作为趋化因子受体调节剂的3－氨基环戊烷甲酰胺类的制作方法

专利名称：作为趋化因子受体调节剂的3－氨基环戊烷甲酰胺类的制作方法
背景技术：
本发明涉及调节趋化因子受体，诸如CCR2和CCR5的活性的化合物。在明显实施方案中，这些化合物调节CCR2和CCR5。例如，这些化合物用于治疗与趋化因子受体表达或活性相关的疾病。
背景技术：
白细胞从血管迁移和转运入患病组织涉及启动正常抗病炎性反应。该过程也称作白细胞募集反应，它还涉及威胁生命的炎症的发作和发展以及虚弱性自身免疫性疾病。这些疾病产生的病理情况来源于身体免疫系统对正常组织的攻击。因此，防止和阻断白细胞募集至炎症、自身免疫性疾病和癌症中的靶组织可成为治疗介入的高度有效的手段。
涉及细胞免疫反应的不同类型的白细胞包括单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞和嗜碱粒细胞。在大部分情况中，单核细胞和淋巴细胞为启动、协调和维持慢性炎症反应的白细胞类型，并且阻断这些细胞进入炎症部位是理想的。淋巴细胞吸引单核细胞达到组织部位，它们与淋巴细胞共同导致发生在炎性疾病中的大部分实际组织损害。已知淋巴细胞和/或单核细胞浸润可以导致广泛的慢性自身免疫性疾病且还可以导致器官移植排斥。这些疾病包括但不限于类风湿性关节炎、慢性接触性皮炎、炎性肠病、狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化、动脉粥样硬化、牛皮癣、结节病、特发性肺纤维化、皮肌炎、皮肤类天疱疮和相关疾病(例如寻常天疱疮(Pemphigus vulgaris)、落叶性天疱疮(P.foliacious)、红斑性天疱疮(P.erythematosis))、肾小球肾炎、血管炎、肝炎、糖尿病、同种异体移植物排斥和移植物抗宿主病。
认为白细胞离开血流、蓄积在炎症部位并且启动疾病的过程具有至少三步，将它们描述为(1)滚动；(2)活化/牢固粘着；和(3)跨内皮迁移[Springer，T.A.，Nature 346425-433(1990)；Lawrence和Springer，Cell 65859-873(1991)；Butcher，E.C.，Cell671033-1036(1991)]。第二个步骤在分子水平上由化学引诱物受体介导。白细胞表面上的化学引诱物受体随后结合由损害或感染部位上的细胞分泌的趋化细胞因子。受体结合的活化白细胞，增加介导跨内皮迁移的粘着分子的粘着性，并且促进细胞定向迁移至趋化细胞因子源。
趋化细胞因子(白细胞化学引诱物/活化因子)也称作趋化因子，也称作互泌素(intercrine)和SIS细胞因子，它们为一组分子量为6-15kDa的炎症/免疫调节多肽因子，由炎症部位上的各种细胞释放，诸如巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、中性粒细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞和肥大细胞(综述在Luster，New Eng.J Med.，338，436-445(1998)和Rollins，Blood，90，909-928(1997)中)。此外，趋化因子描述在下列文献中Oppenheim，J.J.等，Annu.Rev.Immunol.，9617-648(1991)；Schall和Bacon，Curr.Opin.Immunol.，6865-873(1994)；Baggiolini，M.等，和Adv.Immunol.，5597-179(1994)。趋化因子具有刺激定向细胞迁移，也称作趋化性的过程的能力。每种细胞因子含有4个半胱氨酸残基(C)和2个内部二硫键。可以基于两个氨基末端半胱氨酸残基是否紧密相邻(CC族)或被一个氨基酸分隔开(CXC族)将趋化因子分成两组主要的亚族。这些差异与两个亚族构成单独的基因簇相关。在每个基因簇内，趋化因子一般表现出25-60％的序列相似性。CXC趋化因子，诸如白细胞介素-8(IL-8)、中性白细胞-活化蛋白-2(NAP-2)和黑素瘤生长刺激活性蛋白(MGSA)主要对中性白细胞和T淋巴细胞具有趋化性，而CC趋化因子，诸如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4，和MCP-5)和嗜酸细胞活化趋化因子(-1和-2)对巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜酸性细胞、树突细胞和嗜碱粒细胞等细胞类型具有趋化性。还存在不属于主要趋化因子亚族的趋化因子淋巴细胞趋化因子-1、淋巴细胞趋化因子-2(均为C趋化因子)；和fractalkine趋化分子(CXXXC趋化因子)。
MCP-1(也称作MCAF(巨噬细胞趋化和活化因子的缩写)或JE)为单核细胞/巨噬细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞产生的CC趋化因子并且导致单核细胞(例如，参见Valente，A.J.等，Biochemistry，1988，27，4162；Matsushima，K.等，J.Exp.Med.，1989，169，1485；Yoshimura，T.等，J.Immunol.，1989，142，1956；Rollins，B.J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1988，85，3738；Rollins，B.J.等，Blood，1991，78，1112；Jiang，Y.等，J.Immunol.，1992，148，2423；Vaddi，K.等，J.Immunol.，1994，153，4721)、记忆T淋巴细胞(例如，参见Carr，M.W.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，3652)、T淋巴细胞(例如，参见Loetscher，P.等，FASEB J.，1994，8，1055)和天然杀伤细胞(例如，参见Loetscher，P.等，J.Immunol.，1996，156，322；Allavena，P.等，Eur.J.Immunol.，1994，24，3233)细胞迁移和细胞粘附，并且介导嗜碱粒细胞的组胺释放(例如，参见Alam，R.等，J.Clin.Invest.，1992，89，723；Bischoff，S.C.等，J.Exp.Med.，1992，175，1271；Kuna，P.等，J.Exp.Med.，1992，175，489)。此外，在疾病中报导了MCP-1的高度表达，其中认为单核细胞/巨噬细胞和/或T细胞蓄积在疾病发生或发展中是重要的，诸如动脉粥样硬化(例如，参见Hayes，I.M.等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，1998，18，397；Takeya，M..等，Hum.Pathol.，1993，24，534；Yla-Herttuala，S.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1991，88，5252；Nelken，N.A.，J.Clin.Invest.，1991，88，1121)、类风湿性关节炎(例如，参见Koch，A.E.等，J.Clin.Invest.，1992，90，772；Akahoshi，T.等，Arthritis Rheum.，1993，36，762；Robinson，E.等，Clin.Exp.Immunol.，101，398)、肾炎(例如，参见Noris，M.等，Lab.Invest.，1995，73，804；Wada，T.等，Kidney Int.，1996，49，761；Gesualdo，L.等，Kidney Int.，1997，51，155)、肾病(例如，参见Saitoh，A.等，J.Clin.Lab.Anal.，1998，12，1；Yokoyama，H.等，J.Leukoc.Biol.，1998，63，493)、肺纤维化、肺结节病(例如，参见Sugiyama，Y.等，Internal Medicine，1997，36，856)、哮喘(例如，参见Karina，M.等，J.Invest.Allergol.Clin.Immunol.，1997，7，254；Stephene，T.H.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，1997，156，1377；Sousa，A.R.等，Am.J.Respir.CellMol.Biol.，1994，10，142)、多发性硬化(例如，参见McManus，C.等，J.Neuroimmunol.，1998，86，20)，牛皮癣(例如，参见Gillitzer，R.等，J.Invest.Dermatol.，1993，101，127)、炎性肠病(例如，参见Grimm，M.C.等，J.Leukoc.Biol.，1996，59，804；Reinecker，H.C.等，Gastroenterology，1995，106，40)、心肌炎(例如，参见Seino，Y.等，Cytokine，1995，7，301)、子宫内膜异位(例如，参见Jolicoeur，C.等，Am.J.Pathol.，1998，152，125)、腹膜内粘连(例如，参见Zeyneloglu，H.B.等，Human Reproduction，1998，13，1194)、充血性心力衰竭(例如，参见Aurust，P.等，Circulation，1998，97，1136)、慢性肝病(例如，参见Marra，F.等，Am.J.Pathol.，1998，152，423)、病毒性脑膜炎(例如，参见Lahrtz，F.等，Eur.J.Immunol.，1997，27，2484)、川畸病(例如，参见Wong，M.；等，J.Rheumatol.，1997，24，1179)和脓毒症(例如，参见Salkowski，C.A.；等，Infect.Immun.，1998，66，3569)。此外，已经报导了抗-MCP-1抗体在下列疾病的动物模型中表现出了抑制作用或治疗作用类风湿性关节炎(例如，参见Schimmer，R.C.等，J.Immunol.，1998，160，1466；Schrier，D.J.，J.Leukoc.Biol.，1998，63，359；Ogata，H.等，J.Pathol.，1997，182，106)；多发性硬化(例如，参见Karpus，W.J.等，J.Leukoc.Biol.，1997，62，681)；肾炎(例如，参见Lloyd，C.M.等，J.Exp.Med.，1997，185，1371；Wada，T.等，FASEB J.，1996，10，1418)；哮喘(例如，参见Gonzalo，J.-A.等，J.Exp.Med.，1998，188，157；Lukacs，N.W.，J.Immunol.，1997，158，4398)；动脉粥样硬化(例如，参见Guzman，L.A.等，Circulation，1993，88(suppl.)，I-371)；迟发型超敏反应(例如，参见Rand，M.L.等，Am.J.Pathol.，1996，148，855)；肺动脉高压(例如，参见Kimura，H.等，Lab.Invest.，1998，78，571)；和腹膜内粘连(例如，参见Zeyneloglu，H.B.等，Am.J.Obstet.Gynecol.，1998，179，438)。还报导了MCP-1的肽拮抗剂MCP-1(9-76)在小鼠模型中抑制关节炎(参见Gong，J.-H.，J.Exp.，4ed.，1997，186，131)，并且在MCP-1-缺陷型小鼠中的研究已经证实MCP-1主要用于体内单核细胞募集(参见Lu，B.等，J.Exp.Med.，1998，187，601；Gu，L.等，Moll.Cell，1998，2，275)。
肺慢性阻塞性疾病(COPD)在西方社会的死亡原因中排列为最常见的等级。将其定义为肺功能进行性衰退，仅部分可通过支气管扩张药逆转。COPD的特征在于不同于在哮喘中观察到的气道或肺泡中的慢性炎症，包括气道壁、肺泡室和血管平滑肌中的中性粒细胞、巨噬细胞、CD8+T细胞和/或肥大细胞数量增加。认为与COPD相关的细胞因子包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和MCP-1。已知CCR2为MCP-1的受体且近期数据支持了MCP-1和CCR2直接或通过巨噬细胞在气道重塑和炎症中的作用。因此，CCR2拮抗剂为治疗COPD的有吸引力的手段(De Boer，W.I.，Chest，2002，121，209S-218S)。
文献指示趋化因子，诸如MCP-1和MIP-1α吸引单核细胞和淋巴细胞达到疾病部位并且介导其活化，且由此认为与紧密涉及单核细胞和淋巴细胞的疾病发生、发展和维持紧密相关，诸如动脉粥样硬化、糖尿病、再狭窄、类风湿性关节炎、牛皮癣、哮喘、溃疡性结肠炎、肾炎(肾病)、多发性硬化、肺纤维化、心肌炎、肝炎、胰腺炎、结节病、克罗恩病、子宫内膜异位、充血性心力衰竭、病毒性脑膜炎、脑梗塞、神经病、川畸病和脓毒病(例如，参见Rovin，B.H.等，Am.J.Kidney.Dis.，1998，31，1065；Lloyd，C.等，Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.，1998，7，281；Conti，P.等，Allergy和Asthma Proc.，1998，19，121；Ransohoff，R.M.等，Trends Neurosci.，1998，21，154；MacDermott，R.P.等，Inflammatory Bowel Diseases，1998，4，54)。
趋化因子结合属于G-蛋白-偶联的七-跨膜区蛋白族的特异性细胞表面受体(综述在Horuk，Trends Pharm.Sci.，15，159-165(1994)中)，它们称作″趋化因子受体″。在结合其同源配体时，趋化因子受体通过相关三聚化G蛋白转导细胞内信号，从而导致胞内钙浓度快速增加，细胞形状改变，细胞粘附分子表达增加，脱粒和促进细胞迁移等反应。
已经克隆了编码特异性趋化因子受体的基因，并且已知这些受体为存在于各种白细胞群体上的G蛋白-偶联的七-跨膜受体。迄今为止，已经鉴定了至少5种CXC趋化因子受体(CXCR1-CXCR5)和8种CC趋化因子受体(CCR1-CCR10)。例如，IL-8为CXCR1和CXCR2的配体，MIP-1α为CCR1和CCR5的配体，且MCP-1为CCR2A和CCR2B的配体(就参考文献而言，例如，参见Holmes，W.E.等，Science 1991，253，1278-1280；Murphy P.M.等，Science，253，1280-1283；Neote，K.等，Cell，1993，72，415-425；Charo，I.F.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，2752-2756；Yamagami，S.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1994，202，1156-1162；Combadier，C.等，The Journal ofBiological Chemistry，1995，270，16491-16494，Power，C.A.等，J.Biol.Chem.，1995，270，19495-19500；Samson，M.等，Biochemistry，1996，35，3362-3367；Murphy，P.M.，Annual Reviewof Immunology，1994，12，592-633)。据报导肺炎症和肉芽肿(granuroma)形成在CCR1-缺陷小鼠中得到抑制(参见Gao，J.-L.等，J.Exp.Med.，1997，185，1959；Gerard，C.等，J.Clin.Invest.，1997，100，2022)，并且巨噬细胞募集和粥样硬化病变形成在CCR2-缺陷小鼠中降低(参见Boring，L.等，Nature，1998，394，894；Kuziel，W.A.等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1997，94，12053；Kurihara，T.等，J.Exp.Med.，1997，186，1757；Boring，L.等，J.Clin.Invest.，1997，100，2552)。
趋化因子受体也称作导致病毒感染、例如HIV感染的病毒进入的共同受体。逆转录和蛋白质加工是设计抗逆转录病毒治疗剂用于对其进行阻断的病毒生活周期的经典步骤。尽管认为许多新药可能有希望阻断病毒进入，但是目前还没有HIV-1对其无法获得抗性的活性剂。需要多个病毒复制循环才能产生形成这种抗性基础的遗传差异。复制受到最大限度的抑制的联合疗法保持了在使用其它活性剂时使用进入抑制剂的基石。认为靶向病毒进入过程中的多个步骤具有协同作用的潜能(Starr-Spires等，Clin.Lab.Med.，2002，22(3)，681)。
HIV-1进入CD4(+)细胞需要病毒包膜糖蛋白与CD4和共同受体、诸如趋化因子受体CCR5和CXCR4的依次相互作用。阻断该过程的合理手段在于使用共同受体功能的小分子拮抗剂。TAK-779分子为起预防HIV-1感染的作用的CCR5的一种这类拮抗剂。TAK-779通过阻断病毒表面糖蛋白gp120与CCR5的相互作用抑制HIV-1复制。CCR5上TAK-779的结合位点位于跨膜螺旋1、2、3和7之间形成的腔内该受体胞外表面附近(Dragic等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2000，97(10)，5639)。
认为趋化因子受体CXCR4和CCR5分别用作进入其宿主细胞的T细胞-向性(X4)和巨噬细胞-向性(R5)HIV-1菌株的共同受体。HIV-1的菌株在CD4淋巴细胞和巨噬细胞上增殖需要CCR5共同受体在细胞表面上表达。缺乏CCR5的个体(CCR5δ32纯合基因型)为表型正常和抗HIV-1感染的。病毒进入可以受到CXCR4(CXC趋化因子SDF-1)和CCR5(CC趋化因子RANTES、MIP-1α和MIP-1β)的天然配体的抑制。与CCR5而不与CXCR4发生相互作用的第一种非肽化合物为季铵衍生物，称作TAK-779，它也具有功效和可变的抗-HIV活性(De Clercq等，Antivir.Chem.Chemother.2001，12 Suppl.1，19。
SCH-C(SCH 351125)为通过CCR5共同受体的另一种HIV-1进入的小分子抑制剂。一种肟-哌啶化合物SCH-C是作为在多受体结合和信号转导试验中确定的特异性CCR5拮抗剂。该化合物特异性抑制U-87星形神经胶质瘤中CCR5介导的HIV-1感染，但对表达CXCR4的细胞感染没有作用(Strizki等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2001，98(22)，12718或Tremblay等，Antimicrobial Agents和Chemotherapy，2002，46(5)，1336)。
与SCH-C在化学上相关的AD101也通过人CCR5抑制人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的进入。已经发现AD101通过猕猴CCR5抑制HIV-1进入，而SCH-C不能。在人与猕猴共同受体形式之间存在差异的8个残基中，仅有一个，即甲硫氨酸-198可以导致猕猴CCR5对SCH-C的抑制作用不敏感。198为位于CCR5跨膜(TM)螺旋5中并且不位于涉及TM螺旋1、2、3和7中的残基的AD101和SCH-C的上述确定的结合位点内。基于CCR5中的氨基酸取代研究提示接近198位残基的CCR5区可以影响该受体的构象状态(Billick等，2004，J.Virol.，78(8)，4134)。
调节趋化因子受体活性的化合物的鉴定代表了用于治疗与趋化因子受体活性相关的疾病的药物活性剂研发要求的理想药物设计手段。本发明的化合物有助于满足这些和其它要求。
发明概述本发明提供了通式I的化合物 或其药物上可接受的盐或前体药物，其中本文提供了构成成员。
本发明进一步提供了包括通式I化合物和药物上可接受的载体的组合物。
本发明进一步提供了调节趋化因子受体活性的方法，包括使所述的趋化因子受体接触通式I的化合物。
本发明进一步提供了治疗与患者趋化因子受体表达或活性相关的疾病的方法，包括给予该患者治疗有效量的通式I的化合物。
本发明进一步提供了治疗患者HIV感染的方法，包括给予该患者给予治疗有效量的通式I的化合物。
本发明进一步提供了本文所述的化合物在疗法中的应用。
本发明进一步提供了本文所述的化合物在制备用于疗法的药物中的应用。
详细描述化合物本发明特别提供了通式I的化合物 或其药物上可接受的盐或前体药物，其中虚线表示任选的键；W为 V为N、NO或CR5；X为N，NO或CR2；Y is N、NO或CR3；Z为N、NO或CR4；其中V、X、Y和Z中不超过一个为NO；RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6链烯基、C1-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、杂环基、碳环基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、CN、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R1为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、-(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-(C0-6烷基)-S-(C1-6烷基)、-(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、OH、OR10、SR10、COR11、CO2R10、CONR10R12、碳环基、杂环基、CN、NR10R12、NR10SO2R10、NR10COR10、NR10CO2R10、NR10CONR12、CR10R11CO2R10或CR10R11OCOR10；R2、R3、R4、R5和R6各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6硫代烷氧基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、杂环基、碳环基、碳环氧基、杂环氧基、CN、NO2、COR11、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R7为H或任选地被1-3个选自卤素、OH、CO2H、CO2-(C1-6烷基)或C1-3烷氧基的取代基取代的C1-6烷基；R8为C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷氧基或OH；R8’为H；R9和R9’各自独立为H、C1-6烷基、卤素、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、OH、CO2R10、OCOR10，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个选自F、C1-3烷氧基、OH或CO2R10的取代基取代；或R9和R9’与它们所连接的碳原子一起形成3-7元螺环基；R10为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH，C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H，和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；R11为H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基，其中所述的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3的取代基取代；R12为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H，和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；且P为0或1。
本发明特别提供了通式II的化合物 或其药物上可接受的盐或前体药物，其中虚线表示任选的键；W为 X为N、NO或CR2；Y为N、NO或CR3；Z为N、NO或CR4；其中X、Y和Z中不超过一个为NO；RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6链烯基、C1-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、杂环基、碳环基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、CN、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R1为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-S-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、OH、OR10、SR10、COR11、CO2R10、CONR10R12、碳环基、杂环基、CN、NR10R12、NR10SO2R10、NR10COR10、NR10CO2R10、NR10CONR12、CR10R11CO2R10或CR10R11OCOR10；R2、R3、R4、R5和R6各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6硫代烷氧基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、杂环基、碳环基、碳环氧基、杂环氧基、CN、NO2、COR11、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R7为H或任选地被1-3个选自卤素、OH、CO2H、CO2-(C1-6烷基)或C1-3烷氧基的取代基取代的C1-6烷基；R8为C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷氧基或OH；R8’为H；R9和R9’各自独立为H、C1-6烷基、卤素、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、OH、CO2R10、OCOR10，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个选自F、C1-3烷氧基、OH或CO2R10的取代基取代；或R9和R9’与它们所连接的碳原子一起形成3-7元螺环基；R10为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH，C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H，和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；R11为H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基，其中所述的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3的取代基取代；R12为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H，和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；且P为0或1。
