专利名称：一种树脂和凝胶多极串联高效集成分离纯化苹果多酚新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种苹果多酚分离纯化新工艺，尤其是涉及将树脂和凝胶多极串联集成纯化苹果多酚工艺。
背景技术：
现代医学试验证明，苹果多酚作为一类具有生物活性的天然化合物，具有强抗氧化性、抗龋齿、抗癌细胞增生、预防心血管、哮喘、糖尿病等慢性疾病，调节脂类代谢、改善肺功能、抑菌、抑病毒消除口臭，防脱发、生发、美容等生理功能，性质稳定，性能优于茶多酚，可广泛应用于食品、药品、化妆品等工业中，是一种优良的功能性基材，对人们在强身健体、防病治病、延年益寿等方面具有巨大的潜在价值。
据资料报道，当前全球的多酚需求约在每年4万吨，而生产能力不足1万吨，市场远未饱和，据专家预计，需求量还会以每年40％的速度增长。因此，苹果多酚产品具有广阔的市场前景。
国内外对苹果多酚的研究，无论是提取、分离纯化还是功效研究都刚刚起步，大多尚处实验室阶段。目前，纯化苹果多酚多采用溶剂萃取、复盐沉淀、树脂吸附等方法，得到的苹果多酚制品，纯度低，品种少，多为初级产品，难以满足国内外市场要求。如中国专利00120528.5使用硫酸锌和氯化钙复盐沉淀多酚再用有机溶剂萃取，方法简便但有机溶剂或金属离子残留较多，多酚制品纯度不高。孙建霞用大孔吸附脂AB-8纯化苹果粗提液，得到纯度48.67％的苹果多酚；任静用聚酰胺层析法纯化苹果渣提取液，得到纯度43.95％的苹果原花青素；虽然都得到了苹果多酚制品，但纯度过低不能直接应用，还需进一步精制。因此，开展高纯苹果多酚的生产工艺研究，生产出符合要求的产品迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是提供一种连续、高效生产出高纯苹果多酚制品的新工艺。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种树脂和凝胶多极串联集成连续分离纯化苹果多酚的新工艺，包括将苹果多酚粗液用树脂吸附洗脱，再用凝胶吸附洗脱，真空浓缩，得到苹果多酚的浓缩液制品。
用未成熟和成熟苹果全果、苹果果肉、苹果皮籽、苹果加工废料-苹果渣中提取的苹果多酚粗液及苹果汁生产中脱除的苹果多酚粗液作为原料生产高纯苹果多酚制品。
调节苹果多酚粗液的浓度、pH值和上柱流速条件，使大孔吸附树脂柱体吸附至饱和，用水洗去可溶性糖等杂质，再调节洗脱剂浓度、洗脱流速和洗脱剂体积条件，洗脱大孔吸附树脂柱体吸附的苹果多酚，洗脱的苹果多酚经真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚。
上柱苹果多酚粗液的浓度0.5～3.0mg/ml，pH值范围2.0～6.0，上柱流速0.5～2.5ml/min；洗脱剂使用甲醇或乙醇或丙酮，洗脱剂浓度10～100％，洗脱剂用量5～15BV(BV，柱床体积)，洗脱速度0.5～2.5ml/min。
调节初步纯化苹果多酚的浓度、pH值和上样体积条件，上凝胶柱，先用水洗去可溶性糖等杂质，后调节洗脱剂浓度、洗脱流速和洗脱剂体积条件，洗脱凝胶柱吸附的苹果多酚，洗脱的苹果多酚经真空浓缩，得到精制的苹果多酚制品。
过凝胶柱的苹果多酚浓度0.5～3.0mg/ml，pH值2.0～6.0，上样体积0.5～10％BV；洗脱剂使用甲醇或乙醇或丙酮均可，洗脱剂浓度10～100％，洗脱剂用量2～5BV，洗脱流速0.5～2.5ml/min。
所用树脂为聚苯乙烯系或聚酰胺系极性或非极性大孔吸附树脂，凝胶为葡聚糖系凝胶；采用固定床式吸附；纯化工艺采用树脂柱床和凝胶柱床串联，树脂柱床可采用单组或多组集成。
经过树脂和凝胶串联纯化的苹果多酚浓缩液再经喷雾干燥或冷冻干燥得到苹果多酚含量≥80％的粉状制品。
本发明的优点在于将分离纯化天然产物所单独使用的树脂和凝胶技术串联集成使用，结合两者优点，达到连续生产高纯苹果多酚的目的，工艺简单，操作简便，有利于苹果多酚的工业化连续生产，有利于苹果多酚活性的保持；另外，分离纯化在常温常压下进行，可以节省能源；洗脱剂可以回收使用，没有污染，属环境友好型技术。本发明研究成功，不仅可以提升我国果蔬加工行业整体水平，增强企业创新能力和市场竞争力，快速延长苹果产业链条，生产出高附加值苹果多酚产品，还可优化食品工业结构，带动农业增产、农民增收、农村持续快速发展，具有极为重要的经济及社会意义。
具体实施例方式
实施例1粉碎过100目筛的苹果渣用60％乙醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节苹果多酚粗液浓度1.5mg/ml，pH值4.5，流速1.0ml/min，上NKA-9树脂柱，定时测定粗提液苹果多酚浓度，至0.15～0.2mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖测出，换用60％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量10BV，洗脱速度1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.5mg/ml pH值4.5的经初步纯化的苹果多酚溶液5ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用80％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品，纯度达到84.12％。
实施例2粉碎过100目筛的苹果渣用60％乙醇提取得粗提液，将处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.0mg/ml，pH值5.5，流速1.5ml/min上NKA-9树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.2～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用60％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量10BV，洗脱速度1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.5mg/ml pH值4.5的经初步纯化的苹果多酚溶液5ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无糖检出，换用80％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品，纯度达到84.12％。
实施例3粉碎过100目筛的苹果渣用70％乙醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.5mg/ml，pH值4.5，流速0.5ml/min上NKA-9树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用60％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量10BV，洗脱速度1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.0mg/ml pH值3.5的初步纯化后苹果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用80％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品，纯度达到82.65％。
实施例4将未成熟和成熟苹果全果用60％乙醇萃取得粗提液，将处理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上XAD-5树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.0mg/ml pH值3.0的初步纯化后苹果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱流速2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例5将苹果果肉和苹果皮籽用80％乙醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度0.5mg/ml，pH值6.0，流速0.5ml/min上XAD-5树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量15BV，洗脱速度2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将0.5mg/ml pH值2.0的初步纯化后苹果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量2BV，洗脱流速1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例6将苹果皮籽用60％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度0.5mg/ml，pH值2.0，流速0.5ml/min上XAD-5树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将0.5mg/ml