专利名称：新的共轭亚油酸衍生物及它的制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及化学药物领域，属于新的共轭亚油酸衍生物，具体涉及一种共轭亚油酸左旋肉碱酯的新化合物，和该化合物的制备方法及用途。
背景技术：
共轭亚油酸(简称CLA)和左旋肉碱(简称L-肉碱)都是人体必须营养物质。左旋肉碱在动物体内有生物活性，以天然成分存在于微生物，植物和哺乳动物组织中。L-肉碱，又称肉毒碱，化学名为L-β-羟基-γ-三甲铵丁酸[(CH3)3-N+-CH2-CHOH-CH2-COO-]，是一种安全、有效的水溶性氨基酸。
L-肉碱是二十世纪初由俄国科学家发现的。由于L-肉碱对人体和动物安全无毒性，无刺激和诱变性，被美国FDA和世界卫生组织确定为无毒添加剂。很多生产厂家把L肉碱作为一种重要的减肥添加剂之一。有文献报道L-肉碱还有减轻神经紧张、促进心血管病人康复、增强免疫力、加速蛋白质合成、促进伤口愈合、保护细胞膜的稳定性等作用。
共轭亚油酸是一系列具有共轭双键的十八碳二烯酸，包括顺反构型，共有十几种同分异构体，但其分子式、分子量相同，其功效相同。天然共轭亚油主要来自瘤胃动物如牛、羊等的乳脂和肉制品中，目前，大量CLA的获得通常采用含亚油酸较高的植物油如红花籽油，葵花籽油等通过人工合成得到共轭亚油酸，人工合成的CLA仍是多种异构体的混合物，主要是含有顺9，反11-CLA和/或反10，顺12-CLA。
共轭亚油酸是一种新兴的营养物质。大量研究发现CLA具有抗癌、降脂、抗动脉粥样硬化、调节能量代谢、增强机体免疫力与促进生长发育等多种重要的生理活性，其中共轭亚油酸的减肥降脂作用尤其受到青睐。
共轭亚油酸和L-肉碱这物质均被分别制备食品或药品，广泛用于保健，但只能各起各自的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种既具有共轭亚油酸的作用又有L-肉碱作用的新的化合物，并提供其制备方法和用途。
为实施本发明的目的，所采取的技术方案是提供一种新的共轭亚油酸衍生物，该化合物是由共轭亚油酸和左旋肉碱为原料制备得到的共轭亚油酸左旋肉碱酯，化学名为R-3-十八碳二烯酰氧基-4-N，N，N-三甲铵丁酸，分子式为C25H45O4N，产品为无色或淡黄色的半固体物。
本发明所提供的新化合物，其依据在于左旋肉碱在脂肪代谢过程中起着关键的作用，共轭亚油酸和左旋肉碱存在着密切的代谢相关性，二者合用在发挥药效活性方面表现出协同或互补的作用。作为能量底物的脂肪酸的氧化，需在线粒体内的β-区进行，脂肪酸因不能直接穿透线粒体内膜而需一种特殊的运送机制将脂酰COA运送到β-氧化降解区域----线粒体基质内。一方面，活化的中长链脂肪酸是由肉碱携带着穿过线粒体内膜的，首先，脂肪酸由合成酶活化形成脂酰辅酶A，在膜外侧的转移酶的作用下，转化为脂酰肉碱而移至膜内，再经膜内的转移酶的作用，脱去肉碱重新转变成脂酰辅酶A，肉碱在这一过程中是唯一的载体；另一方面，共轭亚油酸能增加肉碱棕榈酰基转移酶的活性，促进脂肪的燃烧。此外，共轭亚油酸还能通过减低脂肪的沉积、促进脂肪细胞调亡的途径起到互补的作用。所以将共轭亚油酸和左旋肉碱制备成一种新的化合物，在体内代谢后能发挥更好的作用。
共轭亚油酸是一系列具有共轭双键的十八碳二烯酸，包括顺反构型，共有十几种同分异构体，本发明所说的共轭亚油酸可以是这系列共轭双键的十八碳二烯酸同分异构体的混合物，也可以是某一较纯的构型，当所用的共轭亚油酸为顺9，反11-十八碳二烯酸时，所制得的产品为R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸，结构式为 当所用的共轭亚油酸为反10，顺12-十八碳二烯酸时，所制得的产品为R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸，结构式为