在某些实施方案中，W为 在某些实施方案中，W为
在某些实施方案中，V为CR5。
在某些实施方案中，X为CR2。
在某些实施方案中，Y为CR3。
在某些实施方案中，Z为CR4。
在某些实施方案中，X为N。
在某些实施方案中，Z为N。
在某些实施方案中，X和Z均为N。
在某些实施方案中，X为CR2；Y为CR3；且Z为CR4。
在某些实施方案中，V为CR5，X为CR2；Y为CR3；且Z为CR4。
在某些实施方案中，V、X、Y和Z中不超过2个为N。
在某些实施方案中，V、X、Y和Z中至少2个不为N或NO。
在某些实施方案中，V、X、Y和Z中没有1个为N或NO。
在某些实施方案中，V、X、Y和Z中的1个为N。
在某些实施方案中，V、X、Y和Z中的2个为N。
在某些实施方案中，RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6链烯基、C1-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基。
在某些实施方案中，RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH或C1-6烷氧基。
在某些实施方案中，RA、RA1、RB和RB1各自独立为H或OH。
在某些实施方案中，R1为C1-6烷基、C1-6羟基烷基、-(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)或杂环基。
在某些实施方案中，R1为C1-6烷基。
在某些实施方案中，R1为丙-2-基。
在某些实施方案中，R5和R6不为H。
在某些实施方案中，R5和R6为C1-4卤代烷基。
在某些实施方案中，R6为C1-4卤代烷基。
在某些实施方案中，R6为CF3。
在某些实施方案中，R7为H。
在某些实施方案中，R8为C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基。
在某些实施方案中，R8为C1-3烷氧基。
在某些实施方案中，R8为甲氧基。
在某些实施方案中，R8为乙氧基。
在某些实施方案中，R9和R9’均为H。
在某些实施方案中，p为0。
在某些实施方案中，p为1。
在某些实施方案中，本发明的化合物具有通式Ia 在某些实施方案中，本发明的化合物具有通式Ib、Ic或Id
在某些实施方案中，本发明的化合物具有通式Ie或If 在某些实施方案中，本发明的化合物具有通式Ig 在某些实施方案中，本发明的化合物具有通式Ih或Ii
在本说明书中不同位置处，以组和范围的形式披露了本发明化合物的取代基。特别指定，本发明包括这类组合范围中成员的各个和每种子组合。例如术语“C1-6烷基”特别用以各自披露甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
就变量出现一次以上的本发明化合物而言，每个变量可以为选自定义该变量的马库什基团的不同部分。例如，如果描述了带有2个同时存在于相同化合物上的R基团的结构；那么这2个R基团可以代表选自对R定义的马库什基团的不同部分。
进一步理解，为清楚起见在上下文各实施方案中描述的本发明的某些特征还可以以单一实施方案的组合形式提供。相反，为简明起见在上下文单一实施方案中描述的本发明的不同特征也可以单独或以任意合适的子组合的形式提供。
本文所用的术语“烷基”的含义是指为直链或支链的饱和烃基。烷基的实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正-丙基和异丙基)、丁基(例如正-丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正-戊基、异戊基、新戊基)等。烷基可以含有1-约20个，2-约20个，1-约10个，1-约8个，1-约6个，1-约4个或1-约3个碳原子。
本文所用的“亚烷基”指的是二价烷基。
本文所用的“C2-4亚烷基”指的是由2-4个碳原子组成的亚烷基。
本文所用的“链烯基”指的是带有一个或多个碳-碳双键的烷基。链烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、环己烯基等。
本文所用的“炔基”指的是带有一个或多个碳-碳三键的烷基。炔基的实例包括乙炔基、丙炔基等。
本文所用的“卤代烷基”指的是带有一个或多个卤素取代基的烷基。卤代烷基的实例包括CF3、C2F5、CHF2、CCl3、CHCl2、C2Cl5等。
本文所用的“芳基”指的是单环或多环(例如带有2、3或4个稠合环)芳族烃类，诸如，例如苯基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基等。在某些实施方案中，芳基带有6-约20个碳原子。
本文所用的“碳环基”为饱和(即不含双键或三键)或不饱和(即含有一个或多个双键或三键)的环烃部分。碳环基可以为单-、多-(例如2、3或4个稠合环)。碳环基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、1，3-环戊二烯基、环己烯基、降冰片基、降蒎基、norcarnyl、金刚烷基、苯基等。碳环基可以为芳族(例如“芳基”)或非-芳族(例如“环烷基”)的。在某些实施方案中，碳环基可以带有约3-约30个，约3-约20个，约3-约10个或约3-约7个成环碳原子。
本文所用的“环烷基”指的是非-芳族碳环类，包括环状的烷基、链烯基和炔基。环烷基可以包括单-或多环(例如带有2、3或4个稠合环)环系以及螺环系。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降冰片基、降蒎基、norcarnyl、金刚烷基等。在环烷基的定义中还包括带有一个或多个与环烷基环稠合的(即带有与之共同具有的键)芳族环的部分，例如戊烷、戊烯、己烷等的苯并衍生物。在某些实施方案中，环烷基可以带有约3-约10个，约3个-约10个或约3个-约7个成环碳原子。在某些实施方案中，环烷基可以带有0、1、2、3、4或5个双键或三键。在另一个实施方案中，环烷基的一个或多个成环碳原子可以被氧代或硫代基团取代。
本文所用的“杂环基”或“杂环”指的是饱和或不饱和环烃，其中该环烃的一个或多个成环碳原子被杂原子取代，诸如O、S或N。杂环基可以为芳族(例如“杂芳基”)或非-芳族(例如“杂环烷基”)的。杂环基还可以相当于氢化和部分氢化的杂芳基。杂环基可以包括单-或多环(例如带有2、3或4个稠合环)环系。杂环基可能的特征在于带有3-14或3-7个成环原子。在某些实施方案中，杂环基除含有至少一个杂原子外，还可以含有约1-约13，约2-约10或约2-约7个碳原子并且可以提供碳原子或杂原子连接。在另一个实施方案中，任意的成环碳或杂原子可以被氧化(例如带有氧代或硫代取代基)或氮原子可以季铵化。杂环基的实例包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二烷、哌啶基、吡咯烷基、异唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基等以及下文对“杂芳基”和“杂环烷基”所列的任意基团。杂环的额外实例包括嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、phenoxathiinyl、吩嗪基、二氮杂萘基、哌嗪基、哌啶基、3，6-二氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、1，2，5，6-四氢吡啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1，2，5-噻-二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基(thianthrenyl)、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫吨基、八氢异喹啉基、二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5-二唑基、1，3，4-二唑基、唑烷基、唑基、唑烷基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并-苯硫基、苯并唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、菲啶基、十-氢喹啉基、2H，6H-1，5，2二噻嗪基、二氢苯并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯基、噌啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基和异唑基。杂环的其它实例包括氮杂环丁烷-1-基、2，5-二氢-1H-吡咯-1-基、哌啶-1基、哌嗪-1-基、吡咯烷-1-基、异喹啉-2-基、吡啶-1-基、3，6-二氢吡啶-1-基、2，3-二氢吲哚-1-基、1，3，4，9-四氢咔啉-2-基、噻吩并[2，3-c]吡啶-6-基、3，4，10，10a-四氢-1H-吡唑并[1，2-a]吲哚-2-基、1，2，4，4a，5，6-六氢-吡唑并[1，2-a]喹啉-3-基、吡唑并[1，2-a]喹啉-3-基、二氮杂庚环-1-基、1，4，5，6-四氢-2H-苯并[f]异喹啉-3-基、1，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-苯并[f]异喹啉-3-基、3，3a，8，8a-四氢-1H-2-氮杂-环戊[a]茚-2-基和2，3，4，7-四氢-1H-吖庚因-1-基、氮杂庚环-1-基。
本文所用的“杂芳基”指的是带有至少一个杂原子的环原子，诸如硫、氧或氮的芳族杂环。杂芳基包括单环和多环(例如带有2、3或4个稠合环)系。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基(furyl)(呋喃基(呋喃yl))、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、异唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、二氢吲哚基等。在某些实施方案中，杂芳基带有1-约20个碳原子，且在其它实施方案中，带有约3-约20个碳原子。在某些实施方案中，杂芳基含有3-约14个，3-约7个或5-6个成环原子。在某些实施方案中，杂芳基带有1-约4个，1-约3个或1-2个杂原子。
本文所用的“杂环烷基”指的是非-芳族杂环，包括环状的烷基、链烯基和炔基，其中一个或多个成环碳原子被杂原子，诸如O、N或S原子取代。“杂环烷基”的实例包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二烷、吡啶基、吡咯烷基、异唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基等。在杂环烷基的定义中还包括带有一个或多个与非芳族杂环稠合(即带有与之具有共同的键)的芳族环的部分，例如邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基和杂环的苯并衍生物，诸如吲哚烯(indolene)和异吲哚烯基(isoindolene groups)。在某些实施方案中，杂环烷基带有1-约20个碳原子，且在其它实施方案中带有约3-约20个碳原子。在某些实施方案中，杂环烷基含有3-约14个，3-约7个或5-6个成环原子。在某些实施方案中，杂环烷基带有1-约4个，1-约3个或1-2个杂原子。在某些实施方案中，杂环烷基含有0-3个双键。在某些实施方案中，杂环烷基含有0-2双键或三键。
本文所用的“螺环基”指的是与它所连接的额外环烷基或杂环烷基共有一个原子的3-14元环烷基或3-14元杂环烷基。
本文所用的“卤素(halo)”或“卤素(halogen)”包括氟、氯、溴和碘。
本文所用的“烷氧基”指的是-O-烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正-丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。
本文所用的“硫代烷氧基”指的-S-烷基。
本文所用的“卤代烷氧基”指的是-O-卤代烷基。卤代烷氧基的实例为OCF3。
本文所用的“碳环氧基”指的是-O-碳环基。
本文所用的“环烷氧基”指的是-O-环烷基。
本文所用的“碳环基烷基”指的是被碳环基取代的烷基。
本文所用的“芳烷基”或“芳基烷基”指的是被芳基取代的烷基。
本文所用的“环烷基烷基”指的是被环烷基取代的烷基。
本文所用的“杂环基烷基”指的是被杂碳环基取代的烷基部分。杂环基烷基的实例包括“杂芳基烷基”(被杂芳基取代的烷基)和“杂环烷基烷基”(被杂环烷基取代的烷基)。在某些实施方案中，杂环基烷基带有3-24个碳原子与至少一个成环杂原子。
本文所用的“氧代”指的是＝O。
本文所述的化合物可以为不对称的(例如带有一个或多个立体中心)。除非另有说明，指的是所有的立体异构体，诸如对映体和非对映体。可以分离旋光或外消旋形式的含有不对称取代的碳原子的本发明化合物。如何由旋光原料制备旋光形式的方法为本领域中公知的，诸如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。许多烯烃类、C＝双键等的几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，并且本发明预期所有这类稳定的异构体。描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体并且可以将它们作为异构体混合物或作为单独的异构体形式分离。
可以通过本领域中公知的大量方法拆分化合物的外消旋混合物。实例方法包括使用为旋光的成盐有机酸的“手性拆分酸”进行分级重结晶。用于分级重结晶法的合适的拆分试剂为例如旋光酸，诸如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种旋光樟脑磺酸，诸如β-樟脑磺酸的D和L形式。适合于分级重结晶法的其它拆分试剂包括α-甲基苄胺的立体异构体纯形式(例如S和R形式或非立体异构体纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲伪麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1，2-二氨基环己烷等。
还可以通过在填充了旋光拆分试剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱拆分外消旋混合物。本领域技术人员可以确定合适的洗脱溶剂的组成。
本发明的化合物还包括互变体形式，诸如酮-烯醇互变异构体。
本发明的化合物还可以包括出现在中间体或最终化合物上的原子的所有同位素。同位素包括那些具有相同原子数，但原子量不同的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。
本文所用的术语″药物上可接受的″指的是在健全的医学判断范围内适用于接触人和动物组织，但没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症的与合理的利益/风险比相匹配的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
本发明还包括本文所述化合物的药物上可接受的盐。本文所用的″药物上可接受的盐″指的是披露化合物的衍生物，其中通过将存在的酸或碱部分转化成其盐形式修饰母体化合物。药物上可接受的盐的实例包括，但不限于碱性残基，诸如胺类的无机酸或有机酸盐；所需残基，诸如羧酸的碱金属或有机酸盐等。本发明的药物上可接受的盐包括例如由无毒性无机酸或有机酸形成的母体化合物的无毒性盐或季铵盐。可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成本发明的药物上可接受的盐。一般来说，可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的合适的碱或酸在水或有机溶剂或它们两者的混合物中反应制备这类盐；一般来说，优选非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的实例可以在Remington′sPharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，p.1418和Journal of Pharmaceutical Science，66，2(1977)中找到，将这些文献各自完整地引入本文作为参考。
本发明还包括本文所述化合物的前体药物。本文所用的“前体药物”指的是在对哺乳动物受试者给药时释放活性母体药物的任何共价结合的载体。可以通过修饰存在于化合物上的官能基团制备前体药物，按照这类方式以便以常规操作或在体内将修饰物裂解成母体化合物。前体药物包括化合物，其中在对哺乳动物受试者给药时，羟基、氨基、硫氢基或羧基与可分别裂解成游离羟基、氨基、巯基或羧基的任意基团结合。前体药物的实例包括但不限于本发明化合物上的醇和胺官能基团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。在T.Higuchi和V.Stella，″Pro-drugs as Novel Delivery Systems″A.C.S.Symposium Series的Vol.和Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association和Pergamon Press，1987中讨论了前体药物的制备和应用，将这两篇文献的全部内容引入本文作为参考。
合成可以使用公知有机合成技术制备并且可以按照任意大量可能的合成途经合成本发明的化合物，包括其盐、水合物和溶剂合物。
可以在有机合成领域普通技术人员易于选择的合适的溶剂中进行制备本发明化合物的反应。合适的溶剂可以基本上不与原料(反应剂)、中间体或产物在进行反应的温度下反应，例如从溶剂冰冻温度到溶剂沸腾温度范围的温度。可以在溶剂或一种以上溶剂混合物中进行指定的反应。根据特定反应步骤的不同，可以选择用于特定反应步骤的合适的溶剂。
本发明化合物的制备可以包括对各种化学基团的保护和脱保护。保护和脱保护的要求和合适的保护基的选择易于由本领域技术人员确定。例如，保护基化学可以在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，3rd.Ed.，Wiley & Sons，Inc.，NewYork(1999)中找到，将该文献的全部内容引入本文作为参考。
可以按照本领域公知的任意合适的方法监测反应。例如，可以通过分光光度法，诸如核磁共振光谱法(例如1H或13C)、红外光谱法、分光光度测定法(例如UV-可见光)或质谱法或通过色谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法监测反应。
下文的方案1-13中提供了本发明化合物的典型合成途经，其中所述通式的构成成员如本文所定义。
可以使用方案1中所述的方案制备通式1-5的3-氨基戊烷羧酸。可以通过在DMF中用碘甲烷/碳酸钾处理将商购的羧酸1-1转化成酯，诸如甲酯。可以使用碱，诸如六甲基二硅氮化锂(LHMDS)使所得酯1-2进行使用卤化物、诸如碘化物(R1I)的烷基化而提供烷基化产物1-3，其为顺式与反式非对映体的混合物(4∶1之比)。可以通过在将酯水解成酸后进行结晶除去少量的反式对映体。可以使用催化剂，诸如Pd-C使所得对映体纯的酸1-4进行氢化而得到饱和的羧酸1-5。
方案1 可以使用方案2中概括的操作步骤制备通式2-5的环戊烷甲酸。可以将商购的3-氧代环戊烷甲酸2-1转化成酯，诸如甲酯。可以通过在有酸性催化剂(catlyst)、诸如对甲苯磺酸存在下用原甲酸三甲酯处理来保护所得酯2-2的酮。可以使用碱，诸如LHMDS进行使用烷基碘(R1I)的生成的酮缩醇2-3的烷基化。使用碱，诸如LiOH、NaOH或KOH使烷基化酯2-4水解而得到通式2-5的羧酸。
方案2 使用方案3中所述的操作步骤制备哌嗪衍生物。使用碘化亚铜(I)和磷酸钾使通式3-2的哌嗪衍生物与通式3-1的碘苯衍生物偶联而得到中间体3-3。使用酸，诸如在二烷中的HCl或TFA除去Boc基团而得到通式3-4的哌嗪衍生物。
方案3 或者，可以通过用通式4-2的哌嗪衍生物取代通式4-1的2-氯吡啶或2-氯嘧啶衍生物制备哌嗪衍生物(通式4-3)。
方案4 或者，可以使用方案5中解释的顺序制备哌嗪衍生物。可以通过用溴化异丙基镁和碘处理将商购的3，5-二溴吡啶5-1转化成3-溴-5-碘吡啶5-2。可以使用碘化亚铜(I)和磷酸钾使所得碘与通式3-2的哌嗪衍生物偶联。在使用溴化异丙基镁和碘将所得中间体5-3的溴转化成碘后，可以通过用Me3SiCF3/CuI/KF/DMF处理用三氟甲基取代碘而得到通式5-5的三氟甲基吡啶衍生物。使用酸，诸如在二烷中的HCl或TFA除去Boc而得到通式5-6的哌嗪衍生物。
方案5 可以如方案6中所示合成哌啶或四氢吡啶衍生物。用烷基锂，诸如正-丁基锂或叔丁基锂使通式6-1的溴-或碘苯衍生物锂化，随后用通式6-2的酮衍生物猝灭而得到通式6-3的叔醇。在使用脱水剂，诸如亚硫酰氯/吡啶脱水后，可以通过使用催化剂，诸如Pd/碳氢化还原所得烯烃。用酸，诸如在二烷中的HCl或TFA处理6-3、6-4和6-5而得到通式6-6、6-7和6-8的化合物。
方案6 或者，可以使用方案7中解释的顺序合成哌嗪或四氢吡啶衍生物。可以通过用BrSiMe3处理将商购的通式4-1的2-氯吡啶或2-氯吡啶衍生物转化成通式7-1的2-溴吡啶衍生物。可以使用与方案6中所述相似的操作步骤由7-1获得通式7-5和7-6的哌啶和四氢吡啶衍生物。
方案7 或者，可以如方案8中概括的合成哌啶或四氢吡啶衍生物。可以通过硝化商购的5-三氟甲基吡啶-2-醇(8-1)获得3-硝基-5-三氟甲基吡啶-2-醇。在将8-2上的羟基转化成氯后，使用催化剂，诸如Pd/碳使所得氯化合物8-3进行氢化而得到3-氨基-5-三氟甲基吡啶8-4。在有Cu(I)Br存在下使用NaNO2/HBr使8-4重氮化而得到3-溴-5-三氟甲基吡啶8-5。在方案6中所述的操作步骤后，可以将8-5转化成通式8-9和8-10的哌啶或四氢吡啶衍生物。
方案8 可以如方案9中详述的获得四氢吡喃衍生物(其中R8a例如为烷基)。可以通过用在甲醇中的间-氯过苯甲酸处理将商购的4-甲氧基-3，6-二氢-2H-吡喃9-1转化成4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃-2-醇。使用NaH，用烷基卤使9-2烷基化而得到三烷氧基中间体9-3。使用酸，诸如HCl水溶液处理9-3而得到通式9-4的酮产物。可以通过用氨基二苯基甲烷进行还原氨基化，随后进行氢化将酮9-4转化成通式9-6的胺。
方案9 可以使用方案10中所述的方法组合通式I的最终化合物。可以使用标准酰胺形成试剂，诸如BOP或PyBrop(偶联试剂)使通式1-5的羧酸与通式10-1的胺缩合。在使用酸，诸如HCl或TFA除去Boc后，使用还原剂，诸如三乙酰氧基硼氢化钠使所得胺10-3与通式10-4的酮进行还原氨基化而得到通式10-5的最终化合物。
方案10 或者，可以按照方案11组合本发明的化合物。使用标准酰胺形成法使通式2-5的羧酸与通式10-1的胺偶联而得到通式11-1的酰胺。在使用酸水将酮缩醇转化成酮后，使用还原剂，诸如三乙酰氧基硼氢化钠使所得酮11-2与通式11-3的胺进行还原氨基化而得到通式11-4的化合物。
方案11 方法在某些实施方案中，本发明的化合物可以调节一种或多种趋化因子受体的活性。术语“调节”指的是增加或降低受体活性的能力。因此，本发明的化合物可以用于调节趋化因子受体的方法中，通过使所述受体接触本文所述的化合物或组合物中的任意一种或多种来进行。在某些实施方案中，本发明的化合物可以作为趋化因子受体抑制剂起作用。在额外的实施方案中，本发明的化合物可以用于调节需要调节受体的个体的趋化因子受体活性，通过给予调节量的通式I化合物来进行。
本发明化合物结合和/或调节的趋化因子受体包括任意的趋化因子受体。在某些实施方案中，趋化因子受体属于趋化因子受体的CC族，包括例如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8和CCR10。在某些实施方案中，趋化因子受体为CCR2。在某些实施方案中，趋化因子受体为CCR5。在某些实施方案中，趋化因子受体结合和/或调节CCR2和CCR5。
本发明的化合物可以为选择性的。所谓“选择性”指的是化合物与至少一种额外的趋化因子受体相比以分别具有较大亲合力或功效结合或抑制趋化因子受体。
本发明的化合物为CCR2和CCR5的双重抑制剂，即本发明的化合物以分别比对其它趋化因子受体更大的亲合力或功效结合或抑制CCR2和CCR5，所述的其它趋化因子受体诸如CCR1、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7、CCR8和CCR10。在某些实施方案中，本发明的化合物对CCR2和CCR5具有的结合或抑制选择性超过了对任意其它趋化因子受体的结合或抑制选择性。选择性可以至少约为10-倍，至少约20-倍，至少约50-倍，至少约100-倍，至少约200-倍，至少约500-倍或至少约1000-倍。可以按照本领域中的常规方法，诸如按照本文提供的试验测定结合亲和性和抑制剂功效。
