专利名称：用于治疗和预防丙型肝炎病毒感染的3－醚和3－硫醚取代的环孢菌素衍生物的制作方法
1.发明领域本发明提供了环孢菌素衍生物和由其制备的药物组合物，用于在有此需要的个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染。在某些方面，通过向有此需要的个体施用治疗或预防感染有效量的本发明3-醚或3-硫醚环孢菌素，本发明提供了用于治疗丙型肝炎感染的方法。
2.发明背景在1989年，发现了一种主要的导致非甲型和非乙型输血后肝炎的主要致病病毒，将其命名为丙型肝炎病毒(HCV)。从那以后，除甲型、乙型和丙型肝炎病毒外，又发现了几种肝炎病毒类型，其中由HCV引起的肝炎称为丙型肝炎。认为感染有HCV的个体涉及世界人口的百分之几，HCV感染的特征为慢性病。
HCV是包膜RNA病毒，其中基因组是单股正链RNA，属于黄病毒科肝炎病毒属(来自The International Committee on Taxonomy of Viruses，International Union of Microbiological Societies)。对于相同的肝炎病毒，例如乙型肝炎病毒(HBV)，这是一种DNA病毒，通过免疫系统消除，除了免疫能力还不成熟的婴幼儿，感染这种病毒会导致急性感染。相反，由于未知的机理，HCV总能躲过宿主的免疫系统。一旦感染上这种病毒，即使具有成熟免疫系统的成年人也经常会发展成持久的感染。
当慢性肝炎与持久的HCV感染相关时，它会快速发展成肝硬化或肝癌。通过手术摘除肿瘤并没有多大帮助，因为由于非癌部分的后遗炎症，个体经常会发生复发性肝癌。
因此，需要用于治疗丙型肝炎感染的有效治疗方法。除了使用抗炎药进行症状性治疗以抑制炎症外，迫切需要开发能将HCV减少至无炎症的低水平、和根除HCV的治疗性制剂。最佳的治疗性制剂应提供称为“持续病毒学响应”的病毒学响应，这种响应定义为在完成丙型肝炎治疗后六个月或更长的时间内，在血液中检测不到病毒的水平。
如今，用干扰素作为单一药物治疗或与病毒唑组合治疗是已知能根除HCV的唯一有效方法。但是，干扰素仅能在约33-46％的个体人群中根除病毒。对于剩下的个体，它没有效果，或者仅提供临时的效果。因此，极为需要抗HCV药物来代替干扰素或与干扰素同时使用。
环孢菌素A由于其免疫抑制活性和多种治疗用途而为人熟知，其治疗用途包括抗真菌、抗寄生虫、抗炎症以及抗HIV活性。已经报道环孢菌素A和某些衍生物具有抗HCV活性，参见Watashi等人，2003，Hepatology381282-1288、Nakagawa等人，2004，Biochem.Biophys.Res.Commun.31342-7、以及Shimotohno和Watashi，2004，American Transplant Congress，Abstract No.648(American Journal of Transplantation，2004，4(s8)1-653)。
但是，环孢菌素的已知问题是它们的肾毒性。例如，环孢菌素A(环孢菌素)能引起肾毒性和肝细胞毒性。肾毒性是环孢菌素治疗的严重并发症，其特征是剧烈的肾血管收缩，这经常会发展成不可逆的肾结构损坏的慢性损伤(Busauschina等，2004；Myers等人，1988)。在25％至38％的移植个体中报告了与环孢菌素相关的肾毒性。肾功能不良可在任何时间发生，其范围从早期的可逆性损伤到后期发展为不可逆的慢性肾衰竭。在移植后不久或在几周或几个月后，可能出现急性肾毒性，伴有少尿、肾小球滤过速率和肾血流急剧减少(Kahan，1989)。
在长期施用环孢菌素时，慢性肾毒性的特征是进行性的并且大多数为不可逆性的肾功能损伤，这得到组织学损伤的支持，组织学损伤的范围从条状纤维化到缺血性丛状萎陷、肾小球硬化和肾小管萎缩。
全世界都需要治疗或预防丙型肝炎感染的有效方法和组合物来对抗病毒。
3.发明概述令人惊讶地发现，某些3-取代的环孢菌素衍生物具有抗HCV活性。而且，发现某些所述3-取代的环孢菌素衍生物具有出乎意料的良好毒理学性质。
在一个方面，本发明提供了具有抗HCV活性的环孢菌素衍生物。在某些实施方案中，通过向个体施用有效量的本发明的3-取代环孢菌素衍生物，本发明提供了在有此需要的个体中治疗或预防丙型肝炎感染的方法。在某些实施方案中，3-取代的环孢菌素衍生物选自3-醚环孢菌素；3-醚、4-γ-羟基甲基亮氨酸环孢菌素；3-硫醚环孢菌素；和3-硫醚、4-γ-羟基甲基亮氨酸环孢菌素。
在另一方面，本发明提供了具有抗HCV活性的环孢菌素衍生物，其具有改善的安全系数(即有效控制HCV所需的化合物剂量水平与产生毒性的剂量水平之间的差值)。
在还一方面，本发明提供了与已知化合物相比具有改善的肾毒性和/或肝细胞毒性的环孢菌素衍生物。
在另一方面，本发明提供了用于在个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法。在某些方面，本发明的方法包括向有此需要的个体施用有效量的环孢菌素化合物，该化合物对丙型肝炎病毒具有高治疗指数。该治疗指数，或者细胞毒性浓度与病毒抑制浓度的比值将在下文详细描述。
在另一方面，本发明提供了如下方法，该方法包括施用治疗有效量的通式(I)的环孢菌素衍生物或其药学上可接受的的盐 其中A是式(IIa)或(IIb)的残基
B为乙基、1-羟基乙基、异丙基或正丙基；R1表示包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R3取代；包含二至六个碳原子的直链或支链烯基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含二至六个碳原子的直链或支链炔基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含一至六个碳原子的直链或支链烷氧基羰基；R2表示异丁基或2-羟基异丁基；X表示-S(O)n-或氧；R3选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基、-NR4R5和-NR6(CH2)mNR4R5；R4和R5可以相同或不同，表示氢；包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R7取代；包括二至四个碳原子的直链或支链烯基或炔基；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被包含一至六个碳原子的直链或支链烷基取代；
任选地被一至五个相同或不同的基团取代的苯基，所述基团选自卤素、烷氧基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；饱和或不饱和杂环，其含有五个或六个环原子和选自氮、硫和氧的一至三个相同或不同的杂原子；或者R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成含有四至六个环原子的饱和或不饱和杂环，该环可以任选地含有另一个选自氮、氧和硫的杂原子，该环可以任选地被一至四个相同或不同的基团取代，所述基团选自烷基、苯基和苄基；R6表示氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；R7选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基和-NR8R9；R8和R9可以相同或不同，分别表示氢或含有一至六个碳原子的直链或支链烷基；n为0、1或2；m为2至4的整数；卤素表示氟、氯、溴或碘。
在某些实施方案中，X为O。在其它实施方案中，X为S。
在某些情况下，取代基A、B、R1和R2可以产生旋光和/或立体异构化。所有这些形式均包括在本发明内。
作为药学上可接受的盐的例子，包括与碱金属如钠、钾或锂形成的盐、或与碱土金属如镁或钙形成的盐、铵盐或含氮碱的盐，该含氮碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三甲胺、三乙胺、甲胺、丙胺、二异丙胺、N，N-二甲基乙醇胺、苄胺、二环己胺、N-苄基苯乙胺、N，N′-二苄基乙二胺、联苯胺、二苯甲胺、奎宁、胆碱、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸或二苄胺。
作为与药学上可接受的酸的加成盐的例子，包括与无机酸形成的盐，如氢氯酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐；或与有机酸形成的盐，例如琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、丙酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、伊西酸盐或恩波酸盐，或与这些化合物的取代衍生物形成的盐。优选的盐是琥珀酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、氢氯酸盐、甲磺酸盐和丙酸盐。这些盐中的某些是新的，因此组成本发明的其它特征。
因此，在某些方面，本发明提供了本文所述化合物的新型盐。在某些实施方案中，本发明提供了式I化合物的盐，其中所述盐选自氢氯酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、丙酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、伊西酸盐和恩波酸盐。在某些实施方案中，所述盐选自琥珀酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、氢氯酸盐、甲磺酸盐和丙酸盐。
4.优选实施方案描述本发明提供了用于在有此需要的个体中治疗或预防丙型肝炎感染的方法、和用于这些方法的药物组合物和剂型。下面详细描述了这些方法和组合物。
4.1定义当描述本发明的化合物和络合物时，除非另有说明，下列术语具有下列含意。
“环孢菌素”指本领域技术人员已知的任何环孢菌素化合物、或其衍生物。参见例如Ruegger等人，1976，Helv.Chun.Acta.591075-92；Borel等人，1977，Immunology 321017-25；这些文献的内容被全文纳入本文作为参考。本发明的示例化合物是环孢菌素衍生物。除非另有说明，本文所述的环孢菌素为环孢菌素A，本文所述的环孢菌素衍生物为环孢菌素A的衍生物。
“酰基”指基团-C(O)R，其中R为氢，以及如本文所定义的烷基、环烷基、环杂烷基、芳基、芳基烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基。代表性例子包括但不限于甲酰基、乙酰基、环己基羰基、环己基甲基羰基、苯甲酰基、苄基羰基等。
“烷基”指一价的饱和脂肪族烃基，特别是具有最多约11个碳原子，更特别是1至8个碳原子、还更特别是1至6个碳原子的低级烷基。烃链可以是真链或支链的。该术语的示例性基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基、正辛基、叔辛基等。术语“低级烷基”指具有1至6个碳原子的烷基。
“亚烷基”指二价的饱和脂肪族烃基，特别是具有最多约11个碳原子、更特别是1至6个碳原子的二价的饱和脂肪族烃基，亚烷基可以是直链或支链的。该术语的示例性基团如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基异构体(例如-CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2-)等。
“烯基”指一价的烯键式不饱和烃基，优选具有最多约11个碳原子，特别地为2至8个碳原子，更特别地为2至6个碳原子，烯基可以是直链或支链的，具有至少1个、特别是1至2个烯键式不饱和位置。具体的烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)、正丙烯基(-CH2CH＝CH2)、异丙烯基(-C(CH3)＝CH2)、乙烯基和取代的乙烯基等。
“亚烯基”指二价的烯键式不饱和烃基，特别地具有最多约11个碳原子，更特别地为2至6个碳原子，亚烯基可以是直链或支链的，具有至少1个、特别是1至2个烯键式不饱和位置。该术语的例子为基团如亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚丙烯基异构体(例如-CH＝CHCH2-、-C(CH3)＝CH-和-CH＝C(CH3)-)等。
“炔基”指炔式不饱和烃基，特别地具有最多约11个碳原子，更特别地为2至6个碳原子，炔基可以是直链或支链的，具有至少1个、特别是1至2个炔式不饱和位置。炔基的具体非限制性例子包括乙炔、乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(-CH2C≡CH)等。
“烷氧基”指基团-OR，其中R为烷基。作为例子，具体的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基等。
“烷基氨基”指基团烷基-NR′，其中R′选自氢和烷基。
“芳基氨基”指基团芳基-NR′，其中R′选自氢、芳基和杂芳基。
“烷氧基羰基”指基团-C(O)-烷氧基，其中烷氧基如本文所定义。
“氨基”指基团-NH2。
“羧基”指基团-C(O)OH。
“二烷基氨基”指基团-NRR′，其中R和R′独立地表示如本文所定义的烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、取代的环杂烷基、杂芳基、或取代的杂芳基。
“卤素”或“卤”指氯、溴、氟或碘。
“羟基”指基团-OH。
“硝基”指基团-NO2。
“硫代烷氧基”指基团-SR，其中R为烷基。
