专利名称：：选择性萃取原花青素的方法选择性萃取原花青素的方法相关申请的交叉引用本申请要求2005年10月3日递交的美国申请No.11/242，473(现未决)的优先权。发明背景发明领域本发明涉及使用特定顺序的'容剂，依照其聚合度选择性萃取可可原花青素的方法。特别地，本发明涉及使用乙酸正丁酯作为第一萃取溶剂，从可可原花青素的混合物中选择性萃取单独的低聚物或小组低聚物的方法。众所周知，单独的黄烷-3-醇，例如儿茶素、表儿茶素和可可原花青素低聚物，表现出独特的性质并且具有供人类和动物使用的独特应用。基于聚合度选择性萃取特定的单体或低聚物，使得其在药理应用上以及食品级产品的应用中更具靶向性和有效性。相关技术的讨论原花色素，即黄烷-3-醇的低聚物和聚合物，为继木质素之后含量第二丰富的天然植物酚。黄烷-3-醇亚单位主要通过一个亚单位4位与另一个亚单位8位间的碳碳4建(C4—C8)而连接在一起，少量通过C4—C6键而连4矣在一起。原花青素代表了最大一类的原花色素。Gu等人指出，在41种已发现含有原花色素的食物中，有27种含有原花青素。(J.Agric.andFoodChem.51(2003)7513)。原花青素通常由(-)-表儿茶素、(+)-表儿茶素、(-)-儿茶素和/或(+)-儿茶素亚单位组成。原花色素包括B-型和A-型原花色素。在B-型原花色素中，单体亚单位(表儿茶素、儿茶素)通过黄烷间C4—C6和/或黄烷间C4—C8键而连接在一起。只具有C4—C8键的低聚物为线性，而至少一个C4—C6键的存在将导致支化的低聚物。而A-型原花色素为包括键C2-0-C7以及C4—C6或C4—C8的双重连4妄低聚物。原花色素的分子量通常用聚合度(DP)表示，单独的低聚物通常被称作二聚物、三聚物等。已知用于人体和动物时各种原花青素低聚物具有特异性质和潜在作用。例如，Tempesta公开了聚合度(DP)为2-11的原花青素低聚物具有明显的抗病毒活性，并用于治疗^^皮副叙液病毒(paramyxovaridae)(例如呼吸道合月包病毒)、正|占液病毒(orthomyxovaridae)(例如流行性感冒病毒A、B和C)以及疱渗病毒(例如单纯疱渗病毒)感染的包括人在内的温血动物(美国专利5,211,944)。RomanczykJr.等公开了包含DP为3-11的原花青素低聚物和合适载体的抗肿瘤组合物(美国专利5,554，645)。RomanczykJr.等还公开了DP为5-12的原花青素低聚物用作抗氧化剂(美国专利5,891,905)。Schmitz等公开了将DP为2-18的可可原花青素低聚物与乙酰水杨酸用于抗血小板疗法(美国专利6,524,630)。在分离并分析原花青素低聚物方面，现已取得了显著进步，(见Rigaud等人，Chromatogr.654(1993)179;Cheynier等人，MethodsinEnzymology299(1999);Natsume等人，Biosci.Biotechnol.Biochem.64(2000)2581)。现已对原花青素低聚物分离到五聚物(DP=5)。Hammerstone等人公开了对本方法的修改，从而在未发酵可可种子的分析中取得了分离单体至九聚物的进展，(J.Agric.andFoodChem.47(1999)490)。Gu等人还公开了进一步的进展，导致聚合物峰(DP>10)的洗脱，也改善了整体的峰型和分离度，(J.Agric.andFoodChem.50(2002)4852)。希望能够最大程度地增加可可原花青素在制备型HPLC系统上的负载容量，这样可以洗脱更多量所需的特定单体和/或低聚物，以进一步研究或使用。理论上，制备型HPLC柱(300x55mm,100pm)的负载容量约为4克物质。然而，可可原花青素提取物的溶解性问题限制其最大负载容量至约为400毫克，其中只有约41%为黄酮类。预期在进样HPLC柱之前，通过从多酚混合物中选择性萃取单独或小组低聚物，可以显著增加样品负载(黄烷醇)量。因此，需要的是，花青素低聚物的方法。发明概述本发明提供了从可可多酚水性混合物中选择性萃取可可原花青素的方法，该方法用乙酸正丁酯萃取水性混合物，分离水相和乙酸正丁酯相。所述水相富集原花青素二聚物及更高的低聚物，乙酸正丁酯相富集儿茶素和表儿茶素。在优选的实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物的有机溶剂(其是二乙醚或者乙酸曱酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素三聚物及更高^^聚物，有机相富集原花青素二聚物。优选地，乙酸甲酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。此外在本实施方式中，用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素五聚物及更高低聚物，乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物。此外在本实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素六聚物及更高低聚物，有机相富集原花青素五聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。此外在本实施方式中，用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，乙酸曱酯相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物。此外在本实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相，并分离相。乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。在另一个实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，9乙酸甲酯相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物。此外在本实施方式中，除去乙酸曱酯相的溶剂，将所得产物溶于水中，用乙酸乙酯萃取溶解的产物。分离相，水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物和八聚物，乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物。此外在本实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素及原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物，有机相富集原花青素五聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。同样在本实施方式中，用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相，并分离相。乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。在另一个实施方式中，用乙酸乙酯萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素五聚物及更高低聚物，乙酸乙酯相富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物。在本实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素六聚物及更高低聚物，有机相富集原花青素五聚物。优选地，乙酸甲酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。此外在本实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，乙酸曱酯相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物。此外在本实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相，并分离相。乙酸曱酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。同样在本实施方式中，除去乙酸乙酯相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物的有机溶剂(其是二乙醚或者乙酸甲酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素三聚物和四聚物，有机相富集原花青素二聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。或者在本实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，乙酸曱酯相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物和八聚物。