本发明进一步提供了治疗个体(例如患者)趋化因子受体-相关疾病或障碍的方法，通过对需要这类治疗的个体给予治疗有效量或剂量的本发明化合物或其药物组合物来进行。趋化因子受体-相关疾病可以包括直接或间接与趋化因子受体表达或活性相关的任意疾病、障碍或病症。趋化因子受体-相关疾病还可以包括可以通过调节趋化因子受体活性可以预防、改善或治愈的任意疾病、障碍或病症。趋化因子受体-相关疾病可以进一步包括特征在于病原体(infectious agent)、诸如病毒或病毒蛋白与趋化因子受体结合的任意疾病、障碍或病症。在某些实施方案中，趋化因子受体-相关疾病为CCR5-相关疾病，诸如HIV感染。
趋化因子受体-相关疾病、病症和疾患的实例包括炎性和炎性疾病、免疫病变、癌症和病毒感染。炎性疾病的实例包括具有炎症成分的疾病，诸如哮喘、季节性和终年性过敏性鼻炎、鼻窦炎、结膜炎、与年龄相关的黄斑退行性改变、食物过敏、鲭鱼肉中毒、牛皮癣、荨麻疹、瘙痒症、湿疹、炎性肠病、血栓形成疾病、中耳炎、肝硬化、心脏病、阿尔茨海默氏病、脓毒病、再狭窄、动脉粥样硬化、多发性硬化、克罗恩病、溃疡性结肠炎、超敏反应肺病、药物造成的肺纤维化、慢性阻塞性肺疾患(COPD)、类风湿性关节炎和肾炎、溃疡性结肠炎、特应性皮炎、中风、急性神经损伤、结节病、肝炎、子宫内膜异位、神经性疼痛、超敏感性肺炎、嗜酸细胞性肺炎、迟发型超敏反应、间质性肺病(ILD)(例如特发性肺纤维化或与类风湿性关节炎相关的ILD、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、系统性硬化病、斯耶格伦综合征、多发性肌炎或皮肌炎)、眼疾(例如视网膜变性、脉络膜新生血管形成等)等。免疫病变的实例包括类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、青少年型糖尿病；肾小球性肾炎、autoimmune throiditis、器官移植排斥，包括同种异体移植物排斥和移植物抗宿主病。癌症的实例包括癌症，诸如乳腺癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤等，其特征在于巨噬细胞(例如肿瘤相关巨噬细胞，TAMs)浸润入肿瘤或患病组织。病毒感染的实例包括疱疹感染、HIV感染或AIDS。
本文所用的术语“接触”指的是体外系统或体内系统中的指定部分彼此接触。例如，使趋化因子受体“接触”本发明的化合物包括给予具有趋化因子受体的个体或患者、诸如人本发明的化合物，并且，例如将本发明的化合物导入含有细胞的样品或含有趋化因子受体的纯化制品。
本文所用的术语“个体”或“患者”可以互换使用，指的是任意动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿动物、家兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类，且最优选人。
本文所用的术语“治疗有效量”指的是引起生物或药物反应的活性化合物或药物活性剂的量，研究人员、兽医、医生或其它临床医师认为所述的生物或药物反应在组织、系统、动物、个体或人体内具有意义，包括如下中的一种或多种(1)预防疾病；例如，预防可能易感疾病、病症或障碍，但尚未发生或展示出疾病病理情况或症状的个体的疾病、病症或障碍(非限制性实例为预防超敏反应肺病、药物造成的肺纤维化、慢性阻塞性肺疾患(COPD)、移植物抗宿主病和/或移植后的同种异体移植物排斥；或预防过敏反应，诸如特应性皮炎、迟发型超敏反应或季节性或终年性过敏性鼻炎)；(2)抑制疾病；例如，抑制发生或展示出疾病、病症或障碍的病理情况或症状的个体的疾病、病症或障碍(即阻止病理情况和/或症状进一步发展)，诸如抑制超敏反应肺病、药物造成的肺纤维化、慢性阻塞性肺疾患(COPD)、类风湿性关节炎、狼疮或牛皮癣中的炎症或自身免疫反应；或抑制肿瘤生长或使病毒感染情况中的病毒载量保持稳定；和(3)改善疾病；例如改善发生或展示出疾病、病症或障碍的病理情况或症状的个体的疾病、病症或障碍(即逆转病理情况和/或症状)，诸如减轻超敏反应肺病、药物造成的肺纤维化、慢性阻塞性肺疾患(COPD)、类风湿性关节炎、狼疮或牛皮癣中的自身免疫反应；或使与癌症相关的肿瘤退缩或降低病毒感染情况中的病毒载量。
一种或多种额外的药物活性剂，诸如，例如抗体、抗炎药、免疫抑制剂、化疗剂可以与本发明化合物联合用于治疗趋化因子受体-相关疾病、障碍或病症。可以将这些活性剂与本发明化合物合并在单一剂型中，或可以将这些活性剂作为单独的剂型同时或依次给药。
一种或多种额外的药物活性剂，诸如，例如抗病毒剂、抗体、抗炎药、促胰岛素分泌剂和增敏剂、血清脂质和脂质载体调节剂，和/或免疫抑制剂可以与本发明化合物联合用于治疗趋化因子受体-相关疾病、障碍或病症。可以将这些活性剂与本发明化合物合并在单一或连续剂型中，或可以将这些活性剂作为单独的剂型同时或依次给药。
与本发明化合物联用所关注的合适的抗病毒药可以包括核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTIs)、蛋白酶抑制剂和其它抗病毒药。
与本发明化合物联用所关注的合适的抗病毒药可以包括核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非-核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、蛋白酶抑制剂、进入抑制剂、融合抑制剂、成熟抑制剂和其它抗病毒药。
合适的NRTIs实例包括齐多夫定(AZT)；去羟肌苷(ddl)；扎西他滨(ddC)；司他夫定(d4T)；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韦(1592U89)；阿德福韦二匹伏酯[双(POM)-PMEA]；洛布卡韦(BMS-180194)；BCH-10652；恩曲他滨[(-)-FTC]；β-L-FD4(也称作β-L-D4C并且称作β-L-2′，3′-双脱氧(dicleoxy)-5-氟-胞苷(cytidene))；DAPD，((-)-β-D-2，6，-二氨基-嘌呤二氧戊环)；和洛德腺苷(FddA)。
典型的合适的NNRTIs包括奈韦拉平(BI-RG-587)；地拉韦啶(BHAP，U-90152)；依法韦仑(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；和(+)-红厚壳属植物提取物(calanolide)A(NSC-675451)和B。
典型的合适的蛋白酶抑制剂包括沙奎那韦(Ro 31-8959)；利托那韦(ABT-538)；茚地那韦(MK-639)；奈非那韦(nelfnavir)(AG-1343)；安泼那韦(141W94)；拉西那韦(BMS-234475)；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；和AG-1 549。
其它抗病毒药包括羟基脲、利巴韦林、IL-2、IL-12、喷他夫西、enfuvirtide、C-34、环三氮杂磺酰胺CADA、PA-457和Yissum ProjectNo.11607。
在某些实施方案中，与本发明化合物联用所各种的抗炎药或止痛药可以包括例如阿片制剂激动剂类；脂氧合酶抑制剂，诸如5-脂氧合酶抑制剂；环加氧酶抑制剂，诸如环加氧酶-2抑制剂；白细胞介素抑制剂，诸如白细胞介素-1抑制剂；TNF抑制剂，诸如英夫利昔单抗、依那西普或阿达木单抗；NNMA拮抗剂；一氧化氮抑制剂或一氧化氮合成抑制剂；非类固醇性抗炎剂或抑制细胞因子的抗炎药，例如，诸如对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、ketodolac、吗啡、萘普生、非那西丁、吡罗昔康、类固醇止痛药、舒芬太尼、舒林酸(sunlindac)、替尼达普等。类似地，可以将本发明的化合物与如下药物一起给药疼痛缓解剂；增效剂，诸如咖啡因、H2-拮抗剂、二甲硅油、氢氧化铝或氢氧化镁；减充血剂，诸如去氧肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、羟甲唑啉、ephinephrine、萘甲唑林、赛洛唑啉、丙己君或左旋-去氧麻黄碱；antfitussive，诸如可待因、氢可酮、卡拉美芬、托可拉斯或dextramethorphan；利尿剂；和镇静或非镇静抗组胺药。
在某些实施方案中，与本发明化合物联用所关注的药物活性剂可以包括但不限于(a)VLA-4拮抗剂，诸如描述在US 5,510,332、WO95/15973、WO96/01644、WO96/06108、WO96/20216、WO96/229661、WO96/31206、WO96/4078、WO97/030941、WO97/022897、WO98/426567、WO98/53814、WO98/53817、WO98/538185、WO98/54207和WO98/58902中的那些；(b)类固醇，诸如倍氯米松(beclornethasone)、甲泼尼龙(methyl pi-ednisolone)、倍他米松(betarnethasone)、泼尼松、地塞米松和氢化可的松；(c)免疫抑制剂，诸如环胞菌素、他克莫司、雷帕霉素(raparnycin)和其它FK506类免疫抑制剂；(d)抗组胺药(HI-组胺拮抗剂)，诸如溴苯那敏(bromopheniramine)、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼拉敏、美吡拉敏(pyrilarnine)、阿司咪唑(asternizole)、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、desearboethoxyloratadine等；(e)非类固醇类止喘药，诸如特布他林、奥西那林、非诺特罗、异他林(isoethaiine)、沙丁胺醇、比托特罗、吡布特罗、荼碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白细胞三烯拮抗剂(例如扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白细胞三烯生物合成抑制剂(例如齐留通、BAY-1005)；(f)非类固醇类抗炎药(NSAIDs)，诸如丙酸衍生物(例如阿明洛芬、苯洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫洛芬)、乙酸衍生物(例如吲哚美辛、阿西美辛(acernetacin)、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛和佐美酸)、fenarnic acid衍生物(氟芬那酸(flufenarnic acid)、甲氯芬那酸、甲灭酸(rnefenamicacid)、尼氟酸和tolfenarnic acid)、联苯羧酸(biphenylearboxylicacid)衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康类(oxicarns)(伊索昔康(isoxicarn)、吡罗昔康、舒多昔康和替诺昔康)、水杨酸类(乙酰水杨酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(阿扎丙宗、苄哌立隆(bezpiperylon)、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、保泰松)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂；(h)磷酸二酯酶IV型(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体，尤其是CXCR-4、CCR1、CCR2、CCR3和CCR5的其它拮抗剂；(j)降胆固醇药，诸如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、sirrivastatin和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀类药物)、多价螯合剂(考来烯胺和考来替泊)、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝特)；和普罗布考；(k)抗炎生物制剂，诸如抗-TNF疗法、抗-IL-1受体、CTLA-4Ig、抗-CD20和抗-VLA4抗体；(l)抗糖尿病药，诸如胰岛素、磺酰脲类、双胍类(二甲双胍)、U.-糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和orlitazones(曲格列酮和吡格列酮)；(m)干扰素β制品(干扰素β-1o.、干扰素β-1P)；(n)其它化合物，诸如氨基水杨酸类；抗代谢物，诸如硫唑嘌呤和6-巯嘌呤和细胞毒性癌症化疗剂。本发明化合物与第二种活性组分的重量比可以改变并且取决于每种组分的有效剂量。
例如，CCR2和/或CCR5拮抗剂可以与抗炎药物活性剂联合用于治疗炎症、代谢病、自身免疫性疾病、癌症或病毒感染，以便与单独的治疗剂的反应相比改善治疗反应，但不会加剧毒性作用。附加或协同作用是本发明CCR2和/或CCR5拮抗剂与额外的活性剂联用的理想结果。此外，癌细胞对诸如地塞米松这类活性剂的耐受性在使用本发明CCR2和/或CCR5拮抗剂治疗时可以得到逆转。
药物制剂与剂型当作为药物使用时，可以以药物组合物的形式给予通式I的化合物。可以按照制药领域众所周知的方式制备这些组合物，并且可以根据是需要局部治疗还是全身治疗和所治疗的面积通过不同途径给予它们。给药可以为局部(包括眼和对粘膜给药，包括鼻内、阴道和直肠递送)；肺部(例如通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括使用喷雾器；气管内、鼻内、表皮和透皮)、口服或非肠道。非肠道给药包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内或注射或输注；或颅内，例如鞘内或心室内给药。非肠道给药可以为一次性推注剂量形式，或例如可以通过连续灌注泵给药。用于局部给药的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常用的药物载体、水、粉末或油基质、增稠剂等可能是必要或需要的。涂敷的避孕套、手套等也可能是有用的。
本发明还包括药物组合物，它们含有上述一种或多种通式I的化合物作为活性组分与一种或多种药物上可接受的载体。在制备本发明组合物的过程中，一般将活性组分与赋形剂混合，用赋形剂稀释或包封在诸如，例如胶囊、小药囊、纸或其它容器形式的载体中。当赋形剂用作稀释剂时，它可以为固体、半固体或液体物质，起活性组分的媒介物、载体或介质的作用。因此，组合物可以为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、混悬液、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、含有例如达10％活性化合物重量的软膏剂、软和硬胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉末的形式。
在制备制剂的过程中，可以将活性化合物粉碎成合适的颗粒大小，此后与其它组分合并。如果活性化合物基本上为不溶性的，那么可以将其粉碎成低于200目颗粒大小。如果活性化合物基本上为水溶性的，那么可以通过粉碎成在制剂中基本上均匀分布的颗粒大小来调整颗粒大小，例如约40目。
合适的赋形剂的某些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂还可以包括润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，诸如甲基-和丙基羟基-苯甲酸酯类；增甜剂；和矫味剂。可以将本发明的组合物配制成以使之在通过使用本领域公知的操作步骤对患者给药后快速、持续或延迟释放活性组分。
可以将组合物配制成单位剂型，各剂量含有约5-约1000mg(1g)，更通常的约为100-约500mg活性组分。术语″单位剂型″指的是适合于作为人体受试者和其它哺乳动物的单位剂量的物理分散单位，各单位剂量含有为产生所需的治疗作用而计算的预定量的活性物质与合适的药物赋形剂。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物含有约5-约50mg活性组分。本领域技术人员可以理解其可体现为含有约5-约10，约10-约15，约15-约20，约20-约25，约25-约30，约30-约35，约35-约40，约40-约45或约45-约50mg活性组分的化合物或组合物。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物含有约50-约500mg活性组分。本领域技术人员可以理解其可体现为含有约50-约75，约75-约100，约100-约125，约125-约150，约150-约175，约175-约200，约200-约225，约225-约250，约250-约275，约275-约300，约300-约325，约325-约350，约350-约375，约375-约400，约400-约425，约425-约450，约450-约475或约475-约500mg活性组分的化合物或组合物。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物含有约500-约1000mg活性组分。本领域技术人员可以理解其可体现为含有约500-约550，约550-约600，约600-约650，约650-约700，约700-约750，约750-约800，约800-约850，约850-约900，约900-约950或约950-约1000mg活性组分的化合物或组合物。
活性化合物可以在宽剂量范围内有效并且一般以药物有效量给药。然而，可以理解化合物的实际给药量通常由临床医师根据相关情况决定，包括所治疗的疾病、选择的给药途径、实际给予的化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。
为了制备固体组合物，诸如片剂，将主要活性组分与药物赋形剂混合成含有本发明化合物的均匀混合物的固体预配制组合物。当提及这些预配制组合物为均匀时，活性组分一般均匀地分散在整个组合物中，使得易于将该组合物再分成等效的单位剂型，诸如片剂、丸剂和胶囊。然后将这种固体预配制剂再分成含有例如0.1-约1000mg本发明活性组分的上述类型的单位剂型。
可以将本发明的片剂或丸剂包衣，否则就将它们混合成可提供延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可以包括内层剂量和外层剂量成分，后者为在前者上的外壳形式。两种成分可以被肠溶层分隔来，肠溶层用于阻止在胃中崩解并且允许内层成分完整地进入十二指肠或延迟释放。各种材料可以用于这类肠溶层或包衣层，这类材料包括大量聚合物酸和聚合物酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素这类材料的混合物。
可以用于口服或通过注射给药引入本发明化合物和组合物的液体形式包括水溶液、适当矫味的糖浆剂、水或油混悬液和使用食用油，诸如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矫味的乳剂以及酏剂和类似的药物载体。
用于吸入或吹入的组合物包括在药物上可接受的水或有机溶剂或其混合物中的溶液和混悬液以及粉末。液体或固体组合物可以含有如上所述合适的药物上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，通过口服或鼻呼吸途经给予组合物以便产生局部或全身作用。可以通过使用惰性气体雾化组合物。可以从喷雾装置中直接吸入雾化溶液或可以使喷雾装置与面罩塞条或间歇正压呼吸机连接。可以从以合适方式递送制剂的装置中通过口腔或鼻给予溶液、混悬液或粉末组合物。
对患者给予的化合物或组合物的量根据给予何种药物，给药目的，诸如预防或治疗，患者状态、给药方式等的不同而改变。在治疗应用中，可以对已经患病的患者给予足以治愈或至少部分阻止疾病症状及其并发症的用量的组合物。有效剂量取决于所治疗的疾病情况以及参与的临床医师根据诸如疾病严重程度、患者年龄、体重和一般情况等这类因素的判断。
对患者给予的组合物可以为上述药物组合物形式。可以通过常规无菌技术对这些组合物灭菌或可以将它们进行无菌过滤。可以根据应用的不同包装水溶液或将其冻干，其中在给药前将冻干制剂与无菌含水载体合并。化合物制剂的pH一般在3-11，更优选5-9，且最优选7-8。可以理解上述赋形剂、载体或稳定剂中某些的应用导致形成药用盐。
本发明化合物的治疗剂量可以根据例如进行治疗的具体应用、化合物的给药方式、患者的健康和状况以及开据处方的临床医师的判断的不同而改变。本发明化合物在药物组合物中的比例或浓度可以根据许多因素变化，包括剂量、化学特性(例如疏水性)和给药途径。例如，可以将本发明化合物配制成含有约0.1-约10％w/v化合物的生理缓冲水溶液以便进行非肠道给药。某些典型剂量范围约为1μg/kg-约1g/kg体重/天。在某些实施方案中，该剂量范围约为0.01mg/kg-约100mg/kg体重/天。该剂量可能取决于诸如疾病或障碍的类型和发展程度、具体患者的总体健康状况、所选择的相对生物功效、赋形剂组成及其给药途径这样的变量。可以根据来源于体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推有效剂量。
还可以将本发明的化合物与一种或多种额外的活性组分一起配制，所述的额外的活性组分可以包括任意药物活性剂，诸如抗体、免疫抑制剂、抗炎药、化疗剂、降脂药、升HDL活性剂、胰岛素促分泌素或致敏物、用于治疗类风湿性关节炎的药物等。
类风湿性关节炎(RA)治疗方案使用疾病变调剂(甲氨蝶呤、抗疟药、金、青霉胺、柳氮磺吡啶、氨苯砜、来氟米特或生物制品)以攻击性方式治疗的类风湿性关节炎(RA)患者可以获得可变程度的疾病控制，包括完全消退。这些临床反应与疾病活性的标准化评分改善有关，特别是包括如下项的ACR标准疼痛、功能、触痛关节的数量、肿胀关节的数量、患者的整体评价、临床医师的整体评价、炎症的实验室测量值(CRP和ESR)和关节结构性损伤的放射学评价。目前的调节疾病的药物(DMARDs)需要持续给药以便维持最佳有益性。长期给予这些活性剂与明显的毒性和宿主防御受损相关。另外，患者通常变得难以用特定疗法治疗并且需要备选方案。由于这些原因，能够允许标准DMARDs取消的新的有效疗法在临床上可能是重要的发展。
可以用抑制CCR2表达和/或活性的物质治疗已经实现了疾病的临床退化并对如下疗法具有明显反应的患者抗-TNF疗法(英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗)、抗-IL-1疗法(kinaret)或其它调节疾病的抗风湿药(DMARDs)、包括但不限于甲氨蝶呤、环胞菌素、金盐、抗疟药、青霉胺或来氟米特，所述的抑制CCR2表达和/或活性的物质包括例如核酸(例如反义或siRNA分子)、蛋白质(例如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(例如本文披露的化合物和本领域中公知的其它趋化因子受体抑制剂)。
在某些实施方案中，抑制CCR2表达和/或活性的物质为小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)。可以以每天不超过约500mgs的剂量口服q.d.或b.i.d给予CCR2拮抗剂。患者可以从其目前的疗法剂量中退出或可以减少该剂量并且可以在使用CCR2治疗时得以维持。使用CCR2拮抗剂与其目前疗法联合对患者进行治疗，例如约1-约2天，此后停止或减少DMARD的剂量并且持续用CCR2拮抗剂治疗。
使用CCR2拮抗剂取代传统的DMARDS的优点有很多。传统的DMARDs存在严重的限制蓄积剂量的副作用，最常见的是对肝脏的损伤以及免疫抑制作用。预计CCR2拮抗作用具有改善的长期安全性并且没有与传统DMARDs相关的类似的免疫抑制易感性。另外，生物制品的半衰期一般为几天或几周，这在研究不良反应时是一个问题。预计口服可生物利用的CCR2拮抗剂的半衰期约为小时的数量级，由此与生物制剂相比，在不良反应后持续接触药物的风险非常微小。此外，一般通过i.v.或s.c.给予目前的生物制剂(英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、kinaret)，从而要求医生进行给药或患者自我注射。这会产生输液反应或注射部位反应的可能性。使用口服给药的CCR2拮抗剂可以避免这些问题。
糖尿病和胰岛素抵抗治疗方案2型糖尿病是西方社会中发病率和死亡率的主要原因之一。在大部分患者中，该病的特征在于胰腺β-细胞机能障碍，并且伴随有肝脏和周围组织中的胰岛素抵抗。基于与疾病相关的基本机理，可以利用两种一般类型的口服疗法治疗2型糖尿病胰岛素促分泌素(磺酰脲类，诸如格列本脲)和胰岛素致敏物(二甲双胍和噻唑烷二酮类，诸如罗西格列酮)。已经证实定向于这两种机理的联合疗法可以控制该病的代谢缺陷并且在许多情况中表现出可改善对外源性胰岛素给药的需求，然而，胰岛素抵抗通常随时间而发展，导致对额外的胰岛素补充的需求。此外，已经证实称作代谢综合征的糖尿病前期状态的特征在于葡萄糖耐量降低，特别是与肥胖相关。发生2型糖尿病的大部分患者从发生胰岛素抵抗开始，当这些患者不能再维持防止葡萄糖体内稳态缺失所必需的血胰岛素过多程度时发生高血糖。胰岛素抵抗成分的发作高度预测了疾病发作并且与发生2型糖尿病、高血压和冠心病的风险增加有关。
葡萄糖耐量降低和从胰岛素抵抗状态发展成2型糖尿病的最有力的相关因素之一在于存在向心性肥胖。患有2型糖尿病的大部分患者为肥胖型的并且肥胖本身与胰岛素抵抗相关。显然向心性肥胖是发生导致2型糖尿病的胰岛素抵抗的主要风险因素，提示来自内脏脂肪的信号促使了胰岛素抵抗的发生并且发展成疾病。除分泌的蛋白质因子外，肥胖还诱导细胞炎症反应，其中骨髓来源的巨噬细胞蓄积在脂肪库中，变成脂肪组织巨噬细胞。脂肪组织巨噬细胞蓄积在脂肪组织中的比例与肥胖成比例。组织浸润巨噬细胞为已经证实的可诱导脂肪细胞中的胰岛素抵抗的许多炎性细胞因子的来源。
脂肪组织产生的MCP-1与肥胖成比例，提示其通过CCR2进行信号传导的活性还可能在巨噬细胞在脂肪组织中蓄积起重要作用。尚不了解MCP-1/CCR2相互作用是否直接导致单核细胞募集至脂肪组织，人的巨噬细胞募集至脂肪组织的减少是否直接导致促炎分子产生减少和促炎分子产生是否直接与胰岛素抵抗相关。