“硫烷基”指基团HS-。“取代的硫烷基”指基团如RS-，其中R为本文所述的任何取代基。在某些实施方案中，“取代的硫烷基”指基团-SR，其中R为本文所定义的烷基或环烷基，R可以按本文所定义的任选地被取代。代表性例子包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基等。
“亚磺酰基”指基团-S(O)H。“取代的亚磺酰基”指基团如S(O)-R，其中R为本文所述的任何取代基。
“磺酰基”指二价的基团-S(O2)-。“取代的磺酰基”指基团如-S(O2)-R，其中R为本文所述的任何取代基。在具体实施方案中，R选自H、低级烷基、烷基、芳基和杂芳基。
“药学上可接受的的盐”指本发明化合物的任何盐，该盐保持了化合物的生物学性质，是无毒的且不会因为其它原因而不适于药学应用。这些盐可以源自本领域公知的各种有机或无机反离子。这些盐包括(1)与有机酸或无机酸形成的酸加成盐，这些酸为例如氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、戊二酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、扁桃酸、苯二甲酸、月桂酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯代苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、苯甲酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎宁酸、粘酸和类似的酸；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子发生如下反应时形成的盐(a)被金属离子取代，例如碱金属离子、碱土金属离子或铵离子，或者被碱金属或碱土金属氢氧化物代替，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化锌、和氢氧化钡、氨，或者(b)与有机碱配位，有机碱例如脂肪族有机胺、脂肪环有机胺、或芳族有机胺，例如氨、甲胺、二甲胺、二乙胺、皮考啉、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苯甲基苯乙胺、N-甲基葡糖胺、哌嗪、三(羟基甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵等。
仅仅作为示例，盐还还包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、四烷基铵盐等，当化合物包含碱性官能团时，所述盐包括无毒有机酸或无机酸的盐，例如氢卤化物，如氢氯化物和氢溴化物、硫酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊基丙酸盐、乙醇酸盐、戊二酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、山梨酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、苦味酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、苯二甲酸盐、月桂酸盐、甲磺酸盐(甲磺酰盐)、乙磺酸盐、1，2-乙烷-二磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(苯磺酰盐)、4-氯代苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸盐、葡庚糖酸盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、月桂基硫酸盐、葡糖酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、羟基萘酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎宁酸盐、粘酸盐等。
术语“生理学可接受的阳离子”指无毒、生理学可接受的酸性官能团的阳性反离子。这些阳离子的例子为钠阳离子、钾阳离子、钙阳离子、镁阳离子、铵阳离子和四烷基铵阳离子等。
“溶剂化物”指还包括通过分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂的本发明的化合物或其盐。当溶剂为水时，溶剂化物为水合物。
可以理解，具有相同分子式但具有不同性质或不同原子结合顺序、或不同原子空间排列的化合物被称为“异构体”。原子空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。
彼此不互为镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，互为不能重叠的镜像的立体异构体被称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心时，例如当它与四个不同的基团结合时，可能具有一对对映异构体。可以根据Cahn和Prelog规则(Cahn等人，1966，Angew.Chem.78413-447，Angew.Chem.，Int.Ed Engl.5385-414(errataAngew.Chem.，Int.Ed.Engl.5511)；Prelog和Helmchen，1982，Angew.Chem.94614-631，Angew.Chem.Internat.Ed.Eng.21567-583；Mata和Lobo，1993，TetrahedronAsymmetry 4657-668)，通过不对称中心的绝对构型来表征对映异构体，将其称为(R)或(S)，或者可通过分子旋转偏振光平面的方式来表征，将其称为右旋体或左旋体(即(+)-或(-)-异构体)。手性化合物可作为单独的对映异构体或对映异构体混合物存在。包含相等比例的对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。
在某些实施方案中，本发明的化合物可具有一个或多个不对称中心；因此可将这些化合物制备成单独的(R)-或(S)-对映异构体或其混合物。除非另有说明，例如在结构式的任意位置处指定立体化学，否则说明书和权利要求书中对具体化合物的描述或命名包括单独的对映异构体和其混合物、外消旋体或其它形式。用于确定立体化学和分离立体异构体的方法在本领域中是熟知的。在具体的实施方案中，通过用碱处理，本发明提供了本文所示化合物的立体异构体。
在某些实施方案中，本发明的化合物是“立体化学纯的”。立体化学纯的化合物具有一定水平的立体化学纯度，该水平会被本领域技术人员认为是“纯”的。当然，该纯度水平将小于100％。在某些实施方案中，“立体化学纯”指化合物基本上不含其它异构体。在具体的实施方案中，化合物为85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％地不包含其它异构体。
“肌氨酸”或“Sar”指本领域技术人员已知的氨基酸残基，其结构为-N(Me)CH2C(O)-。本领域技术人员可以将肌氨酸认为是N-甲基甘氨酸。
用于本文时，术语“个体”和“患者”在本文中是互换使用的。术语“个体”和“患者”指动物，优选哺乳动物，包括非灵长类动物(例如牛、猪、马、猫、狗、大鼠、和小鼠)和灵长类动物(例如猴子，例如猕猴、黑猩猩和人)，更优选人。在一个实施方案中，个体是用现有的丙型肝炎感染治疗难以控制的，或者对现有的丙型肝炎感染治疗没有响应。在另一个实施方案中，个体是农场动物(例如马、牛、猪等)或宠物(例如狗或猫)。在优选实施方案中，个体是人。
用于本文时，“治疗性制剂”和“多种治疗性制剂”指能用于治疗、控制、或改善病症或其一个或多个症状的任何制剂。在某些实施方案中，术语“治疗性制剂”指本发明的化合物。在某些其它实施方案中，术语“治疗性制剂”并非指本发明的化合物。优选地，治疗性制剂为已知可用于、或现有正用于治疗、控制、预防、或改善病症或其一个或多个症状的药物。
“治疗有效量”指当施用于个体治疗疾病时，化合物、络合物或组合物足以实现对疾病的这种治疗的量。“治疗有效量”可根据例如化合物、疾病及其严重性、和要治疗个体的年龄、体重等而改变。
在一个实施方案中，对任何疾病或病症“进行治疗”或“治疗”指改善个体存在的疾病或病症。在另一个实施方案中，“进行治疗”或“治疗”指改善至少一个生理参数，该参数可能是个体难以识别的。在另一个实施方案中，“进行治疗”或“治疗”指或者在生理上(例如稳定不可识别的症状)或者在心理上(例如稳定生理参数)或者同时在心理和生理上调节疾病或病症。在另一个实施方案中，“进行治疗”或“治疗”指延迟疾病或病症的发生。
用于本文时，术语“预防性制剂”指能用于预防病症或其一个或多个症状的任何制剂。在某些实施方案中，术语“预防性制剂”指本发明的化合物。在某些其它实施方案中，术语“预防性制剂”并非指本发明的化合物。优选地，预防性制剂为已知可用于、或现有正用于预防或阻止病症的发生、发展、进展和/或严重性的药物。
用于本文时，术语“预防”、“进行预防”和“预防”指通过施用治疗(例如预防性制剂或治疗性制剂)、或施用治疗的组合(例如预防性制剂或治疗性制剂的组合)，来预防病症的一个或多个症状在患者体内复发、发生、或发展。
用于本文时，短语“预防有效的量”指治疗(例如预防性制剂)的量足以预防与病症相关的一个或多个症状的发展、复发或发生，或者足够增加或改善另一种治疗(例如另一种预防性制剂)的预防效果。
术语“标记”指将手写、印刷或绘制的东西展示在商品的直观容器上，例如将手写的材料展示在含有药用活性制剂的小瓶上。
术语“标记物”指在任何物品、其任何容器或包装材料上的或该物品随附的所有标记和其它手写、印刷或绘制的东西，例如药用活性制剂容器上随附或相关的包装插入物或说明性的录像带或DVD。
4.2本发明的实施方案本发明部分地基于如下发现本发明的化合物可有效地治疗和预防有此需要的个体的丙型肝炎感染。因此，本发明提供了用于治疗有此需要的个体的丙型肝炎感染的方法。本发明还提供了预防有此需要的个体的丙型肝炎感染的方法。通常，本发明的方法包括如下步骤向有此需要的个体施用一定量的本发明化合物以有效地治疗或预防丙型肝炎感染。在下面部分中详细描述了治疗方法。所述化合物可以是下面部分中所述的任何本发明化合物。如下面的部分所述，在某些实施方案中，所述化合物是药物组合物或剂型的形式。
尽管不希望受任何具体理论的约束，本发明的化合物被认为是通过与现有HCV治疗的机理所不同的机理抑制丙型肝炎病毒(HCV)的复制。如上所述，现有的HCV治疗是将干扰素和病毒唑共给药。现有的治疗被认为是通过调节个体的免疫系统来治疗或预防HCV感染。本发明的化合物被认为是通过在宿主体内调节或抑制对HCV复制重要的细胞过程来发挥作用。在下面的实施例中讨论了这种机理。通过新的机理来起作用，本发明的化合物、组合物和方法提供了用于治疗或预防HCV感染的新治疗。因此，它们对感染有HCV、或有感染HCV风险的任何个体，尤其对现有治疗没有响应的个体是有益的。
在本发明的实施方案中，个体可以是感染有HCV、或有感染HCV风险的任何个体。通过本领域技术人员认为合适的任何技术，能够确认感染或感染的风险。特别优选的个体是感染有HCV的人。
HCV可以是本领域技术人员已知的任何HCV。本领域技术人员现有已知存在至少六种HCV基因型和至少50种亚型。所述HCV可以是本领域技术人员已知的任何基因型或亚型。在某些实施方案中，所述HCV是仍然未被表征的基因型或亚型。在某些实施方案中，个体感染有单一基因型的HCV。在某些实施方案中，个体感染有多种亚型或多种基因型的HCV。
在某些实施方案中，所述HCV为基因型1，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型1a、1b或1c。认为基因型1的HCV感染对现有的干扰素治疗响应很弱。本发明的方法对治疗基因型1的HCV感染有益。
在某些实施方案中，HCV不是基因型1。在某些实施方案中，所述HCV为基因型2，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型2a、2b或2c。在某些实施方案中，所述HCV为基因型3，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型3a、3b或10a。在某些实施方案中，所述HCV为基因型4，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型4a。在某些实施方案中，所述HCV为基因型5，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型5a。在某些实施方案中，所述HCV为基因型6，并可以是任何亚型。例如，在某些实施方案中，所述HCV为亚型6a、6b、7b、8b、9a或11a。参见例如Simmonds，2004，J Gen Virol.853173-88；Simmonds，2001，J Gen.Virol，82，693-712，这些文献的内容被全文纳入本文作为参考。
在本发明的某些实施方案中，个体从未接受过HCV感染的治疗或预防。在本发明的其它实施方案中，个体曾经接受过HCV感染的治疗或预防。例如，在某些实施方案中，个体对现有的HCV治疗没有响应。事实上，在现有的干扰素治疗中，多达50％或更多的HCV个体对治疗没有响应。在某些实施方案中，个体可以是接受了治疗但仍然承受着病毒感染或其一个或多个症状的个体。在某些实施方案中，个体可以是接受了治疗但没有获得持续病毒学响应的个体。在某些实施方案中，个体已经接受了HCV感染治疗，但是在治疗12星期后，HCV RNA水平显示并没有下降了2个Log10。认为在治疗12星期后显示血清HCV RNA水平减少不大于2个Log10的个体有97-100％的机会不产生响应。因为本发明的化合物通过与现有HCV治疗所不同的机理发挥作用，所以相信本发明的化合物应该能够有效地治疗这些无响应者。