所用共轭亚油酸中含有顺9，反11-十八碳二烯酸和反10，顺12-十八碳二烯酸，所制得的产品共轭亚油酸左旋肉碱酯中含有R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸和R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸。
本发明所提供的共轭亚油酸左旋肉碱酯有很好的稳定性，可用作防治肥胖、降血脂、降血糖、降血压、防治骨质疏松的药物或食品，并可添加一种或多种食品或药学上可接受的常规载体制成含有共轭亚油酸左旋肉碱酯组合物，例如添加常规的药用辅料制成片剂、胶囊(包括缓释和控释制剂)、丸剂、散剂、颗粒剂等固体口服制剂；产品用量无需严格控制，所用量取决于症状、患者的体重和年龄等，本发明共轭亚油酸左旋肉碱酯的常用量可以是每日0.1～5g活性物质的较大范围内变化，并且该剂量通常可优选每天一次或分成2-4次服用。
本发明所提供的共轭亚油酸衍生物的制备方法，是用共轭亚油酸和左旋肉碱为原料，采用化学合成法或生物技术法制备，反应式为 所说的化学合成法按如下步骤进行(1)在氮气保护下，将共轭亚油酸置于容器中，加入强酸或强碱作催化剂加热回流1～5小时，搅拌下，加入左旋肉碱，继续搅拌反应12～24小时，原料投料重量比共轭亚油酸∶左旋肉碱为4∶1～8，催化剂的用量为共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的2-10％；(2)取上述所得的反应物料加甲醇至溶解，然后用正己烷萃取，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入蒸馏水洗涤，洗去未反应的左旋肉碱，即得无色或淡黄色半固体的共轭亚油酸左旋肉碱酯。
所说的生物技术法按如下步骤进行(1)在无溶剂或有机溶剂体系下，将共轭亚油酸与左旋肉碱混合置于带盖的容器中，加入游离脂肪酶或固定化酶，再加入适量的缓冲液调节pH值至6～8，在30～45℃下反应，在反应1～11小时期间，加入共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的5～10％的分子筛，继续保持在30～45℃反应，全反应过程为12～24h，然后，加入甲醇终止反应，过滤去掉分子筛和脂肪酶或固定化酶，原料投料重量比共轭亚油酸∶左旋肉碱为4∶1～8，游离脂肪酶或固定化酶的用量为共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的2-10％；(2)取上述过滤后的甲醇层，加入正己烷萃取，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入蒸馏水洗涤，洗去未反应的左旋肉碱，即得无色或淡黄色半固体共轭亚油酸左旋肉碱酯。
当所用的原料共轭亚油酸为顺9，反11-十八碳二烯酸，所制得的产品为R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸，用反10，顺12-十八碳二烯酸为原料，所制得的产品为R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸，共轭亚油酸中含有顺9，反11-十八碳二烯酸和反10，顺12-十八碳二烯酸，所制得的产品共轭亚油酸左旋肉碱酯中含有R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸和R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸。
