4II-3II＝3.2，H4II)，4.953(dd，1H，J3II-2II＝10.4，J3II-4II＝3.2，H3II)，4.229(d，1H，J1I-2I＝8.4，H1I)，4.080(t，1H，J5II-6axII＝6.4，J5II-6eqII＝6.0，H5II)，3.965(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.803(dd，1H，J6eqI-6eqI＝12.0，J6eqI-5I＝1.6，H6eqI)，3.67-3.59(m，2H，H6axI和H3I)，3.54-3.40(m，4H，H4I，H5I和H6II)，3.407(s，3H，OMe)，3.134(dd，1H，J2I-3I＝9.2，J2I-1I＝8.4，H2I)，2.012(s，3H，OAc)，1.909(s，3H，OAc)。13C NMR(D2O，100MHz)173.57，173.47，103.20，99.71，77.12，76.30，74.57，73.09，70.89，69.94，69.04，66.45，60.82，60.18，57.31，20.34，20.09。
步骤c2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯，五钠盐(PG2039)根据标准的磺化/脱乙酰过程，将42mg(95.4μmol)的3，4-二-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯转化为标题化合物，为白色粉末(14.8mg，18％，CE6.12min)。1H NMR(D2O，400MHz)5.404(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.756(d，1H，J1I-2I＝3.6，H1II)，4.60(与水重叠，1H，H3I)，4.448(dd，1H，J2I-3I＝3.2，H2I)，4.296(dd，1H，J2II-3II＝10.0，H2II)，4.23-4.00(m，7H，H6I，H5I，H6II，H4I和H5II)，3.958(dd，1H，J311-4II＝3.6，J4II-5II＝0.8，H4II)，3.930(dd，1H，H3II)，3.367(s，3H，CH3O)。
步骤d2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯根据标准的脱乙酰和甲基化过程，将3，4-二-O-乙酰基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(72mg，80.8μmol)转化为标题化合物，为无色树胶状物(62.7mg，93％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.35-7.08(m，25H，Ph)，5.717(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.856(d，1H，Jgem＝11.2，a-PhCH2)，4.843(d，1H，Jgem＝10.8，b-PhCH2)，4.695(d，2H，Jgem＝12.0，a-PhCH2和c-PhCH2)，4.631(d，1H，Jgem＝12.4，d-PhCH2)，4.571(d，1H，Jgem＝10.8，b-PhCH2)，4.500(d，1H，Jgem＝12.4，d-PhCH2)，4.450(d，1H，Jgem＝11.6，c-PhCH2)，4.433(d，1H，Jgem＝11.2，e-PhCH2)，4.359(d，1H，Jgem＝11.2，e-PhCH2)，4.303(d，1H，JII-2I＝7.6，H1I)，3.949(t，1H，J4I-3I＝9.0，J4I-5I＝9.0，H4I)，3.871(dd，1H，J5II-6axII＝7.2，J5II-6eqII＝6.4，H5II)，3.791(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.77-3.68(m，4H，H4II，H3I，H6axI和H6eqI))，3.59-3.53(m，2H，H5I和H6II)，3.551(s，3H，OMe)，3.51-3.40(m，3H，H3II，H6II和H2I)，3.492(s，3H，OMe)，3.433(s，3H，OMe)。
步骤e3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯根据标准的脱苄基过程，将2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(62.7mg，75.1μmol)脱保护得到标题化合物，为无色树胶状物(28mg，97％)。1H NMR(D2O，400MHz)5.232(d，1H，J1II-2II＝4.4，H1II)，4.217(d，1H，J1I-2I＝8.0，H1I)，3.83-3.75(m，3H，H4II，H5II和H6I)，3.682(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝4.4，H2II)，3.64-3.52(m，4H，H6I，H3II和H6II)，3.47-3.38(m，3H，H4I，H5I和H3II)，3.400(s，3H，OMe)，3.340(s，6H，2×OMe)，3.117(dd，1H，J2I-3I＝9.6，J2I-1I＝8.0，H2I)。13C NMR(D2O，100MHz)103.20，99.64，79.35，76.92，76.34，75.35，74.65，73.06，72.03，68.00，61.02，60.89，60.86，57.30，56.94。
步骤f3，4-二-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯，五钠盐(PG2037)根据标准的磺化过程，由3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(28mg，72.8μmol)得到标题化合物(3.2mg，4.9％)。1H NMR(400MHz，D2O)5.357(d，1H，J1II-2II＝3.2，H1II)，4.766(d，1H，J1I-2I＝3.6，H1I)，4.60(与水重叠，1H，H3I)，4.455(dd，1H，J2I-3I＝2.8，H2I)，4.304(dd，1H，J2II-3II＝10.0，H2II)，4.22-3.99(m，5H，H5I，H6I，H4I和H5II)，4.002(d，2H，J5II-6II＝6.8，H6II)，3.886(d，1H，J3II-4II＝3.2，H4II)，3.667(dd，1H，H3II)，3.398(s，3H，CH3O)，3.367(s，3H，CH3O)，3.356(s，3H，CH3O)。
实施例4PG2053和PG20424-O-烯丙基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二钠盐(PG 2053)。
由2，3-O-异亚丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯[22]通过一般的烷基化(与烯丙基溴)和脱保护过程，随后通过一般的磺化过程得到标题化合物，为无色粉末。CE tm＝10.48min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.19(d，3H，J5，66.4Hz；H-6)；3.26(s，3H；OMe)；3.29-3.40(m，1H；H-4)，3.59-3.67(m，1H；H-5)，4.00-4.05，4.18-4.22(2m，2H，OCH2)，4.41-4.42(m，1H；H-3)，4.63-4.64(m，2H；H-2)，4.83(s，1H；H-1)，5.07-5.21(m，2H；＝CH2)，5.76-5.88(m，1H；＝CH)。
当使用减少量(1当量)的SO3·三甲胺时，可专门获得4-O-烯丙基-2-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，钠盐(PG 2042)。CE tm＞25.00min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.19(d，3H，J5，66.4Hz；H-6)，3.16(t，1H，J3，43.1，J4，59.7Hz；H-4)，3.25(s，3H；OMe)，3.54-3.58(m，1H；H-5)，3.76(dd，1H，J2，39.7Hz；H-3)，4.03-4.18(m，2H；OCH2)，4.34-4.35(m，1H；H-2)，4.80(s，1H；H-1)，5.08-5.22(m，2H；＝CH2)，5.78-5.88(m，1H；＝CH)。
实施例5PG20244-O-苯甲基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二钠盐(PG2024)由2，3-O-异亚丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯通过一般的烷基化(与苄基溴)和脱保护过程，随后通过一般的磺化过程获得标题化合物，为无色粉末。CE tm＝10.82min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.00(d，3H，J5，66.8Hz；H-6)，3.23(s，3H；OMe)；3.78-3.80(m，1H；H-4)，3.88-3.94(m，1H；H-5)，4.41-4.43(m，1H；H-2)，4.52-4.56(m，2H；H-3)，4.54，4.78，(AB四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，4.90(dd，1H，J1，21.2Hz；H-1)，7.20-7.36(m，5H；ArH)。