可以用抑制CCR2表达和/或活性的物质治疗表现出胰岛素抵抗，即既可以为前驱糖尿病(血糖正常的)也可以为糖尿病(血糖过多的)的患者，所述的抑制CCR2表达和/或活性的物质包括例如核酸(例如反义或siRNA分子)、蛋白质(例如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(例如本文披露的化合物和本领域中公知的其它趋化因子受体抑制剂)。在某些实施方案中，抑制CCR2表达和/或活性的物质为小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)。可以以每天不超过约500mgs的剂量口服q.d.或b.i.d给予CCR2拮抗剂。患者可以从其目前的疗法剂量中退出或可以减少该剂量并且可以在使用CCR2治疗时得以维持。或者，CCR2拮抗剂治疗可以用于补充其目前疗法以便提高它的功效或防止发展成进一步的胰岛素抵抗。
用CCR2拮抗剂取代或补充传统活性剂的优点是很多的。例如，这类活性剂可以用于预防前驱糖尿病胰岛素抵抗状态发展成糖尿病状态。这类活性剂可以减少或取代对使用附带有毒性的胰岛素致敏物的需求。这类活性剂还可以减少对需要外源性胰岛素补充的需求或延长需要到补充外源性胰岛素时的期限。
动脉粥样硬化治疗方案动脉粥样硬化是特征在于脂肪物质沉积在动脉壁上的疾病。斑块包括这类脂肪物质、胆固醇、细胞废物、钙和构成动脉内衬的其它物质的沉积物。斑块可以生长至足以明显减少通过动脉的血流的较大程度。然而，在包括变得不稳定并且破裂时，更为明显的损害发生。破裂的斑块产生可形成阻断血流或阻断或输送至身体其它部分的血块。如果血块阻塞了供给心脏的血管，那么它可以导致心脏病发作。如果血块阻断了供给脑的血管，那么它可以导致中风。动脉粥样硬化是一种缓慢的复杂性疾病，它一般从儿童期开始并且通常在人生长至中老年时发展。
血液中的高水平胆固醇是冠心病的主要危险因素。基于作为斑块主要组成的胆固醇，通过减少循环胆固醇或通过升高携带胆固醇的高密度脂蛋白(HDL)来控制斑块形成的发展。例如，可以通过使用或通过减少从食物中补充抑制循环胆固醇在肝脏中的合成来减少循环胆固醇。通过这些机制起作用的这类药物可以包括用于降低高胆固醇水平的药物胆汁酸吸收剂、脂蛋白合成抑制剂、胆固醇合成抑制剂和纤维酸(fibric acid)衍生物。另外，可以通过给予例如普罗布考(probuchol)或高剂量的烟酸来升高循环HDL。已经证实解决多种机制的疗法可以减缓疾病发展和发展成斑块破裂。
动脉粥样硬化一般伴随有细胞炎症反应，其中骨髓来源的巨噬细胞沿血管壁蓄积在脂肪条纹中，从而变成泡沫细胞。泡沫细胞为已经证实可诱导斑块发展的许多炎性细胞因子和可以促进斑块失去稳定性的酶的来源。动脉粥样硬化组织还产生MCP-1，从而提示其通过CCR2进行信号传导的活性还可能在作为在斑块中的泡沫细胞的巨噬细胞蓄积中起重要作用。已经证实CCR2-/-小鼠在作为高脂肪膳食或脂质代谢中的遗传改变结果产生的脂肪条纹中的巨噬细胞明显减少。
可以用抑制CCR2表达和/或活性的物质治疗表现出高循环胆固醇、低HDL或升高的循环CRP或通过成像证实存在血管壁斑块或存在动脉粥样硬化的任意其它证据的患者，所述的抑制CCR2表达和/或活性的物质包括例如核酸(例如反义或siRNA分子)、蛋白质(例如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(例如本文披露的化合物和本领域中公知的其它趋化因子受体抑制剂)。在某些实施方案中，抑制CCR2表达和/或活性的物质为小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)，诸如本发明的化合物。可以以每天不超过约500mgs的剂量口服q.d.或b.i.d给予CCR2拮抗剂。患者可以从其目前的疗法剂量中退出或可以减少该剂量并且可以在使用CCR2拮抗剂治疗时得以维持。或者，CCR2拮抗剂治疗可以用于补充其目前疗法以便提高例如它在预防斑块发展、稳定已经形成的斑块或诱导比例退化方面的功效。
用CCR2拮抗剂取代或补充传统活性剂的优点是很多的。例如，这类活性剂可以用于预防斑块发展成具有与斑块破裂相关的风险的不稳定性阶段。这类活性剂可以减少或取代对使用附带有毒性的调节胆固醇的药物或HDL升高药物的需求，包括但不限于发红、肝损伤和肌肉损伤，诸如肌病。这类活性剂还可以减少对需要手术以开放血管壁的需求或延长直到需要进行该手术或直到需要使用抗凝剂来限制因潜在的斑块破裂产生的损害的期限。
标记的化合物和试验方法本发明的另一个方面涉及荧光染料、自旋标记、重金属或放射性标记的通式I化合物，它们不仅用于成像，而且用于体外和体内测定，以便对组织样品中、包括人的趋化因子受体定位和定量，并且用于通过标记化合物的结合抑制鉴定趋化因子受体配体。因此，本发明包括含有这类标记化合物的趋化因子受体测定。
本发明进一步包括同位素标记的通式I的化合物。“同位素”或“放射性标记的”化合物为本发明的化合物，其中一个或多个原子被具有原子量或原子数不同于一般实际测定的(即天然存在的)原子量或原子数的原子替换或取代。可以掺入本发明化合物的合适的放射性核素包括，但不限于2H(也书写为D，氘)、3H(也书写为T，氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。可以掺入本发明放射性标记的化合物的放射性核素取决于该放射性标记的化合物的具体应用。例如，就体外趋化因子受体标记和竞争性试验而言，掺入3H、14C、82Br、125I、131I、35S或的化合物一般最为有用。就放射性成像应用而言，11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br一般最为有用。
可以理解“放射性标记的”或“标记的化合物”为掺入至少一种放射性核素的化合物。在某些实施方案中，放射性核素选自3H、14C、125I、35S和82Br组成的组。
将放射性同位素掺入有机化合物的合成方法应用于本发明的化合物并且为本领域众所周知。本发明的放射性标记的化合物可以用于鉴定/评价化合物的筛选试验。一般而言，可以评价新合成或鉴定的化合物(即待测化合物)减少本发明放射性标记的化合物与趋化因子受体的结合能力。因此，待测化合物与放射性标记的化合物竞争性结合趋化因子受体的能力与其结合亲和性直接相关。
试剂盒本发明还包括例如用于治疗或预防趋化因子-相关疾病的药物试剂盒，它包括一个或多个含有包括治疗有效量的通式I化合物的药物组合物的容器。如果需要，那么这类试剂盒可以进一步包括各种常用药物试剂盒成分中的一种或多种，诸如，例如含有一种或多种药物上可接受的载体的容器、额外的容器等，正如本领域技术人员显而易见的。在该试剂盒中还可以包括表示所给予的成分的用量、给药指南和/或混合所述成分的指南的可以为插页或标签的技术说明书。
通过具体实施例更具体地描述本发明。提供下列实施例是为了解释目的，但并不以任何方式来限制本发明。本领域技术人员易于识别各种非关键性的参数，可以改变或修改它们而基本上可以产生相同的效果。
实施例实施例1N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A-1
4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃-3-醇向在0℃下4-甲氧基乙基-3，6-二氢-2H-吡喃(5.00g，43.8mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中滴加间-氯过苯甲酸(15.1g，87.6mmol)在甲醇(15mL)中的溶液。在搅拌5小时后，在真空除去甲醇并且将白色残余物溶于二氯甲烷(300mL)。向该溶液中加入K2CO3。将所得溶液搅拌1小时并且通过C盐过滤。在真空中蒸发滤液而得到所需产物，将其不经纯化用于下一步反应。
步骤A-2 3，4，4-三甲氧基四氢-2H-吡喃向在0℃下4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃-3-醇(6.00g，37.0mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入氢化钠(1.48g，37.0mmol)。在0℃下搅拌1小时后，滴加甲基碘(4.61mL，74.0mmol)。将该反应体系温至环境温度并且使用NH4Cl猝灭。用乙醚将产物提取3次。用Na2SO4干燥合并的提取物并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10％乙醚-60％乙醚/己烷)而得到所需产物。1H NMR(CDCl3)δ4.05-3.95(1H，m)，3.80-3.70(1H，m)，3.60-3.50(3H，m)，3.50(3H，s)，3.30(3H，s)，3.10(3H，s)，2.00-1.70(2H，m)。
步骤A-3 3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮向3，4，4-三甲氧基四氢-2H-吡喃(4g，20mmol)在THF/H2O(60mL/10mL)中的溶液中加入浓HCl(6mL)。在搅拌1小时后，在真空中除去THF。用乙醚(3×100mL)提取水溶液。干燥提取物并且在真空中浓缩而得到所需产物。1H NMR(CDCl3)δ4.30-4.10(2H，m)，3.75-3.65(2H，m)，3.60-3.50(1H，m)，3.50(3H，s)，2.70-2.50(2H，m)。
步骤B-1 (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸(10.0g，44mmol)在DMF(25mL)中的溶液中加入碳酸钾(6.33g，45.8mmol)，随后加入碘甲烷(4.0mL，64mmol)。在室温下搅拌过夜后，用EtOAc稀释该反应混合物。用水将该溶液洗涤4次并且用盐水洗涤1次，干燥(MgSO4)并且浓缩。在高度真空中将残余物干燥过夜而得到标题化合物(11g，99％)。C12H19NO4的MS计算值(M+H)+242；测定值142.1(M-Boc+H)+。1H NMR(CDCl3)δ5.86(m，2H)，4.90(m，1H)，4.80(m，1H)，3.72(s，3H)，3.50(m，1H)，2.51(m，1H)，1.86(m，1H)，1.42(s，9H)。
步骤B-2 (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-甲酸甲酯在10分钟内向在-78℃下1.00M六甲基二硅氮化锂在THF中的溶液(202mL)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(22.10g，91.59mmol)在THF(36.2mL)中的溶液。将该溶液在-78℃下搅拌30分钟，此后1次加入异丙基碘(10.0mL，100mmol)。然后将该混合物转至读数在-24℃下的冷藏箱中并且保持过夜。用氯化铵水溶液使反应猝灭并且用乙醚将所得溶液提取3次。用硫酸钠干燥乙醚层并且在真空中蒸发。通过二氧化硅快速色谱法纯化残余物，用10％乙酸乙酯/己烷洗脱而得到标题化合物(20.2g)。C15H25NO4的MS计算值(M+H)+284；测定值184.2(M-Boc+H)+。
步骤B-3 (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-甲酸向(1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(18.42g，65mmol)在THF(500mL)、甲醇(500mL)和水(100mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(5.00g，119mmol)。将该混合物加热至回流过夜。18小时后，TLC显示极微量的原料。在真空中除去有机溶剂并且用乙醚(200mL)提取水层以便除去未反应的原料。用浓HCl将水层酸化至pH＝4，同时用冰浴冷却。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。用MgSO4干燥提取物并且浓缩至得到固体(17g)。将该固体溶于热乙酸乙酯(22mL)并且将己烷(550mL)加入到该溶液中。将该溶液缓慢冷却至室温，此后放入读数在-22至-24℃的冷藏箱。2天后，取出结晶并且在真空中浓缩液体而得到所需产物，为白色泡沫固体(9.78g，56％)。C14H23NO4的MS计算值(M+H)+270；测定值170.1(M-Boc+H)+。
步骤B-4 (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸向(1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-甲酸(9.78g，36.3mmol)在乙醇(250mL)中的溶液中加入10％钯/碳(550mg)。将该混合物在55psi下的氢气环境中振摇过夜并且通过C盐过滤。在真空中蒸发滤液而得到标题化合物(9.45g，96％)。C14H25NO4的MS计算值(M+H)+272；测定值172.1(M-Boc+H)+。
步骤C
[(1R，3S)-3-(4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯将(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(0.10g，0.37mmol)、N-[3-三氟甲基]苯基哌嗪(85mg，0.37mmol)、三乙胺(0.10mL，0.74mmol)和苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸盐(0.16g，0.37mmol)在二氯甲烷(5mL)中混合并且在室温下搅拌过夜。用EtOAc稀释该反应混合物并且用饱和NaHCO3洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且进行快速色谱(50％EtOAc/己烷-EA)而得到所需产物(86mg，53％)。C25H36F3N3O3的MS计算值(M+H)484.3；测定值384.2(M+H-Boc)。
步骤D (1R，3S)-3-(4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺双(三氟乙酸盐)在室温下用在二氯甲烷(3mL)中的三氟乙酸(3mL，0.04mol)将[(1R，3S)-3-(4-[3-(三氟甲基)苯基]-哌嗪-1-基羰基)-环戊基]-氨基甲酸叔丁酯(82mg，0.18mmol)处理1小时。浓缩该混合物而得到所需产物(98mg，93％)。C20H28F3N3O的MS计算值(M+H)384.3；测定值384.2。
步骤E
N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺双(三氟乙酸盐)(140mg，0.23mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(90mg，0.69mmol)和三乙胺(0.096mL，0.69mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(97mg，0.46mmol)。在室温下搅拌过夜后，用EtOAc稀释该反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且用硅胶纯化，用EtOAc-1％Et3N/EtOAc洗脱而得到105mg(92％)所需产物。通过手性HPLC分离产物而得到两种主要异构体。就两种异构体而言，C26H38F3N3O3的MS计算值(M+H)498；测定值498.2。
实施例2 3-乙氧基-N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺的制备步骤A-1 3-乙氧基-4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃向在冰浴中冷却的4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃-3-醇(2.0g，12mmol)在THF(20mL)中的溶液中缓慢加入氢化钠(0.60g，15mmol)并且将所得淤浆搅拌1小时。加入碘乙烷(1.5mL，19mmol)并且将该混合物在室温下搅拌过夜。加入更多的氢化钠(0.6g)和碘乙烷(3mL)并且再持续搅拌过夜。用水使反应猝灭。用EtOAc将所得溶液提取2次并且用乙醚提取2次。干燥合并的提取物，浓缩并且用硅胶纯化(20％EtOAc/己烷)而得到2.1g(90％)所需产物。1H NMR(CDCl3)δ3.32-4.00(7H，m)，3.30(3H，s)，3.20(3H，s)，2.05-1.70(2H，m)，1.25-1.22(3H，m)。
步骤A-2 3-乙氧基四氢-4H-吡喃-4-酮向3-乙氧基-4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃(2.1g，11mmol)在THF/水(50mL/10mL)中的溶液中加入浓HCl(6mL)。在室温下搅拌1小时后，用EtOAc稀释该混合物。分离有机层并且用乙醚将水层提取5次。用MgSO4干燥合并的有机层，过滤并且浓缩至得到1.55g(97％)所需产物。1H NMR(CDCl3)δ4.30-3.50(7H，m)，2.62-2.57(2H，m)，1.30-1.20(3H，t，J＝5Hz)。
步骤B 3-乙氧基-N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺二盐酸盐(200mg，0.438mmol)、3-乙氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(130mg，0.88mmol)和三乙胺(0.18mL，1.3mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(180mg，0.88mmol)。在室温下搅拌过夜后，用EtOAc稀释该反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且用硅胶纯化(EtOAc-1％Et3N/EtOAc-5％Et3N/EtOAc)而得到230mg产物。通过手性HPLC分离产物而得到两种主要异构体异构体1(110mg)和异构体2(77mg)。C27H40F3N3O3的MS计算值(M+H)512；测定值512.2。
实施例3 N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备步骤A 1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪将2-氯-4-(三氟甲基)吡啶(2.0g，11mmol)、哌嗪(3g，30mmol)和三乙胺(3.1mL，22mmol)在DMF(10mL)中的溶液在100℃下加热过夜并且在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc-EtOAc/MeOH/Et3N＝9/1/0.5)而得到1.09g(43％)纯产物。C10H12F3N3的MS计算值(M+H)232；测定值232.1。
步骤B 哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪(145mg，0.627mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(140mg，0.52mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(253mg，0.572mmol)，随后加入三乙胺(0.156mL，1.12mmol)。在搅拌过夜后，用EtOAc稀释该反应混合物并且用饱和NaHCO3洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且通过硅胶快速色谱法纯化(20％ EtOAc/己烷-40％ EtOAc/己烷)而得到0.15g所需产物。C24H35F3N4O3的MS计算值(M+H)485；测定值385.2(M-Boc+H)。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺在室温下用4.0M HCl在1，4-二烷中的溶液(10mL)将[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.31mmol)处理1小时并且在减压下浓缩至得到产物，将其不经纯化用于下一步。C19H27F3N4O的MS计算值(M+H)385；测定值385.2。
步骤D
N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺二盐酸盐(140mg，0.31mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(80mg，0.61mmol)和三乙胺(0.21mL，1.5mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(190mg，0.92mmol)。在搅拌过夜后，用EtOAc稀释该反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且通过硅胶快速色谱法纯化(EtOAc-1％Et3N/EtOAc-5％Et3N/EtOAc)而得到101mg产物。通过手性HPLC进一步分离产物而得到异构体1(55mg)和异构体2(37mg)。就两种异构体而言，C25H37F3N4O3的LCMS计算值(M+1)499；测定值499.2。
实施例4N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A-1 3-溴-5-碘吡啶向3，5-二溴吡啶(48g，200mmol)在THF(200mL)中的溶液中加入2M氯化异丙基镁在THF中的溶液(80mL)。在室温下搅拌2小时后，将该溶液冷却至-78℃。向其中加入预冷却的碘(51g，200mmol)在THF(100mL)中的溶液。用乙醚稀释该混合物并且用饱和氯化铵溶液、2M硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤。用MgSO4干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。从乙醇中结晶而得到33.5g(58％)所需产物。1H NMR(CDCl3)δ8.75(1H，s)，8.60(1H，s)，8.20(1H，s)。
步骤A-2 4-(5-溴吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯将在密封试管内的3-溴-5-碘吡啶(13.0g，45.8mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.53g，45.8mmol)、碘化亚铜(I)(0.871g，4.57mmol)、K3PO4(19.46g，91.68mmol)、1，2-乙二醇(5.1mL，91mmol)在异丙基醇(80mL)中的溶液在80℃下的油浴中加热2天。在冷却至室温后，通过C盐过滤该反应混合物。在真空中浓缩滤液。将残余物溶于EtOAc并且用饱和NaHCO3洗涤该溶液，干燥(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(20％ EtOAc/己烷-30％EtOAc/己烷)而得到5.75g(37％)所需产物。C14H20BrN3O2的MS计算值(M+H)343；测定值342.0，344.0。
步骤A-3 4-(5-碘吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯向4-(3-溴苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0g，5.9mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入2M氯化异丙基镁在THF中的溶液(5mL)。在室温下搅拌2小时后，将该溶液冷却至-78℃。向其中加入预冷却的碘(3.0g，12mmol)在THF(2mL)。在-78℃下搅拌30分钟并且在室温下再搅拌30分钟后，用乙酸乙酯稀释该混合物，用饱和氯化铵、2M硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(20％ EtOAc/己烷-50％EtOAc/己烷)而得到所需产物(1.40g)，纯度为75％。C15H21IN2O2的MS计算值(M+H)390；测定值390.0。
步骤A-4 4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯在缓慢振摇下和高度真空中用火焰加热在烧瓶中的碘化亚铜(I)(0.49g，2.6mmol)和氟化钾(0.15g，2.6mmol)，直到出现淡绿色。加入4-(3-碘苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.5g，1.0mmol)和(三氟甲基)三甲基硅烷(0.37g，2.6mmol)在DMF(5mL)中的溶液。将该棕色溶液在室温下搅拌过夜。再加入(三氟甲基)三甲基硅烷(0.37g)。将该混合物在50℃下加热过夜，用EtOAc稀释并且用饱和氯化铵洗涤。用EtOAc将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且通过硅胶快速色谱法纯化(20％-40％EtOAc/己烷)而得到120mg所需产物。C15H20F3N3O2的MS计算值(M+H)332；测定值332.1。
步骤A-5 1-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪在室温下用4.0M HCl在1，4-二烷中的溶液(7mL)将4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.24g，0.25mmol)处理1小时并且浓缩。将残余物不经进一步纯化用于下一步。C10H12F3N3的MS计算值(M+H)232；测定值232.1。