化学法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯试验结果如下表1表1化学法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯试验结果
生物技术法工艺条件选择试验实验结果见表2、3、4。
表2酶种类的选择
表3酶用量对转化率的影响
表4原料投料用量对转化率的影响
本发明所提供的共轭亚油酸左旋肉碱酯的用途，可用于制备治疗肥胖、降血脂、降血糖、降血压、防治骨质疏松的药物或食品或用作饲料添加剂。
下面通过药效学试验来证实其用途试验例1减肥、降血脂、降血糖作用1.1实验动物健康SD大鼠30只，雄性，体重80-100g。
1.2实验试剂共轭亚油酸左旋肉碱酯样品20g分散于100mL1.5％羧甲基纤维素水溶液中，经口灌胃，喂1mL/100g体重。
1.3高脂饲料配方基础饲料(根据美国营养协会推荐的AIN-93G配方配制而成的纯合成饲料)73.8％、猪油10％、蛋黄粉10％、蔗糖％、胆固醇1％、胆盐0.2％。
1.4实验方法将大鼠随机分为3组，分别为空白对照组，模型对照组，共轭亚油酸肉碱酯组。其中空白对照组给予基础饲料自由摄食，同时以等量1.5％羧甲基纤维素水溶液灌胃；模型对照组给予高脂饲料自由饮食，同时以等量1.5％羧甲基纤维素水溶液灌胃；共轭亚油酸肉碱酯组给予高脂饲料自由饮食，并以1mL/100g体重灌胃。实验45天。实验期间记录大鼠的给食量、剩食量以及撒食量，每周定期称体重1次。
实验第40天大鼠禁食12h，测定空腹血糖值，给药后2h后除空白对照组灌胃生理盐水外，其余各组灌胃葡萄糖溶液1g/kg体重。给糖后30，60min和120min测定尾静脉血糖值。
实验结束时大鼠禁食12小时，称体重，眼眶取血测血脂(总胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C)和血糖GLU水平，剖腹取体内脂肪垫(睾丸及肾周围脂肪垫)并称重，计算脂体比。
1.5试验结果与模型对照组相比，共轭亚油酸肉碱酯组动物体重、体脂、脂体比明显降低，血清总胆固醇和甘油三酯明显下降，高密度脂蛋白胆固醇有升高趋势，结果见表6和表7。
表6共轭亚油酸肉碱酯对大鼠体重和体脂的影响
*与模型对照组比，p＜0.05；**与模型对照组比，p＜0.01。
表7共轭亚油酸肉碱酯对大鼠血脂的影响
*与模型对照组比，p＜0.05；**与模型对照组比，p＜0.01。
表8共轭亚油酸肉碱酯对大鼠糖耐量的影响
*与模型组相比，p＜0.05；**与模型组相比，p＜0.01
由表8可知，共轭亚油酸肉碱酯组能降低大鼠空腹血糖水平，且在30min时对外源性葡萄糖引起的血糖升高有抵抗作用，并且起效较快。在60min和120min时仍能抵抗外源性葡萄糖引起的血糖升高。
结论本发明的新化合物具有显著减肥功能和降血脂降血糖作用。
试验例2.防治骨质疏松作用2.1实验动物健康雄性Balb/c小鼠20只，体重23-27g。
2.2实验试剂共轭亚油酸肉碱酯样品20g分散于100mL1.5％羧甲基纤维素水溶液中。
2.3实验方法将大鼠按体重随机分为2组，分别为空白对照组和共轭亚油酸肉碱酯组。两组均给予基础饲料自由摄食，其中空白对照组以0.1mL/10g体重1.5％羧甲基纤维素水溶液经口灌胃；共轭亚油酸肉碱酯组以0.1mL/10g体重受试物溶液经口灌胃，实验14周。
实验结束时大鼠禁食12小时，称体重，断颈处死动物。分离左侧股骨，采用双能X线骨密度仪测定其密度。
2.4实验结果实验结果见表9，由表可知，本发明新化合物能显著降低小鼠的体重和增加小鼠的股骨密度，进一步验证该化合物的减肥作用，同时又能增加骨质密度，防治骨质疏松。
表9共轭亚油酸左旋肉碱酯对小鼠骨密度的影响
*与对照组比，p＜0.05.