实施例6PG2054步骤a4-O-苯甲酰基-α-L-鼠李糖苷甲酯将在DCM(10mL)中的2，3-O-异亚丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯(200mg，920μmol)，苯甲酰氯(193mg，1.38mmol)和Et3N(364μL，2.76mmol)的溶液搅拌过夜。用DCM(50mL)稀释所得混悬液(Et3N·HCl沉淀物)，用NaHCO3(饱和水溶液)，水，然后用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。将残留物溶解在50mL的1∶1的MeCN∶H2O中，加入p-TsOH(10mg)。将所得溶液搅拌直到反应完成(TLC，～4小时)，蒸发，经过快速色谱(1∶1的EtOAc∶己烷)得到165mg(经过两个步骤，64％)的标题化合物，为无色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.03-8.00(m，2H，Hortho)，7.55(tt，1H，JHp-Hm＝7.5，JHp-Ho＝1.3，Hpara)，7.43-7.39(m，2H，Hmeta)，5.09(dist，1H，J4-3～4-5＝9.3，H4)，4.73(br s，1H，H1)，4.01-3.97(m，2H，H2+H3)，3.91(dq，1H，J4-5＝9.7，J5，6＝6.4，H5)，3.53-3.46(br s，2H，OH)，3.38(s，3H，OMe)，1.25(d，3H，H6)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ167.1，133.3，129.8，129.5，128.3，100.6，75.7，70.8，70.1，65.7，55.0，17.4。
步骤b4-O-苯甲酰基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二钠盐(PG2054)经由4-O-苯甲酰基-α-L-鼠李糖苷甲酯通过一般的磺化过程获得标题化合物，为无色粉末。CE tm＝11.14min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.14(d，3H，J5，66.3Hz；H-6)，3.33(s，3H；OMe)，3.99-4.07(m，1H；H-5)，4.66-4.73(m，2H；H-2，-3)，4.95(d，1H，J1，21.4Hz；H-1)，5.04(t，1H，J3，4＝4，59.6Hz；H-4)，7.35-7.41，7.53-7.55，7.92-7.93(3m，5H；Ph)。
实施例7PG2041步骤a4，6-O-苯亚甲基-1，2-二氢-D-葡萄烯糖。
在H2(1个大气压)下将在MeOH(15mL)中的三-O-乙酰基-D-葡萄烯糖(1.7g，6.25mmol)，AcOH(50μL)和Pd(OH)2/C(100mg)剧烈搅拌过夜。将混合物过滤，蒸发溶剂，然后将残留物经过快速色谱(10-50％的EtOAc/己烷)得到三-O-乙酰基-1，2-二氢-D-葡萄烯糖，为无色油状物。将残留物共蒸发(2×10mL MeCN)，然后经过Zemplén脱乙酰基的一般过程得到1，2-二氢-D-葡萄烯糖，为无色油状物(825mg，89％)。将残留物共蒸发(2×10mL MeCN)。
向在DMF(5mL)中的1，2-二氢-D-葡萄烯糖(495mg，3.34mmol)和α，α-二甲氧基甲苯(753μL，5.01mmol)的溶液中加入p-TsOH.H2O(50mg)，搅拌合并的混合物(60°，1h)。加入Et3N(100μL)，将溶剂蒸发。将残留物经过快速色谱(0-5％MeOH/CHCl3)得到标题化合物，为无色针状物(503mg，64％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72-2.01(m，2H；H-2)，3.27-3.33(m，1H；H-5)，3.41(dd，1H，J3，48.8，J5，69.1Hz；H-4)，3.49-3.56(m，1H；H-3)，3.67(t，1H，J5，6＝6，610.3Hz；H-6)，3.81-3.87，3.93-3.98(2m，2H；H-1)，4.25(dd，1H；J5，64.9Hz；H-6)，5，53(s，1H；CHPh)，7.23-7.52(m，5H，CHPh)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ33.47(C-2)；66.46，69.07，69.64，71.32(4C；C-1，-4，-5，-6)，84.14，(C-3)，102.16(CHPh)，126.43，128.55，129.34，137.50(4C；Ph)。
步骤b3-O-苯甲基-4，6-二-O-磺基-1，2-二氢-D-葡萄烯糖，二钠盐(PG2041)。
使4，6-O-苯亚甲基-1，2-二氢-D-葡萄烯糖经过烷基化(苄基溴)，脱保护和磺化的一般过程得到标题化合物，为无色粉末。CEtm＝15.40min。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.48-1.53，1.97-2.03(2m，2H；H-2)，3.30-3.71(m，1H；H-1)，3.52-3.57(m，1H；H-5)，3.60-3.66(m，1H；H-3)，3.78-3.83(m，1H；H-1)，3.97(dd，1H，J5，68.0，J6，611.4Hz；H-6)，3.98(t，1H，J3，4＝4，58.9Hz；H-4)，4.34(dd，1H，J5，62.3Hz；H-6)，4.52-4.67(m，2H；CH2Ph，7.21-7.36(m，5H；Ph)。
实施例8PG2030步骤a1，6-脱水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖将对甲苯磺酰氯(790mg，4.14mmol)加到冷却(0°)的在吡啶(10ml)中的3-O-甲基-D-吡喃葡萄糖(804mg，4.14mmol)的混悬液中，搅拌反应混合物(0°→室温，1.5小时)。然后加入Ac2O(1.5mL，15mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(50mg)并持续搅拌(室温，4小时)。然后将混合物冷却(0°)，加入MeOH(3mL)，在溶剂蒸发以前继续搅拌(10min)。将残留的油状物溶解(EtOAc)，经过处理得到甲苯磺酸酯，为浅黄色油状物(1.93g)。将在EtOH(20mL)中的粗制甲苯磺酸酯(1.93g)和NaOH(1.0M，20mL，20mmol)的混合物加热(80°，1小时)。用乙酸中和混合物，将溶剂蒸发，共蒸发(甲苯)。用吡啶(10mL)，Ac2O(5mL)和N，N二甲基氨基吡啶(50mg)处理粗制的残留物，搅拌合并的混合物(室温，o/n)。用冰水(10mL)处理混合物并在经过处理(EtOAc)前持续搅拌(室温，3小时)。使残留的油状物经过快速色谱(20-50％的EtOAc/己烷)得到无法分离的2，4-二-O-乙酰基-1，6-脱水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(a)和1，2，4-三-O-乙酰基-3-O-甲基-6-O-甲苯磺酰基-α-D-吡喃葡萄糖(b)的混合物(比例为3∶1)(466mg)，为浅黄色油状物。通过观察1H NMR波谱上的H-1和3-OMe信号的积分来计算该比例。部分1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.32(s，3H；OMe b)，3.45(s，3H；OMe a)；5.22(br s，1H；H-1b)，5.42(brs，1H；H-1a)。使两种化合物的混合物(456mg)经过Zemplén脱乙酰基的一般方法，并使残留物经过快速色谱(0-5％MeOH/EtOAc)得到标题化合物，为无色油状物(162mg，33％，3个步骤)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.27-3.30(m，1H；H-3)，3.38(s，3H；OMe)，3.57-3.59(m，1H；H-2)，3.63-3.65(m，1H；H-4)，3.70(dd，1H，J5，6＝5.6，J6，6＝7.2Hz；H-6)，4.06(d，1H，J6，6＝7.2Hz；H-6)，4.48-4.51(m，1H；H-5)，4.39(br s，1H；H-1)。
步骤b1，6-脱水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖。
将在甲苯(18mL)中的1，6-脱水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(155mg，0.88mmol)和Bu2SnO(241mg，0.97mmol)的混合物加热回流(共沸除去水)，直到溶液为原来体积的一半。将混合物冷却(80°)，加入BnBr(104μL，0.88mmol)和Bu4NBr(567mg，1.76mmol)并持续搅拌(o/n)。在溶剂蒸发前持续搅拌(10min)下用MeOH(2mL)和H2O(1mL)处理混合物。使残余物经过处理(EtOAc)和快速色谱(20-60％的EtOAc/己烷)得到两种化合物。
首先，产生的标题化合物为无色油状物(94mg，40％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.58(d，1H，J2，OH6.4Hz；OH)，3.32-3.43(m，5H；H-3，H-4，OMe)，3.52-3.57(m，1H；H-2)，3.68-3.72，4.01-4.04(2m，2H；H-6)，4.55-4.58(m，1H；H-5)，4.64(s，2H；CH2Ph)，5.39-5.40(m，1H；H-1)，7.28-7.36(m，5H；ArH)。
其次，产生的1，6-脱水-2-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖为无色油状物(91mg，39％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.90(brs，1H；OH)，3.31-3.34(m，4H；H-2，OMe)，3.36-3.38(m，1H；H-3)，3.58(br s，1H；H-4)；3.68(dd，1H；J5，66.0Hz，J6，67.2Hz；H-6)，4.08(dd，1H，J5，60.8Hz，J6，67.2Hz；H-6)，4.47-4.49(m，1H；H-5)，4.56，4.62(AB 四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，5.40-5.41(m，1H；H-1)，7.26-7.36(m，5H；ArH)。
步骤c1，6-脱水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-2-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖，钠盐(PG2030)根据一般过程，将1，6-脱水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(84mg，0.32mmol)磺化，在SEC之前经过快速色谱(50/2/1→10/2/1的EtOAc/MeOH/H2O)得到标题化合物，为淡黄色粉末(70mg，60％)；CE tm＝5.62min；1H NMR(400MHz，D2O)δ3.19(s，3H；OCH3)；3.43-3.45(m，1H；H-4)，3.52-3.53(m，1H；H-3)，3.57(dd，1H，J5，6＝5.9Hz，J6，6＝7.8Hz；H-6)，3.82(dd，1H，J5，6＝1.1Hz，J6，6＝7.8Hz；H-6)，3.97-3.99(m，1H；H-5)，4.59-4.61(m，3H；H-2，CH2Ph)，5.41(br s，1H；H-1)，7.22-7.34(m，5H；ArH)。