步骤B [(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向1-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪三盐酸盐(0.22g，0.23mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(0.18g，0.66mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.338g，0.764mmol)，随后加入三乙胺(0.22mL，1.6mmol)。在室温下将该混合物搅拌过夜并且用EtOAc稀释。用饱和NaHCO3洗涤该溶液，干燥(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(20％ EtOAc/己烷-40％EtOAc/己烷)而得到0.19g(61％)所需产物。C24H35F3N4O3的MS计算值(M+H)485；测定值485.2。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺室温下用4.0M HCl在1，4-二烷中的溶液(5mL)将[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.14mmol)处理1小时。浓缩该混合物并且通过HPLC纯化而得到35mg所需产物。C19H27F3N4O的MS计算值；(M+H)385；测定值385.1。
步骤D N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺三(三氟乙酸盐)(25mg，0.034mmol)、3-甲基四氢-4H-吡喃-4-酮(13mg，0.10mmol)和三乙胺(0.024mL，0.17mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。将该混合物在室温下和N2环境中搅拌过夜并且用EtOAc稀释。用饱和NaHCO3洗涤所得溶液，干燥(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(EtOAc-EtOAc/MeOH/Et3N＝9∶1∶0.5)而得到14mg所需产物，为两种异构体的混合物。通过手性HPLC分离两种异构体而得到峰1(6.6mg)和峰2(4.7mg)。就两种异构体而言，C25H37F3N4O3的MS计算值(M+H)499；测定值499.2。
实施例5N-{(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊基}-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A {(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊基}氨基甲酸叔丁酯在干燥的烧瓶中，将在N2环境中的(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(200mg，0.7mmol)和4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(160mg，0.81mmol)悬浮于二氯甲烷(4mL)中。加入三乙胺(0.22g，2.2mmol)，随后加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.36g，0.81mmol)。将该反应体系在室温下搅拌过夜并且通过添加饱和NaHCO3溶液猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(梯度0-45％ B，在15分钟内。A瓶＝己烷，B瓶＝EtOAc)而得到234mg(80％)所需产物。C25H36N2O3的MS计算值(M+H)413；测定值413.2。
步骤B (1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊胺将{(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊基}氨基甲酸叔丁酯(0.23g，0.56mmol)溶于1.0M HCl在乙醚中的溶液(4mL)。在室温下搅拌2小时后，浓缩该溶液至得到无色油状物(170mg)。C20H28N2O的MS计算值(M+H)313；测定值313.2。
步骤CN-{(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]-环戊基}四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊胺盐酸盐(50mg，0.1mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(56mg，0.43mmol)和三乙胺(0.070mL，0.50mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(91mg，0.43mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入饱和NaHCO3。用二氯甲烷将该溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(梯度0-15％ B，在15分钟内。A瓶＝1％ NH4OH/3％ MeOH/EtOAc，B瓶＝1％ NH4OH/MeOH)而得到所需化合物。C26H38N2O3的MS计算值(M+H)427；测定值427.3。
实施例6
1-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-苯基哌啶-4-醇的制备 步骤A {(1R，3S)-3-[(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)羰基]-3-异丙基环戊基}氨基甲酸叔丁酯向(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙环戊烷-甲酸(200mg，0.7mmol)、4-苯基哌啶-4-醇(140mg，0.81mmol)和三乙胺(0.15g，1.5mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷鎓六氟磷酸盐(0.42g，0.81mmol)。在室温下搅拌过夜后，通过添加饱和NaHCO3溶液使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。将该粗品不经进一步纯化用于下一步。C25H38N2O4的MS计算值(M+H)431；测定值431.2。
步骤B 1-{[(1S，3R)-3-氨基-1-异丙基环戊基]羰基}-4-苯基哌啶-4-醇将{(1R，3S)-3-[(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)羰基]-3-异丙基-环戊基}氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.70mmol)溶于2.0M HCl在乙醚中的溶液(10mL)。在搅拌3.5小时后，加入几滴MeOH而得到澄清溶液。浓缩该混合物至得到油状物。将该粗产物不经纯化用于下一步反应。C20H30N2O2的MS计算值(M+H)331；测定值331.2。
步骤C 1-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-苯基哌啶-4-醇向1-{[(1S，3R)-3-氨基-1-异丙基环戊基]羰基}-4-苯基哌啶-4-醇盐酸盐(50mg，0.1mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(53mg，0.41mmol)和三乙胺(0.066mL，0.48mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)。在室温下搅拌过夜后，使用饱和NaHCO3溶液使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-20％ B，17分钟内。A瓶＝1％ NH4OH/2％ MeOH/EtOAc，B瓶＝1％ NH4OH/MeOH)而得到所需产物。C26H40N2O4的MS计算值(M+H)445；测定值445.2。
实施例71-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇的制备 步骤A-1 4-羟基-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯向冷却至-78℃的1-溴-2-(三氟甲基)苯(1.18g，5.24mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加1.60M正丁基锂在己烷中的溶液(3.4mL)。在搅拌40分钟后，加入4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁酯(1.0g，5.0mmol)在THF(3mL)中的溶液并且将该溶液在-78℃下搅拌1小时。用饱和氯化铵使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取(MgSO4)，过滤并且浓缩至得到0.78g白色固体，将其不经纯化用于下一步反应。C17H22F3NO3的MS计算值(M+H)346；测定值246.0(M-Boc+1)。
步骤A-2 4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇将4-羟基-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.40g，1.0mmol)溶于2.0M HCl在乙醚中的溶液(5mL)。在室温下搅拌过夜后，用乙醚稀释该溶液。过滤白色固体并且用乙醚洗涤-得到170mg纯产物。C12H14F3NO的MS计算值(M+H)246；测定值246.1。
步骤B [(1R，3S)-3-({4-羟基-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-基}羰基)-3-异丙基环戊基]氨基甲酸叔丁酯向(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(150mg，0.55mmol)、4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇盐酸盐(170mg，0.60mmol)和三乙胺(0.17g，1.6mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷鎓六氟磷酸盐(0.31g，0.60mmol)。在搅拌2.5小时后，通过添加饱和NaHCO3溶液使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。将粗产物不经纯化进行下一步。C26H37F3N2O4的MS计算值(M+H)499；测定值499.2。
步骤C 1-{[(1S，3R)-3-氨基-1-异丙基环戊基]羰基}-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇向含有(1R，3S)-3-({4-羟基-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-基}羰基)-3-异丙基环戊基]氨基甲酸叔丁酯(0.27g，0.54mmol)的烧瓶中加入2.00M HCl在乙醚中的溶液(5mL)并且将所得混合物搅拌3.5小时。浓缩该溶液至得到油状物，将其不经纯化用于下一步反应。C21H29F3N2O2的MS计算值(M+H)399；测定值399.2。
步骤D 1-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇向1-{[(1S，3R)-3-氨基-1-异丙基环戊基]羰基}-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇盐酸盐(50mg，0.1mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(45mg，0.34mmol)和三乙胺(0.048mL，0.34mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.073g，0.34mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入饱和NaHCO3溶液。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-20％ B，15分钟内。A瓶＝1％ NH4OH/2％MeOH/EtOAc，B瓶＝1％ NH4OH/MeOH)而得到15mg所需产物，为油状物。C27H39F3N2O4的MS计算值(M+H)513；测定值513.2。
实施例81-[((1S，3R)-1-异丙基-3-{[3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基}环戊基)羰基]-4-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇的制备 使用于对实施例7所述类似的操作步骤制备标题化合物。C27H39F3N2O4的MS计算值(M+H)513；测定值513.2。
实施例91-[((1S，3R)-1-异丙基-3-{[3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基}环戊基)羰基]-4-[4-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇的制备 使用于对实施例21所述类似的操作步骤制备标题化合物。C27H39F3N2O4的MS计算值(M+H)513；测定值513.2。
实施例10N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A-1
4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯向在冰浴中冷却的4-羟基-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.75g，2.2mmol)在吡啶(15mL)中的溶液中缓慢加入亚硫酰氯(0.79mL，11mmol)并且将该混合物温至室温且搅拌过夜(17小时)。用冰水使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-40％ B，25分钟内。A瓶＝己烷，B瓶＝EtOAc)而得到209g所需产物，为固体。C17H20F3NO2的MS计算值(M+H)328；测定值228.0(M-Boc+H)。
步骤A-2 4-[2-(三氟甲基)苯基]-1，2，3，6-四氢吡啶向4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(200mg，0.61mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.5mL)。在室温下搅拌45分钟后，将该溶液浓缩至得到油状物。
步骤B ((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-苯基-2-(三氟甲基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯向(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(115mg，0.424mmol)和4-[2-(三氟甲基)苯基]-1，2，3，6-四氢吡啶三氟乙酸盐(152mg，0.445mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙胺(0.21g，2.1mmol)，随后加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(210mg，0.47mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3溶液使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-50％ B，15分钟内。A瓶＝己烷，B瓶＝EtOAc)而得到174mg所需产物，为白色固体。C26H35F3N2O3的MS计算值(M+H)481；测定值481.1。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊胺将((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯(0.17g，0.00035mol)溶于2.0M HCl在乙醚中的溶液(2.2mL)。在室温下搅拌2小时后，将该溶液浓缩至得到144mg所需产物，为澄清油状物。C21H27F3N2O的MS计算值(M+H)381；测定值381.1。
步骤DN-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊胺盐酸盐(46mg，0.11mmol)、3-甲氧基-四氢-4H-吡喃-4-酮(56mg，0.43mmol)和三乙胺(0.054mL，0.39mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(70mg，0.33mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入饱和NaHCO3溶液。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-20％ B，15分钟。A瓶＝1％ NH4OH/2％MeOH/EtOAc，B瓶＝1％ NH4OH/MeOH)而得到所需产物。C27H37F3N2O3的MS计算值(M+H)495；测定值495.2。
实施例11N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 按照与对实施例10所述类似的方式制备标题化合物。C27H37F3N2O3的MS计算值(M+H)495；测定值495.2。
实施例123-乙氧基-N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 按照与对实施例10所述类似的方式制备标题化合物。C28H39F3N2O3的MS计算值(M+H)509；测定值509.1。
实施例13N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A-1
2-溴-4-(三氟甲基)吡啶将2-氯-4-(三氟甲基)吡啶(2.70g，14.9mmol)和溴三甲基硅烷(3.90mL，29.6mmol)在丙腈(15.0mL)中的混合物在回流状态下加热22小时。将产物(极具挥发性)小心进行旋转蒸发至得到4.07g(含有丙腈的)浓稠的淡棕色混悬液w/o，进一步纯化。C6H3BrF3N的LC-MS计算值(M+H)226.9；测定值225.9/227.8。
步骤A-2 4-羟基-4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯向在-78℃下冷却的轻度浑浊的2-溴-4-(三氟甲基)吡啶(4.0g，14.2mmol)在干燥二氯甲烷(52.7mL)中的溶液中加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(9.65mL)。在-78℃下搅拌40分钟后，滴加4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁酯(2.59g，12.9mmol)在干燥二氯甲烷(10.0mL)中的溶液。将该反应体系在-78℃下搅拌1小时并且用NH4Cl水溶液猝灭。通过旋转蒸发除去THF。用二氯甲烷将水层提取3次。干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(30∶70EtOAc/己烷)而得到2.63g(59％)所需产物，为棕色油状物。C16H21F3N2O3的LC-MS计算值(M+H)347；测定值247.0(M-Boc+1)。
步骤A-3 4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-甲酸叔丁酯向在冰浴中冷却的4-羟基-4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.00g，2.31mmol)在吡啶(15.9mL)中的溶液中缓慢加入亚硫酰氯(0.84mL，12mmol)。将该混合物温至室温且搅拌过夜(17小时)。用冰水猝灭棕色反应混合物并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-10％B，25分钟内。A瓶＝己烷，B瓶＝EtOAc)而得到404mg(53％)所需产物，为淡棕色油状物。C16H19F3N2O2的LC-MS计算值(M+H)329；测定值273.1(M-tBu+1)。
步骤A-4 4-(三氟甲基)-1′，2′，3′，6′-四氢-2，4′-联吡啶将4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-甲酸叔丁酯(380.0mg，1.157mmol)溶于4M HCl在1，4-二烷中的溶液(12.0mL)而形成淡黄色澄清(然后变浑浊)溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空中浓缩该反应混合物而得到389mg产物，为黄色树胶。C11H11F3N2的LC-MS计算值(M+H)229；测定值229.1。
步骤B ((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯向(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(0.288g，1.06mmol)和4-(三氟甲基)-1′，2′，3′，6′-四氢-2，4′-联吡啶二盐酸盐(0.320g，1.06mmol)在干燥二氯甲烷(11.5mL)中的溶液中加入三乙胺(0.592mL，4.25mmol)，随后加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.517g，1.17mmol)。在室温下搅拌过夜后，用NaHCO3和盐水洗涤棕色反应混合物，干燥(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(30∶70 EtOAc/己烷)而得到淡黄色固体产物265mg(52％)。C25H34F3N3O3的LC-MS计算值(M+H)482；测定值382.2(M-Boc+1)。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊胺将((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯(260.0mg，0.54mmol)溶于4M HCl在1，4-二烷中的溶液(6mL)而形成淡黄色澄清溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空中浓缩该反应混合物而得到300mg产物，为二-HCl盐。用1M NaOH溶液处理该固体。用二氯甲烷将游离碱提取3次。干燥合并的提取物，过滤并且浓缩而得到194mg(94％)产物，为淡黄色树胶。C20H26F3N3O的LC-MS计算值(M+H)382；测定值382.1。
步骤D N-((1R，3S)-3-异丙基-3-([4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺在室温下和N2环境中用三乙酰氧基硼氢化钠(85.4mg，0.403mmol)处理(1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊胺(51.2mg，0.134mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(70mg，0.40mmol)和三乙胺(0.0374mL，0.269mmol)在干燥二氯甲烷(5.0mL，0.078mol)中的溶液。用NaHCO3水溶液使反应猝灭并且用二氯甲烷稀释。分离有机层并且用二氯甲烷将水层提取3次。用MgSO4干燥合并的提取物，过滤并且在减压下蒸发。使粗产物(90mg)通过短硅胶垫(30∶70 MeOH/EtOAc)。浓缩滤液并且通过手性HPLC分离而得到两种异构体第一种异构体26.3mg；第二种异构体17.3mg。就两种异构体而言，C26H36F3N3O3的MS计算值(M+H)496；测定值496.2。
实施例14N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A-1 3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇在室温下将5-(三氟甲基)吡啶-2-醇(10.0g，61.31mmol)加入到搅拌的浓硫酸(50.0mL)中。将所得澄清溶液放入冰水浴并且缓慢加入硝酸钾(12.4g，123mmol)，同时将温度维持在0℃。将所得混合物在65℃下加热4小时，此后倾倒在冰上并且小心用50％ NaOH(83mL)处理至pH＝8。用EtOAc将该水溶液提取3次。干燥合并的提取物，过滤并且浓缩至得到9.78(77％)粗产物(纯度＞90％)，为黄色固体。通过与EtOAc一起研磨进一步纯化而得到8.40g纯产物。C6H3F3N2O3的LC-MS计算值(M+H)209；测定值209.0。
步骤A-2 2-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶向磷酰氯(2.0mL，21.2mmol)和喹啉(1.30mL，10.8mmol)的溶液中加入3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇(4.00g，18.3mmol)(95％纯度)固体粉末。将所得深棕色混悬液加热至回流4小时并且逐步变成极为浑浊的深棕色溶液。在冷却至100℃后，将水(11mL)缓慢加入倒该混合物中，进一步冷却至室温并且用Na2CO3小心中和。用EtOAc将所得溶液提取3次。合并提取物，用MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(EtOAc/己烷30∶70)而得到2.28g所需产物。
