在植物来源的载体上纯化他克莫司的制作方法

文档序号:3580643阅读:458来源:国知局
专利名称:在植物来源的载体上纯化他克莫司的制作方法
在植物来源的载体上纯化他克莫司发明领域本发明通常涉及免疫抑制剂和抗微生物三环大环内酯类(macrolide), 特别涉及回收和纯化他克莫司(I)的方法。OMe OMe(i)技术背景他克莫司(1)(17-烯丙基-1,14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环己基)-l-曱基乙烯基-23,25-二甲氧基-13,19,21,27-四曱基-ll,28-二氧基-4-氮杂三环 -[22.3丄04,9]二十八碳-18-烯-2,3,10,16-四酮)是三环大环内酯类,其通过链霉 菌属(S^/;to附F"乎)的发酵产生的。他克莫司用于治疗移植排斥危象、自 身免疫疾病、感染性疾病等。EP 0184162公开了通过发酵和化学合成制备他克莫司及其衍生物的 方法。特别的是,用链霉菌属的发酵除了产生他克莫司外还产生17-乙基衍 生物(II)(17-乙基-l,14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环己基)-l-曱基乙烯 基-23,25- 二甲氧基-13,19,21,27國四甲基-11,28- 二氧基-4-氮杂三环 -[22.3.1.04,9二十^^1-18-締-2,3,10,16-四酮),通常称为FK520<formula>formula see original document page 5</formula>(II)和17-丙基衍生物(III)(17-丙基-l,14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环 己基)-l-甲基乙烯基]-23,25-二曱氧基-13,19,21,27-四甲基-11,28-二氧基-4-氮杂三环-[22.3.1.04,9]二十人碳-18-烯-2,3,10,16-四酮)。OMe OMe(III)在EP 0184162中还7>开了他克莫司的化学物理性质及相关副产物,以 及提取、纯化和回收方法。特别的是从发酵液中回收是通过已知的提取技 术实现的,所述的提取技术例如应用适合从培养基或菌丝体中提取活性 的溶剂;用阴离子和阳离子交换树脂或非离子吸收树脂吸附/洗脱;在常规 色语载体上纯化,所述的色i普载体例如硅胶,氧化铝和纤维素;用活性炭 脱色,结晶和重结晶。根据EP 0184162,从发酵液中提取和回收他克莫司和相关副产物的方 法包括以下步骤-用溶剂(例如丙酮和甲醇)提取菌丝体和/或发酵液;-在非离子吸收树脂(特别是HP-20)上纯化;國将纯化的溶液蒸发至油状物;-在>^吏(特别是12^:胶,Fuji Devison Co.)上纯化,重复两次或三 次以获得粉末形式的产物;-通过制备HPLC纯化以分离上述杂质。在非离子吸收树脂以及在硅胶上的纯化目的是除去大多数衍生自发酵 液的化合物(通过在发酵过程中的微生物产生的物质、无机盐和衍生自原料 的物质,但是杂质(II)和(III)通过在制备HPLC上纯化而分离,但是,该方 法在工业规^莫上的产率和应用性较差。US 6492513公开了从杂质(II)和(III)中通过用银盐(特别是硝酸银)预处 理的阳离子交换树脂纯化他克莫司。在分离具有相同数目碳原子的不饱和 脂族酸的顺-反异构体中应用4艮盐是文献(J. Chromatography, 149(1978)417-430)中已知的。银盐与不饱和化合物形成7i-络合物,而分离 取决于它们的构象。他克莫司(其具有不饱和的17-烯丙基侧链)用US 6492513的方法从具有17-饱和侧链的两种杂质中分离,因为他克莫司在阳 离子交换树脂上比两种杂质保留更紧密,因为它形成了银M物。最后,US 6576135公开了通过非离子吸收树脂从杂质(II)和(III)中分离 他克莫司。