在某些实施方案中，所述个体为由于与治疗相关的一个或多个有害事件而中断HCV治疗的个体。在某些实施方案中，个体是用现有治疗不能治疗的个体。例如，某些HCV治疗伴有神经精神病学事件。干扰素(IFN)-α加病毒唑伴有高比率的抑郁。在许多医学病症中，抑郁症状导致更坏的结果。在HCV治疗过程中，在具有或不具有精神病学病症病史的个体中，都发生过威胁生命或致命的神经精神病学事件，包括自杀、自杀性思维或杀人性思维、抑郁、药物成瘾/药物过量的复发、和攻击性行为。干扰素诱导的抑郁是治疗慢性丙型肝炎的限制，尤其是对于具有精神病学病症的个体。精神病学副作用对于干扰素治疗是常见的，它引起约10％至20％的现有HCV感染治疗的中断。
因此，本发明提供了用于治疗或预防个体HCV感染的方法，在所述个体中，神经精神病学事件例如抑郁的风险使得用现有的HCV治疗是不适当的。本发明还提供了用于治疗或预防个体HCV感染的方法，在所述个体中，神经精神病学事件例如抑郁、或其风险使得现有的HCV治疗被中断。本发明还提供了用于治疗或预防个体HCV感染的方法，在所述个体中，神经精神病学事件例如抑郁、或其风险使得现有HCV治疗的剂量减少。
在对干扰素或病毒唑、或两者、或用于施用干扰素或病毒唑的药物制品的任何其它组分高度敏感的个体中，现有的治疗也是不适当的。在具有血红蛋白病(例如重型地中海贫血、镰状细胞贫血)的个体和有现有治疗的血液病副作用风险的其它个体中，也不能进行现有的治疗。常见的血液病副作用包括骨髓抑制、中性白细胞减少和血小板减少。此外，病毒唑对红细胞是有毒的，伴有溶血。因此，本发明还提供了用于治疗或预防如下个体HCV感染的方法对干扰素或病毒唑或二者高度敏感的个体、具有血红蛋白病的个体，例如重型地中海贫血个体和镰状细胞贫血个体、和对现有治疗有血液病副作用风险的其它个体。
在某些实施方案中，个体己经接受了HCV治疗，在施用本发明的方法前中断了该治疗。在其它实施方案中，个体已经接受了HCV治疗，在施用本发明方法的过程中继续接受该治疗。根据本领域技术人员的判断，本发明的方法可以与其它HCV治疗共同施用。在有益的实施方案中，本发明的方法或组合物可与剂量减少的其它HCV治疗共同施用。
在某些实施方案中，本发明提供了用于治疗个体的方法，所述个体用干扰素治疗是难治的。例如，在一些实施方案中，个体可以是对选自下列的一种或多种制剂治疗没有响应的个体干扰素、干扰素α、PEG化干扰素α、干扰素加病毒唑、干扰素α加病毒唑和PEG化干扰素α加病毒唑。在一些实施方案中，个体可以是对选自下列的一种或多种药物治疗响应微弱的个体干扰素、干扰素α、PEG化干扰素α、干扰素加病毒唑、干扰素α加病毒唑和PEG化干扰素α加病毒唑。
在其它实施方案中，本发明提供了用于治疗已怀孕或可能要怀孕的个体HCV感染的方法，因为现有的治疗对怀孕妇女也是不适当的。
在某些实施方案中，个体已经同时感染了HCV和HIV，或具有同时感染HCV和HIV的风险。例如，在美国，30％的HIV个体同时感染有HCV，证据显示感染有HIV的人具有非常快的丙型肝炎感染过程。Maier和Wu，2002，World J Gastroenterol 8577-57。本发明的方法可用于治疗或预防这些个体的HCV感染。相信消除这些个体的HCV将降低末期肝病所致的死亡率。事实上，与不严重的AIDS免疫缺陷的个体相比，严重的AIDS免疫缺陷个体患进行性肝病的风险更高。参见例如Lesens等人，1999，J Infect Dis1791254-1258。本发明的化合物已经有益地显示能抑制HIV个体的HIV。参见例如美国专利5,977,067、5,994,299、5,948,884和6,583,265以及PCT公开WO 99/32512、WO 99/67280，这些文献的内容据此被全文纳入本文作为参考。因此，在某些实施方案中，本发明提供了用于在有此需要的个体中治疗或预防HIV感染和HCV感染的方法。
在某些实施方案中，在肝移植后向个体施用本发明的方法或组合物。在美国，丙型肝炎是肝移植的主导原因，进行肝移植的许多个体在移植后仍保持HCV阳性。本发明提供了用本发明的化合物或组合物治疗这些HCV复发的个体的方法。在某些实施方案中，本发明提供了在肝移植之前、肝移植过程中或肝移植之后治疗个体以预防HCV感染复发的方法。
4.2.1本发明的化合物在某些实施方案中，通过向个体施用有效量的本发明化合物，本发明提供了用于在有此需要的个体中治疗或预防丙型肝炎感染的方法。在某些实施方案中，本发明的化合物为能在有此需要的个体中有效地治疗或预防丙型肝炎感染的环孢菌素衍生物。除非另有说明，本文所用的术语“环孢菌素”指本领域技术人员已知的环孢菌素A。参见例如Ruegger等人，1976，Helv.Chim.Acta.591075-92；Borel等人，1977，Immunology 321017-25；这些文献的内容被全部纳入本文作为参考。术语“环孢菌素衍生物”指具有抗丙型肝炎感染活性的任何环孢菌素衍生物，无论衍生物是天然的、合成的还是半合成的。
在具体的实施方案中，环孢菌素衍生物与环孢菌素A在第三个位置，即N-甲基甘氨酸位置处不相同，这是本领域技术人员已知的。在某些实施方案中，环孢菌素衍生物是3-醚环孢菌素。在其它实施方案中，环孢菌素衍生物是3-硫醚环孢菌素。环孢菌素衍生物还可包括本领域技术人员已知的其它环孢菌素修饰。在有益的实施方案中，环孢菌素还包括4-γ-羟基甲基亮氨酸残基。因此，在某些实施方案中，环孢菌素衍生物为3-醚、4-γ-羟基甲基亮氨酸。在其它实施方案中，环孢菌素衍生物为3-硫醚、4-γ-羟基甲基亮氨酸。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防个体丙型肝炎感染的方法，该方法包括向个体施用治疗或预防有效量的通式(I)的环孢菌素衍生物、或其药学上可接受的的盐或溶剂化物 在式(I)中，A、B、X、R1和R2如上面所定义。
在某些实施方案中，A为式(IIa)。在其它实施方案中，A为式(IIb)。在优选实施方案中，A为上式(IIa)的残基。
在优选实施方案中，B为乙基。
优选地，R1为2-氨基乙基、2-氨基丙基、2-单烷基氨基乙基、2-单烷基氨基丙基、2-二烷基氨基乙基、2-二烷基氨基丙基、2-单环烷基氨基乙基、2-单环烷基氨基丙基、2-二环烷基氨基乙基或2-二环烷基氨基丙基，其中烷基为包含一至四个碳原子的直链或支链，环烷基包含三至六个碳原子。
在更优选的实施方案中，R1为包含一至四个碳原子(更优选一个或二个碳原子)的直链或支链烷基，其任选地被一个基团R3取代。
在某些实施方案中，R2为异丁基。在其它实施方案中，R2为2-羟基异丁基。
优选地，X为氧或硫。在某些实施方案中，X为氧。在其它实施方案中，X为硫。
R3优选为羟基或-NR4R5，其中R4和R5可以相同或不同，分别表示氢或包含一至六个碳原子(更优选一至四个碳原子)的直链或支链烷基。在更优选的实施方案中，R3为-NR4R5。
在某些实施方案中，当X为硫时，优选R1选自N，N-二甲基氨基乙基、N，N-二乙氨基乙基、N-甲基-N-叔丁基氨基乙基和N-乙基-N-叔丁基氨基乙基。
在某些实施方案中，X为硫，R2为异丁基，R1选自N，N-二甲基氨基乙基、N，N-二乙氨基乙基、N-甲基-N-叔丁基氨基乙基和N-乙基-N-叔丁基氨基乙基。
在某些实施方案中，X为硫，R2为2-羟基异丁基，R1选自N，N-二甲基氨基乙基、N，N-二乙氨基乙基、N-甲基-N-叔丁基氨基乙基和N-乙基-N-叔丁基氨基乙基。
更优选的式(I)化合物是如下化合物，其中R1为包含二至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被基团R3取代；或包含二至四个碳原子的直链或支链烯基；R3为羟基、-NR4R5或甲氧基。
更优选的式(I)化合物是如下化合物，其中每个R4和R5可以相同或不同，为氢；包含一至四个碳原子的直链或支链烷基，或者R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成包含六个环原子的饱和环；氮原子以外的其它环原子独立地选自碳和氧。
在更优选的实施方案中，R3选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基、-NR4R5和-NR6(CH2)mNR4R5。
优选地，卤素为氟、氯或溴，更优选氟或氯。
其中X为氧、R1为2-甲氧基乙基的式(I)化合物、或其药学上可接受的的盐也是优选的。
其中X为氧或硫、R1为被-NR4R5或甲氧基取代的丙基的式(I)化合物、或其药学上可接受的的盐也是优选的。
在本发明方法所用的这些更优选化合物中，包括下列环孢菌素衍生物及其药学上可接受的的盐3-甲氧基环孢菌素；3-乙氧基环孢菌素；3-丙氧基环孢菌素；
3-异丙氧基环孢菌素；3-(2-氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-N-甲基氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-N-乙氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-二甲基氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-二乙氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-叔丁基-甲基氨基乙氧基)环孢菌素；3-(2-叔丁基-乙氨基乙氧基)环孢菌素；3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]-4-[4′-羟基-MeLeu]-环孢菌素；3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]-环孢菌素；3-[(R)-2-(羟基)乙硫基-Sar]-4-[4′-羟基-MeLeu]-环孢菌素；3-[(R)-2-(羟基)乙硫基-Sar]-环孢菌素；3-[(R)-2-(N，N-二乙氨基)乙硫基-Sar]-4-[4′-羟基-MeLeu]-环孢菌素；3-[(R)-2-(N，N-二乙氨基)乙硫基-Sar]-环孢菌素；3-(仲丁氧基)环孢菌素；3-[2-(1，4-二氢吡啶-1-基)乙氧基)环孢菌素。
可用于本发明方法的特别优选的化合物包括下列化合物化合物 名称A3-甲氧基环孢菌素B3-(2-氨基乙氧基)环孢菌素C3-(2-N，N-二甲基氨基乙氧基)环孢菌素D3-(异丙氧基)环孢菌素E3-(2-乙基丁氧基)环孢菌素F3-(2，2-二甲基丙氧基)环孢菌素G3-(2-羟基乙氧基)环孢菌素H3-(3-羟基丙氧基)环孢菌素I3-[2-(N-甲基氨基)乙氧基]环孢菌素
J3-[2-(N-甲基-N-异丙基氨基)乙氧基]环孢菌素K3-[2-(吡啶-1-基)乙氧基]环孢菌素L3-[2-(N-吗啉)乙氧基)环孢菌素M3-乙氧基环孢菌素N3-(2-甲氧基乙硫基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素O3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素P3-乙硫基环孢菌素Q3-丙烯基硫环孢菌素R3-[(2-甲氧基)乙硫基]环孢菌素S3-(甲硫基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素T3-(甲氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素U3-(丙-2-烯-1-氧)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素V3-(异丙氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素W3-(乙氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素X3-[2-(甲氧基)乙氧基]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素Y3-[3-(甲氧基)丙氧基]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素在下文中使用字母A至Y表示上述化合物。
在具体实施方案中，通过向有此需要的个体施用有效量的选自化合物A至Y的本发明的化合物或其药学上可接受的的盐，本发明提供了用于在个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法。
由于化合物O、或其药学上可接受的盐的高活性水平和毒物学性质，所以它是特别优选的，如下面实施例所述。
在某些实施方案中，通过已知的方法，可将本发明的环孢菌素衍生物转化为与酸的加成盐，在所述衍生物中，R1为被一个或多个R3取代的烷基，其中R3为-NR4R5或-NR6(CH2)mNR4R5，R4、R5和R6如上面所定义。应理解这些盐也在本发明的范围内。在下面的部分中描述了本发明的示例性盐、和它们的制备方法。
在本发明的有用的实施方案中，化合物是纯的形式。纯度可以是本领域技术人员已知的任何纯度，例如绝对纯度、立体化学纯度或同时两者。在某些实施方案中，本发明的化合物为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的纯度。在某些实施方案中，本发明的化合物为至少90％的纯度。在本发明的其它实施方案中，化合物为至少98％的纯度。下面描述了纯化本发明化合物的方法。