本发明的有益效果1、本发明提供了一个新的化合物，共轭亚油酸肉碱酯具有减肥、降血脂、降血糖、降血压和防治骨质疏松的作用，可制备成相关的药物或食品或用作饲料添加剂等；2、本发明所提供的化合物的制备方法工艺简单，易实施工业化的大批量生产。
图1.为共轭亚油酸左旋肉碱酯的ESI-MS2.为共轭亚油酸左旋肉碱酯的1H-NMR3.为共轭亚油酸左旋肉碱酯的13C-NMRδ图下面通过具体实施例和附图进一步阐述本发明的技术方案具体实施方式
本发明具体实施例所用到的左旋肉碱由沈阳东宇精细化工有限公司提供，共轭亚油酸由中山市尤利卡天然药物有限公司提供.
实施例1化学合成法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在氮气保护下，将共轭亚油酸2.8g置于圆底烧瓶中，加入0.44g的硫酸作催化剂，加热回流1小时，在搅拌条件下，加入1.6g左旋肉碱，继续搅拌反应8小时。反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体3.1g，转化率为73.4％。采用仪器分析鉴定产品的结构一、ESI-MS(质荷比m/z)的测定仪器Bruker esquire HCT质谱仪方法将共轭亚油酸左旋肉碱酯溶于甲醇水溶液(甲醇∶水＝1∶1)配成10μg/ml的储备液，进样量为10μl。
结果如图1所示，分子离子峰为[M+1]+424；二级碎片离子峰为340.8(M-C6H11+)，262.8(C18H31O+)，244.8(M-C13H24+)，188.8(C8H15NO4+)，160.8(C7H15NO3+)；上述结果表明共轭亚油酸左旋肉碱酯的分子量为423，这与它的理论分子量423.63基本一致。
二、核磁共振法仪器MPMS XL-7 300核磁共振仪方法将共轭亚油酸左旋肉碱酯20mg溶于CD30D-d4中，测定其氢谱和碳谱。
结果如图2所示，1H-NMR数据为δ6.3(1H，m)；5.9(1H，m)；5.6(1H，m)；5.4(1H，m)；5.3(1H，m)；4.1-3.6(2H，m)；3.3(9H，s)；2.4(2H，t)；2.2(2H，t)；2.1(2H，m)；2.0(2H，m)；1.6(2H，m)；1.4(4H，m)；1.3(12H，m)；O.9(3H，t)。如图3所示，13C-NMRδ数据为176.9；176.7；134.1；129.3；128.7；125.7；70.7；64.2；53.8；42.3；36.0；32.7；29.4；27.4；25.8；22.6；三、旋光性测定仪器旋光仪方法将共轭亚油酸左旋肉碱酯溶于甲醇中，测定其旋光性。
结果共轭亚油酸左旋肉碱酯为左旋。
上述结果表明该合成方法不会改变化合物的旋光性，是可行的。经MS和NMR证实产品的结构为共轭亚油酸左旋肉碱酯。
实施例2化学合成法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在氮气保护下，将共轭亚油酸2.8g置于圆底烧瓶中，加入0.07g对甲苯磺酸催化剂，加热回流1小时，在搅拌条件下，加入0.7g左旋肉碱，继续搅拌反应8小时。反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体0.98g，转化率为10.4％。
实施例3化学合成法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在氮气保护下，将共轭亚油酸28g置于圆底烧瓶中，加入2g的硫酸催化剂，加热回流5小时，在搅拌条件下，加入16g左旋肉碱，继续搅拌反应24小时，反应结束后加甲醇2ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入2ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体27.4g，转化率为65％。
实施例4化学合成法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在氮气保护下，将共轭亚油酸56g置于圆底烧瓶中，加入5g的硫酸催化剂，加热回流5小时，在搅拌条件下，加入32g左旋肉碱，继续搅拌反应24小时，反应结束后加甲醇50ml溶解，然后加入50ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入50ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，59.3g，转化率为70.2％。
实施例5本发明产品I制备在氮气保护下，将c9，t11-CLA 2.8g置于圆底烧瓶中，加入0.44g的对甲苯磺酸催化剂，加热回流1小时，在搅拌条件下，加入1.6g左旋肉碱，继续搅拌反应8小时。反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，2.32g，转化率为55％。
实施例6本发明产品II制备在氮气保护下，将t10，c12-CLA 2.8g置于圆底烧瓶中，加入0.22g的对甲苯磺酸催化剂，加热回流1小时，在搅拌条件下，加入1.6g左旋肉碱，继续搅拌反应8小时。反应结束后加甲醇2ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入2ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，2.27g，转化率为53.8％。
实施例7生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将1.6g左旋肉碱与2.8g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，2.57g，转化率为60.9％。产品经鉴定，结果同实施例1。