同样在此供选实施方式中，除去乙酸曱酯相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物，有机相富集原花青素五聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。在另一个实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸甲酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素六聚物及更高低聚物，有机相富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物。优选地，乙酸甲酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。在本实施方式中，用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，乙酸甲酯相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物。此外在本实施方式中，用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相，并分离相。乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。或者在本实施方式中，除去富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物的有机溶剂(其是二乙醚或乙酸甲酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，有机相富集原花青素二聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。同样在本替代实施方式中，用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素五聚物，乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物。在另一个实施方式中，用乙酸甲酯萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素九聚物及更高低聚物，乙酸曱酯相富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物。在本实施方式中，除去乙酸曱酯相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物的有机溶剂(其是二乙醚或乙酸甲酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物，有机相富集原花青素二聚物。优选地，乙酸甲酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。此外在本实施方式中，用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量九聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物，乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物。此外在本实施方式中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)，萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物，有机相富集原花青素五聚物。优选地，乙酸甲酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。或者在本实施方式中，除去富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的乙酸甲酯相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机溶剂(其是乙酸曱酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物，有机相富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。同样在本替代实施方式中，除去富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的有机相的溶剂，将所得产物溶于水中，用能有效地选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物的有机溶剂(其是二乙醚或者乙酸甲酯和二乙醚的混合物)萃取溶解的产物。分离相。水相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，有机相富集原花青素二聚物。优选地，乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。同样在本替代实施方式中，用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物的水相，并分离相。水相富集原花青素五聚物，乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物。这些及其它目的和实施方式在此公开，或者依照以下详述说明书是显而易见的。附图简述图1:可可多酚标准品的HPLC色谱图。图2:来自水性可可多酚提取物的乙酸甲酯有机萃取部分的HPLC/FLD色谱图。图3:来自水性可可多酚提取物的乙酸正丁酯有机萃取部分的HPLC/FLD色谱图。图4:来自水性可可多酚提取物的乙酸乙酯有机萃取部分的HPLC/FLD色谱图。图5:来自水性可可多酚提取物的二乙醚有机萃取部分的HPLC/FLD色谱图。图6:来自水性可可多酚提取物的有机萃取部分的HPLC/FLD色语图，溶剂为乙酸曱酯和二乙醚的混合物(25:75v/v)。图7:来自水性可可多酚提取物的有机萃取部分的HPLC/FLD色镨图，溶剂为乙酸甲酯和二乙醚的混合物(50:50v/v)。图8:来自水性可可多酚提取物的有机萃取部分的HPLC/FLD色谱图，溶剂为乙酸甲酯和二乙醚的混合物(75:25v/v)。图9:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是乙酸正丁酯。图10:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是乙酸乙酯。图11:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是乙酸甲酯。图12:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是二乙醚。图13:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是乙酸甲酯和二乙醚的混合物(25:75v/v)。图14:选择性萃取水性可可多酚提取物的选择性萃取路径流程图；第一溶剂是乙酸甲酯和二乙醚的混合物(75:25v/v)。发明详述本发明公开了从可可多酚水性混合物中选择性萃取单独或小组可可原花青素单体和/或低聚物的方法。特别地，本发明涉及通过所选顺序的基于乙酸酯和/或二乙醚的溶剂，选择性萃取原花青素单体和/或低聚物，其中第一萃取溶剂为乙酸正丁酯。现已表明，将可可多酚提取物溶于水并用乙酸乙酯萃取该水溶液，可选择性萃取较少量的原花青素低聚物(儿茶素、表儿茶素、原花青素二聚物、三聚物和四聚物)。基于这些结果，考察了其它的溶剂(其不能与水混溶，是极性的、"绿色的"、食品级的，且价格合理)和溶剂顺序。特别地，考察了用乙酸正丁酯和乙酸甲酯选择性萃取可可原花青素单体和/或低聚物，考察了两种溶剂单独使用和与乙酸乙酯顺序使用的情况。所有三种基于乙酸酯的溶剂可以食品级质量购买。这在所萃取的低聚物部分用于食品或药品时具有益处。图1描述了可可多酚标准品的高效液相色谱图，显示单独的单体和寸氐聚物。图2显示乙酸甲酯的选择性萃取特征。现已发现用乙酸甲酯首先萃取水相可可多酚提取物可选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物。还发现(未描绘)在除去较低级的低聚物之后，用乙酸曱酯进一步萃取可选择性萃取原花青素九聚物及更高低聚物。图3显示了乙酸正丁酯的选择性萃取特征，这在以前不为人所知。现已发现，用乙酸正丁酯首先萃取水性可可多酚提取物，可选择性萃取儿茶素、表儿茶素和少量原花青素二聚物。图4显示了乙酸乙酯的选择性萃取特征，如前所示，用乙酸乙酯首先萃取水性可可多酚提取物，可选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物和四聚物。除了三种基于乙酸酯的溶剂之外，乙酸甲酯和二乙醚的混合物溶聚物。