4.2.2本发明化合物的制备通过对本领域技术人员显而易见的任何方法，可制备、分离或获得本发明的化合物。在下面的实施方案中详细描述了示例性制备方法。
此外，根据美国专利5,977,067；5,994,299、5,948,884和6,583,265以及PCT公开WO 99/32512、WO 99/67280描述的方法，可制备3-位被硫醚或醚基团取代的环孢菌素。这些参考文献的内容被全文纳入本文作为参考。
通过对本领域技术人员显而易见的用于纯化环孢菌素衍生物的方法，可以在合成后纯化化合物。在某些实施方案中，通过层析法纯化化合物。例如，可以使用高效液相层析法(HPLC)纯化本发明的化合物。HPLC纯化的有用实例如下HPLC柱尺寸为10mm(d)？50mm(1)，含5-祄反相固定相(十八烷基-硅烷或八烷基-硅烷)，用含有0.1％甲酸、50％至90％水、和50％至10％乙腈的流动相平衡HPLC柱。重要的是，将柱加热到至少65℃，或者可以加热最高至85℃。流动相的流速为10至16mL/分钟，将其加热到60℃。在0.1至0.8mL溶剂(优选二甲亚砜)中，将约5至25mg环孢菌素衍生物装载到柱上。保持流动相的流速，在20至60分钟的时间内，以线性梯度将其组成调整到最高至90％或100％乙腈。使用蒸发光散射检测器和/或可见光-紫外线检测器，在205至215nm的波长设置处检测化合物峰。在流动相中收集化合物峰，在真空中除去流动相；将样品仔细地真空干燥，通过NMR、IR和HPLC-MS分析来对化合物进行定性和确定纯度。
4.2.3本发明化合物的药用盐如上所述，本发明的环孢菌素衍生物可以是中性形式、或盐的形式。盐形式可以是本领域技术人员已知的任何盐形式。特别有用的盐形式是与磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、甲磺酸盐或丙酸盐配位的盐形式。
当本发明的化合物，例如所发明的化合物被碱部分取代时，可形成酸加成的盐。可用于制备酸加成盐的酸优选包括以下的酸当与游离碱结合时，该酸能够产生药学上可接受的的盐，即该盐的阴离子在盐的药用剂量下对个体是无毒的。本发明范围内的药学上可接受的盐是源自下列酸的盐无机酸如氢氯酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸和硝酸；和有机酸如乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、戊二酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、扁桃酸、苯二甲酸、月桂酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、树丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、苯甲酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎宁酸、粘酸和类似的酸。
相应的酸加成盐包括氢卤化物，例如氢氯化物和氢溴化物、硫酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊基丙酸盐、乙醇酸盐、戊二酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、山梨酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、苦味酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、苯二甲酸盐、月桂酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸盐)、乙磺酸盐、1，2-乙烷-二磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(苯磺酸盐)、4-氯代苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸盐、葡庚糖酸盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、月桂基硫酸盐、葡糖酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、羟基萘酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎宁酸盐、粘酸盐等。
根据本发明的其它特征，通过应用或修改已知的方法，使游离碱与适当的酸反应，可制备本发明化合物的酸加成盐。例如，可如下制备本发明化合物的酸加成盐将游离碱溶解在含适当酸的水溶液、或水-醇溶液或其它合适的溶剂中，通过蒸发溶剂来分离盐，或者使游离碱和酸在有机溶剂中反应，在这种情况下，直接分离盐，或者可通过浓缩溶液来获得盐。
通过应用或修改已知的方法，可以从盐中再生本发明化合物的酸加成盐，例如所发明的化合物。例如，通过用碱如碳酸氢钠水溶液或氨水溶液处理，可从本发明母体化合物的酸加成盐中再生本发明的母体化合物。
当本发明的化合物，例如所发明的化合物用酸部分取代时，可形成碱加成盐。本发明范围内的药学上可接受的盐，包括例如碱金属盐和碱土金属盐，是源自下列碱的盐氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化锌、氢氧化钡，和有机胺，例如脂肪族有机胺、脂肪环有机胺、或芳族有机胺，例如氨、甲胺、二甲胺、二乙胺、皮考啉、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、N-甲基葡糖胺哌嗪哌嗪、三(羟基甲基)氨基甲烷、N-四甲基氢氧化铵等。
在水溶剂或有机溶剂中，通过使所选择金属的氢化物、氢氧化物、碳酸盐或类似的反应性化合物与本发明化合物的游离酸形式接触，可获得本发明化合物，例如所发明的化合物的金属盐。所用的水溶剂可以是水，或者可以是水与有机溶剂的混合物，有机溶剂优选醇如甲醇或乙醇、酮如丙酮、脂肪族醚如四氢呋喃、或酯如乙酸乙酯。所述反应通常在环境温度下进行，但如果需要，它们可以在加热下进行。
在水溶剂或有机溶剂中，通过使胺与本发明化合物的游离酸形式接触，可获得本发明化合物，例如所发明的化合物的胺盐。合适的水溶剂包括水以及水与醇如甲醇或乙醇、醚如四氢呋喃、腈如乙腈、或酮如丙酮的混合物。氨基酸盐也可以被类似地制备。
通过应用或修改已知的方法，可以从盐中再生本发明化合物，例如所发明的化合物的碱加成盐。例如，通过用酸如氢氯酸处理，可从它们的碱加成盐中再生本发明的母体化合物。
4.2.4药物组合物和给药方法优选使用包含至少一种通式(I)的化合物(如果合适，为盐的形式)的药物组合物来提供本发明方法中所用的环孢菌素衍生物，该化合物是单独使用的，或者与一种或多种相容的且药学上可接受的载体如稀释剂或佐剂组合使用，或者与另一种抗HCV制剂组合使用。在临床实践中，可通过任何常规的途径，特别是口服、肠胃外、直肠或通过吸入(例如以气雾剂的形式)施用本发明的环孢菌素衍生物。优选通过口服施用本发明的环孢菌素衍生物。
可以使用片剂、丸剂、硬明胶胶囊、散剂或颗粒剂作为固体组合物用于口服施用。在这些组合物中，将本发明的活性产物与一种或多种惰性稀释剂或佐剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。
这些组合物可包括稀释剂以外的物质，例如润滑剂如硬脂酸镁、或用于控释的包衣。
可以使用包含惰性稀释剂如水或液体石蜡的药学上可接受的溶液剂、悬浮剂、乳剂、糖浆和酏剂作为液体组合物用于口服。除了稀释剂，这些组合物还可包括其它物质，例如润湿剂、甜味剂或调味剂。
用于肠胃外施用的组合物可以是乳剂或无菌溶液。可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油特别是橄榄油、或可注射的有机酯如油酸乙酯作为溶剂或运载体。这些组合物还可包含佐剂，特别是润湿剂、等张剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。可通过几种方式进行灭菌，例如使用细菌过滤器、通过辐射或通过加热。也可以将它们制成无菌固体组合物的形式，在使用时将固体组合物溶解在无菌水或任何其它可注射的无菌介质中。
用于直肠施用的组合物是栓剂或直肠胶囊，除了活性成分外，其中还包含赋形剂如可可脂、半合成甘油酯或聚乙二醇。
组合物也可以是气雾剂。对于以液体气雾剂形式使用，组合物可以是稳定的无菌溶液剂，或者是在使用时溶于无热原的无菌水、盐水或任何其它药学上可接受的运载体中的固体组合物。对于以干燥气雾剂的形式用于直接吸入的用途，将活性成分细微地分散，与水溶性固体稀释剂或运载体例如右旋糖、甘露醇或乳糖组合。
在优选实施方案中，本发明的组合物是药物组合物或单一单位剂型。本发明的药物组合物和单一单位剂型包括预防或治疗有效量的一种或多种预防性制剂或治疗性制剂(例如本发明的化合物，或其它预防性制剂或治疗性制剂)、和通常的一种或多种药学上可接受的的载体或赋形剂。在具体的实施方案和本文中，术语“药学上可接受的的”指由联邦政府或州政府管理部门批准或列入美国药典或其它公认的药典，可用于动物，更特别地用于人的。术语“载体”指稀释剂、佐剂(例如Freund佐剂(完全的和不完全的))、赋形剂、或用于施用治疗的运载体。这些药学上可接受的的载体可以是无菌液体如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是优选的载体。盐水溶液、右旋糖水溶液和甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于可注射的溶液剂。合适药用载体的例子由E.W.Martin描述于“Remington′sPharmaceutical Sciences”。
典型的药物组合物和剂型包括一种或多种赋形剂。合适的赋形剂对药物领域的技术人员是熟知的，合适赋形剂的非限制性例子包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻谷、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、干燥脱脂奶、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。具体的赋形剂是否适合掺入药物组合物或剂型中，这取决于本领域熟知的各种因素，这些因素包括但不限于将剂型施用于个体的方式和剂型中的具体活性成分。如果需要，组合物或单一单位剂型还可包含少量润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。
不含乳糖的本发明组合物可包括本领域熟知的赋形剂，这些赋形剂列于例如美国药典(USP)SP(XXI)/NF(XVI)中。通常，不含乳糖的组合物包含活性成分、药学相容且药学上可接受的量的粘合剂/填充剂、和润滑剂。不含乳糖的示例性剂型包含活性成分、微晶纤维素、预胶化淀粉、和硬脂酸镁。
本发明还包括含有活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水能促进一些化合物的降解。例如，为了确定特性如贮存期或剂型随时间的稳定性，在药学领域中广泛接受用添加水(例如5％)作为模拟长期贮存的方式。参见例如Jens T.Carstensen，Drug StabilityPrinciples & Practice，2d.Ed.，MarcelDekker，NY，NY，1995，pp.379-80。结果是，水和热会加速一些化合物的分解。因此，水对剂型的效果可能特别重要，因为在剂型的制造、加工、包装、贮存、运输和使用过程中经常会接触水分和/或温度。
用无水或低水分含量的成分和低水分或低湿度条件，可制备本发明的无水药物组合物和剂型。如果在制造、包装、和/或贮存过程中可能会与水分和/或湿度充分接触，则包含乳糖和至少一种包含伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型优选是无水的。
应该制备无水药物组合物并以保持其无水性质的方式来贮存。因此，优选使用已知能防止暴露于水的材料包装无水组合物，以使它们能够被包装在合适的剂型盒中。合适包装的例子包括但不限于密封的封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩、和条状包装。
本发明还包括如下药物组合物和剂型，其中包含能减少活性成分分解速率的一种或多种化合物。在本文中被称为“稳定剂”的这些化合物包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂、或盐缓冲剂。
药物组合物和单一单位剂型可以采用溶液剂、悬浮剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、缓释剂型等的形式。口服剂型可包括标准的载体，例如药用级别的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物和剂型将包含预防或治疗有效量的、优选为纯化形式的预防性制剂或治疗性制剂，以及合适量的载体，从而提供用于正确施用于个体的形式。剂型应适合施用的模式。在优选实施方案中，药物组合物或单一单位剂型是无菌的，并且适合施用于个体的形式，所述个体优选为动物，更优选哺乳动物，最优选人。
将本发明的药物组合物配制成与其预期施用途径是相容的。施用途径的例子包括但不限于肠胃外施用，例如静脉内、皮内、皮下、肌肉内、皮下、口服、口腔、舌下、吸入、鼻腔、透皮、局部、透粘膜、肿瘤内、滑囊内和直肠施用。在具体的实施方案中，根据常规程序将组合物配制成药物组合物，用于静脉内、皮下、肌肉内、口服、鼻腔或局部施用于人类。在一个实施方案中，根据常规程序配制药物组合物，用于皮下施用于人类。典型地，用于静脉内施用的组合物是在无菌等张水性缓冲溶液中的溶液。当必要时，组合物还可包含增溶剂和局麻药如利多卡因，以缓解注射位置的疼痛。