pH值2.0的初步纯化后苹果多酚溶液3ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量2BV，洗脱流速0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例7将成熟苹果全果用60％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度0.5mg/ml，pH值2.0，流速0.5ml/min上聚酰胺树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将0.5mg/mlpH值2.0的初步纯化后苹果多酚溶液3ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用10％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量2BV，洗脱流速1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例8将苹果果肉用60％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.0mg/ml，pH值2.0，流速2.0ml/min上聚酰胺树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量15BV，洗脱速度2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.0mg/ml pH值3.0的初步纯化后苹果多酚溶液8ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱流速2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例9将未成熟苹果全果用60％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度3.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上聚酰胺树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量15BV，洗脱速度2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.0mg/mlpH值6.0的初步纯化后苹果多酚溶液8ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱流速2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例10将未成熟和成熟苹果全果、苹果果肉、苹果皮籽、苹果加工废料-苹果渣用60％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上S-8树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用30％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量10BV，洗脱速度1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.0mg/ml pH值3.5的初步纯化后苹果多酚溶液4ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用30％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱流速1ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例11将苹果果肉用60％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.0mg/ml，pH值3.5，流速2.0ml/min上S-8树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量8BV，洗脱速度2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.5mg/ml pH值3.5的初步纯化后苹果多酚溶液4ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量4BV，洗脱流速2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例12将苹果全果用80％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.0mg/ml，pH值3.5，流速2.5ml/min上S-8树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量10BV，洗脱速度2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.5mg/ml pH值2.5的初步纯化后苹果多酚溶液6ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱流速2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例13粉碎过100目筛的苹果渣用80％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.0mg/ml，pH值3.5，流速1.5ml/min上AB-8树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量9BV，洗脱速度2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.5mg/ml pH值2.5的初步纯化后苹果多酚溶液6ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱流速2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例14将苹果全果用80％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.0mg/ml，pH值5.5，流速1.5ml/min上聚酰胺树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用80％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量9BV，洗脱速度1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.0mg/ml pH值2.5的初步纯化后苹果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用50％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量3BV，洗脱流速1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例15将苹果全果用80％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.0mg/ml，pH值5.5，流速2.5ml/min上AB-8树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用80％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量9BV，洗脱速度1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.0mg/ml pH值5.0的初步纯化后苹果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用100％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量4BV，洗脱流速1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例16粉碎过100目筛的苹果渣用50％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.5mg/ml，pH值6.0，流速1.0ml/min上NKA树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用40％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量6BV，洗脱速度1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将2.0mg/ml