这种基于二乙醚的溶剂中，乙酸甲酯:二乙醚之比可以为0至100:100至0(v/v)。如图5所示，当溶剂中乙酸甲酯:二乙醚为0:100(v/v)，也就是说，当溶剂仅为二乙醚时，该溶剂从水性可可多酚提取物中选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物。如图6所示，当溶剂中乙酸甲酯:二乙醚为25:75(v/v)时，该溶剂选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物，以及少量原花青素三聚物。如图7所示，当混合溶剂中乙酸曱酯:二乙醚为50:50(v/v)时，该溶剂选择性萃取儿茶素、表儿茶素以及原花青素二聚物、三聚物和四聚物。如图8所示，当混合溶剂中乙酸曱酯:二乙醚为75:25(v/v)时，该溶剂选择性萃取儿茶素、表儿茶素以及原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物和少量原花青素六聚物。下表总结了这里讨论的基于乙酸酯和二乙醚的有机溶剂的选择性萃取特征。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>预期其它基于二乙醚的溶剤(乙酸曱酯与二乙醚的其它配比)，可选择性萃取其它组的原花青素低聚物。有两个主要因素决定特定选择性萃取顺序中所用的溶剂。第一个因素是所用单独溶剂的萃取特征。如指出的，乙酸酯溶剂(乙酸正丁酯、乙酸乙酯和乙酸曱S旨)分别限于选择性萃取儿茶素、表儿茶素和少量原花青素二聚物；儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物和四聚物；和儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物。相比而言，基于二乙醚的溶剂组对原花青素低聚物的选择性要大一些，这取决于溶剂中二乙醚的比例。例如，单独用二乙醚可选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物。乙酸曱酯和二乙醚的混合物(25:75v/v)选择性萃取儿茶素、表儿茶素，以及原花青素二聚物和少量原花青素三聚物。乙酸甲酯和二乙醚的混合物(75:25v/v)选择性萃取儿茶素、表儿茶素，以及原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物和少量原花青素六聚物。确定所用溶剂的第二个因素是目标原花青素低聚物部分在所选溶剂中的相对溶解性。与乙酸甲S旨:二乙醚混合溶剂相比，可可原花青素倾向于更易溶解在基于乙酸酯的溶剂中，产生类似萃取特征。例如，乙酸乙酯，以及乙酸曱酯与二乙醚的等量混合物(50:50v/v),都是从水性可可多酚提取物中选择性萃取儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物、三聚物和四聚物。然而，乙酸乙酯需要较少次萃取洗涤来累积目标多酚。已知没有一种溶剂能在单次萃取洗涤中完全萃取尽其目标多酚。乙酸酯溶剂需要多次萃取洗涤(多至四次)。相比而言，已知二乙醚和基于二乙醚的溶剂需要更多次额外的萃取洗涤(多于10次)才能接近完全(exhaustion)，也可能达不到完全萃取(exhaustiveextraction)。因此，在可能的情况下，用具有相应萃取特征的基于乙酸酯的溶剂代替基于二乙醚的溶剂，以改善萃取效率。根据基于乙酸酯和二乙醚的溶剂的选择性萃取特征，可使用多种选择性萃取顺序来选择性萃取所需的原花青素单体和/或低聚物。可通过任何常规方法来制备水性可可多酚提取物。对于第一溶剂是乙酸正丁酯或乙酸甲酯的选择性萃取，水性可可多酚提取物的制备样品制备来自脱脂可可固体的可可多酚j是取物。可可多酚提取物经由多步工艺制备，旨在将可可原花青素的损失降至最低。收集可可种子，洗去浆状物，并干燥。在环境条件下以压榨器按压干燥的可可豆，以去除可可脂。然后用乙醇:水(70:30v/v)研磨和提取油饼。离心去除固体。减压蒸发提取液去除乙醇，最后喷雾干燥。样品制备来自脱脂可可种子的可可多酚提取物。将新鲜的未发酵的可可种子(30g)冷冻干燥(16.9g)。用己烷使冷冻干燥的可可种子(10.2g)脱脂，研磨脱脂可可豆小样(6.3g)，用40mL丙酮:水:醋酸(70:29.5:0.5,v/v/v)超声(10分钟，50。C)提取三次。减压旋转蒸发去除合并提取液中的丙酮。冷冻干燥剩余液体得到紫红色残留物(l.13g)。将干燥的可可多酚提取物溶于水中，优选将50克提取物溶于200毫升水中，得到供选择性萃取用的水性可可多酚提取物，开始用乙酸正丁酯或乙酸甲酯萃取。选择性提取的部分经由HPLC分析，使用配备有自动进样器、四元HPLC泵、柱温箱、二极管阵列检测器和荧光检测器的AgilentllOOHPLC系统。所用柱子为DevelosilDiol(250x4.6mm内径，5^粒径)，购自Phenomenex(Torrance,California)。两元流动相由(A)乙腈:醋酸(98:2，v/v)和(B)甲醇:水:醋酸(95:3:2，v/v/v)组成。利用线性梯度(流动相)在35°〇以1.0mL/分钟流速如下进行分离0-35分钟，0%B;35-40分钟，40%B等度；40-45分钟，40-0%B，接着5分钟再平4軒时间。通过UV检测(280nm)和荧光检测(FLD)(激发波长=276腦，发射波长=31611111)监控洗脱液。利用MS法和自Hammerstone等，J.Agric.andFoodChem.47(1999)490修改的参数表征提取物和纯化的流分，通过引用将其公开的内容结合到本文。电离试剂通过正好在质谱前的HPLC洗脱液液流中的T形物加入，并通过HPLC泵输送。用于在正离子模式分析的条件包括以0.05mL/分钟流速引入0.05MNaCl以有助于电离，3.5kV毛细管电压，100V裂解器(fragmentor)电压，25psig喷雾压力和350。C干燥气体温度。用于在负离子模式分析的条件包括1.5MNH4OH作为緩沖剂，其流速为0.09mL/分钟29分钟，然后0.05mL/分钟。毛细管电压为3kV，裂解器电压为75V，喷雾压力为25psig，干燥气体温度为350°C。MS分析忽略氬氧化铵的使用。将样品溶解在丙酮水醋酸(70:29.5:0.5,v/v/v)或流动相中，注入前滤过0.45pmPTFE注射过滤器。所有提取都在室温下进行。4是取溶剂中没有使用酸。鉴于这里所用萃取溶剂的非完全萃取(non-exhaustive)性质，如下面实施例中所用的，当所述溶剂为乙酸正丁酯、乙酸乙酯或乙酸甲酯时，"萃取，，是指用所述溶剂萃取洗涤(extractionwashes)多至四次。当使用二乙醚或者使用二乙醚和乙酸甲酯的任何混合物时，"萃取"是指用所述溶剂萃取洗涤至少10次。应明白的是，将每次萃取的所有有机相合并，以供使用或根据需要作进一步萃取。还有这里所用的，"富集，，是指以下内容当溶剂;1^于乙酸酯或基于二乙醚的有机溶剂时，"富集"是指所鉴定的相基本上由溶于指定溶剂的所鉴定的单体和/或低聚物，以及其它痕量物质所组成。当溶剂是水时，即所述相是来自萃取步骤的水性相时，"富集"是指所述相基本上由溶于水的所鉴定的单体和/或低聚物，以及其它痕量物质组成。本领域技术人员明白，可以用常规方法来分离由下面实施例中各次提取所得到的有机相和水相，分开的相可根据需要直接使用，进一步萃取或者丟弃。如果需要，可通过常规方法来除去有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中以得到水性混合物。进一步理解的是，如果在实施例中有机溶剂相(乙酸正丁酯相、乙酸乙酯相、乙酸曱酯相、二乙醚相或其它有机相W支萃取，则在萃取之前通过蒸发或其它常规方法除去有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中，得到产物的水溶液，然后可对其进行萃取。以下实施例参考图9至14将更容易理解。在图中，"CP,，指可可多酚的水性提取物，包含儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物及更高低聚物。"O，，指有机相，"A，，指水相，可以指萃取后的相以及正被萃取的相(水相或有机相)。对于溶剂，"nBA"指乙酸正丁酯；"0:100"指只含二乙醚的溶剂；"25:75"指基于二乙醚的溶剂，其中乙酸甲酯与二乙醚之比为25:75(v/v);"EtAc，，指乙酸乙酯；"75:25"指基于二乙醚的溶剂，其中乙酸曱酯与二乙醚之比为75:25(v/v);"MeAc"指乙酸甲酯，不含二乙醚。括号里的数字指包含在被萃取相中的低聚物的聚合度。在实施例1至1.5.23中，最先萃取溶剂是乙酸正丁酯。参考图9中的流程图可更好地理解实施例。实施例1:最先萃取乙酸正丁酯:可用乙酸正丁酯萃取可可多酚的水性混合物(儿茶素、表儿茶素和原花青素二聚物及更高低聚物)。所得乙酸正丁酯相富集儿茶素和表儿茶素，以及少量原花青素二聚物，所得水相富集原花青素二聚物及更高低聚物。比较图l、3。