剂型的例子包括但不限于片剂；囊片；胶囊，例如软弹性明胶胶囊；囊片；药片；锭剂；分散剂；栓剂；油膏；糊剂(膏药)；贴剂；粉剂；敷料；乳膏；橡皮膏；溶液剂；贴片；气雾剂(例如鼻腔喷雾或吸入剂)；凝胶；适合口服或鼻腔施用于个体的液体剂型，包括悬浮剂(例如水性或非水性液体悬浮剂、水包油乳剂、或油包水液体乳剂)、溶液剂、和酏剂；适合肠胃外施用于个体的液体剂型；和无菌固体(例如晶体或无定形固体)，其能够被重新配制以提供适合肠胃外施用于个体的液体剂型。
通常本发明剂型的组成、形状、和类型将根据它们的用途而改变。例如，用于初始治疗病毒感染的剂型所含的一种或多种活性成分的量可大于用于维持治疗同一感染的剂型所含的量。类似地，肠胃外剂型所含的一种或多种活性成分的量可小于用于治疗同一疾病或病症的口服剂型所含的量。本发明所采用的具体剂型的这些和其它方式各不相同，这对于本领域技术人员将是显而易见的。参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
通常，本发明组合物的成分或者分别提供，或者将它们混合成单位剂型，例如在说明了活性制剂量的密封容器如安瓿或小袋中的冻干粉或无水浓缩物。当通过输液施用时，可以将组合物分散在含无菌药用级别的水或盐水的输液瓶中。当通过注射施用组合物时，可提供无菌注射用水安瓿或盐水安瓿，从而可以在施用前混合各成分。
本发明的典型剂型包含本发明的化合物、或其药学上可接受的的盐、溶剂化物或水合物，其范围为约0.1mg至约1000mg/天，在早晨作为每日一次单一剂量服用，但优选在全天以分开剂量随食物服用。本发明的具体剂型含有约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、100、200、250、500或1000mg活性环孢菌素。
4.2.4.1口服剂型适合口服施用的本发明药物组合物可作为离散的剂型存在，例如但不限于片剂(例如咀嚼片)、囊片、胶囊、和液体(例如调味糖浆)。这些剂型包含预定量的活性成分，可以通过本领域技术人员熟知的药学方法来制备。通常参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th ed.，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
在优选实施方案中，口服剂型是固体，并在无水条件下用无水成分制备，如上面部分中的详细描述的。但是，本发明的范围不限于无水固体口服剂型。同样，本文还描述了其它形式。
根据常规配药技术，通过将活性成分与至少一种赋形剂掺混，来制备本发明的典型口服剂型。取决于施用所需的制剂形式，赋形剂可采用广泛不同的形式。例如，适用于口服液体剂型或气雾剂剂型的赋形剂包括但不限于水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂和着色剂。适用于固体口服剂型(例如粉剂、片剂、胶囊和囊片)的赋形剂例子包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、和崩解剂。
因为易于施用，片剂和胶囊是最有益的口服剂量单位形式，其中使用固体赋形剂。如果需要，可通过标准水性或非水技术将片剂包衣。可通过任何药学方法制备这些剂型。通常，通过将活性成分与液体载体、细微分散的固体载体、或两者均匀和密切地掺合，来制备药物组合物和剂型，如果必需，然后将产物成型为所需的外观。
例如，可通过压制或模制来制备片剂。可如下制备压制片将自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分任选地与赋形剂混合，在合适的机器中压片。可如下制备模制片在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物制模。
可用于本发明口服剂型的赋形剂的例子包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂、和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包括但不限于玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然和合成胶如阿拉伯胶、藻酸钠、海藻酸、其它藻酸盐、粉状黄芪胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羧丙基甲基纤维素(例如2208号、2906号、2910号)、微晶纤维素、及其混合物。
适用于本文公开的药物组合物和剂型的填充剂的例子包括但不限于滑石、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉状纤维素、右旋糖、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉、及其混合物。本发明药物组合物中的粘合剂或填充剂通常占药物组合物或剂型的约50％至约99％重量。
合适的微晶纤维素形式包括但不限于作为AVICEL PH 101、AVICELPH 103、AVICEL RC 581、AVICEL PH 105(购自FMC Corporation，AmericanViscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA)出售的材料、及其混合物。具体的粘合剂是作为AVICEL RC 581出售的微晶纤维素与羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低水分赋形剂或添加剂包括AVICEL PH 103TM和Starch 1500LM。
在本发明的组合物中，使用崩解剂以使片剂在暴露于水性环境时崩解。包含太多崩解剂的片剂会在贮存时崩解，而包含太少崩解剂的片剂不能以所需速率崩解，或者不能在所需环境下崩解。因此，应该使用足够量的崩解剂来形成本发明的固体口服剂型，该量既不会太多也不会太少以致不利地改变活性成分的释放。所使用的崩解剂量基于剂型的类型而改变，本领域普通技术人员可容易地识别该量。典型的药物组合物包含约0.5％至约15％重量的崩解剂，特别是约1％至约5％重量崩解剂。
可用于本发明药物组合物和剂型的崩解剂包括但不限于琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、波拉克林钾、淀粉羟乙酸钠、马铃薯淀粉或木薯淀粉、预胶化淀粉、其它淀粉、粘土、其它海藻酸、其它纤维素、胶、及其混合物。
可用于本发明药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、及其混合物。其它润滑剂包括例如硅酸盐硅胶(AEROSIL200，由W.R.Grace Co.of Baltimore，MD制造)、合成二氧化硅的凝结气雾剂(由Degussa Co.of Piano，TX出售)、CAB O SIL(由Cabot Co.of Boston，MA出售的热源二氧化硅产品)、及其混合物。如果使用了，润滑剂的通常用量为小于所掺入药物组合物或剂型的约1％重量。
4.2.5延迟释放剂型可通过本领域普通技术人员熟知的控释方式或通过递药装置来施用活性成分如本发明的化合物。例子包括但不限于美国专利3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123和4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566中描述的那些，所述每个专利均被纳入本文作为参考。通过使用不同比例的例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物材料、凝胶、可渗透的膜、渗透体系、多层衣料、微粒、脂质体、微球、或其组合来提供所需的释放特性，这些剂型可用于缓慢释放或控制释放一种或多种活性成分。可方便地选择本领域普通技术人员已知的合适控释剂型，包括本文所述的剂型，以用于本发明的活性成分。因此，本发明包括适合口服施用的单一单位剂型，例如但不限于用于适于控释的片剂、胶囊、软胶囊和囊片。
控释药物产品的普遍目标是与其非控释的对应药所获得的治疗相比，改善药物的治疗。理想地，最佳设计的控释制剂在医学治疗中的用途特征是在最短的时间内，使用最少量的药物来治疗或控制病症。控释剂型的优点包括延长药物的活性、减少给药频率、和增加个体依从性。此外，控释剂型可用于影响作用发生的时间或其它特征，例如药物的血液水平，因此能够影响副作用(例如不利作用)的发生。
大多数控释剂型被设计成最初释放一定量的药物(活性成分)，以迅速产生所需的治疗效果，然后逐渐持续释放其余药物量，以在延长的时间内保持这种水平的治疗或预防效果。为了在体内保持这种稳定的药物水平，药物从剂型中的释放速率必须能够补偿被代谢和排泄出体外的药物量。可通过各种条件，包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物来激发活性成分的控制释放。
4.2.6肠胃外剂型虽然无水的固体口服剂型是优选的，但本发明还提供了肠胃外剂型。肠胃外剂型可通过各种途径施用于个体，这些途径包括但不限于皮下、静脉内(包括大丸推注)、肌肉内和动脉内。因为肠胃外剂型的施用通常绕开了个体对抗污染物的天然屏障，所以它们优选是无菌的，或者在施用于个体前被灭菌。肠胃外剂型的例子包括但不限于可以注射的溶液剂、可以溶于或悬浮于药学上可接受的注射运载体中的干燥产物、可以注射的悬浮剂和乳剂。
可用于提供本发明肠胃外剂型的合适运载体对本领域技术人员是熟知的。例子包括但不限于USP注射用水；水性运载体，例如但不限于氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、和乳酸化的林格氏注射液；与水混溶的运载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性运载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油醇乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯甲酯。
还可以将能增加本文公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物掺入本发明的肠胃外剂型中。
4.2.7透皮、局部和粘膜剂型尽管无水口服固体剂型是优选的，但本发明还提供了透皮、局部和粘膜剂型。本发明的透皮、局部和粘膜剂型包括但不限于眼用溶液、喷雾、气雾剂、乳膏、洗剂、油膏、凝胶、溶液、乳剂、悬浮剂或本领域技术人员已知的其它形式。参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，16th and18th eds，Mack Publishing，Easton PA(1980 & 1990)；和Introduction toPharmaceutical Dosage Forms，第4版，Lea & Febiger，Philadelphia(1985)。可以将适合用于治疗口腔内粘膜组织的剂型配制成嗽口水或口腔凝胶。此外，透皮剂型包括“贮库型”或“基质型”贴片，可将它们应用到皮肤上，佩戴特定一定时间，以允许渗透所需量的活性成分。
可用于提供本发明透皮、局部和粘膜剂型的合适赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它材料对药学领域的技术人员是熟知的，它们取决于给定药物组合物或剂型将要施用的具体组织。因此，典型的赋形剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油、及其混合物，用于形成洗剂、酊剂、乳膏、乳剂、凝胶或油膏，这些赋形剂是无毒和药学上可接受的的。如果需要，也可以将润湿剂或保温剂添加到药物组合物和剂型中。这些额外成分的例子在本领域中是熟知的。参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，16th and 18th eds.，Mack Publishing，Easton PA(1980 & 1990)。
根据待治疗的具体组织，可以在用本发明的活性成分治疗前、治疗过程中、或治疗后使用附加的组分。例如，可以使用促渗剂协助将活性成分递送到组织中。合适的促渗剂包括但不限于丙酮；各种醇如乙醇、油醇、和四氢呋喃；烷基亚砜，例如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮，例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon级别(Povidone、Polyvidone)；尿素；和各种水溶性或水不溶性糖酯，例如Tween 80(聚山梨酯80)和Span 60(硬脂酸山梨坦)。
也可以调整药物组合物或剂型的pH、或要应用药物组合物或剂型的组织的pH，以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可调整溶剂载体的极性、其离子强度或张力，以改善递送。还可以将化合物如硬脂酸脂添加到药物组合物或剂型中，以有益地改变一种或多种活性成分的亲水性或疏水性，从而改善递送。在这点上，硬脂酸脂可作为剂型的脂质运载体、乳化剂或表面活性剂、和作为递送增强剂或促渗剂。可利用活性成分的不同盐、水合物或溶剂化物，进一步调整所得组合物的性质。