发明详述现在发现他克莫司可以作为与银离子的7t-络合物(IV)通过应用植物来 源的载体方便地从杂质(II)和(III)中纯化。<formula>formula see original document page 6</formula>(IV)因此,本发明涉及纯化他克莫司的方法,该方法包括将粗的他克莫司与溶于水-有机溶剂混合物中的银盐以及植物来源的载体接触,所述的载体选自纤维素(例如ARBOCELL BC 200, J. Rettenmaier & Sohn或SOLKA FLOC,Dicalite),改良纤维素(例如Methocel, Dow Chemical)、淀粉、改良 淀粉、具有作为单体的简单烃的天然聚合物和碳。在该方法中,杂质保留 在植物来源的载体上,而络合物他克莫司-银离子被洗脱在水相中。在溶剂混合物从载体上洗脱后,用他克莫司可溶解的有机溶剂处理7jC相可以回收 他克莫司。因此,根据第一个实施方案,本发明方法包括a. 将粗的他克莫司与溶于水-有机溶剂混合物中的银盐以及植物来源的载体接触,所述的载体选自纤维素、改良纤维素、淀粉、改良淀粉、具 有作为单体的简单烃的天然聚合物和碳;b. 从载体中分离7jc/有机溶剂混合物;c. 从水相中回收他克莫司。特别的是,从7jc相中回收他克莫司可以通过以下方法实现 cl.除去有机溶剂;c2.用他克莫司可溶解的有机溶剂提取7jc相;c3.从7K相中分离有^M目并且通过蒸发溶剂回收纯的他克莫司。根据本发明优选的实施方案,用该方法纯化的他克莫司可以再进行该 方法,应用相同的植物来源的载体作为第一个纯化步骤,或应用不同的载 体。例如,在第一个纯化步骤中可以应用纤维素,而在第二个纯化步骤中 可以应用碳,反之亦然。对于本发明的目的,表达"有机溶剂"指的是水可混溶的或非混溶的 溶剂,其选自酮类、醇类、脂族和脂环族烃;优选的溶剂是丙酮、曱醇、 正己烷和环己烷。他克莫司可溶解的并且用于从水相中回收他克莫司(步骤c2)的有机溶 剂是非水可混溶的有机溶剂,例如乙酸乙酯、曱基-乙基-酮、乙醚、二氯 甲烷,优选乙酸乙酯。更详细的是,如下进行步骤c:将含有他克莫司-银 7t-^^物的混合物真空浓缩以除去有机溶剂(步骤d),随后用0.5-3体积他克莫司可溶解的有机溶剂提取(步骤c2)。将有4M目用l体积去离子水洗涤2-3次,随后浓缩至小体积(步骤c3)。步骤c3获得的包含银盐的7jC相可以回收并且再循环以制备他克莫司國 银离子^物。与他克莫司的重量相比,植物来源的载体的重量是3 + 100倍,优选 15 + 25倍。其中植物来源的载体是碳,其与他克莫司的重量相比使用量为 3 + 50倍,优选5 + 15倍。在该情况中,将在水-有机溶剂混合物中的^^ 物他克莫司4艮离子上样至包含碳的柱中并且用包含水和相同有机溶剂混 合物(包含络合物)的混合物平衡。洗脱流速为0.5 + 10体积/小时,其取决 于所用的碳的体积,优选3.0 + 5体积/小时。与碳的体积相比,洗涤溶液的 体积是2 + 10倍,优选3 + 8倍。然后将洗脱液回收并且进行上述步骤a-d。将进行纯化形成*物的银离子从银盐中释放出来,所述的银盐优选 硝酸银或高氯酸银。银离子的浓度范围优选0.05至1.30 mol/L,最优选0.20 至0.30 mol/L。将来自链霉菌属的发酵产物溶于他克莫司可溶解的有机溶 剂中制备进行第一个纯化循环的他克莫司-离子银复合物,所述的有机溶剂 选自乙酸乙酯、甲醇和乙腈。将不是碳的载体加入至溶液中,然后将有机 溶剂蒸发并且将获得的固体用包含银盐的7JC-有机溶剂混合物提取。与水溶 液的体积相比,在换:取混合物中有机溶剂的量范围为0至60%,优选0至 20%。与他克莫司的重量相比,提取混合物的重量是50 + 500倍。固体-液体提取可以重复至多5次,以便获得纯的他克莫司的提取摩尔产率高于 90%。另一方面,当载体是碳时,将发酵产物直接用包含银盐的水-有机溶剂 混合物处理,然后上样至柱上。