实施例1.1:第二次萃取二乙醚:可用二乙醚萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相(实施例1)，得到富集原花青素二聚物的有机(二乙醚)相和富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相。实施例l丄l:第三次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例1.1)。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而所得水相富集原花青素五聚物及更高低聚物。实施例l丄2:第四次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(其是乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相(实施例l丄l),得到富集原花青素五聚物的有机相和富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相。实施例l丄3:第五次萃取乙酸甲酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例l丄2),得到富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例l丄4:第六次萃取乙酸甲酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物的水相(实施例l丄3)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的有机相。所得水相基本除尽原花青素。实施例1丄5:第四次萃取乙酸曱酯:对实施例1丄2的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例l丄l有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中。可用乙酸甲酯萃取溶解的产物，得到富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例U.6:第五次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):通过蒸发或其它常规方法除去实施例l丄5乙酸曱酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(其是乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃^l溶解的产物，得到富集原花青素五聚物和少量原花青素六聚物的有机相。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物。实施例l丄7:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例l丄5)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。实施例1丄8:第三次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):对实施例l丄l的改变，可用有机溶剂(包含乙酸甲酯和二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例1.1)。所得有机相将富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物。水相将富集原花青素六聚物及更高低聚物。实施例1.1.9:第四次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例l丄8有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物，得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，所得水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。20实施例1丄10:第四次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例l丄8)，得到富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例l丄ll:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例I丄IO)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。实施例1丄12:第三次萃取乙酸曱酯:对实施例l丄l的另一种改变，可用乙酸曱酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例l.l),得到富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1丄13:第四次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1丄12乙酸曱酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物，得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物。实施例1丄14:第五次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(其是乙酸曱S旨:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物的水相(实施例1丄13)，得到富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物的有机相。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物和少量原花青素九聚物。实施例1丄15:第四次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):对实施例1丄13的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1丄12乙酸曱酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(其是乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取溶解的产物，得到富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物及少量原花青素六聚物的有机相。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.1.16:第五次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1丄15有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物，得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，和富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物的水相。实施例1丄17:第四次萃取乙酸甲酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例U.12)。所得乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。水相基本除尽原花青素。实施例1.2:第二次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:75v/V):对实施例1.1的改变，可用有机溶剂(其是乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相(实施例1)，得到富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物的有机相，和富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相。实施例1.2.1:第三次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2)。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及更高低聚物。实施例1.2.2:第四次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(其是乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.1)，得到富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物的有机相。