4.2.8剂量和单位剂型在人的治疗中，医生将根据预防性或医疗性治疗，并根据待治疗个体的具体年龄、体重、感染阶段和其它因素，确定他认为最适当的剂量。通常，对于成人，剂量为约1至约1000mg/天，或者剂量为约5至约250mg/天、或约10至50mg/天。在某些实施中，剂量为每个成人约5至约400mg/天，更优选25至200mg/天。剂量率为约50至约500mg/天也是优选的。
在其它方面，通过向有此需要的个体施用有效量的丙型肝炎病毒治疗指数高的本发明化合物、或其药学上可接受的的盐，本发明提供了用于治疗个体丙型肝炎病毒感染的方法。可根据本领域技术人员已知的任何方法，例如下面实施例所述的方法，来测量治疗指数。在某些实施方案中，治疗指数是化合物的毒性浓度与有效对抗丙型肝炎病毒的浓度的比值。可通过技术人员已知的任何技术，包括细胞毒性(例如IC50或IC90)和致死剂量(例如LD50或LD90)来测量毒性。类似地，可通过技术人员已知的任何技术，包括有效浓度(例如EC50或EC90)和有效剂量(例如ED50或ED90)来测量有效浓度。优选地，用比值来比较类似的测量值(例如IC50/EC50、IC90/EC90、LD50/ED50或LD90/ED90)。在某些实施方案中，治疗指数能高达2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0或更高。
可以有效预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状的本发明化合物或组合物的量将根据疾病或病症的性质和严重性、以及活性成分的施用途径而变化。频率和剂量还将根据每个个体的特异性因素改变，这取决于所施用的具体治疗(例如治疗性制剂或预防性制剂)、病症、疾病或症状的严重性、施用途径、以及个体的年龄、体重、响应和既往药史。可以用来自体外或动物模型测定体系的剂量-响应曲线推断有效剂量。
组合物的示例剂量包括每千克个体或样品重量的活性化合物的毫克或微克量(例如约10微克/千克至约50毫克/千克、约100微克/千克至约25毫克/千克、或约100微克/千克至约10毫克/千克)。对于本发明的组合物，按活性化合物的重量计，施用于个体的剂量典型地为0.140mg/kg至3mg/kg个体体重。优选地，施用于个体的剂量为0.20mg/kg至2.00mg/kg个体体重、或者0.30mg/kg至1.50mg/kg个体体重。
通常，对于本文所述的病症，本发明组合物的每日推荐剂量范围为约0.1mg至约1000mg/天，作为每日一次单一剂量给药，或作为全天的分剂量给药。在一个实施方案中，以相等的分剂量每日两次施用每日剂量。具体地，每日剂量的范围应为约10mg至约200mg/天，更具体地，为约10mg至约150mg/天，甚至更具体地为约25mg至约100mg/天。在一些情况下，可能需要使用本文公开范围以外的活性成分剂量，这对于本领域普通技术人员将是显而易见的。此外，临床医生或治疗医师将知道如何和何时根据个体的响应中断、调整或终止治疗。
可以对不同的疾病和病症应用不同的治疗有效量，这对本领域普通技术人员将是容易明白的。类似地，上述剂量和给药频率计划也包括足以预防、控制、治疗或改善这些病症，但不足以引起、或足以减少与本发明组合物相关的不利副作用的量。此外，当向个体施用多个剂量的本发明组合物时，并不需要所有的剂量都相同。例如，可以增加施用于个体的剂量以改善组合物的预防或治疗效果，或者可以降低剂量以减少具体个体正在承受的一种或多种副作用。
在具体实施方案中，按活性化合物的重量计，用于预防、治疗、控制、或改善个体的病症、或其一种或多种症状的本发明组合物剂量为0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg或15mg/kg个体体重或更多。在另一个实施方案中，用于预防、治疗、控制、或改善个体的病症、或其一种或多种症状的本发明组合物剂量为0.1mg至200mg、0.1mg至100mg、0.1mg至50mg、0.1mg至25mg、0.1mg至20mg、0.1mg至15mg、0.1mg至10mg、0.1mg至7.5mg、0.1mg至5mg、0.1至2.5mg、0.25mg至20mg、0.25至15mg、0.25至12mg、0.25至10mg、0.25mg至7.5mg、0.25mg至5mg、0.5mg至2.5mg、1mg至20mg、1mg至15mg、1mg至12mg、1mg至10mg、1mg至7.5mg、1mg至5mg、或1mg至2.5mg的单位剂量。
在某些实施方案中，可以用本发明化合物或组合物的一个或多个加载剂量开始治疗或预防，然后使用一个或多个维持剂量。在这些实施方案中，加载剂量可以为例如在一天至五周内约60至约400mg/天，或者约100至约200mg/天。在加载剂量后可以使用一个或多个维持剂量。每个维持剂量可以独立地为约10mg至约200mg/天，更具体地为约25mg至约150mg/天，或者甚至更具体为约25mg至约80mg/天。优选每天施用维持剂量，维持剂量可以作为单个剂量施用，或者作为分剂量施用。
在某些实施方案中，可以施用本发明化合物或组合物的剂量以在个体的血液或血清中获得稳态浓度的活性成分。根据技术人员可利用的技术进行测量，或者基于个体的身体特征如高度、体重和年龄，可确定稳态浓度。在某些实施方案中，施用足够量的本发明化合物或组合物，以在个体的血液或血清中获得约300至约4000ng/mL、约400至约1600ng/mL、或约600至约1200ng/mL的稳态浓度。可以在一至五天内施用加载剂量，以获得约1200至约8000ng/mL、或约2000至约4000ng/mL的稳态血液或血清浓度。可以施用维持剂量，以在个体的血液或血清中获得约300至约4000ng/mL、约400至约1600ng/mL、或约600至约1200ng/mL的稳态浓度。
在某些实施方案中，可以重复施用相同的本发明组合物，可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月施用。在其它实施方案中，可以重复施用相同的预防性制剂或治疗性制剂，可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月、或6个月施用。
在某些方面，本发明以适合施用的形式提供了包含本发明化合物或其药学上可接受的盐的单位剂量。上面详细描述了这些形式。在某些实施方案中，单位剂量包含1至1000mg、5至250mg或10至50mg活性成分。在具体实施方案中，单位剂量包含约1、5、10、25、50、100、125、250、500或1000mg活性成分。可根据本领域技术人员熟知的技术制备这些单位剂量。
4.3试剂盒本发明还提供了治疗或预防HCV感染的方法中使用的试剂盒。试剂盒可包括本发明的药用化合物或组合物和说明书，说明书根据治疗或预防细菌感染的用途为健康护理人员提供信息。可以以印刷的形式或以从中可获得这些说明书的电子媒介如移动盘、CD或DVD的形式、或网址的形式提供说明书。本发明化合物或组合物的单位剂量可包括如下剂量，当施用于个体时，该剂量可以将个体化合物或组合物的治疗或预防有效的血浆水平保持至少1天。在一些实施方案中，包括的本发明化合物或组合物可以作为无菌含水性药物组合物或干燥粉末(例如冻干)组合物。在一个实施方案中，化合物符合式(I)。
在一些实施方案中，提供了合适的包装。用于本文时，“包装”指体系中通常使用的固体基质或材料，它们能够以固定的限度将本发明的化合物或组合物保持为合适施用于个体。这些材料包括玻璃和塑料(例如聚乙烯、聚丙烯、和聚碳酸酯)瓶、小瓶、纸、塑料、和塑料-箔层压的封袋等。如果使用电子束灭菌技术，则包装应该具有足够低的密度，以允许对内容物灭菌。
除了本发明的化合物或组合物外，本发明的试剂盒还可以包括其它化合物或组合物，用于在以上方法中与所述化合物或组合物一起使用。
下列实施例说明本发明所用的代表性环孢菌素衍生物的合成，下列参考实施例说明在其制备过程中中间体的合成。这些实施例并非用于、也不应理解为限制本发明的范围。应清楚地理解，可通过本文具体描述以外的方式实施本发明。根据本文的教导对本发明进行的许多修改和改变是可能的，因此，这些修改和改变也在本发明的范围内。
5.实施例5.1实施例13-甲氧基环孢菌素将3-(巯基苯并噻唑-2-基硫)环孢菌素(0.4g，0.28mmol)和樟脑磺酸(0.7g，3mmol)的干燥四氢呋喃和干燥甲醇溶液在50℃加热2h。将混合物冷却至室温，添加饱和碳酸氢钠、醚和水。分离层，用二乙醚萃取水相。用无水硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤。在硅胶上重复进行层析，用二氯甲烷和乙酸乙酯的混合物洗脱，获得120mg的3-甲氧基环孢菌素(化合物A)。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于5.83ppm(肌氨酸H)、3.49ppm(甲氧基CH3)、83.5ppm(肌氨酸C)和58.7ppm(甲氧基CH3)。
5.2实施例23-(2-氨基乙氧基)环孢菌素向3-(N-Fmoc-2-氨基乙氧基)环孢菌素(0.52g，0.35mmol)的二甲基甲酰胺(16ml)溶液中添加哌啶(4ml)。将混合物在氮气中搅拌1.25小时。用乙酸乙酯(25ml)和水(25ml)稀释所得混合物。用水(20ml)、盐水(2？0ml)洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。通过重复的硅胶层析法纯化所得物质，用甲醇/乙酸乙酯至100％甲醇进行梯度洗脱，获得3-(2-氨基乙氧基)环孢菌素(化合物B)，为白色的胶体(130mg)。该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于5.95ppm(肌氨酸H)。
盐形成将化合物B(130mg)溶于二氯甲烷中，用甲磺酸的溶液(1ml的0.1M二氯甲烷溶液)处理，持续搅拌10分钟。蒸发溶剂，用二乙醚研磨残余物，得到白色固体(120mg)。
53实施例33-(2-二甲基氨基乙氧基)环孢菌素将3-(2-氨基乙氧基)环孢菌素(0.375g，0.3mmol)、富尔马林(0.8mmol)和甲酸(1.33mmol)的1，4-二氧杂环乙烷溶液在80℃加热5小时。将混合物冷却到室温，用饱和碳酸氢钠稀释。用二氯甲烷萃取所得混合物，用无水硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤并蒸发。通过重复的柱层析法纯化残余物，在硅胶上用甲醇/二氯甲烷至100％甲醇进行梯度洗脱，得到3-(2-二甲基氨基乙氧基)环孢菌素(化合物C，230mg)。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于0.01ppm(肌氨酸H)和82.6ppm(肌氨酸C)。
盐形成向化合物C(194mg)的叔丁基甲醚和甲醇溶液中添加氢氯酸溶液(2ml2.0M醚溶液)。将所得混合物搅拌1小时，然后蒸发溶剂。用醚研磨残余物，以得到浅黄色固体(154mg)。
5.4实施例43-甲氧基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素3-甲氧基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素向1，4-二乙酰基-3-甲氧基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(275mg)的甲醇(15mL)溶液中添加25％重量的甲醇钠甲醇溶液(0.12mL)，在氮气中，将所得混合物在室温下搅拌24小时。减压除去甲醇，用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，用饱和氯化铵(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。在除去溶剂后，使用制备性液相层析法纯化残余物，以获得33mg标题化合物(化合物T)。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于(ppm)5.80(单峰，肌氨酸H)，四个NH双峰信号处于7.14、7.39、7.69、和7.96。LCMS(ESI)C63H113N11O14的计算值1247，测得值1248.5(M+H)+。
5.5实施例5-133-醚环孢菌素对于每种产物，通过实施与具体实施例或参考实施例所述的类似方法，也可制备的下列具有上式(I)化合物，其中A为上式(IIa)的残基，B为乙基，X为氧，R2为异丁基
5.6实施例143-(2-甲氧基乙硫基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素在烧瓶中，在氮气下浓缩液体氨(30mL)。添加酰胺钠(1.0g)，然后添加4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(1.22g，1.0mmol)的叔丁基甲醚(20mL)溶液。将混合物在-35℃搅拌90分钟。添加2-甲氧基乙基二硫化物(5.9g)，在-35℃继续再搅拌2小时。添加固体氯化铵(1.5g)，将混合物在-33℃搅拌10分钟。在恢复至室温后，用叔丁基甲醚稀释混合物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。在除去溶剂后，使用硅胶柱层析法纯化残余物，首先用乙酸乙酯/庚烷、然后用甲醇/乙酸乙酯洗脱，获得500mg 3-(2-甲氧基乙硫基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素(化合物N)。该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于(ppm)5.97(单峰，肌氨酸H)，四个NH双峰信号处于7.14、7.47、7.62、和7.92。LCMS(ES)C65H117N11O14S计算值1307，测得值1308.6(M+H)+。