步骤A-3 5-(三氟甲基)吡啶-3-胺向在N2中的2-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶(1.25g，5.518mmol)在甲醇(25.0mL)中的溶液中加入钯(1.17g，1.10mmol)(在湿活性炭上10％干重)。将该反应混合物放在Parr仪上并且在50psi下氢化90分钟。通过C盐垫过滤出催化剂。浓缩滤液而得到粗产物(1.08g)，它为足够纯的(通过HPLC证实＞98％)，无需进一步纯化。C6H5F3N2的LC-MS计算值(M+H)163；测定值163.1。
步骤A-4 3-溴-5-(三氟甲基)吡啶在冰-水浴中将亚硝酸钠(402mg，5.83mmol)在水(6.8mL)中的溶液缓慢加入到5-(三氟甲基)吡啶-3-胺(947mg，5.55mmol)在溴化氢(48％水溶液，1.57mL)中的混悬液中。在搅拌10分钟后，直接但并非缓慢地将所得橙色重氮溶液转移入搅拌的溴化亚铜(I)(876mg，6.11mmol)和溴化氢(48％水溶液，0.38mL)的混合物中。将所得棕色混合物在60℃下加热1小时。在冷却至室温后，用二氯甲烷稀释该混合物，用50％ NaOH(直到pH＝11)和水稀释。用二氯甲烷反萃取水层。在真空中小心浓缩合并的有机提取物而得到粗产物，无需进一步纯化。
步骤A-5 4-羟基-4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯向在-78℃下的3-溴-5-(三氟甲基)吡啶(2.20g，30％纯度，2.92mmol)在干燥二氯甲烷(15.0mL)中的轻度浑浊的溶液中加入1.6M正丁基锂在己烷中的溶液(1.99mL)。在-78℃下搅拌30分钟后，滴加4-氧代-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.534g，2.65mmol)在干燥二氯甲烷(3.0mL)中的溶液。将该反应体系在-78℃下搅拌1.5小时并且用NH4Cl水溶液猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的有机层，过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(50∶50 EtOAc/己烷)而得到330mg(25％)所需产物，为黄色油状物。C16H21F3N2O3的LC-MS计算值(M+H)347；测定值247.1(M-Boc+1)。
步骤A-6 5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-甲酸叔丁酯向在冰浴中冷却的4-羟基-4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.433mmol)在吡啶(3.00mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(0.158mL，2.16mmol)。在室温下搅拌过夜后(16小时)，用冰水使棕色反应混合物猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤并且浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(0-20％ B，35分钟内。A瓶＝己烷，B瓶＝EtOAc)而得到65mg(46％)所需产物，为淡黄色油状物。C16H19F3N2O2的LC-MS计算值(M+H)329；测定值329.1。
步骤A-7 5-(三氟甲基)-1′，2′，3′，6′-四氢-3，4′-联吡啶将5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-甲酸叔丁酯(50.0mg，0.152mmol)溶于4M在1，4-二烷中的HCl(2mL)而形成淡黄色澄清(然后变浑浊)溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空中浓缩该反应混合物而得到40.0mg(87％)产物，为黄色树胶。C11H11F3N2的LC-MS计算值(M+H)229；测定值229.0。
步骤B ((1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯向(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(40.0mg，0.147mmol)和5-(三氟甲基)-1′，2′，3′，6′-四氢-3，4′-联吡啶二盐酸盐(44.4mg，0.147mmol)在干燥二氯甲烷(2.5mL)中的溶液中加入三乙胺(0.103mL，0.737mmol)，随后加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(71.7mg，0.162mmol)。在室温下搅拌过夜后，用NaHCO3水溶液使反应猝灭。用二氯甲烷将所得溶液提取3次。干燥合并的提取物，过滤，浓缩。通过硅胶柱纯化残余物(30∶70 EtOAc/己烷，然后梯度洗脱至50∶50 EtOAc/己烷)而得到灰黄色凝胶状产物24mg(34％).C25H34F3N3O3的LC-MS计算值(M+H)482；测定值382.0(M-Boc+1)。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊胺将((1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)氨基甲酸叔丁酯(24.0mg，0.0498mmol)溶于4M在1，4-二烷中的HCl(2.0mL)而形成淡黄色澄清溶液。在室温下搅拌1小时后，在真空中浓缩该反应混合物。用1M NaOH溶液处理残余物并且用二氯甲烷将该溶液提取3次。干燥提取物，过滤并且浓缩而得到28mg产物，为淡黄色固体。C20H26F3N3O的LC-MS计算值(M+H)382；测定值382.1。
步骤D N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊胺(9.0mg，0.024mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(12.3mg，0.0709mmol)和三乙胺(6.58μL，0.0472mmol)在干燥二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(15.0mg，0.0708mmol)。在室温下搅拌过夜后，用NaHCO3水溶液使反应猝灭并且用二氯甲烷稀释。分离有机层并且用二氯甲烷将水层提取3次。合并有机层，用MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。通过硅胶柱纯化粗产物(30∶70 MeOH/EtOAc)而得到1.6mg(14％)的纯产物。C26H36F3N3O3的MS计算值(M+H)496；测定值496.1。
实施例15N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A 2-哌嗪-1-基-4-(三氟甲基)嘧啶在密封试管内将2-氯-4-(三氟甲基)嘧啶(2.0g，11mmol)、哌嗪(2.8g，33mmol)和三乙胺(3.0mL，22mmol)在DMF(10mL)中的溶液在100℃下搅拌过夜。在除去大部分溶剂后，通过硅胶柱色谱法纯化残余物(EtOAc-EtOAc/MeOH/NEt39/1/0.5)而得到1.48g(56％)所需产物。C9H11F3N4的MS计算值(M+H)233；测定值233.1。
步骤B [(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向2-哌嗪-1-基-4-(三氟甲基)嘧啶(250mg，1.08mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(300mg，1.1mmol)和三乙胺(0.45mL，3.2mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(520mg，1.2mmol)。在搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭。用EtOAc将所得溶液提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(20％-40％ EtOAc/己烷)而得到290mg所需产物。C23H34F3N5O3的MS计算值(M+H)486；测定值386.1(M-Boc+1)。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺将[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(290mg，0.60mmol)溶于4.0MHCl在1，4-二烷中的溶液(10mL)。在室温下搅拌1小时后，浓缩该混合物至得到270mg所需产物。C18H26F3N5O的MS计算值(M+H)386；测定值386.1。
步骤D N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊胺二盐酸盐(135.0mg，0.29mmol)、3-甲基四氢-4H-吡喃-4-酮(100mg，0.88mmol)和三乙胺(0.16mL，1.2mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(190mg，0.88mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭。用EtOAc将所得溶液提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(EtOAc-EtOAc/Et3N＝10∶0.1)而得到所需产物，为两种异构体混合物。通过手性HPLC分离两种异构体而得到异构体1(转化成TFA盐后65mg)和异构体2(转化成TFA盐后45mg)。就两种异构体而言，C24H36F3N5O3的MS计算值(M+1)500；测定值500.1。
实施例16N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A 1-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪在密封的试管内将2-氯-6-(三氟甲基)吡啶(1.0g，5.5mmol)、哌嗪(1.4g，16.0mmol)和三乙胺(1.5mL，11.0mmol)的溶液在DMF(10mL)中混合。将该混合物在100℃下加热过夜。浓缩该反应混合物并且进行硅胶色谱(乙酸乙酯-EA/MeOH/Et3N＝9∶1∶0.5)而得到1.05g所需产物。C10H12F3N3的MS计算值(M+H)232.1；测定值232.1。
步骤B [(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向1-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪(249mg，1.08mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(300mg，1.10mmol)、三乙胺(0.45mL，3.2mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(524mg，1.18mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭。用EtOAc将所得溶液提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化(20％ EA/己烷-40％ EA/己烷)而得到310mg所需产物，C24H36F3N4O3的MS计算值(M+H)485.3；测定值485.3。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐将[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.62mmol)溶于4.0M HCl在1，4-二烷中的溶液(10mL)。在室温下搅拌1小时后，浓缩该溶液而得到260mg所需产物。C19H27F3N4O的MS计算值(M+H)385.2；测定值385.2。
步骤D N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐(110mg，0.24mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(80mg，0.61mmol)和三乙胺(0.16mL，1.2mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(190mg，0.88mmol)。在室温下搅拌过夜后，用水稀释该反应混合物并且用乙酸乙酯提取3次，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物(乙酸乙酯-EtOAc/Et3N＝10∶0.1)而得到123mg所需产物，为两种异构体的混合物。通过手性HPLC分离两种异构体而得到异构体1(转化成TFA盐后45mg)和异构体2(转化成TFA盐后35mg)。就两种异构体而言，C25H37F3N4O3的LCMS计算值(M+H)498.2；测定值498.2。
实施例17N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A 4-氯-6-(三氟甲基)嘧啶将6-(三氟甲基)嘧啶-4-醇(5.0g，30.5mmol)、磷酰氯(3.41mL，36.6mmol)和喹啉(2.16mL，18.3mmol)在甲苯(50mL)中的溶液在100℃下搅拌5小时。用水稀释该反应体系并且用乙酸乙酯提取3次，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物(10％ EtOAc/己烷)而得到所需产物(1.20g，21.6％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)9.21ppm(1H，s)，7.78(1H，s)。
步骤B 4-哌嗪-1-基-6-(三氟甲基)嘧啶将4-氯-6-(三氟甲基)嘧啶(1.0g，5.48mmol)、哌嗪(2.36g，27.4mmol)和三乙胺(2.29mL，16.4mmol)在DMF(20mL)中的溶液在100℃下搅拌5小时。用水稀释该反应溶液并且用乙酸乙酯提取3次，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物(10％ MeOH/5％ Et3N/EtOAc)而得到所需产物(720mg，56.6％)。C9H12F3N4的LCMS计算值(M+H)233.1；测定值233.1。
步骤C [(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯将4-哌嗪-1-基-6-(三氟甲基)嘧啶(1.0g，4.31mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(1.75g，6.46mmol)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(2.86g，6.46mmol)和三乙胺(1.20mL，8.61mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释该反应混合物，用盐水洗涤，用了硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物而得到所需产物(800mg，38.3％)。C23H35F3N5O3的LCMS计算值(M+H)486.2；测定值486.2。
步骤D 将溶于4M在1，4-二烷中的HCl(10mL，40mmol)的[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(800mg，1.65mmol)的溶液在室温下搅拌2小时。用二氯甲烷稀释该反应混合物，用饱和NaHCO3溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物而得到所需产物(0.6g，99％)。C18H27F3N5O的LCMS计算值(M+H)386.2；测定值386.2。
步骤E N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺(120mg，0.30mmol)，3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(120mg，0.90mmol)和三乙胺(0.12mL，0.90mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.19g，0.90mmol)。在室温下搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该反应混合物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。通过快速色谱法纯化残余物而得到所需产物，为4种异构体的混合物。就4种异构体而言，C24H37F3N5O3的LCMS计算值(M+H)500.3；测定值500.3。
实施例18N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A 1-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪将2-氯-6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶(1.0g，5.11mmol)、哌嗪(1.32g，15.3mmol)和三乙胺(0.71mL，5.1mmol)的溶液在1，4-二烷(10mL)中混合。在100℃下搅拌5小时后，用水稀释该反应溶液并且用乙酸乙酯提取3次，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物(10％ MeOH/5％ Et3N/EtOAc)而得到所需产物(880mg，70.2％)。C11H15F3N3的LCMS计算值(M+H)246.1；测定值246.1。
步骤B [(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向1-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪(280mg，1.1mmol)、(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷甲酸(460mg，1.7mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.60g，1.4mmol)和三乙胺(0.20g，2.0mmol)。在搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该反应混合物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物而得到所需产物(200mg，35.1％)。C25H37F3N4O3的LCMS计算值(M+H)499.3；测定值499.2。
步骤C (1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺将溶于4M在1，4-二烷中的HCl(10mL，40mmol)的[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，1.65mmol)的溶液在室温下搅拌1小时。用二氯甲烷稀释该反应体系，用饱和NaHCO3溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到所需产物(0.15g，94％)。C20H30F3N4O的LCMS计算值(M+H)399.2；测定值399.2。
步骤D N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺(120mg，0.30mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(120mg，0.90mmol)和三乙胺(0.12mL，0.90mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.19g，0.90mmol)。在室温下搅拌过夜后，用二氯甲烷稀释该反应混合物，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。通过快速色谱法纯化残余物而得到所需产物，为顺式/反式异构体的混合物。就2种异构体而言，C26H40F3N4O3的LCMS计算值(M+H)513.3；测定值513.2。
实施例19(4R)-N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺的制备
将(4R)-N-((1R，3S)-3-异丙基-3-[4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺(8.0mg，0.016mmol)溶于甲醇(0.63mL)，脱气-用N2净化，随后添加钯(3.44mg)(在湿活性炭上10％干重)。将反应烧瓶脱气-用N2净化3次，然后在室温下和H2(1atm)环境中搅拌过夜。将该混合物通过C盐垫过滤，用二氯甲烷洗涤并且浓缩至得到所需产物，为白色固体(5.7mg，71％)。C27H40F3N2O3的LC-MS计算值(M+H)497.2；测定值497.2。
实施例202-[(1R，3S)-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]-1-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇双(三氟乙酸盐)(盐)的制备 步骤A (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯向在-78℃下搅拌的1.00M六甲基二硅氮化锂(Lithiumhexamethyldisilazide)在四氢呋喃中的溶液(45mL)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(5.0g，21mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液。将所得金色混合物温至-28℃至-23℃(CCl4/干冰)并且搅拌30分钟。将该反应溶液冷却至-78℃并且加入无水丙酮(1.8mL，25mmol)。在添加后，将该反应混合物保持在CCl4/干冰浴中并且将其温至室温下过夜。用饱和NH4Cl使深色溶液猝灭并且用乙醚提取3次。干燥合并的提取物，过滤，浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗残余物(EtOAc/己烷)而得到所需产物(1.4g，22.6％)。
步骤B (3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊烷甲酸甲酯在Parr烧瓶中将(4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(1.4g，4.7mmol)溶于乙醇(30mL)并且用N2净化。加入10％钯/碳(0.14g)并且将该混合物在50psi下的氮气环境中振摇过夜。将该混合物通过C盐过滤，用二氯甲烷洗涤并且浓缩至得到所需产物(1.06g，86％)。
步骤C (3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊烷甲酸向(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊烷甲酸甲酯(1.0g，3.3mmol)在四氢呋喃(30mL)、甲醇(30mL)和水(6mL)的混合物中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.22g，5.3mmol)并且将该混合物回流过夜(110℃)。蒸发有机溶剂并且用乙醚将水层洗涤1次。然后用6N HCl将水层酸化至约pH4并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物，过滤并且浓缩至得到所需产物(0.47g，49％)。
步骤D [3-(1-羟基-1-甲基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向在N2环境中的(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(1-羟基-1-甲基乙基)环戊烷甲酸(150mg，0.52mmol)和1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪(130mg，0.57mmol)在二氯甲烷(3mL)中的混悬液中加入三乙胺(0.16g，1.6mol)和苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(0.25g，0.57mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3溶液使反应猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤，浓缩并且通过快速柱色谱法纯化而得到所需产物(76mg，29％)。
步骤E 2-[(1R，3S)-3-氨基-1-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇二盐酸盐将[(3R)-3-(1-羟基-1-甲基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.15mmol)与2.00M氯化氢在乙醚中的溶液(2mL)和四氢呋喃(1mL)混合。在室温下搅拌1小时后，将该反应溶液浓缩至得到所需产物(70mg，98.7％)。C17H28F3N4O2的LCMS计算值(M+H)473.2；测定值473.2。