水相富集原花青素六聚物及更高低聚物。实施例1.2.3:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.2)，得到富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.2.4:第六次萃取乙酸甲酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.3)。所得乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物，而水相基本除尽原花青素。实施例1.2.5:第四次萃取乙酸曱酯:对实施例1.2.2的改变，可用乙酸甲酯萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.1)，得到富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.2.6:第五次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.2.5有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(包含乙酸曱酉旨:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.2.7:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.5)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。实施例1.2.8:第三次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):对实施例1.2.1的改变，可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2)。所得有才/L相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物。水相富集原花青素六聚物及更高低聚物。实施例1.2.9:第四次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.8)。所得乙酸甲酯相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物，水相富集原花青素九聚物及更高#^聚物。实施例1.2.10:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.9)。所得乙酸甲酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物，而水相基本除尽原花青素。实施例1.2.11:第四次萃fl:乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.2.8有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.2.12:第三次萃取乙酸甲酯:对实施例1.2.1的另一种改变，可用乙酸甲酯萃取富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2)。所得乙酸曱酯相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物，而水相富集原花青素九聚物及更高低聚物。实施例1.2.13:第四次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.2.12乙酸曱酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.2.14:第五次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.2.13)。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.2.15:第四次萃取乙酸曱西旨:二乙醚(75:25v/v):对实施例1.2.13的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.2.12乙酸甲酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(包含乙酸曱酉旨:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.2.16:第五次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.2.15有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.2.17:第四次萃取乙酸甲酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.2.12)。所得乙酸曱酯相富集原花青素九聚物及更高低聚物。水相基本除尽原花青素。实施例1.3:第二次萃取乙酸乙酯:对实施例U的进一步改变，可用乙酸乙酯萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相(实施例1)，得到富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，和富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相。实施例1.3.1:第三次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.3乙酸乙酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用二乙醚萃取溶解的产物，得到富集原花青素二聚物的二乙醚相和富集原花青素三聚物和四聚物的水相。实施例1.3.2:第三次萃取乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v):实施例1.3.1的替代方法，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.3乙酸乙酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物，得到富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物的有机相，和富集原花青素三聚物及四聚物的水相。实施例1.3.3:第三次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(包含乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相(实施例1.3),得到富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物的有机相，所得水相富集原花青素六聚物及更高低聚物。实施例1.3.4:第四次萃取乙酸曱酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例1.3.3),得到富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.3.5:第五次萃取乙酸甲酯:可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.3.4)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。实施例1.3.6:第三次萃取乙酸甲酯:对实施例1.3.3的改变，可用乙酸曱酯萃取富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相(实施例1.3)，得到富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.3.7:第四次萃取乙酸曱酉旨:二乙醚(75:25v/v):通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.3.6乙酸甲酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(包舍乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.3.8:第四次萃取乙酸甲酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.3.6)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。