实施例9PG2012和PG2013步骤aN-苯甲基-N-(环己基乙酰氨基)-1，2，3，4-四-O-乙酰基-D-葡糖醛酰胺根据Ugi反应的一般过程，将D-葡萄糖醛酸(0.950g，4.89mmol)，以及以下三种试剂的溶液苄胺(在MeOH中2M，2.45mL，4.89mmol)，甲醛(在MeOH中2M，2.45mL，4.89mmol)和环己基胩(在MeOH中1M，4.89mL，4.89mmol)装入反应器中，在室温搅拌混合物19小时。减压除去挥发物，在高真空下干燥得到N-苯甲基-N-(环己基乙酰氨基)-D-葡糖醛酰胺，为黄色泡沫状物。
根据乙酰化的一般过程，将上述粗制Ugi产物全乙酰化，在经过快速色谱(用2∶1至1∶1的己烷-EtOAc进行梯度洗脱)后得到标题化合物，为浅黄色泡沫状物，1.929g，66％(两个步骤，Rf＝0.37，1∶1的己烷-EtOAc)。由于存在端基异构体和旋转异构体，1H NMR(CDCl3，400MHz)非常复杂。在将温度升到55℃后，波谱也没有简化。但是，100℃在吡啶-d6，各组旋转异构体在某种程度上融合成为更为简化的结构，因此清楚地观察到两种端基异构体(α∶β比例＝69∶31)。1HNMR(CDCl3，400MHz，25℃)7.41-7.14(m，5H，Ph)，6.337(d，0.39H，J＝3.6)，6.300(d，0.29H，J＝3.6)，5.969(br d，0.52H，J＝8)，5.823(brd，0.09H，J＝8.4)，5.66-5.41(m，2.25H)，5.28-5.09(m，1.3H)，4.92-4.58(m，2.25H)，4.411(d，J＝10)和4.395(d，J＝14，0.55H)，4.271(d，0.11H，J＝9.6)，4.219(d，0.09H，J＝17.2)，4.125(d，0.17H，J＝14)，4.098(d，0.17H，J＝14.4)，3.994(d，J＝15.2)和3.963(d，J＝14.8，0.89H)，3.82-3.59(m，2.04H)，2.190，2.111，2.038，2.033，2.025，2.023，2.016，2.014，2.008，1.998，1.983，1.944和1.927(全部为单峰，12H，Ac)，1.89-1.55(m，5H，环己基-CH2)，1.41-0.83(m，5H，环己基-CH2)。1H NMR(CDCl3，400MHz，55℃)7.38-7.16(m，5H，Ph)，6.336(d，J＝3.2，)和6.153(d，J＝3.2，0.7H)，5.939(br d，0.6H，J＝6.8)，5.721(br d，0.2H，J＝7.2)，5.65-5.55(m，1.3H)，5.52-5.41(m，1H，)，5.28-5.10(m，1.4H)，4.85-4.58(m，2.4H)，4.48-4.40(m，0.6H)，4.318(d，0.1H，J＝9.2)，4.205(d，0.1H，J＝17.6)，4.02-3.93(m，0.9H)，3.84-3.62(m，2.2H)，2.179，2.090，2.021，2.012，2.001，1.989，1.983，1.975，1.968，1.959和1.935(全部为单峰，12H，Ac)，1.88-1.56(m，5H，环己基-CH2)，1.42-0.88(m，5H，环己基-CH2)。1H NMR(吡啶-d6，400MHz，δ7.22，100℃)只提供了典型的糖质子；剩余的信号(除了乙酸酯单峰外)复杂并且表现为宽块(broad lumps)。α-端基异构体，6.672(d，J＝3.6，glu-H1)，5.456(dd，J＝9.6，3.6，glu-H2)；β-端基异构体，6.206(d，J＝8.0，glu-H1)，5.741(t，J＝9.2，glu-H4或H5)，5.515(dd，J＝8.8，8.0，glu-H2)。
步骤bN-苯甲基-N-(环己基乙酰氨基)-1，2，3，4-四-O-磺基-α-D-葡糖醛酰胺，四钠盐(PG2012)和N-苯甲基-(环己基乙酰氨基)-1，2，3-三-O-磺基-α-D-葡糖醛酰胺，三钠盐(PG2013)根据脱乙酰的一般过程，将上述的四乙酸酯(0.441g，0.747mmol)脱乙酰基得到N-苯甲基-N-(环己基乙酰氨基)-D-葡糖醛酰胺，为浅黄色玻璃状物(0.316g，100％)。
根据磺化的一般过程，将上述的四醇(0.257g，0.608mmol)磺化(使用三氧化硫吡啶复合物，60℃，19小时)。将残留物与甲苯共蒸发，通过快速色谱[2.5×20cm，用EtOAc，MeCN，MeCN-Et3N(10∶1)，MeCN-Et3N-H2O(110∶2∶11)洗脱]进行纯化。根据TLC和CE将级分分为两个部分。将极性较小的部分通过快速色谱，LH20(x2)和离子交换色谱再次纯化，冻干后得到PG2013三硫酸盐，为白色松散粉末(19.3mg，4.4％)。1H NMR(D2O，400MHz)两种旋转异构体比例为56∶44。主要的旋转异构体，δ7.36-7.11(m，5H，Ph)，5.946(d，1H，J＝3.2，H1)，4.894(d，1H，J＝9.6，H5)，4.748(d，1H，J＝16，a-CH2)，4.685(d，1H，J＝16，a-CH2)，4.502(t，1H，J＝10.4，9.6，H3)，4.306(dd，1H，J＝9.6，3.6，H2)，4.005(t，1H，J＝9.6，8.8，H4)，3.869(s，2H，b-CH2)，3.42-3.32(m，1H，环己基-CHN)，1.64-1.36(m，5H，环己基-CH2)，1.20-0.92(m，5H，环己基-CH2)；次要的旋转异构体，7.36-7.11(m，5H，Ph)，5.905(d，1H，J＝3.2，H1)，4.578(d，1H，J＝10，H5)，4.523(s，2H，c-CH2)，4.478(t，1H，J＝10.4，9.6，H3)，4.321(d，1H，J＝17.6，d-CH2)，4.281(dd，1H，J＝9.6，3.2，H2)，4.039(t，1H，J＝9.6，9.2，H4)，3.900(d，1H，J＝17.6，d-CH2)，3.42-3.32(m，1H，环己基-CHN)，1.64-1.36(m，5H，环己基-CH2)，1.20-0.92(m，5H，环己基-CH2)。13C NMR(D2O，100MHz，没有参照)由于有两种旋转异构体各信号折叠(double-up)，169.96(酰胺-CON)，169.75(酰胺-CON)，168.91(酰胺-CON)，168.85(酰胺-CON)，135.45(ipso-Ph)，135.20(ipso-Ph)，129.16，129.07，128.47，128.32，128.20和128.13(间-，邻-和对-Ph)，95.67和95.65(glu-C1)，77.84和77.75(glu-C3)，73.76和73.71(glu-C2)，70.66和70.18(glu-C4)，69.23和68.70(glu-C5)，52.87(a-CH2)，51.12(c-CH2)，50.32(d-CH2)，50.02(b-CH2)，49.25和49.00(环己基-CHN)，31.89和31.86，25.08和25.05，24.47和24.38(环己基-CH2)。ES-LRMS(+ve，m/z)C21H27N2Na3O16S3required 728.02，found751(M+Na+)，729(M+H+)；ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C21H27N2Na4O16S3required 751.0113，found 750.1087；M+H+，C21H28N2Na3O16S3required729.0294，found 729.0242。
将极性部分通过LH20柱(x2)和离子交换柱纯化，冻干后得到PG2012四硫酸盐，为灰白色粉末(7.6mg，1.5％)。1H NMR(D2O，400MHz)两种旋转异构体比例为70∶30。主要的旋转异构体，δ7.34-7.16(m，5H，Ph)，5.954(d，1H，J＝3.6，H1)，5.235(d，1H，J＝9.6，H5)，4.904(d，1H，J＝15.6，a-CH2)，4.67-4.57(与水重叠，1H，H3)，4.536(t，1H，J＝9.6，8.8，H4)，4.466(d，1H，J＝15.6，a-CH2)，4.394(dd，1H，J＝9.8，3.4，H2)，3.927(d，1H，J＝16.8，b-CH2)，3.749(d，1H，J＝16.8，b-CH2)，3.30-3.20(m，1H，环己基-CHN)，1.65-1.35(m，5H，环己基-CH2)，1.18-0.92(m，5H，环己基-CH2)；次要的旋转异构体，7.34-7.16(m，5H，Ph)，5.912(d，1H，J＝3.4，H1)，4.77-4.72(m，2H，H5和H3或H4)，4.689(d，1H，J＝15.2，c-CH2)，4.67-4.56(与水重叠，1H，H4或H3)，4.373(dd，1H，J＝9.8，3.4，H2)，4.256(d，1H，J＝18.4，d-CH2)，4.215(d，1H，J＝15.2，c-CH2)，3.936(d，1H，J＝18.4，d-CH2)，3.36-3.26(m，1H，环己基-CHN)，1.65-1.35(m，5H，环己基-CH2)，1.18-0.92(m，5H，环己基-CH2)。13C NMR(D2O，100MHz，没有参照)主要的旋转异构体，172.35(酰胺-CON)，171.69(酰胺-CON)，137.22(ipso-Ph)，131.71和131.58(间-和邻-Ph)，131.11(对-Ph)，97.68(glu-C1)，78.08(glu-C4)，77.60(glu-C3)，76.43(glu-C2)，70.10(glu-C5)，55.81(a-CH2)，53.17(b-CH2)，51.77(环己基-CHN)，34.17(环己基-CH2)，27.56(环己基-CH2)，27.13(环己基-CH2)；次要的旋转异构体(只显示了典型的峰)，97.65(glu-C1)，78.22(glu-C4)，77.77(glu-C3)，76.33(glu-C2)，71.01(glu-C5)，53.26(d-CH2)，53.79(c-CH2)，52.10(环己基-CHN)，34.28(环己基-CH2)，27.52(环己基-CH2)，27.08(环己基-CH2)。ES-MS(+ve，m/z)C21H26N2Na4O19S4required 829.96，found 853(M+Na+)，831(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C21H26N2Na5O19S4required852.9501，found 852.9334；M+H+，C21H27N2Na4O19S4required 830.9682，found 830.9635。