根据另外的实施方案,本发明方法还可以包括在非离子树脂上的色i昝 纯化,其根据例如EP 0184162中描述的进行。树脂通常选自可商购获得的 吸收树脂,优选Mitsubishi Chemical Corporation(SP200或SP800)或Rohm 和Haas(系列XAD)。该另外的步骤可以在用植物来源的载体纯化之前或之 后进行。根据特别优选的实施方案,该另外的步骤在用植物来源的载体纯 化之前进行,如以下更详细的描述。将适当过滤的发酵液或菌丝体用他克莫司可溶解的有机溶剂提取,所述的溶剂优选酮类或醇类,更优选丙酮或甲醇,并且将提取产物在非离子 吸收树脂上进行吸收色语,以从发酵液中包含的其它化合物中纯化他克莫 司和杂质(II)和(III),所述的其它物质例如在发酵过程中由孩1生物释放的物 质、无机盐和衍生自原料的物质。将产生的产物溶于进行本发明方法的包含银盐的水-有机溶剂混合物 中。优选的是,包含他克莫司-银离子*物的混合物首先如上述在碳上纯 化,然后应用另外的植物来源的载体、优选纤维素重复纯化方法。将用本发明方法获得的纯的他克莫司用已知方法进行结晶;通常将产 物溶于有机溶剂、优选乙腈中,并且通过加入去离子水沉淀为一水合晶体。产生的晶体的特征在于高纯度(HPLC。/。面积〉99。/。,其根据在Y. Namiki 等人,Chromatographia Vol. 40, N。 5/6 March 1995中报道的HPLC方法进 行)。本发明方法与已知方法比较特别有利,从产率和最终产品的耗费可见。 关于产率,本发明方法不需要在正常相硅胶上的重复的色语纯化。文献中公开的在提取/纯化过程中需要的所述的纯化涉及应用显著量的溶剂和珪胶以;sj逸长的时间。最终产物的耗费确实比用已知方法获得的产物的耗费低,因为本发明 方法包括应用可商购获得的植物来源的载体,该载体比在文献中公开的方 法中应用的色谱载体的耗费低。另外,根据本发明方法,包含银离子的水 溶液可以完全再循环,其保持环境影响低并且限制银盐在最终产物上耗费 的发生。本发明现在将通过某些实施例更详细说明。 实施例实施例i-在吸收树脂上提取和纯化在50 L发酵液中加入50 L丙酮和1 kg过滤辅剂(Dicalite)。在室温下 搅拌1小时后,将浆液过滤。将产生的澄清溶液吸收在2 L吸收树脂XAD 16(Pohm和Haas)上。将活性用6 L水/丙酮25/75洗脱。将产生的溶液浓 缩以除去丙酮。将水相(1.5L)用1.5 L乙酸乙酯提取。分离各相并且将有机 相浓缩至油状物。实施例2-在粒状活性炭上纯化在油相中加入包含13.5 g AgN03的180 mL 50/50水/丙酮溶液。将产 生的溶液在包含100 mL粒状活性炭GAC 1240 PLUS(CECA ITALIANA) 的柱上渗滤,该柱预先用包含11.25 g AgN03的150 mL 50/50水/丙酮溶液 调节。然后,将包含30 gAgN03的400 mL 50/50水/丙酮溶液通过柱洗脱。 将产生的溶液蒸发至体积为350 mL。加入350mL乙酸乙酯,分离各相并 且将7jC相再循环,而有机相根据实施例3处理。实施例3-在纤维素上纯化在实施例2的有机相中加入160 g纤维素SOLKA FLOC(DICALITE)。 将悬浮液蒸发直至完全除去有机溶剂。在产生的固体中加入包含111.5 g AgN03的2 L 75/25 7JC/正己烷溶液并且在室温下搅拌30分钟,然后将固 体过滤。将拔^取和过滤重复4次并且分离各相。在7JC相中加入1L乙酸乙 酯并且分离各相。将水相再循环,而有4M目用与有树目的体积相比的1体 积去离子水洗涤3次,然后浓缩以获得白色固体(9.2g)。实施例4-他克莫司一水合物的结晶将固体产物(9.2g,包含8.5g他克莫司)溶于700mL乙腈中。在25X: 下将1200 mL去离子水緩慢加入(l-2小时)并且将溶液冷却至5"C ,将其在 5'C下放置12-14小时,然后过滤。获得7.0 g高纯度的他克莫司(HPLC。/。 