实施例1.4:第二次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):还是对实施例1.1的进一步改变，可用有机溶剂(包含乙酸曱酉旨:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相(实施例1),得到富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物及少量原花青素六聚物的有机相，和富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相。实施例1.4.1:第三次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.4有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用二乙醚萃取溶解的产物。所得二乙醚相富集原花青素二聚物，所得水相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物。实施例1.4.2:第四次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物的水相(实施例1.4.1),得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，所得水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.4.3:第三次萃取乙酸甲酉旨:二乙醚(25:75v/v):对实施例1.4.1的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.4有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中。可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物。水相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物和少量原花青素六聚物。实施例1.4.4:第四次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物及少量原花青素六聚物的水相(实施例1.4.3)，得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，和富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物的水相。实施例1.4.5:第三次萃取乙酸乙酯:对实施例1.4.1的另一改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.4有机相中的溶剂，并将所得产物溶于水中，用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物和少量原花青素六聚物。实施例1.4.6:第四次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.4.5乙酸乙酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中，用二乙醚萃取溶解的产物。所得二乙醚相富集原花青素二聚物，而水相富集原花青素三聚物和四聚物。实施例1.4.7:第四次萃取乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v):对实施例1.4.6的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.4.5乙酸乙酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中，用有机溶剂(包含乙酸曱酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物。水相富集原花青素三聚物和四聚物。实施例1.4.8:第三次萃取乙酸甲酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相(实施例1.4)，得到富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸甲酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.4.9:第四次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.4.8)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸曱酯相。水相基本除尽原花青素。27实施例1.5:第二次萃取乙酸甲酯:对实施例1.1的另一种改变，可用乙酸曱酯萃取富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相(实施例l)，得到富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的乙酸曱酯相，和富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相。实施例1.5.1:第三次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5乙酸曱酯相中的溶剂，并将所得产物溶于水中，用二乙醚萃取溶解的产物，得到富集原花青素二聚物的二乙醚相，和富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相。实施例1.5.2:第四次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.1)，得到富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相，和富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相。实施例1.5.3:第五次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75'.25v/v):可用有机溶剂(包含乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.2)。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.4:第三次萃取乙酸乙酯:对实施例1.5.1的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5乙酸甲酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.5:笫四次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.4乙酸乙酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用二乙醚萃取溶解的产物。所得二乙醚相富集原花青素二聚物，而水相富集原花青素三聚物和四聚物。实施例1.5.6:第四次萃取乙酸曱酉旨:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(包含乙酸曱S旨:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.4)。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.7:第四次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/V):可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.1)。所得有机相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物，及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.8:第五次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.7有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原;&青素六聚物。实施例1.5.9:第五次萃取乙酸曱酯:可用乙酸甲酯萃取富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.7)。所得乙酸曱酯相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。水相基本除尽原花青素。