实施例10PG2064步骤a2-(N-乙酰基-N-环己基)氨基-N-(甲基2，3，4-三-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖-6-基)乙酰胺根据Ugi反应的一般过程，将以下四种试剂的溶液乙酸(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，环己胺(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4-三-O-苯甲基-6-脱氧-6-异氰基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(在CHCl3中0.721M，150μL，108μmol)装入4mL样品瓶中，在60℃将混合物搅拌19小时。减压下除去挥发物并且通过快速色谱进行纯化(用4∶1至1∶4的己烷-EtOAc进行梯度洗脱)得到标题化合物，为无色树胶状物，42mg，60％(Rf＝0.49，EtOAc)。1H NMR(CDCl3，400MHz)两种旋转异构体比例为72∶28。δ7.38-7.26(m，15H，3×C6H5)，6.933(t，72％×1H，J＝4.4，主要旋转异构体的NH)，6.357(t，28％×1H，J＝5.8，主要旋转异构体的NH)，4.91-4.41(m，7H，糖-H1和3×PhCH2)，4.04-3.42(m，9H，糖-H2-6，NCH2CO和环己基-CH)，3.305(s，72％×3H，主要旋转异构体的CH3O)，3.266(s，28％×3H，次要旋转异构体的CH3O)，2.067(s，72％×3H，主要旋转异构体的CH3O)，2.012(s，28％×3H，主要旋转异构体的CH3O)，1.85-1.00(m，10H，环己基-CH2)。
步骤b2-(N-乙酰基-N-环己基)氨基-N-(甲基6-脱氧-2，3，4-三-O-磺基-α-D-吡喃甘露糖-6-基)乙酰胺，三钠盐(PG2064)根据苄基醚脱保护的一般过程，在50psi的氢气气氛下将在MeOH(2mL)中的上述三苄基醚(42mg，0.065mmol)，20％活性炭载钯(22mg)的混合物搅拌10小时。经过一般处理得到为无色树胶状物的三醇中间体。根据磺化的一般过程，将三醇磺化(三氧化硫三甲胺复合物，60℃，19小时)，将粗制物蒸发。通过连续SEC(sequential SEC)(Bio Gel P-2，随后用LH20)将残留物纯化。通过离子交换柱使得纯化产物转化为钠盐，冻干后得到标题化合物，为白色松散的粉末(3.1mg，7.0％，两个步骤)。1H NMR(D2O，内对照(int.ref.)丙酮为2.05，400MHz)两种旋转异构体比例为63∶37。δ4.844(s，1H，糖-H1)，4.678(s，1H，糖-H2)，4.51-4.45(m，1H，糖-H3)，4.240(t，37％×1H，J＝9.6，次要旋转异构体的糖-H4)，4.214(t，63％×1H，J＝9.6，主要旋转异构体的糖-H4)，3.980(s，37％×2H，次要旋转异构体的COCH2N)，3.825(s，63％×2H，主要旋转异构体的COCH2N)，3.78-3.59(m，3H，糖-H5，一个糖(one sugar)-H6和环己基-CH)，3.31-3.17(m，4H，一个糖-H6和CH3O[3.253，s，3H])，2.060(s，67％×3H，主要旋转异构体的CH3CO)，1.900(s，33％×3H，次要旋转异构体的CH3CO)，1.70-0.88(m，10H，环己基-CH2)。
实施例11PG2068步骤a
根据Ugi反应的一般过程，将琥珀酸单甲基酯(monomethylsuccinate)(15.7mg，0.119mmol)和以下三种试剂的溶液乙胺(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4-三-O-苯甲基-6-脱氧-6-异氰基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(在CHCl3中0.721M，150μL，108μmol)装入2mL样品瓶中，在室温将混合物搅拌19小时。减压下除去挥发物并且通过快速色谱进行纯化(用1∶1至1∶4的己烷-EtOAc，然后使用EtOAc进行梯度洗脱)得到纯化产物，为无色树胶状物(46.8mg，65％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)两种旋转异构体比例为73∶27。δ7.38-7.25(m，15H，Ph)，6.598(t，73％×1H，J＝6，NH)，6.529(t，27％×1H，J＝6，NH)，4.93-4.61(m，7H，糖-H1和3xPhCH2)，4.14-3.24(m，16H，糖6×H，NCH2CO，2xCH3O[单峰，在3.660和3.301，73％；3.648和3.276，27％]和乙基-CH2)，2.70-2.42(m，4H，COCH2CH2CO)，1.138(t，73％×3H，J＝7，乙基-CH3)，1.014(t，27％×3H，J＝7，乙基-CH3)。13C(100MHz，CDCl3，δ77.0)主要的旋转异构体，173.32，171.73，168.94，138.20，138.17，138.09，128.22，128.18，128.10，127.76，127.63，127.49，127.46，98.94，79.97，75.38，75.01，74.84，73.01，72.01，70.10，54.63，51.63，49.84，43.59，39.63，28.99，27.24，13.45。次要的旋转异构体(只有没有重叠的峰)，173.26，171.54，168.01，128.27，127.69，127.55，98.98，79.85，75.14，74.40，72.86，71.92，69.97，54.74，50.91，49.72，42.10，28.90，27.83，12.29。
步骤b(PG2068)根据苄基醚脱保护的一般过程，在50psi的氢气气氛下将在MeOH(3mL)中的上述的三苄基醚(46.8mg，0.0706mmol)，20％活性炭载钯(30mg)的混合物搅拌2小时。经过一般处理得到为无色树胶状物的三醇中间体。根据磺化的一般过程，将三醇磺化(三氧化硫三甲胺复合物，60℃，19小时)。将残留物溶解在1M NaOH(3mL，0.16M)中。将混合物在室温搅拌过夜，减压浓缩。通过连续SEC将残留物纯化(BioGel P-2，随后用LH20)。经由通过离子交换柱使得纯化产物转化为钠盐，得到PG2068，为白色粉末(4.9mg，9.8％，两个步骤)。1H NMR(D2O，内部参照丙酮在2.05，400MHz)两种旋转异构体比例为70∶30。δ4.86-4.84(m，1H，糖-H1)，4.69-4.67(m，1H，糖-H2)，4.50-4.46(m，1H，糖-H3)，4.28-4.19(m，1H，糖-H4)，4.072(s，30％×2H，次要旋转异构体的COCH2N的2H)，3.987(d，35％×2H，J＝16.8，主要旋转异构体COCH2N的1H)，3.815(d，35％×2H，J＝16.8，主要旋转异构体COCH2N的1H)，3.79-3.69(m，2H，糖-H5和一个糖-H6)，3.44-3.18(m，6H，一个糖-H 6，乙基-CH2和CH3O[3.245，s，3H])，2.633(t，J＝6.8)和2.45-2.37(m，总共4H，COCH2CH2CO2)，1.054(t，70％×3H，J＝7.2，CH3O)，0.906(t，30％×3H，J＝7.2，CH3O)。
实施例12PG2075步骤a将3-氯代苯乙酸(223mg，1.307mmol)溶解在MeCN(3mL)中。加入氨溶液(28％，0.26mL，3.8mmol)。将混合物涡旋片刻，然后真空蒸发。将残留物在MeCN(3mL)中混悬，过滤，然后用MeCN洗涤白色固体，冻干得到3-氯代苯乙酸铵(0.195g，80％)。
根据Ugi反应的一般过程，将上述铵盐(22.5mg，0.120mmol)和以下两种试剂的溶液甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷2-异氰基乙基酯(在CHCl3中0.762M，157μL，120μmol)装入2mL样品瓶中，在室温将混合物搅拌19小时。减压下除去挥发物并且通过快速色谱进行纯化得到纯化产物，为无色树胶状物(34.8mg，37％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.39-7.06(m，24H，4×C6H5和1×C6H4)，6.731(t，1H，J＝6.0，NH)，4.878(d，1H，J＝10.8，a-CH2)，4.844(d，1H，J＝2.0，糖-H1)，4.770(d，1H，J＝12.4，b-CH2)，4.723(d，1H，J＝12.4，b-CH2)，4.640(s，2H，c-CH2)，4.589(d，1H，J＝11.6，d-CH2)，4.535(d，1H，J＝11.6，d-CH2)，4.505(d，1H，J＝10.8，a-CH2)，4.446(d，1H，J＝14.8，e-CH2)，4.362(d，1H，J＝14.8，e-CH2)，3.90-3.51(m，12H)，3.38-3.29(m，1H)。13C(100MHz，CDCl3，δ77.0)169.67，166.81，138.27，138.11，137.70，135.16，134.31，129.82，129.40，128.34，128.31，128.01，127.85，127.78，127.70，127.68，127.60，127.53，127.46，98.90，79.96，75.08，75.04，74.71，73.58，72.73，72.19，72.13，69.78，68.49，63.17，40.25，39.27。
步骤b(PG2075)根据苄基醚脱保护的一般过程，在50psi的氢气气氛下将在MeOH(2mL)中的上述的四苄基醚(34.8mg，0.0439mmol)，20％活性炭载钯(26mg)的混合物搅拌2小时。经过一般处理得到为无色树胶状物的四醇中间体。根据磺化的一般过程，将上述四醇磺化。通过SEC将残留物纯化(Bio-Gel P-2)。经由通过离子交换柱使得纯化产物转化为钠盐，冻干后得到PG2075，为白色松散粉末(10.6mg，28％，两个步骤)。1H NMR(D2O，内部参照丙酮在2.05，400MHz)δ7.30-7.11(m，4H，Ar)，5.00-4.97(m，1H，糖-H1)，4.72-4.28(m，3H，糖-H2，H3和H4)，4.21-3.30(m，11H，糖-H5，H6和4×CH2)。