实施例8生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯将底物1.6g左旋肉碱与5.4g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入10ml乙腈，然后再加入140mg Amano AY 30脂肪酶和调pH至6.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入350mg的分子筛，继续12h至结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，1.94g，转化率为45.9％。
实施例9生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物1.6g左旋肉碱与3.2g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入96mg Amano AYS脂肪酶和调节pH至8.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时结束，加入甲醇终止反应，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，1.30g，转化率为30.9％。
实施例10生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物1.6g左旋肉碱与2.8g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入88mg Amano AK脂肪酶和调pH至7.0磷酸缓冲液，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时至结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，2.75g，转化率为65％。
实施例11生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物1.6g左旋肉碱与2.8g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入220mg Novezym 435脂肪酶和调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为45℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时，结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，1.95g，转化率为46％。
实施例12生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物1.6g左旋肉碱与2.8g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入100mg黑曲酶脂肪酶和调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，1.52g，转化率为36％。
实施例13生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物16g左旋肉碱与28g共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入880mg Amano AY 30脂肪酶和调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为30℃，反应12h后，加入4.4g分子筛，继续反应12结束，反应结束后加甲醇20ml溶解，然后加入50ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入20ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体，27.9g，转化率为66％。
实施例14生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将底物32g左旋肉碱与56g共轭亚油酸(含顺9，反11-十八碳二烯酸和反10，顺12-十八碳二烯酸)，混合置于三角瓶中，加入1.76gAmano AY 30脂肪酶和调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为35℃，反应12h后，加入6g的分子筛，继续反应12小时至结束，反应结束后加甲醇40ml溶解，然后加入100ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入40ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体55.8g，产品中含有R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸和R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸。转化率为66％。
实施例15生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将1.6g左旋肉碱与2.8g c9，t11-共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体-产品I，2.57g，转化率为60.9％。
实施例16生物技术方法制备共轭亚油酸左旋肉碱酯在无溶剂体系中，将1.6g左旋肉碱与2.8g t10，c12-共轭亚油酸混合置于三角瓶中，加入88mg Amano AY 30脂肪酶，调pH至7.0，然后放入水浴摇床上振摇，水浴温度为40℃，反应12h后，加入300mg的分子筛，继续反应12小时结束，反应结束后加甲醇10ml溶解，然后加入5ml正己烷，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入10ml蒸馏水，洗去未反应的左旋肉碱，即可得到淡黄色半固体为产品II，2.57g，转化率为60.9％.