实施例1.5.10:第三次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):对实施例1.5.1的另一种改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5乙酸甲酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.11:第四次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.10有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用二乙醚萃取溶解的产物。所得二乙醚相富集原花青素二聚物，而水相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.12:第五次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物及少量原花青素六聚物的水相(实施例1.5.11)。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.13:第四次萃取乙酸乙酯:对实施例1.5.11的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.10有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.14:第五次萃取二乙醚:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.13乙酸乙酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用二乙醚萃取溶解的产物。所得二乙醚相富集原花青素二聚物，而水相富集原花青素三聚物和四聚物。实施例1.5.15:第五次萃取乙酸曱酯:二乙醚〖25:75v/v):对实施例1.5.14的改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.13乙酸乙酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用有机溶剂(包含乙酸甲酉旨:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集二聚物及少量原花青素三聚物，水相富集原花青素三聚物和四聚物。实施例1.5.16:第四次萃取乙酸曱酯:二乙醚(25:75v/v):对实施例1.5.11的另一种改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.10有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物。水相富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.17:第五次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物及少量原花青素六聚物的水相(实施例1.5.16)。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.18:第三次萃取乙酸曱酯:二乙醚(25:75v/v):对实施例1.5.1的另一种改变，通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5乙酸曱酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用有机溶剂(包含乙酸曱酯:二乙醚(25:75v/v)的混合物)萃取溶解的产物。所得有机相富集原花青素二聚物及少量原花青素三聚物，而水相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.19:第四次萃取乙酸乙酯:可用乙酸乙酯萃取富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.18)。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.20:第五次萃取乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v):可用有机溶剂(包含乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.19)。所得有机相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.21:第四次萃取乙酸甲酯:二乙醚(75:25v/v):对实施例1.5.19的改变，可用有机溶剂(包含乙酸曱酯:二乙醚(75:25v/v)的混合物)萃取富集原花青素三聚物。四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物的水相(实施例1.5.18)。所得有机相富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物及少量原花青素六聚物，而水相富集原花青素六聚物、七聚物、八聚物及少量原花青素九聚物。实施例1.5.22:第五次萃取乙酸乙酯:通过蒸发或其它常规方法除去实施例1.5.21有机相中的溶剂，将所得产物溶于水中，并用乙酸乙酯萃取溶解的产物。所得乙酸乙酯相富集原花青素三聚物和四聚物，而水相富集原花青素五聚物及少量原花青素六聚物。实施例1.5.23:第三次萃取乙酸曱酯可用乙酸曱酯萃取富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相(实施例1.5)，得到富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。水相基本除尽原花青素。图10至14描述了使用其它最先萃取溶剂的其它萃取顺序的实施例。图IO描绘了实施例2至2.5.2，其中最先萃取溶剂(实施例2)为乙酸乙酯。图11描绘了实施例3至3.6，其中最先萃取溶剂(实施例3)为乙酸曱酯。图12描绘了实施例4至4.4.5,其中最先萃取溶剂为二乙醚。图13描绘了实施例5至5.4.5，其中最先萃取溶剂为乙酸曱酯和二乙醚(25:75v/v)的混合物。图14描绘了实施例6至6.5.1,其中最先萃取溶剂为乙酸甲酯和二乙醚(75:25v/v)的混合物。本领域技术人员应理解，尽管以上实施例涉及水性可可多酚提取物的选择性萃取，但是依照所提供的实施例，任何包含极性质子低聚物的物质都可以被选择性萃取。适当的极性质子低聚物包括原花色素、可水解单宁、低聚糖、低聚核苷酸、多肽、丙烯酰胺、聚山梨醇酯、聚酮、泊洛沙姆、聚乙二醇、聚氧乙烯醇和聚乙烯醇。当极性质子低聚物为原花色素时，它们可以是原芽菜定(proapigeninidins)、原木犀草定(proluteolinidins)、原五羟黄酮(protricetinidins)、原花葵素(propelargonidins)、原花翠素(prodelphinidins)、原桂金合欢定(proguibourtinidins)、原四轻黄酮(profisetinidins)、原刺槐定(prorobinetinidins)、proteracacinidins和/或原黑金合？欠素(promelacacinidins)。尽管参考某些具体实施方式对本发明进行了描述，但是可以理解，本领域技术人员可以进行多种修改和变更，而不脱离本发明。因此，希望通过附加的权利要求涵盖可落入本发明真正精神和范围内的所有这些修改和变更。权利要求1.一种从可可多酚的水性混合物中选择性萃取可可原花青素的方法，所述方法包括以下步骤用乙酸正丁酯萃取水性混合物，分离富集原花青素二聚物及更高低聚物的水相和富集儿茶素和表儿茶素的乙酸正丁酯相。2.权利要求1的方法，其还包括以下步骤用二乙醚或乙酸甲酯和二乙醚的混合物来萃取水相，分离富集原花青素三聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素二聚物的乙酸甲酯或乙酸曱酯-二乙醚相。3.权利要求2的方法，其还包括以下步骤用乙酸乙酯萃取水相，分离富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。4.权利要求3的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯和二乙醚的混合物萃取水相，分离富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素五聚物的乙酸甲酯-二乙醚相。5.权利要求4的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物的乙酸甲酯相。6.权利要求5的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯萃取水相，分离水相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。7.