实施例13PG2014步骤a根据Ugi反应的一般过程，将2-(苯甲基3，4，6-三-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷-2-基)乙酸(50mg，0.0835mmol)和以下三种试剂的溶液苄胺(在MeOH中2M，41.8μL，0.0835mmol)，甲醛(在MeOH中2M，41.8μL，0.0835mmol)以及2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷2-异氰基乙基酯(在MeOH中0.415M，201.4μL，0.0835mmol)装入2mL样品瓶中，在室温将混合物搅拌19小时。经过一般处理得到产物，为无色树胶状物(38.9mg，36％)。1H NMR(400MHz)在酰胺CO-NH单键周围的两种旋转异构体比例为66∶34。δ7.40-7.05(m，45H，9×C6H5)，6.66(t，0.66H，J＝5.6，CONH-主要的旋转异构体)和6.40(t，0.34H，J＝5.4，CONH-次要的旋转异构体)，5.104(d，0.66H，J＝1.2，H1I-主要的旋转异构体)和5.046(s，0.34H，H1I-次要的旋转异构体)，4.86-4.20(m，21H)，3.97-3.48(m，16H)，3.36(q，0.66H，J＝5.6，主要的旋转异构体)和3.26(q，0.34H，J＝5.6，次要的旋转异构体)。
步骤b(PG2014)。
根据苄基醚脱保护的一般过程，在50psi的氢气气氛下将在EtOH(4mL)中的上述八苄基醚(35mg，0.0267mmol)，20％活性炭载钯(10mg)的混合物搅拌2小时。经过一般处理得到为无色树胶状物的八醇(octol)中间体。根据磺化的一般过程，将上述辛醇磺化(三氧化硫三甲胺复合物，60℃，19小时)。通过SEC将残留物纯化(Bio-GelP-2)。经由通过离子交换柱使得纯化产物转化为钠盐，得到PG2014，为白色粉末(16.6mg，44％，两个步骤)。1H NMR(D2O，400MHz，由于两种旋转异构体而复杂)δ7.32-7.14(m，5H，Ph)，5.80-5.66(m，0.5H)，5.44-5.39(m，0.5H)，5.04-4.96(m，1.5H)，4.80-4.20(m，9H，与水重叠)，4.18-3.78(m，7.5H)，3.76-3.46(m，1.5H)，3.42-2.98(m，3.5H)。
实施例14PG2016步骤a根据Ugi反应的一般过程，将反式-1，4-二氨基环己烷(6.3mg，0.055mmol)和以下三种试剂的溶液2-(甲基2，3，4-三-O-苯甲基α-D-吡喃甘露糖苷-6-基)乙酸(在MeOH中0.91M，121μL，0.11mmol)，甲醛(在MeOH中2M，55μL，0.11mmol)以及环己基胩(在MeOH中1M，110μL，0.11mmol)装入2mL样品瓶中，在室温将混合物搅拌5天。减压除去挥发物，通过快速色谱(用2∶1至1∶4的己烷-EtOAc进行梯度洗脱)得到产物，为无色树胶状物，33.0mg，43％(Rf＝0.24，DCM-MeOH95∶5或Rf＝0.48，MeCN-EtOAc 1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz，由于两种旋转异构体而复杂)δ7.50-7.20(m，30H，Ph)，6.62(br s，1.1H)，6.48(br s，0.38H)，5.96(br d，0.26H，J＝8)，5.79(br d，0.26H，J＝10)，4.92-4.85(m，2H)，4.78-4.56(m，12H)，4.28-4.22(m，2.8H)，4.35-4.06(m，1.6H)，3.94-3.56(m，19.6H)，3.28(s，6H，OMe)，1.88-1.42(m，16H)，1.36-1.00(m，12H)。
步骤b.(PG2016)。
根据苄基醚脱保护的一般过程，在1个大气压的氢气气氛下将在MeOH(2.8mL)中的上述的六苄基醚(33mg，0.0235mmol)，和20％活性炭载钯(65mg)的混合物搅拌5天。经一般处理得到为无色树胶状物的六醇中间体。根据磺化的一般过程，将上述六醇磺化。通过连续柱色谱法(在Bio-Gel P-2上的进行SEC，随后通过离子交换柱)将残留物纯化得到PG2016，为白色粉末(12.2mg，35％)。1H NMR(D2O，400MHz)δ4.97-4.92(m，2H，man-H1)，4.77-4.75(m，2H，man-H2)，4.58-4.52(m，2H，man-H3)，4.46-4.08(m，6H，含有man-H4在4.46-4.36，和OCH2CO)，3.98-3.80(m，8H，man-H5，man-H6和NCH2CO)，3.80-3.32(m，6H，含有man-H6在3.80-3.64，和环己基-CH)，3.318(s，6H，OMe)，1.82-1.34(m，18H，环己基-CH2)，1.26-1.00(m，10H，环己基-CH2)。ES-MS(+ve，m/z)C40H62N4Na6O34S6required 1472.10，found1495(M+Na+)，1473(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C40H62N4Na7O34S6required 1495.0853，found 1495.0957；M+H+，C40H63N4Na6O34S6required1473.1034，found 1473.1082。
实施例15PG2015步骤a根据Ugi反应的一般过程，将3，3-二甲基戊二酸(7.1mg，0.0443mmol)和以下三种试剂的溶液2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷3-氨基丙基酯(在MeOH中0.642M，138μL，0.0886mmol)，甲醛(在MeOH中2M，44.3μL，0.0886mmol)以及环己基胩(在MeOH中1M，88.6μL，0.0886mmol)装入2mL样品瓶中，在室温将混合物搅拌5天。减压除去挥发物，通过快速色谱(用2∶1至1∶4的己烷-EtOAc进行梯度洗脱)得到产物，为无色树胶状物，32.3mg，46％(Rf＝0.45，己烷-EtOAc 1∶3)。1H NMR(CDCl3，400MHz，由于两种旋转异构体而非常复杂)δ7.38-7.21(m，40H，Ph)，7.003(d，0.41H，J＝7.7)，6.930(br s，0.21H)，6.726(d，0.4H，J＝8.4)，6.597(d，0.73H，J＝8.8)，6.487(br s，0.25H)，4.85-4.78(m，4H)，4.76-4.59(m，10H)，4.54-4.45(m，4H)，4.00-3.62(m，20H)，3.46-3.14(m，6H)，2.52-2.22(m，4H)，1.90-1.52(m，15H)，1.34-1.00(m，15H)。
步骤b(PG2015)。
根据苄基醚脱保护的一般过程，在1个大气压的氢气气氛下将在MeOH(2.8mL)中的上述的六苄基醚(32.3mg，0.0202mmol)，20％活性炭载钯(41mg)的混合物搅拌5天。经过一般处理得到生为无色树胶状物的八醇中间体。根据磺化的一般过程，将上述的辛醇磺化。通过SEC(在Bio-Gel P-2上)将残留物纯化得到PG2015，为白色粉末(12.6mg，37％)。1H NMR(D2O，400MHz)δ5.020(d，2H，J＝1.6，man-H1)，4.759(br s，2H，man-H2)，4.66-4.56(m，2H，man-H3，与水重叠)，4.46-4.41(m，2H，man-H6)，4.265(t，2H，J＝9.6，9.2，man-H4)，4.10-3.96(m，4H，man-H5和man-H6)，4.05-3.14(m，14H，NCH2CO，环己基-CH和NCH2CH2CH2O)，2.50-2.11(m，4H，CCH2CO)，1.84-1.42(m，14H，环己基-CH2和NCH2CH2CH2O)，1.24-0.93(m，16H，环己基-CH2和Me)。ES-MS(+ve，m/z)C41H93N11O37S7(7xSO3NH4)required 1556，found1578(M+Na+)，1556(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+H+C41H93N11O37S7required 1556.3857，found 1556.3783。
实施例16PG21552，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-磺基-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯，二钠盐(PG2155)由2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-磺基-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯[23]通过一般的磺化过程获得标题化合物，为无色粉末。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.10(dd，3H；CH2CH3)；2.49-2.66(m，2H，CH2CH3)；3.59(dd，1H，J1，22，39.7Hz；H-2)；3.65(dd，1H，J5，6a3.3，J6a，6b11.0Hz；H-6a)；3.68(dd，1H，J5，6b4.0Hz；H-6b)；3.83(m，1H；H-5)；4.36(dd，1H，J3，43.0Hz；H-3)；4.46(s，2H；CH2Ph)；4.48(d，1H；H-1)；4.60，4.75(AB四重峰，J10.3Hz；CH2Ph)；4.85(dd，1H；J4，50.0Hz；H-4)；7.22-7.29，7.37-7.39(2m，10H；ArH)。