步骤F
2-[(1R，3S)-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]-1-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇双(三氟乙酸盐)向2-[(1R，3S)-3-氨基-1-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇二盐酸盐(71mg，0.15mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(69mg，0.45mmol)和三乙胺(63μL，0.45mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(64mg，0.30mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤，浓缩，通过色谱法纯化且然后转化成所需产物TFA盐(57mg，57.5％)。C25H37F3N4O4的LCMS计算值(M+H)515.3；测定值515.4。
实施例212-[(1S，3R)-3-[(4R)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基-1-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例20所述类似的操作步骤制备标题化合物。C24H36F3N5O4的MS计算值(M+H)516.3；测定值516.4。
实施例222-[(1S，3S)-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]-1-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例20所述类似的操作步骤制备标题化合物。C25H37F3N4O4的MS计算值(M+H)515.3；测定值515.4。
实施例23N-[(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 步骤A (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊-2-烯-1-甲酸甲酯在-78℃下和10分钟内向1.00M六甲基二硅氮化锂在四氢呋喃中的溶液(61.5mL，61.5mmol)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(6.71g，27.8mmol)在四氢呋喃(10.0mL)中的溶液。将所得淡棕色溶液在-78℃下搅拌30分钟，此后1次加入碘乙烷(2.67mL，33.4mmol)。然后将该混合物保持在-25℃下过夜。用饱和NH4Cl水溶液使反应猝灭。分离有机层并且进一步用乙醚将水层提取3次。然后用以上许多合并的有机层，用Na2SO4，干燥，过滤，浓缩并且通过快速柱色谱法纯化而得到所需产物，为7∶1的顺式/反式混合物(4.83g，65％)。C14H23NO4的MS计算值(M+H)170.2；测定值170.1(M+H-Boc)。
步骤B (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊-2-烯-1-甲酸向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(4.80g，17.8mmol))在四氢呋喃(100mL)、甲醇(100mL)和水(20mL)的混合物中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(1.2g，28.6mmol)并且将该混合物回流过夜。蒸发有机溶剂。然后用6N HCl将水层酸化至约pH4并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物，过滤并且浓缩至得到顺式/反式异构体混合物(2.93g，顺式/反式＝7∶1)，为淡黄色固体。将该固体溶于EtOAc(4.0mL)，通过加热并且用己烷稀释(100mL)而得到澄清溶液。在1小时内将该溶液缓慢冷却至室温且然后维持在-25℃下过夜。使顺式-异构体结晶并且干燥至得到所需产物(1.40g，31％)，为白色固体。C13H21NO4的MS计算值(M+H)256.2.2；测定值156.1(M+H-Boc)。
步骤C (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊烷甲酸向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊-2-烯-1-甲酸(1.38g，5.41mmol)在乙醇(40mL)中的溶液中加入10％钯/碳(200mg)。将该混合物在50psi下的氢气环境中振摇18小时并且通过C盐过滤。在真空中蒸发滤液而得到所需产物(1.5g)。C13H23NO4的MS计算值(M+H)258.2；测定值158.1(M+H-Boc)。
步骤D [(1S，3R)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯向在N2环境中的(1R，3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-乙基环戊烷甲酸(0.30g，1.2mmol)和1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪二盐酸盐(0.39g，1.3mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入三乙胺(0.65mL，4.7mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.663g，1.75mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的提取物(MgSO4)，过滤，浓缩并且通过快速柱色谱法纯化而得到所需产物(400mg，72.9％)。C23H34F3N4O3的MS计算值(M+H)471.3；测定值371.2(M+H-Boc)。
步骤E (1S，3R)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐将[(1S，3R)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(0.39g，0.83mmol)溶于4M氯化氢在1，4-二烷中的溶液(3.1mL)并且将该溶液在室温下搅拌过夜。蒸发反应溶液而得到所需产物，为黄色粉末(0.36g，96％)。
步骤F
N-[(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)向(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐(100mg，0.20mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(77mg，0.50mmol)和三乙胺(0.110mL，0.79mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(96mg，0.45mmol)。在室温下搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤，浓缩，通过柱色谱法纯化(NH4OH/MeOH/EtOAc)而得到所需产物(111mg，69.1％)。C24H35F3N4O3的MS计算值(M+H)485.3；测定值485.2。
实施例24(4R)-N-[(1R，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例23所述类似的操作步骤制备标题化合物。C23H34F3N5O3的MS计算值(M+H)486.3；测定值486.2。
实施例25N-[(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备
使用与对实施例23所述类似的操作步骤制备标题化合物。C24H35F3N4O3的MS计算值(M+H)485.3；测定值485.3。
实施例26(4R)-N-[(1R，3S)-3-甲基-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例23所述类似的操作步骤制备标题化合物。C22H32F3N5O3的MS计算值(M+H)472.3.3；测定值472.3。
实施例27(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 步骤A 1-碘-2-甲氧基乙烷向1-溴-2-甲氧基乙烷(2.0g，14mmol)在丙酮(40mL)中的溶液中加入碘化钠(11g，72mmol)并且将所得溶液在N2环境中回流(70℃)3小时。冷却该混合物并且过滤。在冷藏箱内进一步冷却时，有额外的固体析出并且将它们过滤出来，此后浓缩至得到橙色残余物。将残余物溶于乙醚并且用Na2S2O3洗涤，产生接近无色的溶液。干燥该溶液(MgSO4)，过滤并且浓缩至得到黄色油状物(1.8g，64％)。1H NMR(CDCl3)δ3.70-3.60(2H，t，J＝5Hz)，3.40(3H，s)，3.30-3.20(2H，t，J＝5Hz)。
步骤B (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯向在-78℃下和N2环境中的1.00M六甲基二硅氮化锂在四氢呋喃中的溶液(9.1mL，9.1mmmol)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(1.0g，4.1mmol)在四氢呋喃(2.0mL)中的溶液。将所得淡棕色溶液在-78℃下搅拌30分钟，此后添加1-碘-2-甲氧基乙烷(0.93g，5.0mmol)在四氢呋喃(2.0mL)中的溶液。将所得混合物在-78℃下搅拌1小时，然后保持在-20℃读数的冷藏箱内过夜。用饱和氯化铵使反应猝灭。分离各层并且用乙醚将水层提取提取3次。然后用盐水洗涤合并的有机层，干燥(硫酸镁)，过滤并且通过快速色谱法纯化(EtOAc/己烷)而得到所需产物(0.28g，23％)。C15H26NO5的LCMS计算值(M+H)300.2；测定值300.2。
步骤C (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸向搅拌的(1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(0.78g，2.6mmol)在四氢呋喃(1.5mL)、甲醇(15mL)和水(3.0mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.55g，13mmol)并且将所得橙色混合物在80℃下搅拌过夜。蒸发溶剂并且用6NHCl将该混合物酸化至pH约为4。然后用二氯甲烷将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤并且在真空中浓缩至得到所需产物，为油状物(0.47g，63.2％)。C14H24NO5的LCMS计算值(M+H)286.2；测定值286.2。
步骤D (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊烷甲酸向(1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊-2-烯-1-甲酸(1.56g，5.47mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入10％钯/碳(150mg)。将该混合物在50psi下的氢气环境中振摇过夜并且通过C盐过滤。在真空中蒸发滤液而得到所需产物(1.57g，99.9％)。C14H26NO5的MS计算值(M+H)288.2；测定值188.2(M+H-Boc)。
步骤E [(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯将(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(2-甲氧基乙基)环戊烷甲酸(276.6mg，0.96mmol)、1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪二盐酸盐(322.0mg，1.06mmol)、三乙胺(0.54mL，3.85mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(547.6mg，1.44mmol)(HBTU)在干燥DMF(6.6mL)中混合并且将所得棕色溶液在室温下和N2环境中搅拌3天。用CH2Cl2稀释反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用CH2Cl2将水层提取4次。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤，浓缩并且通过快速色谱法纯化(EtOAc/己烷)而得到所需产物(252mg，52％)。C24H36F3N4O4的MS计算值(M+H)501.3；测定值401.3(M+H-Boc)。
步骤F (1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐将[(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(252mg，0.503mmol)溶于2M氯化氢在乙醚中的溶液(8mL)并且在室温下搅拌2小时。将该反应溶液浓缩至得到所需产物，为黄色粉末(0.36g，96％)。C19H27F3N4O2的MS计算值(M+H)401.3；测定值401.3。
步骤G (4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)向(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐(140.0mg，0.30mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(115mg，0.887mmol)和三乙胺(0.165mL，1.18mmol)在干燥二氯甲烷(12mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(188.1mg，0.887mmol)。在室温下和N2环境中搅拌过夜后，用饱和NaHCO3使反应猝灭并且用二氯甲烷提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤，浓缩，通过快速柱色谱法纯化(MeOH/EtOAc)并且转化成TFA盐而得到所需产物(72.4mg，34％)。C25H37F3N4O4的MS计算值(M+H)515.3；测定值515.4。
实施例283-甲氧基-N-[(1S，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例27所述类似的操作步骤制备标题化合物。C24H36F3N5O4的MS计算值(M+H)516.3；测定值516.3。
实施例29(4R)-N-[(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备
步骤A (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯在-78℃下向1.0M六甲基二硅氮化锂在四氢呋喃的溶液(36.7mL)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(4.00g，1.66mmol)在四氢呋喃(6.0mL)中的溶液。将所得淡棕色溶液在-78℃下搅拌30分钟，此后1次加入(氯甲氧基)乙烷(1.88g，19.9mol)。将该混合物在-78℃下搅拌1小时且然后在读数在-25℃下的冷藏箱内保持过夜。然后用饱和NH4Cl(50mL)使反应猝灭。分离有机层并且用CH2Cl2将水层提取3次。用以上洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并且通过快速色谱法纯化(0-15％在己烷中的EtOAC)而得到所需产物(3.29g，66％)，基于反相HPLC分析为顺式/反式(3∶2)混合物。C15H26NO5的MS计算值(M+H)300.2；测定值200.2(M+H-Boc)。
步骤B (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊-2-烯-1-甲酸向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(3.25g，10.8mmol)在四氢呋喃(58.7mL)、甲醇(58.7mL)和水(12.6mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.731g，17.42mmol)。将该粉红色混合物加热至回流过夜。在真空中除去有机溶剂并且用乙醚将水层洗涤1次且然后用浓HCl缓慢酸化至pH达到4。用二氯甲烷将所得混悬液提取3次。用MgSO4干燥合并的有机层，过滤并且浓缩至得到所需产物，为顺式/反式异构体混合物(2.75g，89％)。C14H24NO5的MS计算值(M+H)286.2；测定值186.2(M+H-Boc)。
步骤C (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊烷甲酸向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊-2-烯-1-甲酸(2.70g，9.46mmol)在乙醇(69.5mL)中的溶液中加入10％钯/碳(350mg)。将该混合物在50psi下的氢气环境中振摇18小时，通过C盐过滤并且用二氯甲烷洗涤。浓缩滤液而得到所需产物(2.87g)。C14H26NO5的MS计算值(M+H)288.2；测定值188.2(M+H-Boc)。
步骤D [(3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯将(1S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-(乙氧基甲基)环戊烷甲酸(429.4mg，1.494mmol)、1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪二盐酸盐(500.0mg，1.644mmol)、三乙胺(0.833mL，5.98mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(850.3mg，2.242mol)(HBTU)在干燥DMF(10.2mL)中混合。将所得棕色溶液在室温下和N2环境中搅拌过夜。用CH2Cl2稀释反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用CH2Cl2将水层提取4次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且通过快速色谱法纯化而得到所需产物(304.4mg，40％)。C24H36F3N4O4的MS计算值(M+H)501.3；测定值501.3。
步骤E (1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐将[(3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(295mg，0.589mol)溶于2M氯化氢在乙醚中的溶液(10mL)。在室温下搅拌过夜后，在真空中浓缩该反应混合物而得到所需产物(330mg)，为淡黄色固体。C19H28F3N4O2的MS计算值(M+H)401.3；测定值401.3。
步骤F (4R)-N-[(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)向(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐(100.0mg，0.211mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(82.5mg，0.634mmol)和三乙胺(0.118mL，0.845mmol)在干燥二氯甲烷(8.6mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(134.3mg，0.634mmol)。在室温下和N2环境中搅拌过夜后，用饱和NaHCO3水溶液使反应猝灭并且用二氯甲烷稀释。分离有机层并且用二氯甲烷将水层提取3次。合并有机层，用MgSO4干燥，过滤，通过硅胶组合-快速系统(梯度，0-40％在EtOAc中的MeOH，12克柱)纯化并且转化成TFA盐而得到所需产物(115.4mg，74％)。C25H37F3N4O4的MS计算值(M+H)515.3；测定值515.4。
实施例30(4R)-N-[(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例29所述类似的操作步骤制备标题化合物。C24H36F3N5O4的MS计算值(M+H)516.3；测定值516.4。
实施例31(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(甲氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例29所述类似的操作步骤制备标题化合物。C24H35F3N4O4的MS计算值(M+H)501.3；测定值501.3。
实施例32(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(甲氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺双(三氟乙酸盐)的制备 使用与对实施例29所述类似的操作步骤制备标题化合物。C23H34F3N5O4的MS计算值(M+H)502.3；测定值502.3。
实施例33(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 步骤A (3R)-3-碘四氢呋喃向(S)-(+)-3-羟基四氢呋喃(0.50g，5.7mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中依次加入三苯基膦(3.0g，11mmol)、1H-咪唑(0.75g，11mmol)和碘(2.9g，11mmol)。在N2环境中回流过夜后，用0.2MNa2S2O3(60mL)使反应猝灭。分离有机层并且用二氯甲烷将水层提取3次。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤并且浓缩至得到湿的黄色固体。向该固体中加入戊烷(100mL)并且搅拌2小时。过滤出固体并且浓缩滤液而得到所需产物(970mg，79.4％)，为黄色油状物。1H NMR(CDCl3)δ4.30-3.85(5H，m)，2.50-2.20(2H，m)。
步骤B
(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯向在-78℃下和N2环境中的1.00M六甲基二硅氮化锂在四氢呋喃中的溶液(34.8mL，34.8mmol)中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(4.0g，16mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液。将所得棕色溶液在-78℃下搅拌30分钟，此后加入(3R)-3-碘四氢呋喃(3.75g，17.4mmol)在THF(3mL)中的溶液。将该混合物在-78℃下搅拌10分钟，然后保持读数在-25℃下的冷藏箱内过夜。用饱和氯化铵使反应猝灭，用乙醚提取3次。干燥合并的有机提取物(MgSO4)，过滤，浓缩并且通过快速柱色谱法纯化(EtOAc/己烷)而得到所需产物(1.6g，31％)。C16H25NO5的MS计算值(M+H)312.2；测定值312.2。
步骤C (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊-2-烯-1-甲酸向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(1.60g，5.14mmol)在四氢呋喃(27.8mL)、甲醇(27.8mL)和水(6.0mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.346g，8.25mmol)。将该粉红色混合物加热至回流18小时。在真空中除去有机溶剂并且用乙醚将水层洗涤1次且然后用6M HCl缓慢酸化至pH达到3-4。用CH2Cl2将所得混悬液提取3次。用MgSO4干燥合并的有机层，过滤并且浓缩至得到产物，为2种顺式/反式异构体混合物(1.59g)，为淡黄色固体。C15H24NO5的MS计算值(M+H)298.2；测定值198.2(M+H-Boc)。
步骤D (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊烷甲酸将(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊-2-烯-2-甲酸(0.79g，2.6mol)溶于乙醇(20.0mL)，脱气-用N2净化，随后添加二氧化铂(0.150g，0.528mol)。将该反应混合物放入Parr仪并且在55psi H2下氢化18小时。将该混合物通过C盐垫过滤，用MeOH洗涤，浓缩至得到所需产物(730mg，91.8％)。C15H26NO5的MS计算值(M+H)300.2；测定值200.2(M+H-Boc)。