5.7实施例15-193-硫醚环孢菌素对于每种产物，通过实施与具体实施例或参考实施例所述类似的方法，也可制备下列具有上式(I)的化合物，其中A为上式(IIa)的残基，B为乙基，X为硫
5.8参考实施例13-(巯基苯并噻唑-2-基硫)环孢菌素在惰性气氛中，在-70℃，向二异丙基酰胺锂(LDA)(10.0mmol)的干燥四氢呋喃溶液中滴加环孢菌素A(1.2g，1.0mmol)的干燥四氢呋喃溶液，在-70℃持续搅拌1小时，然后一次性添加固体二苯并噻唑二硫化物(5g，15mmol)。将所得悬浮液恢复至室温，搅拌18小时。将混合物过滤，将滤液用水处理并蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯，用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。通过硅胶层析法纯化所得的棕色胶(3.3g)，用乙酸乙酯/异己烷洗脱，以获得3-(巯基苯并噻唑-2-基硫)环孢菌素，为米色固体(0.33g)。该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于6.98ppm(肌氨酸H)。
5.9参考实施例23-(N-Fmoc-2-氨基乙氧基)-环孢菌素向3-(巯基苯并噻唑-2-基硫)环孢菌素(0.7g，0.5mmol)的干燥四氢呋喃溶液中添加樟脑磺酸(0.175g，0.75mmol)和(2-羟基-乙基)-樟脑酸9H-芴-9-基甲酯(1.7g，6mmol)，将所得溶液在50℃加热4.5小时。将反应混合物冷却到室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释。用饱和硫酸钠(20ml)、盐水(20ml)洗涤溶液，用无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。通过柱层析法纯化残余物，在硅胶上用乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，获得3-(N-Fmoc-2-氨基乙氧基)环孢菌素，为胶(0.52g)。该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于5.9ppm(肌氨酸H)。
5.10参考实施例3(2-羟基-乙基)-樟脑酸9H-芴-9-基甲酯在6℃，向乙醇胺(0.49g，8mmol)、四氢呋喃、水和碳酸氢钠(1.5g，18mmol)的搅拌混合物中一次性添加9-芴基甲基氯甲酸酯(2.27g，8.8mmol)的四氢呋喃溶液，继续搅拌1小时，使混合物恢复到室温。用水稀释混合物，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤并蒸发成粗产物。将粗产物从二氯甲烷中重结晶，得到(2-羟基-乙基)-樟脑酸9H-芴-9-基甲酯，为白色固体(1.2g)。
5.11参考实施例41，4-二乙酰基-3-甲氧基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素向1，3，4-三乙酰基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(295mg)的甲醇(5mL)溶液中添加樟脑磺酸(55mg)；在氮气中，将所得混合物在50℃搅拌5小时。减压除去甲醇，用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，用饱和碳酸氢钠(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。除去溶剂后，获得275mg标题化合物，不经纯化将其用于下一步骤。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于(ppm)1.92(单峰，OAc)、2.00(单峰，OAc)、5.71ppm(单峰，肌氨酸H)，四个NH双峰信号处于7.33、7.43、8.03和8.51。LCMS(ESI)C63H113N11O14计算值1331，测得值1332.6(M+H)+。
5.12参考实施例51，3，4-三乙酰基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素向1，4-二乙酰基-3-苯硫基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(389mg)的冰乙酸(8mL)溶液中添加乙酸汞(389mg)，在氮气中，将所得混合物在50℃搅拌3小时。减压除去乙酸，用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，用饱和碳酸氢钠(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。在除去溶剂后，用硅胶柱层析法纯化残余物，首先用乙酸乙酯/庚烷(30∶70)、然后用甲醇/乙酸乙酯(0.2/100)洗脱，获得280mg标题化合物。
5.13参考实施例61，4-二乙酰基-3-苯硫基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素向3-苯硫基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(550mg)的干燥二氯甲烷(10mL)溶液中按顺序添加4-二甲基氨基吡啶(310mg)、三乙胺(0.35mL)和乙酸酐(0.16mL)，在氮气中，将所得混合物在室温下搅拌60小时。用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(50mL)、1.0N HCl(50mL)、饱和碳酸氢钠(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。在除去溶剂并真空干燥后，获得389mg标题化合物。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于(ppm)2.00(3H，单峰，OAc)、2.04(3H，单峰，OAc)、6.11(1H，单峰，肌氨酸H)、7.20-7.37(6H，多重峰，NH和苯基)，三个NH双峰信号为7.44、8.03、和8.52。
5.14参考实施例73-苯硫基-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素在烧瓶中，在氮气下浓缩液氨(30mL)。添加酰胺钠(1.0g)，然后添加4-(γ-羟基甲基亮氨酸)-环孢菌素(1.22g，1.0mmol)的叔丁基甲醚(15mL)溶液。将混合物在-35℃搅拌90分钟。然后，添加二苯基二硫化物(4.4g，20mmol)的叔丁基甲醚(15mL)溶液，在-35℃再继续搅拌2小时。添加固体氯化铵(1.5g)，将混合物在-33℃搅拌10分钟。在恢复至室温后，用叔丁基甲醚(50mL)稀释混合物，用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。在除去溶剂后，使用硅胶柱层析法纯化残余物，首先用乙酸乙酯/庚烷(30∶70)、然后用甲醇/乙酸乙酯(0.2∶100)洗脱，获得550mg标题化合物。
该化合物在氘氯仿中的NMR信号处于(ppm)6.21(1H，单峰，肌氨酸H)、7.33(5H，双重峰，Ph)，四个NH双峰信号为7.14、7.39、7.65和7.96。
5.15实施例20[(R)-2(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]3[4′-羟基-MeLeu]4环孢菌素(化合物O)的盐该实施例显示本发明的药学上可接受的盐，其对于用于本发明的方法具有有益的溶解度。
将[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]3[4′-羟基-MeLeu]4环孢菌素A(1.0g)溶于10mL乙醚中。添加相应的酸(1.0当量)，在25℃搅拌2小时。过滤收集沉淀物，用冷醚洗涤，真空干燥并分析。在乙酸盐和丙酸盐的实施例中，向醚溶液中添加10mL庚烷，以促进沉淀。使用比浊滴定确定每种盐在生物学缓冲液，即Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶解度(Schote等人，2002.JPharm Sciences 91(3)856)。该pH为7.2的缓冲液具有生理学浓度的钙、镁、钠、钾、磷酸根和氯。环孢菌素在PBS中的溶解度为0.015至0.020mM，而所述盐在0.45至0.65mM的范围内是可溶的。制备了化合物O的下列盐
5.16实施例21HCV活性该实施例显示本发明的化合物可有效地对抗HCV感染。此外，该实施例显示与环孢菌素A相比，本发明的化合物具有有益的功效、或细胞毒性、或两者。
使用由Kriger等人，2001，Journal of Virology，754614-4624，Pietschmann等人，2002，Journal of Virology 764008-4021所述方法的改良方法，并使用美国专利6,630,343中所述的HCV RNA结构，测试本发明化合物(作为实施例1至21所述制备的盐)对抗HCV的活性。这些参考文献的内容被全文纳入本文作为参考。
在人肝细胞癌细胞系ET(lub ubi neo/ET)中分析化合物，ET是含有稳定荧光素酶(LUC)报道基因的HCV RNA复制子。HCV RNA复制子ET包含HCV的5′末端(具有HCV内部核糖体进入位点(IRES)和HCV核心蛋白中最开始的几种氨基酸)，它促使产生萤火虫荧光素酶(LUC)、泛素蛋白(ubiquitin)和新霉素磷酸转移酶(NeoR)融合蛋白。泛素蛋白裂解释放LUC和NeoR蛋白。EMCV IRES元件控制着HCV结构蛋白NS3-NS5的翻译。NS3蛋白裂解HCV多蛋白，释放出HCV复制所需的NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B成熟蛋白。复制子的3′末端为HCV的真实3′NTR。LUC报道基因的活性与HCV复制水平直接成比例，阳性对照抗病毒化合物使用LUC终点产生可再生的抗病毒响应。
分别以五个半对数浓度将化合物溶于DMSO中，各个半对数浓度范围为0.02至2.0礛、0.03至3礛、2.0至20礛、或1至100礛。将来汇合的ET细胞系培养物取出，放入96孔板中，来分析细胞数量(细胞毒性)或抗病毒活性，第二天向适宜的孔中添加该化合物。在72小时后处理细胞，此时细胞仍然是未汇合的。抗病毒活性表达为EC50和EC90，它们分别是将病毒复制减少50％和90％的化合物有效浓度。化合物的EC50和EC90值获自HCVRNA水平，该水平确定为源自HCV RNA复制子的LUC活性。将细胞毒性表达为IC50和IC90，它们分别是抑制50％和90％细胞存活的化合物浓度。使用比色法计算化合物的IC50和IC90值，作为细胞数量和细胞毒性的指征。LUC报道基因的活性与人细胞系中HCV RNA的水平直接成比例。在平行实验中，使用干扰素-α-2b作为阳性对照，验证了HCV复制子测定。还通过对比的方式测试了环孢菌素。与环孢菌素相比，本发明化合物能更大程度地有效抑制人肝细胞中的HCV复制。此外，当考虑到细胞毒性水平时，与环孢菌素相比，本发明化合物具有更宽的安全限(例如，细胞毒性IC50与抗病毒EC50相比)。
结果如下所示(除非另有说明，所有值均以nM表示)，“N/D”指该数据未测定。
5.17实施例22亲环蛋白(cyclophilin)结合和HCV活性该实施例提供了其它方法来评价本发明化合物用于在有此需要的个体中治疗或预防HCV感染的效力。
已经证实，通过环孢菌素与亲环蛋白B(CyPB)的结合，某些环孢霉能有效地治疗或预防HCV感染。参见Watashi等人，2005，Molecular Cell19111-122；Nakagawa等人，2005Gastroenterology 129(3)1031-41；这些文献的内容被全文纳入本文作为参考。虽然不受任何具体操作理论的限制，但认为亲环蛋白B对HCV基因组的有效复制很关键。在标准测定中，能够抑制亲环蛋白B的环孢菌素A和环孢菌素衍生物可显著减少HCV的复制。
因此，通过评价本发明化合物与亲环蛋白，例如亲环蛋白B的结合或调节，显示它们能有效地用于治疗或预防HCV感染。根据标准技术，例如Watashi等人，2005中所述的方法，Nakagawa等人，2005中所述的方法、或Billich等人，J.Virol.692451-2461中所述的方法，测量本发明化合物对亲环蛋白的调节，这些文献的内容被全文纳入本文作用参考。
5.18实施例23HIV活性使用HIV株HIV-1IIIIB感染人T-类淋巴母细胞系CEM-SS，测试本发明化合物对抗人免疫缺陷病毒-1(HIV)的抗逆转录病毒活性(Weislow等人，1989，J. Natl.Cancer Inst.81577-586)。在该MST细胞保护测定中，每个实验包括细胞对照孔(只有细胞)、病毒对照孔(细胞加病毒)、药物毒性孔(只有细胞加药物)、药物比色对照孔(只有药物)以及实验孔(药物加细胞加病毒)。首先将化合物溶于DMSO中，使用六个半对数稀释物测定，从20礛或2礛的高浓度开始。向每个孔中添加50礚体积的HIV-1RF，确定病毒的数量能在感染后6天杀灭约90％细胞。在测试终止时，用可溶的基于四氮唑的染料MTS(CellTiter 96Reagent，Promega)将测定碟染色，以确定细胞存活，对化合物的毒性进行定量。具有代谢活性的细胞的线粒体酶代谢MTS，以获得可溶的甲臜产物，从而提供对细胞存活和化合物细胞毒性的定量分析。在平行实验中，使用叠氮胸苷(3′-叠氮-3′-脱氧胸苷或AZT)作为阳性对照，验证该测定。测定包括确定化合物的EC50(抑制50％病毒复制的浓度)、IC50(导致抑制50％细胞生长的浓度)和选择性指数(IC50/EC50)。