实施例17PG2163步骤a4-O-烯丙基-6-叠氮基-6-脱氧-2，3-二-O-异亚丙基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯用(±)-樟脑-10-磺酸(16mg，0.0709mmol，5mol％)处理在2，2-二甲氧基丙烷(4.7mL，0.3M)中的6-叠氮基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(311mg，1.419mmol)的溶液。将混合物在室温搅拌1h。TLC显示完全转化为产物(Rf＝0.40，EtOAc-己烷＝17∶83)。通过加入饱和Na2CO3(饱和水溶液)使混合物碱化，真空下蒸发。用EtOAc(30mL)萃取残留物，用盐水洗涤EtOAc溶液，干燥(MgSO4)。过滤，蒸发得到树胶状物，将其和甲苯共蒸发一次。将最终的无色树胶状物溶解在无水DMF(3.5mL，0.4M)中，和NaH(在矿物油中60％的分散体，163mg，4.257mmol，3当量)搅拌1小时。加入烯丙基溴(360μL，4.257mmol，3当量)，将混合物在室温搅拌另外6小时，用甲醇(1mL)处理，蒸发至干。通过二氧化硅柱色谱(2.5×18cm，用1∶10至1∶6的EtOAc-己烷进行洗脱)将残留物纯化得到标题化合物，为无色树胶状物(0.281mg，经由两个步骤66％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)5.85(m，1H，烯丙基-2′)，5.23(ddd，1H，J2-3′反式＝17.2，J3′-gem＝3.6，J1′-3′＝1.6，H3′反式)，5.17-5.13(m，1H，H3′顺式)，4.89(s，1H，H1)，4.35(dddd，1H，J1′gem＝12.4，J1′-2′＝5.2，J＝1.6，H1′)，4.16(dd，1H，J2-3＝5.6，J3-4＝7.2，H3)，4.09(d，1H，H2)，4.05(dddd，1H，H1′)，3.67(ddd，1H，J4-5＝10.4，J5-6ax＝6.8，J5-6eq＝2.4，H5)，3.48(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.40(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝6.8，H6ax)，3.33(dd，1H，H5)，1.50(s，3H，Me)，1.30(s，3H，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)134.4，117.1，109.2，98.0，78.2，76.2，75.6，71.5，68.0，54.9，51.6，27.8，26.1。
步骤b4-O-烯丙基-6-叠氮基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯将4-O-烯丙基-6-叠氮基-6-脱氧-2，3-二-O-异亚丙基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(56mg，0.187mmol)溶解在MeCN-MeOH-H2O(分别为3mL，3mL和0.2mL)中，用对甲苯磺酸一水合物(7mg，0.0374mmol，20mol％)进行处理。将混合物在室温搅拌5h，加入三乙胺(0.4mL)。将混合物蒸发，通过柱色谱(二氧化硅1×18cm，用1∶6至2∶1的EtOAc-己烷进行洗脱)进行纯化得到产物，为无色蜡状固体(34.8mg，72％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)5.91(m，1H，烯丙基-H2′)，5.28(ddd，1H，J2′-3′反式＝16.8，J3′反式-3′顺式＝3.0，J1′-3′＝1.6，烯丙基-H3′反式)，5.20(ddd，1H，J2′-3′顺式＝10.0，J3′反式-3′顺式＝3.0，J1′-3′＝1.6，烯丙基-H3′顺式)，4.72(ddd，1H，J1-2＝2.0，H1)，4.28(dddd，1H，Jgem＝12.4，J1′-2′＝5.6，J＝1.6，烯丙基-1′)，4.13(dddd，1H，烯丙基-1′)，3.92(dd，1H，J2-3＝3.6，H2)，3.88(dd，1H，J3-4＝9.6，H3)，3.70(ddd，1H，J4-5＝9.6，J5-6ax＝5.6，J5-6eq＝2.8，H5)，3.54-3.44(m，3H，H4，H6ax和H6eq)，3.39(s，3H，MeO)，2.62(br s，2H，OH)。
步骤c4-O-烯丙基-6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-2，3-二-O-磺酸基(sulfonato)-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二钠盐(PG 2163)根据常规过程将4-O-烯丙基-6-叠氮基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯磺化得到标题化合物，为白色粉末，55mg(89％)。Rf＝0.20(EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1)。1H NMR(D2O，400MHz)5.88-5.76(m，1H，烯丙基-2′)，5.20(d，1H，J2′-3′反式＝17.2，烯丙基-3′反式)，5.12(d，1H，J2′-3′顺式＝10.0，烯丙基-3′顺式)，4.91(s，1H，H1)，4.65(brs，1H，J2-3＝3.2，H2)，4.48(dd，1H，J2-＝3.2，J3-4＝9.2，H3)，4.21(dd，1H，Jgem＝11.6，J1′-2′＝5.6，烯丙基-1′)，4.00(dd，1H，J1′-2′＝6.4，烯丙基-1′)，3.71-3.67(m，1H，H5)，3.58(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6eq＝2.0，H6eq)，3.58(dd，1H，J4-5＝9.6，H4)，3.46(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6ax＝5.6，H6ax)，3.30(s，3H，MeO)。13C NMR(D2O，100MHz，内MeOH为49.05ppm)133.9，119.2，98.4，76.1，75.3，74.2，73.1，70.7，55.4，50.8。
实施例18PG2160，PG2161和PG2173步骤a6-叠氮基-6-脱氧-2，3-二-O-苯亚基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯将6-叠氮基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(1.011g，4.61mmol)溶解在无水DMF(9mL)和乙腈(9mL)中。按顺序加入苯甲醛二甲基乙缩醛(1.38mL，9.22mmol，2当量)和(±)-樟脑-10-磺酸(214mg，0.922mmol，20mol％)。在60℃(外部)将混合物在室内真空(housevacuum)下搅拌过夜，通过rotavap去除挥发性物质。将残留物装填到硅胶上，通过柱色谱进行纯化(二氧化硅2.5×20cm，用10∶1，9∶1，7∶1，5∶1，4∶1，3∶1至2∶1的己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱)。将各级分合并成两部分。极性小的部分(Rf＝0.55和0.51，己烷-EtOAc 3∶1)为4-乙缩醛的混合物，极性部分主要为4-OH产物。将混合物合并，蒸发。将残留物重新溶解在二氯甲烷(50mL)中，与1M氯化铵溶液一起搅拌(50mL)。极性小的斑点逐渐消失，转化为极性产物。但是在40min后转化没有进一步提高。因此将二氯甲烷相分离，与0.5M HCl溶液(50mL)搅拌另外20min。TLC显示没有进一步的变化。将DCM相分离，用盐水-1M NaOH洗涤，干燥(MgSO4)。将干燥的DCM溶液过滤，蒸发，通过如上的二氧化硅硅柱将残留物纯化，得到标题化合物，为无色树胶状固体(0.543g，38％，Rf＝0.29，EtOAc-己烷＝1∶3)。1H NMR(CDCl3，400MHz)两种苯亚甲基差向异构体的比例为1∶1。7.49-7.36(m，5H，C6H5)，6.126和5.902(2xs，1H，苯亚甲基-CH)，5.066和4.987(2xs，1H，糖-H1)，4.396(dd，0.5H，J＝6.4，5.6，糖-H3)，4.248(dd，0.5H，J＝6.4，6.0，糖-H3)，4.214(dd，0.5H，J＝6.0，糖-H2)，4.102(dd，0.5H，J＝4.8，糖-H2)，3.86-3.38(m，4H)，3.466和3.424(2xs，3H，CH3O)，2.984(br s，1H，OH)。13CNMR(CDCl3，100MHz)138.01，136.41，129.38，128.99，128.24，128.12，126.41，125.86，103.85，102.60，97.74，97.53，79.36，77.75，77.47，74.81，70.00，68.91，68.42，66.97，54.78，51.18和51.10。
步骤b6-叠氮基-3-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯和6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯用氰基硼氢化钠(589mg，9.37mmol，12当量)和分子筛3_(1g)处理在DMF(7.8ml，0.1M)中的6-叠氮基-6-脱氧-2，3-二-O-苯亚甲基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(240mg，0.781mmol)中的在溶液。将混合物在室温搅拌20min，然后在70℃搅拌同时缓慢加入TFA(0.361mL，4.686mmol，6当量)。加完后，将混合物在70℃搅拌6小时。冷却至0℃，通过加入固体Na2CO3使其碱化。将冷的混合物过滤，用EtOAc洗涤滤饼。用饱和Na2CO3萃取滤液和洗涤液一次。蒸发得到树胶状物，通过柱色谱(二氧化硅柱2.5×18cm，用1∶4至1∶1的EtOAc-己烷进行洗脱)将其纯化得到6-叠氮基-3-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(无色树胶状物，64mg，26％，Rf＝0.45，EtOAc-己烷＝1∶1)；1HNMR(CDCl3，400MHz)7.41-7.32(m，5H，Ph)，4.78(d，1H，J1-2＝1.6，H1)，4.70(d，1H，Jgem＝12.0，CH2)，4.56(d，1H，CH2)，4.02(dd，1H，J2-3＝3.2，H2)，3.78(dd，1H，J3-4＝8.4，J4-5＝10.0，H4)，3.73(ddd，1H，J5-6ax＝6.0，J5-6eq＝3.2，H5)，3.64(dd，1H，H3)，3.52(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.47(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝6.0，H6ax)，3.40(s，3H，MeO)，2.21(br s，2H，2xOH)和6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(无色蜡状固体，62mg，26％，Rf＝0.27，EtOAc-己烷＝1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.38-7.28(m，5H，Ph)，4.78(s，1H，H1)，4.71(d，1H，J＝11.6，CH2)，4.53(d，1H，J＝11.6，CH2)，3.75-3.61(m，4H，H2，H3，H4和H5)，3.53(dd，1H，J＝13.2，1.5，H6eq)，3.46-3.40(dm，1H，J＝13.2，H6ax)，3.38(s，3H，MeO)，2.83(br s，2H，2xOH)。