权利要求2的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的乙酸曱酯相。8.权利要求7的方法，其还包括以下步骤除去乙酸甲酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用乙酸乙酯萃取水溶液，分离富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的水相和富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。9.权利要求8的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯和二乙醚的混合物萃取水相，分离富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物的水相和富集原花青素五聚物的乙酸曱酯-二乙醚相。10.权利要求7的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯萃取水相，分离水相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸曱酯相。11.权利要求l的方法，其还包括以下步骤用乙酸乙酯萃取水相，分离富集原花青素五聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素二聚物、三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。12.权利要求11的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水相，分离富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素五聚物的乙酸甲酯-二乙醚相。13.权利要求12的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物的乙酸甲酯相。14.权利要求13的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯萃取水相，分离水相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸曱酯相。15.权利要求11的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的乙酸甲酯相。16.权利要求15的方法，其还包括以下步骤除去乙酸甲酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物的水相和富集原花青素五聚物的乙S交甲酯-二乙醚相。17.权利要求11的方法，其还包括以下步骤除去乙酸乙酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用二乙醚或乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素三聚物及四聚物的水相和富集原花青素二聚物的二乙醚相或乙酸甲酯-二乙醚相。18.权利要求l的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水相，分离富集原花青素六聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物和五聚物的乙酸曱酯-二乙醚相。19.权利要求18的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素六聚物、七聚物和八聚物的乙酸甲酯相。20.权利要求19的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯萃取水相，分离水相和富集原花青素九聚物及更高低聚物的乙酸甲酯相。21.权利要求18的方法，其还包括以下步骤除去乙酸曱酯相-二乙醚相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用二乙醚或乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素三聚物、四聚物和五聚物的水相和富集原花青素二聚物的二乙醚相或乙酸曱酯-二乙醚相。22.权利要求21的方法，其还包括以下步骤用乙酸乙酯萃取水相，分离富集原花青素五聚物的水相和富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。23.权利要求l的方法，其还包括以下步骤用乙酸甲酯萃取水相，分离富集原花青素九聚物及更高低聚物的水相和富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的乙酸曱酯相。24.权利要求23的方法，其还包括以下步骤除去乙酸曱酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用二乙醚或乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物和八聚物的水相和富集原花青素二聚物的二乙醚相或乙酸曱酉旨-二乙酸相。25.权利要求24的方法，其还包括以下步骤用乙酸乙酯萃取水相，分离富集原花青素五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量的九聚物的水相和富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。26.权利要求25的方法，其还包括以下步骤用乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水相，分离富集原花青素六聚物、七聚物及八聚物的水相和富集原花青素五聚物的乙酸甲酯-二乙醚相。27.权利要求23的方法，其还包括以下步骤除去乙酸曱酯相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用乙酸曱酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素六聚物、七聚物及八聚物的水相和富集原花青素二聚物、三聚物、四聚物及五聚物的乙酸甲酯-二乙醚相。28.权利要求27的方法，其还包括以下步骤除去乙酸甲酯-二乙醚相中的溶剂，将所得产物溶于水中，用二乙醚或乙酸甲酯和二乙醚的混合物萃取水溶液，分离富集原花青素三聚物、四聚物及五聚物的水相和富集原花青素二聚物的二乙醚相或乙酸曱酯-二乙醚相。29.权利要求28的方法，其还包括以下步骤用乙酸乙酯萃取水相，分离富集原花青素五聚物的水相和富集原花青素三聚物和四聚物的乙酸乙酯相。30.权利要求2、17、21、24或28的方法，其中所述乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为25:75(v/v)。31.权利要求4、9、12、16、18、26或27的方法，其中所述乙酸曱酯和二乙醚的混合物约为75:25(v/v)。32.—种从水性混合物中选择性萃取特定组的儿茶素及表儿茶素单体和/或其原花青素低聚物的方法，所述水性混合物包含所述单体和/或低聚物，该方法包括以下步骤(a)用选自乙酸曱酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二乙醚及乙酸甲酯和二乙醚的混合物的有机溶剂萃取水性混合物；(b)分离水相和溶剂相；(c)用上述溶剂之一萃取水相，得到富集特定组的单体和/或低聚物的水相和有机相；和(d)任选重复萃取和分离步骤。33.权利要求32的方法，其中乙酸正丁酯用于步骤(a)，以选择性萃取儿茶素、表儿茶素及少量二聚物；或者其中乙酸乙酯用于步骤(a)，以选择性萃取儿茶素、表儿茶素及少量二聚物、三聚物和四聚物；或者其中乙酸曱酯用于步骤(a),以选择性萃取儿茶素、表儿茶素、二聚物、三聚物、四聚物、五聚物、六聚物、七聚物、八聚物及少量的九聚物；或者其中二乙醚用于步骤(a)，以选择性萃取儿茶素、表儿茶素和二聚物；或者其中乙酸曱酯和二乙醚的混合物(25:75v/v)用于步骤(a)，以选择性萃取儿茶素、表儿茶素、二聚物及少量的三聚物；或者其中乙酸曱酯和二乙醚的混合物(75:25v/v)用于步骤(a),以选择性萃取儿茶素、表儿茶素、二聚物、三聚物、四聚物、五聚物及少量的六聚物。全文摘要本发明描述了从可可多酚的水性混合物中选择性萃取可可原花青素的方法，使用特定顺序的溶剂来萃取选择的原花青素单体和/或低聚物。所述溶剂为乙酸正丁酯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二乙醚或者乙酸甲酯和二乙醚的混合物。优选地，首先用乙酸正丁酯萃取可可多酚的水性混合物。乙酸甲酯和二乙醚的混合物为25∶75至75∶25(v/v)。文档编号C07D311/62GK101316831SQ200680044192公开日2008年12月3日申请日期2006年10月3日优先权日2005年10月3日发明者J·P·穆纳富,M·A·凯姆,R·J·罗宾斯申请人:玛尔斯有限公司