所选择化合物的结果如下(除非另有说明，所有值均以nM表示)。
5.19实施例24口服剂型可以将本发明的一种或多种化合物配制成胶囊。这种胶囊可含有10至200mg所述化合物和一种或多种赋形剂，该赋形剂选自微晶纤维素、预胶化淀粉、乳糖、淀粉羟乙酸钠、交联聚维酮、聚维酮、羟丙基纤维素、硬脂酸镁和二氧化硅。可以用一种或多种标准包封成分如明胶或增塑剂包裹所得组合物。
可以将一种或多种本发明化合物配制成糖浆或酏剂中的盐。一种或多种化合物的总浓度可为5至50mg/mL。糖浆或酏剂还可包含聚乙二醇、丙二醇、聚乙二醇的混合物、PEG400、氧化乙烯和氧化丙烯的嵌段共聚物(例如泊洛沙姆407)、聚山梨酯20、乙醇、糖、柠檬酸和/或调味剂。
本说明书中引用的所有出版物和专利申请均纳入本文作为参考，如同特别和单独地说明每一个出版物或专利申请被纳入本文以供参考一样。尽管已经根据各种优选实施方案描述了本发明，但本领域技术人员将理解，在不背离本发明精神的条件下，可以进行各种修改、替代、省略和改变。因此，本发明的范围仅由下列权利要求书、包括其等同物的范围来限定。
权利要求
1.用于在有此需要的个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的具有通式(I)的环孢菌素衍生物或其药学上可接受的盐或溶剂化物 其中A是具有式(IIa)或(IIb)的残基 B为乙基、1-羟基乙基、异丙基或正丙基；R1为包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R3取代；包含二至六个碳原子的直链或支链烯基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含二至六个碳原子的直链或支链炔基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含一至六个碳原子的直链或支链烷氧基羰基；R2为异丁基或2-羟基异丁基；X为-S(O)n-或氧；R3选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基、-NR4R5和-NR6(CH2)mNR4R5；每个R4和R5可以相同或不同，独立地为氢；包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R7取代；包括二至四个碳原子的直链或支链烯基或炔基；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被包含一至六个碳原子的直链或支链烷基取代；任选地被一至五个相同或不同的基团取代的苯基，所述基团选自卤素、烷氧基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基；饱和或不饱和杂环，其包含五个或六个环原子和选自氮、硫和氧的一至三个相同或不同的杂原子；或者R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成包含四至六个环原子的饱和或不饱和杂环，该环可以任选地包含另一个选自氮、氧和硫的杂原子，并且该环可以任选地被一至四个相同或不同的基团取代，所述基团选自烷基、苯基和苄基；R6为氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；R7选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基和-NR8R9；R8和R9可以相同或不同，分别表示氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；n为0、1或2；m为2至4的整数。
2.如权利要求1所述的方法，其中A为具有式(IIa)的残基，B为乙基。
3.如权利要求1所述的方法，其中R1为2-氨基乙基、2-氨基丙基、2-单烷基氨基乙基、2-单烷基氨基丙基、2-二烷基氨基乙基、2-二烷基氨基丙基、2-单环烷基氨基乙基、2-单环烷基氨基丙基、2-二环烷基氨基乙基或2-二烷基氨基丙基，其中烷基为包含一至四个碳原子的直链或支链，环烷基包含三至六个碳原子。
4.如权利要求1所述的方法，其中X为氧或硫。
5.如权利要求1所述的方法，其中X为氧。
6.如权利要求1所述的方法，其中X为硫。
7.如权利要求1所述的方法，其中X为硫，且R1选自二甲基氨基乙基、二乙氨基乙基、甲基-叔丁基氨基乙基和乙基-叔丁基氨基乙基。
8.如权利要求1所述的方法，其中具有式(I)的环孢菌素衍生物为下述化合物或其药学上可接受的盐3-甲氧基环孢菌素；3-(2-氨基乙氧基)环孢菌素；3(2-N，N-二甲基氨基乙氧基)环孢菌素；3-(异丙氧基)环孢菌素；3-(2-乙基丁氧基)环孢菌素；3-(2，2-二甲基丙氧基)环孢菌素；3-(2-羟基乙氧基)环孢菌素；3-(3-羟基丙氧基)环孢菌素；3-[2-(N-甲基氨基)乙氧基]环孢菌素；3-[2-(N-甲基-N-异丙基氨基)乙氧基]环孢菌素；3-[2-(哌啶-1-基)乙氧基]环孢菌素；3-[2-(N-吗啉)乙氧基)环孢菌素；3-乙氧基环孢菌素；3-(2-甲氧基乙基硫基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙基硫基-Sar]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-乙硫基环孢菌素；3-丙烯基硫代环孢菌素；3-[(2-甲氧基)乙基硫基]环孢菌素；3-(甲基硫基)4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-(甲氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-(丙-2-烯-1-氧)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-(异丙氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-(乙氧基)-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-[2-(甲氧基)乙氧基]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素；3-[3-(甲氧基)丙氧基]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素。
9.如权利要求1所述的方法，其中环孢菌素衍生物是口服施用的。
10.如权利要求1所述的方法，其中所施用的环孢菌素衍生物量为约1至约1000mg/天。
11.如权利要求10所述的方法，其中所施用的环孢菌素衍生物量为约25至200mg/天。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述个体为干扰素难治的。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述个体同时感染有HIV。
14.具有通式(I)的环孢菌素衍生物、或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗丙型肝炎病毒感染的药物中的用途，其中A、B、R1、R2和X如权利要求1至6中任一项所定义
15.用于在个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括施用治疗有效量的3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素、或其药学上可接受的的盐。
16.3-[(R)-2-(N，N-二甲基氨基)乙硫基-Sar]-4-(γ-羟基甲基亮氨酸)环孢菌素、或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗丙型肝炎病毒感染的药物中的应用。
17.用于在个体中治疗或预防丙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括施用治疗有效量的通式(I)的环孢菌素衍生物、或其药学上可接受的的盐或溶剂化物 其中A是具有式(IIa)或(IIb)的残基 B为乙基、1-羟基乙基、异丙基或正丙基；R1为包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R3取代；包含二至六个碳原子的直链或支链烯基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含二至六个碳原子的直链或支链炔基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含一至六个碳原子的直链或支链烷氧基羰基；R2为异丁基或2-羟基异丁基；X为氧；R3选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基、-NR4R5和-NR6(CH2)mNR4R5；每个R4和R5可以相同或不同，独立地为氢；包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R7取代；包括二至四个碳原子的直链或支链烯基或炔基；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被包含一至六个碳原子的直链或支链烷基取代；任选地被一至五个相同或不同的基团取代的苯基，所述基团选自卤素、烷氧基、烷氧基羰基、氨基、N-烷基氨基和二烷基氨基；饱和或不饱和杂环，其包含五个或六个环原子和选自氮、硫和氧的一至三个相同或不同的杂原子；或者R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成包含四至六个环原子的饱和或不饱和杂环，该环可以任选地包含另一个选自氮、氧和硫的杂原子，且该环可以任选地被一至四个相同或不同的基团取代，所述基团选自烷基、苯基和苄基；R6为氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；R7选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基和-NR8R9；每个R8和R9可以相同或不同，独立地为氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；n为0、1或2；m为2至4的整数。
18.具有通式(I)的环孢菌素衍生物的药学上可接受的盐 其中A是具有式(IIa)或(IIb)的残基 B为乙基、1-羟基乙基、异丙基或正丙基；R1为包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R3取代；包含二至六个碳原子的直链或支链烯基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含二至六个碳原子的直链或支链炔基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被选自卤素、羟基、氨基、单烷基氨基和二烷基氨基的一个或多个相同或不同的基团取代；包含一至六个碳原子的直链或支链烷氧基羰基；R2为异丁基或2-羟基异丁基；X为氧；R3选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基、-NR4R5和-NR6(CH2)mNR4R5；R4和R5可以相同或不同，分别表示氢；包含一至六个碳原子的直链或支链烷基，其任选地被一个或多个相同或不同的基团R7取代；包括二至四个碳原子的直链或支链烯基或炔基；包含三至六个碳原子的环烷基，其任选地被包含一至六个碳原子的直链或支链烷基取代；任选地被一至五个相同或不同的基团取代的苯基，所述基团选自卤素、烷氧基、烷氧基羰基、氨基、N-烷基氨基和二烷基氨基；饱和或不饱和杂环，其包含五个或六个环原子和选自氮、硫和氧的一至三个相同或不同的杂原子；或者R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成包含四至六个环原子的饱和或不饱和杂环，该环可以任选地包含另一个选自氮、氧和硫的杂原子，且该环可以任选地被一至四个相同或不同的基团取代，所述基团选自烷基、苯基和苄基；R6为氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；R7选自卤素、羟基、羧基、烷氧基羰基和-NR8R9；每个R8和R9可以相同或不同，独立地为氢或包含一至六个碳原子的直链或支链烷基；n为0、1或2；和m为2至4的整数。
19.如权利要求18所述的药学上可接受的盐，其中所述盐为磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、氯化物、甲磺酸盐或丙酸盐。
20.权利要求18的盐的水合物。
全文摘要
本发明涉及用于治疗丙型肝炎病毒的具有通式(I)的环孢菌素衍生物，其中A、B、R
文档编号C07K7/64GK101068829SQ200580041203
公开日2007年11月7日 申请日期2005年9月30日 优先权日2004年10月1日
发明者汉斯·吉奥格·弗莱里, 大卫·兰威克·霍克 申请人:西尼克斯公司