步骤c6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二钠盐(PG2160)根据常规方法将6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯磺化得到标题化合物，为白色粉末，64mg，59％。1H NMR(D2O，400MHz)7.38-7.26(m，5H，Ph)，4.72(d，1H，Jgem＝12.0，CH2Ph)，4.59(d，1H，J1-2＝2.0，H1)，4.58(d，1H，CH2Ph)，4.49(d，1H，J2-3＝2.8，J3-4＝9.6，H3)，4.44(dd，1H，J4-5＝9.6，H4)，4.07(dd，1H，H2)，3.78(ddd，1H，J5-6ax＝5.6，J5-6eq＝2.4，H5)，3.62(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.51(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝5.6，H6ax)，3.22(s，3H，MeO)。
步骤d；6-叠氮基-3-O-苯甲基-6-脱氧-2，4-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二钠盐(PG2161)根据常规方法将6-叠氮基-3-O-苯甲基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(64mg)磺化得到标题化合物，为白色粉末，58mg，66％。1HNMR(D2O，400MHz)7.42-7.21(m，5H，Ph)，4.92(d，1H，J1-2＝2.4，H1)，4.67(d，1H，Jgem＝12.4，CH2Ph)，4.60(d，1H，CH2Ph)，4.56(dd，1H，J2-3＝3.2，H2)，4.35(dd，1H，J3-4＝9.6，J4-5＝9.6，H4)，3.80(dd，1H，H3)，3.75(ddd，1H，J5-6ax＝6.0，J5-6eq＝2.8，H5)，3.66(dd，1H，J6ax-6eq＝13.4，H6eq)，3.54(dd，1H，J6ax-6eq＝13.4，J5-6ax＝6.0，H6ax)，3.29(s，3H，MeO)。
步骤e6-[1′-(4-苯基)三唑基]-2-O-苯甲基-6-脱氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二钠盐(PG2173)使用苯基乙炔使6-叠氮基-2-O-苯甲基-6-脱氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二钠盐经过Huisgen反应的一般过程得到标题化合物，为白色粉末6.8mg，67％，Rf＝0.34，EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1。1H NMR(D2O，400MHz)8.26(s，1H，三唑)，7.64-7.60(m，2H)，7.37-7.15(m，8H)，4.89(dd，1H，J＝14.4，2.8，H 3)，4.67(d，1H，J＝12.0，PhCH2)，4.57-4.39(m，5H，PhCH2，H1，H4和H6eq和H6ax)，4.04(dd，1H，J＝2.8，2.0，H2)，3.99(ddd，1H，J＝9.2，8.8，2.4，H5)，2.83(s，3H，MeO)。
实施例19PG21706-叠氮基-2，3-O-二磺酸基-6-脱氧-4-O-(1-萘基甲基)-α-D-吡喃甘露糖苷烯丙基酯二钠盐(包含10％的2-萘基甲基异构体)(PG2170)由6-叠氮基-6-脱氧-α-D-吡喃甘露糖苷烯丙酯起始与PG2163相似制备，得到标题化合物，为白色粉末87.5mg，87％，Rf＝0.28(主要)，0.22(次要)，EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1。1H NMR(D2O，400MHz)7.87(d，1H，J＝8.4，萘基)，7.65-7.54(m，2H，萘基)，7.33-7.19(m，4H，萘基)，5.68(ddt，1H，J烯丙基2′-3′反式＝22.0，J烯丙基2′-3′顺式＝10.8，J烯丙基1′-2′＝6.0，烯丙基-2′)，5.23(AB四重峰，2H，Jgem＝12.0，萘基-CH2)，5.17-5.02(m，3H，烯丙基-3′和H1)，4.74(dd，1H，J1-2＝2.0，J2-3＝3.2，H2)，4.64(d，1H，J3-4＝9.6，H 3)，3.90(dd，1H，J烯丙基1′gem＝13.2，J＝6.0，烯丙基-1′)，3.81(dd，1H，烯丙基-1′)，3.64(t，1H，J4-5＝9.6，H4)，3.39(ddd，1H，J5-6eq＝2.0，J5-6ax＝5.2，H5)，2.78(dd，1H，J6eq-6aX＝13.6，H6eq)，2.68(dd，1H，J5-6ax＝5.2，J6eq-6ax＝13.6，H6ax)。2-萘基甲基衍生物次要异构体的典型信号4.84(AB四重峰，2H，Jgem＝11.2，萘基-CH2)，3.52(ddd，1H，J4-5＝10.0，J5-6eq＝2.4，J5-6ax＝6.0，H5)，3.07(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，H6eq)，2.96(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6ax＝6.0，H6ax)。次要异构体的来源是步骤a中使用的商购的1-和2-溴甲基萘9∶1的混合物。
对在上文实施例1至19中详细描述的合成方法进行适当的修改能够合成其他的化合物。这些其它的化合物包括在列举本发明化合物生物学试验结果的表中。
实施例20化合物的生物学试验方法1.生长因子结合试验使用基于表面等离子体谐振(SPR)的溶液亲和力测定法测量配体对于生长因子的结合亲和力。测定法的原理是固定在传感芯片表面的肝素能够辨别出在平衡的生长因子和配体的溶液中的游离的和结合的生长因子。当注射该溶液时，随着SPR反应的增强，检测出结合至固定的肝素的游离的生长因子，由此而测定其浓度。作为配体浓度函数的游离生长因子浓度的减少可用于计算解离常数Kd。重要的是要注意结合至生长因子的配体只有当相互作用包括肝素结合部位时才可被检出，因而消除了评价与蛋白质其它部位非特异性结合的可能性。假定所有蛋白质∶配体的相互作用的化学计量为1∶1。
已经记载了通过将生物素化的BSA-肝素固定在抗生物素蛋白链菌素涂敷的传感芯片上制备肝素-涂敷的传感芯片[24]。还可使用己二酸二酰肼或1，4-二氨基丁烷通过醛偶合将肝素固定。对于各Kd的测量，需制备包含固定浓度的蛋白质和不同浓度配体的缓冲溶液。在HBS-EP缓冲液中(10mM HEPES，pH7.4，150mM NaCl，3.0mM EDTA和0.005％(v/v)聚山梨醇酯20)测量结合至FGF-1和VEGF的配体，而在包含0.3M NaCl的HBS-EP缓冲液中测量当结合至FGF-2的配体[24]。注射前，将样品保持在4℃以使蛋白质的稳定性最佳。对于各测定混合物，以5-40μL/min注射50-200μL的溶液，测量相对的结合灵敏度。所有的表面结合试验均在25℃下进行。通过以40μL/min注射40μL的4M NaCl，随后以40μL/min注射40μL的缓冲液使表面再生。
使用BIAevaluation软件(BIAcore)分析Sensorgram数据。从试验sensorgram减去背景sensorgram以得到特异性结合的曲线，随后将所有曲线的基线调节至0。可使用以下的方程将每次注射的相对结合灵敏度换算为游离蛋白质的浓度 其中r是相对结合灵敏度和rm是最大结合灵敏度。
假定注射前溶液中建立的结合平衡的化学计量为1∶1。因此，对于该平衡，
其中P对应于生长因子蛋白质，L是配体，P·L是蛋白质配体的复合物，平衡方程为Kd=[P][L][P·L]]]>且结合方程[24]可表示为 使用结合方程时，给定的Kd值是与[P]相对于[L]总计的曲线相一致的值。其中Kd值测量两次，取两次测量值的平均值。已经证明与这些生长因子牢固结合的GAG模拟物引起了体内的生物学反应[24]。
2.抗病毒试验如Nyberg等所述[25]，在抑制病毒传染性和细胞-至-细胞间的传播的两项试验中测试了所选择的化合物对抗两种类型的单纯性疱疹病毒(HSV)，即，HSV-1和HSV-2。使用在6-孔簇板(cluster plates)培养的非洲绿猴肾细胞(GMK AH1)[26]的单层培养细胞。使用的病毒株是单纯性疱疹病毒1型(HSV-1)KOS321株[27]和HSV-2333株[28]。
在两项试验中，化合物以200μM进行测定。
(i)在HSV传染性试验中，将化合物与病毒混合，在室温下培养10min，然后将混合物加入细胞中，仅保持细胞1小时以使(或没有使)病毒粘附于/进入细胞中。因此该试验反映了所讨论的化合物是否有能力与病毒微粒结合，并且阻断其粘附于/进入细胞中。抑制作用表现为病毒斑数量的减少。
(ii)下一个试验，称为HSV传播试验，依靠在病毒粘附/进入步骤后向细胞中加入化合物。该试验反映了所研究的化合物是否有能力抑制病毒从感染细胞至非感染细胞的传播(细胞-至-细胞间的传播)，和另外该化合物是否有能力进入细胞和抑制病毒复制。在病毒感染性试验中化合物缺乏活性但是在病毒传播试验中具有某些活性提示化合物通过进入细胞和抑制病毒复制的步骤发挥作用。抑制表现为病毒斑尺寸的减少。
结果(参见表5)以对照的％即，以在化合物存在的情况下相对于模拟治疗对照组(没有用化合物)获得的病毒斑的数量(传染性试验)或尺寸(传播试验)来表示。
结果前述部分描述的试验结果在表1至5中列出。
表1


表2














表3







表4



表5抗病毒试验结果