pH值5.0的初步纯化后苹果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用40％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量4BV，洗脱流速1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例17将苹果皮渣用50％甲醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.5mg/ml，pH值6.0，流速1.0ml/min上NKA树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用40％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量6BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将3.0mg/ml pH值5.0的初步纯化后苹果多酚溶液2.0ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用40％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量4BV，洗脱流速2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例18将苹果果肉用50％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度2.5mg/ml，pH值5.0，流速2.5ml/min上NKA树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用70％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量6BV，洗脱速度0.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将3.0mg/ml pH值5.5的初步纯化后苹果多酚溶液2.0ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用40％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量2BV，洗脱流速2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例19将未成熟和成熟苹果全果用100％丙酮提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020极性大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度3.0mg/ml，pH值2.5，流速1.0ml/min上D4020树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用70％丙酮溶液洗脱，洗脱剂用量12BV，洗脱速度2.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将3.0mg/ml pH值5.5的初步纯化后苹果多酚溶液3.0ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用60％乙醇溶液洗脱，洗脱剂用量2BV，洗脱流速1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例20将未成熟苹果全果用100％乙醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020极性大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度3.0mg/ml，pH值2.5，流速1.5ml/min上D4020树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用30％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量12BV，洗脱速度1.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖凝胶(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.5mg/ml pH值5.5的初步纯化后苹果多酚溶液4.0ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用60％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱流速1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
实施例21将苹果皮渣用100％乙醇提取得粗提液，把处理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020极性大孔吸附树脂装入层析柱，平衡后，调节粗提液浓度1.0mg/ml，pH值3.0，流速2.5ml/min上D4020树脂柱，定时测定苹果多酚溶液浓度，至0.20～0.25mg/ml时，停止上样；用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用30％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量12BV，洗脱速度2.0ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚溶液。将充分溶胀好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)装入层析柱，平衡后，将1.5mg/ml pH值6.0的初步纯化后苹果多酚溶液8.0ml加入葡聚糖凝胶柱中，用蒸馏水洗脱至无总糖检出，换用60％甲醇溶液洗脱，洗脱剂用量5BV，洗脱流速1.5ml/min。收集洗脱液，在真空度0.096MPa温度45℃下真空浓缩，得到精制的苹果多酚溶液，冷冻浓缩得到苹果多酚粉末制品。
权利要求
1.一种树脂和凝胶多极串联集成连续分离纯化苹果多酚的新工艺，包括将苹果多酚粗液用树脂吸附洗脱，其特征是再用凝胶吸附洗脱，真空浓缩，得到苹果多酚的浓缩液制品。
2.根据权利1所述的工艺，其特征在于用未成熟和成熟苹果全果、苹果果肉、苹果皮籽、苹果加工废料-苹果渣中提取的苹果多酚粗液及苹果汁生产中脱除的苹果多酚粗液作为原料生产高纯苹果多酚制品。
3.根据权利2所述的工艺，其特征在于调节苹果多酚粗液的浓度、pH值和上柱流速条件，使大孔吸附树脂柱体吸附至饱和，用水洗去可溶性糖等杂质，再调节洗脱剂浓度、洗脱流速和洗脱剂体积条件，洗脱大孔吸附树脂柱体吸附的苹果多酚，洗脱的苹果多酚经真空浓缩，得到初步纯化的苹果多酚。
4.根据权利3所述的工艺，其特征在于上柱苹果多酚粗液的浓度0.5～3.0mg/ml，pH值范围2.0～6.0，上柱流速0.5～2.5ml/min；洗脱剂使用甲醇或乙醇或丙酮，洗脱剂浓度10～100％，洗脱剂用量5～15BV，洗脱速度0.5～2.5ml/min。
5.根据权利3所述的工艺，其特征在于调节初步纯化苹果多酚的浓度、pH值和上样体积条件，上凝胶柱，先用水洗去可溶性糖等杂质，后调节洗脱剂浓度、洗脱流速和洗脱剂体积条件，洗脱凝胶柱吸附的苹果多酚，洗脱的苹果多酚经真空浓缩，得到精制的苹果多酚制品。
6.根据权利5所述的工艺，其特征在于过凝胶柱的苹果多酚浓度0.5～3.0mg/ml，pH值2.0～6.0，上样体积0.5～10％BV；洗脱剂使用甲醇或乙醇或丙酮均可，洗脱剂浓度10～100％，洗脱剂用量2～5BV，洗脱流速0.5～2.5ml/min。
7.根据权利1至6任一所述的工艺，其特征在于所用树脂为聚苯乙烯系或聚酰胺系极性或非极性大孔吸附树脂，凝胶为葡聚糖系凝胶；采用固定床式吸附；纯化工艺采用树脂柱床和凝胶柱床串联，树脂柱床可采用单组或多组集成。
8.根据权利1所述的工艺，其特征在于经过树脂和凝胶串联纯化的苹果多酚浓缩液经喷雾干燥或冷冻干燥得到苹果多酚含量≥80％的粉状制品。
全文摘要
一种树脂和凝胶多极串联集成连续分离纯化苹果多酚的新工艺，包括将苹果多酚粗液用树脂吸附洗脱，再用凝胶吸附洗脱，真空浓缩，得到苹果多酚的浓缩液制品。本发明的优点在于将分离纯化天然产物所单独使用的树脂和凝胶技术串联集成使用，结合两者优点，达到连续生产高纯苹果多酚的目的，工艺简单，操作简便，有利于苹果多酚的工业化连续生产，有利于苹果多酚活性的保持；另外，分离纯化在常温常压下进行，可以节省能源；洗脱剂可以回收使用，没有污染，属环境友好型技术。本发明不仅可以延长苹果产业链条，生产出高附加值苹果多酚产品，还可优化食品工业结构，带动农业增产、农民增收、农村持续快速发展，具有极为重要的经济及社会意义。
文档编号C07H17/06GK101058570SQ200610160009
公开日2007年10月24日 申请日期2006年12月29日 优先权日2006年12月29日
发明者艾志录, 王育红, 郭娟, 潘治利, 崔建涛, 王娜 申请人:河南农业大学