面积>99%)。实施例5-用再循环的AgN03水溶液在粒状活性炭上纯化将残留的有机溶剂从实施例2的水相中除去形成2卯mL溶液,然后 力口入290 mL丙酮。在才艮据实施例1描述的方法获得的油相中加入180 mL再循环的7]C/丙 酮溶液。将产生的溶液上样至包含100 mL粒状活性炭GAC 1240 PLUS(CECA ITALIANA)的柱上,该柱预先用包含11.25 g AgNCb的150 mL 50/50 7JC/丙酮溶液调节。然后,将400mL再循环的水/丙酮溶液洗脱。 将产生的溶液蒸发至350 mL并且加入350 mL乙酸乙酯,然后分离各相并 且将水相再循环,而有树目根据实施例6中报道的处理。实施例6-用再循环的AgN03水溶液在纤维素上纯化将残留的有机溶剂从实施例3获得的待再循环的水相中除去,以获得 6L溶液,在其中加入2L正己烷。在实施例5的有树目中加入160 g纤维素SOLKA FLOC(DICALITE)。 将悬浮液蒸发直至有机溶剂除去。在产生的固体中加入从再循环获得的2 L 水/正己烷溶液并且在室温下搅拌30分钟,然后将固体过滤。将損:取和过 滤重复4次并且分离各相。在7K相中加入1 L乙酸乙酯并且分离各相。将 7K相再循环,而有机相用与有4M目的体积相比的1体积去离子水洗涤3次, 然后浓缩以获得白色固体产物(9.2 g)。实施例7-他克莫司一水合物的结晶将固体产物(9.2g,包含8.5g他克莫司)溶于700mL乙腈中。在25匸 下将1200 mL去离子7jC緩慢加入(l-2小时)并且将溶液冷却至5'C ,然后将 其在下放置12-14小时并且过滤。获得7.0 g高纯度的他克莫司(HPLC% 面积>99%)。
权利要求
1.纯化他克莫司(I)的方法该方法包括a.将粗的他克莫司与溶于水-有机溶剂混合物中的银盐以及植物来源的载体接触,所述的载体选自纤维素、改良纤维素、淀粉、改良淀粉、具有作为单体的简单烃的天然聚合物和碳;b.从载体中分离水/有机溶剂混合物;c.从水相中回收他克莫司。
2. 权利要求l中要求的方法,其中从7JC相中回收他克莫司通过以下方法实现cl.除去有机溶剂;c2.用他克莫司可溶解的有机溶剂提取水相;c3.从水相中分离有树目并且通过蒸发溶剂回收纯的他克莫司。
3. 权利要求1或2中要求的方法,该方法进一步包括d.将纯的他克莫司用包含银盐的水/溶剂混合物处理并且重复步骤
4. 权利要求l-3中任意一项的方法,其中载体是纤维素。
5. 权利要求l-3中任意一项的方法,其中载体是碳。
6. 权利要求3中要求的方法,其中步骤a)第一次用碳进行并且第二次 用纤维素进行。
7. 权利要求3中要求的方法,其中步骤a)第一次用纤维素进行并且第 二次用碳进行。
8. 权利要求l-7中任意一项的方法,其中溶剂是醇类或酮类。
9. 权利要求8中要求的方法,其中溶剂是甲醇或丙酮。
10. 权利要求1-9中任意一项的方法,其中有机溶剂是脂族或脂环族烃。
11. 权利要求IO中要求的方法,其中溶剂是正己烷或环己烷。
12. 权利要求2或3中要求的方法,其中他克莫司可溶解的有机溶剂 是乙酸乙酯。
13. 权利要求2或3中要求的方法,其中从步骤d)的提取获得的水溶 液再循环至步骤a)。
14. 以上权利要求中任意一项的方法,该方法进一步包括他克莫司在 非离子树脂上的色语纯化。
全文摘要
本发明涉及纯化他克莫司的方法,该方法包括将粗的他克莫司与溶于水/有机溶剂混合物中的银盐以及植物来源的载体接触,从载体中分离混合物并且回收纯的他克莫司。
文档编号C07D498/18GK101238136SQ200680029005
公开日2008年8月6日 申请日期2006年7月10日 优先权日2005年8月5日
发明者G·拉兹利, J·罗来多, L·莫拉, P·派索尼, W·卡布里 申请人:安蒂比奥蒂科斯有限公司
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