表1至4中所列结果表明本发明包括的宽范围的化合物对于GAG-结合生长因子具有强亲和力，因而可用作它们活性的调节剂。表5中的结果表明化合物确实具有体内活性。
前述实施方案仅仅是本发明原理的例证，各种修改和变化对本领域那些技术人员来说很容易想到。可采用各种方法和其它实施方案来实践和实施本发明。还应该理解本文中使用的术语是用于说明，而不应该被认为是限制。
本文中使用的术语“包含(comprise)”及其该术语的变型例如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”指包括一种指定的完整物或若干指定的完整物但是不排除任何其它的完整物或若干任何其它的完整物，除非在上下文或用法上需要该术语的排除性解释。
不认为在本说明书中引用的出版物的任何参考文献其公开的内容在澳大利亚构成通常的常识。
参考文献[1]Kjellen，L.；Lindahl，U.Annu.Rev.Biochem.1991，60，443。
Sugahara，K.；Kitagawa，H.Curr.Opin.Struct.Biol.2000，10，518. 20179369 Tumova，S.；Woods，A.；Couchman，J.R.Int.J.Biochem.CellBiol.2000，32，269。
Capila，I.；Linhardt，R.J.Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，391。
Casu，B.；Lindahl，U.Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.2001，57，159。
Liu，J.；Thorp，S.C.Med.Res.Rev.2002，22，1。
van Boeckel，C.A.A.；Petitou，M.Angew.Chem.Int.Ed.Engl。1993，35，1671。
Petitou，M.；Hérault，J.P.；Bernat，A.；Driguez，P.A.；Duchaus-soy，P.；Lormeau，J.C.；Herbert，J.M.Nature 1999，398，417。
Yeh，B.K.；Eliseenkova，A.V.；Plotnikov，A.N.；Green，D.；Pinnell，J.；Polat，T.；Gritli-Linde，A.；Linhardt，R.J.；Mohammadi，M.Mol.Cell.Biol.2002，22，7184。
Liekens，S.；Leali，D.；Neyts，J.；Esnouf，R.；Rusnati，M.；Dell Era，P.；Maudgal，P.C.；De Clercq，E.；Presta，M.Mol.Pharmacol.1999，56，204。
Sola，F.；Farao，M.；Pesenti，E.；Marsiglio，A.；Mongelli，N.；Grandi，M.Cancer Chemother.Pharmacol.1995，36，217，[12]Foxall，C.；Wei，Z.；Schaefer，M.E.；Casabonne，M.；Fugedi，P.；Peto，C.；Castellot，J.J.，Jr；Brandley，B.K.J Cell.Physiol.1996，168，657。
Parish，C.R.；Freeman，C.；Brown，K.J.；Francis，D.J.；Cowden，W.B.Cancer Res.1999，59，3433。
Kisilevsky，R.；Green，A.M.；Gervais，F.2001，US Patent No.6,310,073。
D_mling，A.；Ugi，I.Angew.Chem.Int.Ed.2000，39，3168and referencescited therein。
Lockhoff，O.；Frappa，I.Combina torial Chemistry & High ThroughputScreening 2002，5，361 and references cited therein。
Hanessian，S.Preparative Carbohydrate Chemistry；Chapter 3；MarcelDekker Inc.New York，1996。
Pozsgay，V.；Trinh，L.；Shiloach，J.；Robbins，J.B.；Donohue-Rolfe，A.；Calderwood，S.B.Bioconjugate Chem.1996，7，45。
Dasgupta，F.；Masada，R.I.Carbohydr.Res.2002，337，1055。
Hori，H.；Nishida，Y.；Ohrui，H.；Meguro，H.J.Org.Chem.1989，54，1346。
Prepared analogously to ref.18。
Lipták，A.；Imre，J.；Nánási，P.Carbohydr.Res.1981，92，154。
goston，K.；Kerékgyártó，J.；Hajkó，J.；Batta，G.；Lefeber，D.J.；Kamerling，J.P.；Vliegenthart，J.F.Chem.Eur.J2002，8，151。
Cochran，S.；Li，C.；Fairweather，J.K.；Kett，W.C.；Coombe，D.R.；Ferro，V.J Med Chem.2003，46，4601。
Nyberg，K.；Ekblad，M.；Bergstr_m，T.；Freeman，C.；Parish，C.R.；Ferro，V.；Trybala，E.Antiviral Res.2004，63，15。
Gunalp，A.Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1965，118，185。
Holland，T.C.；Homa，F.L.；Marlin，S.D.；Levine，M.；Glorioso，J.J.Virol.1984，52，566。
Duff，R.；Rapp，F.Nat.New Biol.1971，233，48。
权利要求
1.下式的化合物 其中n是0至2的整数；Z是N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2；X各自独立的是C，C(O)，N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2或是键；和R1至R6各自独立的是键或选自基团氢；卤素；直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代的或未取代的烷基，链烯基，炔基，芳基，或杂芳基；磷酰基例如磷酸酯，硫代磷酸酯-O-P(S)(OH)2；磷酸酯-O-P(O)(OR)2；硫代磷酸酯-O-P(S)(OR)2；膦酸酯-O-P(O)OHR；硫代膦酸酯-O-P(S)OHR；取代的膦酸酯-O-P(O)OR1R2；取代的硫代膦酸酯-O-P(S)OR1R2；-O-P(S)(OH)(SH)；和环磷酸酯；其它含磷的化合物例如亚磷酰胺-O-P(OR)-NR1R2；和氨基磷酸酯-O-P(O)(OR)-NR1R2；硫基团例如-O-S(O)(OH)，-SH，-SR，-S(→O)-R，S(O)2R，RO-S(O)2-，-O-SO2NH2，-O-SO2R1R2或磺酰胺-NHSO2NH2；氨基例如-NHR，-NR1R2，-NHAc，-NHCOR，-NH-O-COR，-NHSO3，-NHSO2R，-N(SO2R)2，和/或脒基例如-NH-C(＝NH)NH2和/或脲基例如-NH-CO-NR1R2或硫脲基例如-H-C(S)-NH2；结构I的另一个单元，通过任意位置连接，其中Z，X和R1至R6如上所定义；或基于下式基团的亚结构 其中Y是键或选自基团直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代或未取代的烷基；直链的，环状的，支链的，取代的，杂环的，杂原子取代或未取代的酰基；和芳基，取代的芳基，杂芳基；和R7至R11各自独立地是至少一个根据式I的结构，或根据式II的结构；条件是当Z是O，X是O或键时，R1至R5都不是H或CH2OH；或当Z是N并且X是O或键时，R1至R6都不是H。
2.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物是如上文定义的PG2024，PG2037，PG2046，PG2155。
3.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物是说明书表1-4中的任一种化合物。
4.用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的药物或兽医学组合物，其包含至少一种根据权利要求1的化合物和对于所述的至少一种化合物而言药学上或兽医学上可接受的载体或稀释剂。
5.根据权利要求4的组合物，其进一步包括药学上或兽医学上可接受的赋形剂，缓冲剂，稳定剂，等渗调节剂，防腐剂或抗氧剂。
6.根据权利要求4的组合物，其中所述化合物在其中以酯，游离酸或碱，水合物或前药的形式存在。
7.根据权利要求1的化合物在制备用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染引起的疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求7的用途，其中所述哺乳动物患者为人类患者。
9.用于预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成，转移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的方法，该方法包含对患者施用有效量的至少一种根据权利要求1的化合物，或包含所述至少一种化合物的组合物。
10.根据权利要求9的方法，其中所述哺乳动物患者为人类患者。
11.根据权利要求9的方法，其中所述由血管生成引起的疾病是增生性视网膜病或实体瘤生长产生的血管生成。
12.根据权利要求9的方法，其中所述由炎症引起的疾病是类风湿性关节炎，多发性硬化症，炎性肠病，同种异体移植物排斥或慢性哮喘。
13.根据权利要求9的方法，其中所述由凝血和/或血栓形成引起的疾病是深部静脉血栓形成，肺栓塞，血栓性中风，周围动脉血栓形成，不稳定心绞痛或心肌梗塞。
14.根据权利要求9的方法，其中所述由病毒感染引起的疾病是单纯性疱疹。
全文摘要
本发明涉及用于模拟GAG
文档编号C07H15/18GK1906203SQ200480040751
公开日2007年1月31日 申请日期2004年12月21日 优先权日2003年12月23日
发明者R·H·唐, V·费尔罗, I·比瑟维, S·克奇兰, J·K·法尔威瑟, E·T·哈蒙德, T·卡洛丽, 李彩萍, 刘立功 申请人:普罗吉恩工业有限公司