步骤E [(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯将(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-[(3R)-四氢呋喃-3-基]环戊烷甲酸(350.0mg，1.169mmol)、1-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪二盐酸盐(391.1mg，1.286mmol)、三乙胺(0.652mL，4.68mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(665.1mg，1.754mol)(HBTU)在干燥DMF(8.0mL)中混合。在室温下搅拌过夜后，用CH2Cl2稀释反应混合物并且用饱和Na2CO3洗涤。用CH2Cl2将水层提取4次。干燥合并的有机层(MgSO4)，浓缩并且通过快速色谱法纯化(组合-快速系统，0-50％在己烷中的EtOAcs，梯度洗脱，40克柱)而得到所需产物(270mg，45％)。C25H36F3N4O4的MS计算值(M+H)513.3；测定值513.3。
步骤F (1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐将[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯(260mg，0.51mmol)溶于2M氯化氢在乙醚中的溶液(8mL)。在室温下搅拌过夜后，在真空中浓缩该反应混合物而得到所需产物(290mg)，为淡黄色固体。C20H27F3N4O2的MS计算值(M+H)413.2；测定值413.0。
步骤G (4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺向(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊胺二盐酸盐(73.8mg，0.152mmol)、3-甲氧基四氢-4H-吡喃-4-酮(59.4mg，0.456mmol)和三乙胺(0.0848mL，0.608mmol)在干燥二氯甲烷(4.1mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(96.7mg，0.456mmol)。在室温下和N2环境中搅拌后，用NaHCO3水溶液使反应猝灭并且用CH2Cl2稀释。分离有机层并且用CH2Cl2将水层提取3次。合并有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并且通过硅胶色谱法纯化(组合-快速系统，0-40％在EtOAc中的MeOH，梯度，12克柱)而得到所需产物(20mg，41％)。C26H37F3N4O4的MS计算值(M+H)527.3；测定值527.3。
实施例34(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺的制备 使用与对实施例33所述类似的操作步骤制备标题化合物。C25H36F3N5O4的MS计算值(M+H)528.3；测定值528.3。
实施例ACCR2体外试验可以使用合适的筛选(例如高流通量试验)测定本发明新化合物拮抗趋化因子受体(例如CCR2)功能的能力。例如，在胞外酸化试验、钙流通量试验、配体结合试验或趋化性试验中测试活性剂(例如，参见Hesselgesser等，J Biol.Chem.273(25)15687-15692(1998)；WO00/05265和WO 98/02151)。
在合适的试验中，使用可以分离或重组来源的CCR2蛋白，它具有至少一种哺乳动物CCR2蛋白的特性、活性或功能特征。特异性可以为结合性(例如与配体或抑制剂结合)、信号传导活性(例如哺乳动物G蛋白活化、胞质游离钙[Ca++]i浓度的快速和瞬时增加的诱导、细胞反应功能(例如白细胞刺激趋化性或炎症介体释放)等。
在结合试验实例中，将含有CCR2蛋白或其变体的组合物维持在适合于结合的条件下。使CCR2受体接触测试化合物并且检测或测定结合。
在基于细胞的试验的实例中，使用应用具有编码CCR2受体的核酸序列的载体或表达弹夹稳定或短暂转染的细胞。将细胞维持在适合于受体表达的条件下并且使其在适合于结合发生的条件下接触活性剂。可以使用标准技术检测结合。例如，测定与合适的对照组相比的结合程度。此外，可以使用含有所述受体的细胞部分，诸如膜部分代替完整细胞。
结合检测或试验中的复合物形成可以直接或间接检测。例如，可以使用合适的标记(例如荧光标记、同位素标记、酶标记等)标记活性剂并且可以通过检测该标记测定结合。可以通过竞争性或取代研究，使用未标记的活性剂或配体作为竞争剂评价特异性和/或竞争性结合。
可以将本发明化合物的CCR2拮抗剂活性报导为受体结合试验中达到特异性结合50％抑制所需的抑制剂浓度(IC50值)，所述的试验使用125I-标记的MCP-1作为配体和由正常人全血通过密度梯度离心制备的外周血单核细胞(PBMCs)。优选将特异性结合定义为总体结合(例如滤器上的总cpm)减去非特异性结合。将非特异性结合定义为在有过量未标记的竞争剂(例如MCP-1)存在下仍然检测到的cpm的量。
实施例B结合试验在结合试验中将人PBMCs用于测试本发明化合物。例如，将200,000-500,000个细胞与0.1-0.2nM125I-标记的MCP-1，与或不与未标记的竞争剂(10nM MCP-1)或各种浓度的待测化合物一起温育。通过合适的方法制备125I-标记的MCP-1或它们购自商品供应商(Perkin Elmer，Boston MA)。使结合反应在室温下和由1M HEPES pH7.2和0.1％ BSA(牛血清清蛋白)组成的50-250μL结合缓冲液中进行30分钟。通过经预浸入0.3％聚乙烯亚胺或磷酸缓冲盐水(PBS)中的玻璃纤维滤膜(Perkin Elmer)快速过滤采集膜终止结合反应。用含有0.5M NaCl或PBS的约600μL结合缓冲液冲洗滤器，然后干燥并且通过用γ计数器(Perkin Elmer)计数测定结合的放射性的量。
按照这种结合试验方案，本发明的化合物具有低于约3000nM的IC50值。
实施例C趋化性试验在修饰的Boyden Chamber(Neuro Probe)内，使用外周血单核细胞在白细胞趋化性试验中测定本发明化合物拮抗CCR2功能的能力。将在不含血清的DMEM培养基(In Vitrogen)中的500,000个细胞与或不与所述抑制剂一起温育并且温至37℃。还预温热趋化室(NeuroProbe)。将400μL温热的10nM MCP-1加热至所有孔中的底部室内，而阴性对照加入DMEM。将8微米膜滤膜(Neuro Probe)放在顶部并且用室盖封闭。然后将细胞加入到室盖中的孔中，这些孔与滤膜下的室孔连接。将整个室在37℃，5％ CO2中温育30分钟。然后抽吸出细胞，打开室盖并且缓慢除去滤膜。用PBS将滤膜顶部洗涤3次并且保持不接触底部。将滤膜风干并且用Wright Geimsa染色剂(Sigma)染色。通过显微镜检查对滤膜进行计数。阴性对照孔用作本底并且将其从所有值中扣除。通过将迁移至含有拮抗剂的孔中底部室的细胞数量与迁移至MCP-1对照孔中底部室的细胞数量进行比较来确定拮抗剂功效。
根据该趋化性试验，本发明的化合物具有低于约3000nM的IC50值。
实施例DCCR5表达leukophoresis(Biological Specialty，Colmar，PA)获自正常的不含药物的供体并且通过密度梯度离心分离外周血单核细胞(PBMCs)。通过离心冲洗进一步分离单核细胞。在洗涤后，使用补充了10％ FBS(Hyclone，Logan，UT)和10-20ng/mL重组人IL-10(R&Dsystems，Minneapolis，MN)的RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)以106个细胞/ml重新悬浮单核细胞并且在37℃下和含有5％ CO2的培养基中孵育24-48小时。然后通过用PE-缀合的抗-人CCR5抗体(PharMingen，San Diego，CA)染色来验证IL-10-处理的单核细胞上的CCR5表达，随后使用FACSCalibur(BD Biosciences，Bedford，MA)进行FACS分析。
实施例ECCR5结合试验在96孔MultiScreenTM滤板(Millipore Systems，Billerica，MA)中，在室温下和含有20mM HEPES(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.3％BSA(Sigma，St Louis，MO)的150μL RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)中将3×105个IL-10-处理的单核细胞与0.2nM125I-MIP-1β(PerkinElmer，Boston，MA)和一系列浓度的本发明化合物一起温育1小时。通过将细胞与0.3μM MIP-1β(R&D Systems，Minneapolis，MN)一起温育测定非特异性结合。通过将细胞收集在多头抽真空装置(Millipore Systems，Billerica，MA)上的平板中的滤膜上终止结合反应。然后在多头抽真空装置上用补充了20mM HEPES(Invitrogen，Carlsbad，CA)、0.3％ BSA(Sigma，St Louis，MO)和0.4M NaCl的RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)将滤膜洗涤5次，风干并且从平板中剥离。使用微孔冲压系统(Millipore Systems，Billerica，MA)冲压出滤板中与样品孔相当的过滤碟(dish)。通过用γ计数器计数测定每一过滤碟(dish)上结合的放射性的量。将特异性结合定义为总体结合减去非特异性结合。使用Prism(GraphPad Software，San Diego，CA)评价结合数据。按照本试验发现本发明的化合物具有约1μM或1μM以下的结合亲合力。
实施例FHIV-1进入试验通过例如Connor等在Virology，206(1995)，935-944中所述，将编码HIV-1的NL4-3菌株的质粒(已经通过使包膜基因突变并且导入荧光素酶报道质粒进行了修饰)与编码几种HIV-1包膜基因之一的质粒共转染，产生复制缺陷型HIV-1报道病毒体。在通过磷酸钙沉淀转染两种质粒后，在第3天时收集病毒上清液并且测定功能性病毒滴度。然后将这些储备溶液用于感染稳定表达CD4和趋化因子受体CCR5的已经与或不与待测化合物一起预温育的U87细胞。将感染在37℃下进行2小时，洗涤细胞并且用含有化合物的新鲜培养基取代。将细胞孵育3天，溶解并且测定荧光素酶活性。将结果报导为抑制对照培养物中50％荧光素酶活性所需的化合物浓度。
实施例GMT-4细胞中的HIV-1复制试验如上所述进行HIV-1 NL4.3(或IIIB)复制抑制的试验(Bridger等，J.Med.Chem.423971-3981(1999)；De Clercq等，Proc.Natl.Acad.Sci.895286-5290(1992)；De Clercq等，Antimicrob.AgentsChemother.38668-674(1994)；Bridger等，J.Med.Chem.38366-378(1995))。为概括起见，平行进行抗-HIV活性和细胞毒性测定，并且基于在有不同浓度测试化合物存在下感染了HIV的MT-4细胞存活率。在使MT-4细胞增殖5天后，通过在96-孔微阵列(microtrays)中的基于四氮唑的量热3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑溴化物(MTT)操作步骤对存活细胞的数量进行定量。对结果进行量化而得到EC50值，它们代表防止50％病毒感染的细胞发生病毒致细胞病变性(cytopathicity)所需的浓度。
除本文所述的那些技术方案外，根据上述描述对本发明的各种变型对本领域技术人员而言显而易见。这类变型也属于附批权利要求的范围。将本申请中引述的每一参考文献，包括专利、专利申请和公开文献的全部内容引入本文作为参考。
权利要求
1.通式I的化合物 或其药物上可接受的盐或前体药物，其中虚线表示任选的键；W为 V为N、NO或CR5；X为N，NO或CR2；Y is N、NO或CR3；Z为N、NO或CR4；其中V、X、Y和Z中不超过一个为NO；RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6链烯基、C1-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、杂环基、碳环基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、CN、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R1为C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、-(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-(C0-6烷基)-S-(C1-6烷基)、-(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、OH、OR10、SR10、COR11、CO2R10、CONR10R12、碳环基、杂环基、CN、NR10R12、NR10SO2R10、NR10COR10、NR10CO2R10、NR10CONR12、CR10R11CO2R10或CR10R11OCO10；R2、R3、R4、R5和R6各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、C1-6硫代烷氧基、NR10R12、NR10CO2R11；NR10CONR10R12、NR10SO2NR10R12、NR10-SO2-R11、杂环基、碳环基、碳环氧基、杂环氧基、CN、NO2、COR11、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10；或SO2-NR10R12；R7为H或任选地被1-3个选自卤素、OH、CO2H、CO2-(C1-6烷基)或C1-3烷氧基的取代基取代的C1-6烷基；R8为C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷氧基或OH；R8’为H；R9和R9’各自独立为H、C1-6烷基、卤素、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、OH、CO2R10、OCOR10，其中所述的C1-6烷基任选地被一个或多个选自F、C1-3烷氧基、OH或CO2R10的取代基取代；或R9和R9’与它们所连接的碳原子一起形成3-7元螺环基；R10为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH，C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；R11为H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基，其中所述的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、苄氧基、苯氧基、C3-6环烷基或C3-6环烷氧基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3的取代基取代；R12为H、C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基，其中所述的C1-6烷基、苄基、苯基或C3-6环烷基任选地被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、CO2H和CO2-(C1-6烷基)的取代基取代；且P为0或1。
2.权利要求1所述的化合物，其中W为
3.权利要求1所述的化合物，其中W为
4.权利要求1所述的化合物，其中V为CR5。
5.权利要求1所述的化合物，其中X为CR2。
6.权利要求1所述的化合物，其中Y为CR3。
7.权利要求1所述的化合物，其中Z为CR4。
8.权利要求1所述的化合物，其中X为CR2；Y为CR3；且Z为CR4。
9.权利要求1所述的化合物，其中V为CR5，X为CR2；Y为CR3；且Z为CR4。
10.权利要求1所述的化合物，其中RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6链烯基、C1-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基。
11.权利要求1所述的化合物，其中RA、RA1、RB和RB1各自独立为H、OH或C1-6烷氧基。
12.权利要求1所述的化合物，其中RA、RA1、RB和RB1各自独立为H或OH。
13.权利要求1所述的化合物，其中R1为C1-6烷基、C1-6羟基烷基、-(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)或杂环基。
14.权利要求1所述的化合物，其中R1为C1-6烷基。
15.权利要求1所述的化合物，其中R1为丙-2-基。
16.权利要求1所述的化合物，其中R5和R6之一不为H。
17.权利要求1所述的化合物，其中R5和R6之一为C1-4卤代烷基。
18.权利要求1所述的化合物，其中R6为C1-4卤代烷基。
19.权利要求1所述的化合物，其中R6为CF3。
20.权利要求1所述的化合物，其中R7为H。
21.权利要求1所述的化合物，其中R8为C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基。
22.权利要求1所述的化合物，其中R8为C1-3烷氧基。
23.权利要求1所述的化合物，其中R8为甲氧基。
24.权利要求1所述的化合物，其中R8为乙氧基。
25.权利要求1所述的化合物，其中R9和R9’均为H。
26.权利要求1所述的化合物，具有通式Ia Ia。
27.权利要求1所述的化合物，具有通式Ib、Ic或Id
28.权利要求1所述的化合物，具有通式Ie或If
29.权利要求1所述的化合物，具有通式Ig
30.权利要求1所述的化合物，具有通式Ih或Ii
31.权利要求1所述的化合物，选自N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；3-乙氧基-N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[3-(三氟甲基)苯基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-{(1R，3S)-3-异丙基-3-[(4-苯基-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)羰基]环戊基}-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；1-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-苯基哌啶-4-醇；1-({(1S，3R)-1-异丙基-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]环戊基}羰基)-4-[2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇；1-[((1S，3R)-1-异丙基-3-{[3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基}环戊基)羰基]-4-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇；1-[((1S，3R)-1-异丙基-3-{[3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基}环戊基)羰基]-4-[4-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-醇N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[2-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；3-乙氧基-N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基]羰基}环戊基)四氢-2H-吡喃-4-胺；N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[4-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-2，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-((1R，3S)-3-异丙基-3-{[5-(三氟甲基)-3′，6′-二氢-3，4′-联吡啶-1′(2′H)-基]羰基}环戊基)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-({4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-(三氟甲基)嘧啶-4-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-N-[(1R，3S)-3-异丙基-3-(4-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；2-[(1R，3S)-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]-1-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇；2-[(1R，3S)-3-[(4R)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基]氨基-1-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇；2-[(1S，3S)-3-[(3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基]-1-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]丙-2-醇；N-[(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-N-[(1R，3S)-3-乙基-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；N-[(1S，3S)-3-乙基-3-(4-[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-N-[(1R，3S)-3-甲基-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；3-甲氧基-N-[(1S，3S)-3-(2-甲氧基乙基)-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-N-[(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-N-[(1R，3S)-3-(乙氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(甲氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-(甲氧基甲基)-3-(4-[4-(三氟甲基)-嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)-吡啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；和(4R)-3-甲氧基-N-[(1R，3S)-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]-3-(4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基羰基)环戊基]四氢-2H-吡喃-4-胺；或其药物上可接受的盐。
32.组合物，包括权利要求1-31中任一项的化合物和药物上可接受的载体。
33.调节趋化因子受体活性的方法，包括使所述的趋化因子受体接触权利要求1-31任一项的化合物。
34.权利要求33所述的方法，其中所述的趋化因子受体为CCR2或CCR5。
35.权利要求33所述的方法，其中所述的调节为抑制。
36.权利要求33所述的方法，其中所述的化合物抑制CCR2和CCR5。
37.治疗患者中与趋化因子受体表达或活性相关的疾病的方法，包括给予所述的患者治疗有效量的权利要求1-31中任一项的化合物。
38.权利要求37所述的方法，其中所述的趋化因子受体为CCR2或CCR5。
39.权利要求37所述的方法，其中所述的疾病为炎性疾病。
40.权利要求37所述的方法，进一步包括给予抗炎药。
41.权利要求40所述的方法，其中所述的抗炎药为抗体。
42.权利要求37所述的方法，其中所述的疾病为免疫障碍。
43.权利要求37所述的方法，其中所述的疾病为类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、狼疮、多发性硬化、神经性疼痛、移植排斥、糖尿病或肥胖。
44.权利要求37所述的方法，其中所述的疾病为癌症。
45.权利要求44所述的方法，其中所述的癌症以与肿瘤相关的巨噬细胞为特征。
46.权利要求44所述的方法，其中所述的癌症为乳腺癌、卵巢癌或多发性骨髓瘤。
47.权利要求37所述的方法，其中所述的疾病或病症为病毒感染。
48.权利要求47所述的方法，其中所述的病毒感染为HIV感染。
49.治疗患者HIV感染的方法，包括给予所述的患者治疗有效量的权利要求1-31中任一项的化合物。
50.权利要求49所述的方法，进一步包括同时或依次给予至少一种抗病毒药。
全文摘要
本发明涉及通式I的化合物，它们为趋化因子受体的调节剂。本发明的化合物及其组合物用于治疗与趋化因子受体表达和/或活性相关的疾病。
文档编号C07D405/12GK1976702SQ200580021744
公开日2007年6月6日 申请日期2005年6月27日 优先权日2004年6月28日
发明者薛楚标, 郑长胜, 冯皓, M·夏, J·戈兰恩, 曹敢峰, B·W·迈特卡夫 申请人:因赛特公司