实施例17共轭亚油酸左旋肉碱酯硬胶囊物质称量共轭亚油酸左旋肉碱酯100g，茶多酚0.02g，羟丙纤维素1g，微晶纤维素1g，硬脂酸镁0.5g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯，茶多酚，羟丙纤维素和微晶纤维素混合均匀，置流化床制粒机中制粒，颗粒水分小于5％，30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀后的颗粒填充胶囊即得。成人剂量3.5-4.0g/日。
实施例18共轭亚油酸左旋肉碱酯片剂物质称量共轭亚油酸钙左旋肉碱酯100g，维生素E 0.04g，淀粉100g，羟丙纤维素1g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯，维生素E，淀粉和羟丙纤维素混合均匀，以压片机压片，密封包装即成。成人剂量4.0-5.0g/日。
实施例19共轭亚油酸左旋肉碱酯薄膜包衣片剂物质称量共轭亚油酸左旋肉碱酯100g，茶多酚0.03g，淀粉100g，微晶纤维素2g，硬脂酸镁0.5g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯，茶多酚，淀粉和羟丙纤维素混合均匀，按常规片剂工艺压片制素片，再用3％HPMC(含1％钛白粉)进行薄膜包衣，制成薄膜包衣片剂。成人剂量4.5-5.5g/日。
实施20共轭亚油酸左旋肉碱酯散剂物质称量共轭亚油酸左旋肉碱酯100g，茶多酚0.01g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯，茶多酚混合均匀，粉碎至150～200目，采用防水、避光、无污染的包装材料进行包装。成人剂量3.5-4.0g/日。
实施例21共轭亚油酸左旋肉碱酯颗粒剂物质称量共轭亚油酸左旋肉碱酯100g，茶多酚0.04g，微晶纤维素1g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯，茶多酚和微晶纤维素混合均匀，用5％PVP乙醇液制粒，干燥，整粒，采用防水、避光、无污染的包装材料进行包装。成人剂量3.5-4.0g/日。
实施例22减肥共轭亚油酸左旋肉碱酯奶粉物质称量脱脂鲜牛奶10L，共轭亚油酸150ml(2.5％V/V)，共轭亚油酸左旋肉碱酯100g(0.3％M/V)，维生素A 0.03g、维生素D0.0002g。
把称量好的共轭亚油酸左旋肉碱酯、维生素A、D与共轭亚油酸混合，牛奶加热至40~45℃，把混合物加入脱脂鲜牛奶中，搅拌，在35~40Mpa压力下均质一次。85℃短时杀菌后，以进风温度控制在160~165℃，出风温度控制在75~80℃左右的条件进行喷雾干燥，采用防水、避光、无污染的包装材料进行包装。成人剂量8-12g/日。
权利要求
1.一种新的共轭亚油酸衍生物，其特征在于该化合物是由共轭亚油酸和左旋肉碱为原料制得的共轭亚油酸左旋肉碱酯，化学名为R-3-十八碳二烯酰氧基-4-N，N，N-三甲铵丁酸，分子式为C25H45O4N，产品为无色或淡黄色的半固体物。
2.根据权利要求1所述的共轭亚油酸衍生物，其特征在于所述的共轭亚油酸左旋肉碱酯中至少含有两个同分异构体，一是R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(I)，二是R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(II)，其结构式如下
3.一种组合物，其特征在于含有权利要求1所述的共轭亚油酸左旋肉碱酯和药学或食品上可接受的载体。
4.一种如权利要求1所述的共轭亚油酸衍生物的制备方法，其特征在于用共轭亚油酸和左旋肉碱为原料，共轭亚油酸和左旋肉碱采用化学合成法或生物技术法制备，所说的化学合成法按如下步骤进行(1)在氮气保护下，将共轭亚油酸置于容器中，加入强酸或强碱作催化剂加热回流1～5小时，搅拌下，加入左旋肉碱，继续搅拌反应12-24小时，原料投料重量比共轭亚油酸∶左旋肉碱为4∶1～8，催化剂的用量为共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的2-10％；(2)取上述所得的反应物料加甲醇至溶解，然后用正己烷萃取，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入蒸馏水洗涤，洗去未反应的左旋肉碱，即得无色或淡黄色半固体的共轭亚油酸左旋肉碱酯；所说的生物技术法按如下步骤进行(1)在无溶剂或有机溶剂体系下，将共轭亚油酸与左旋肉碱混合置于带盖的容器中，加入游离脂肪酶或固定化酶，再加入适量的缓冲液调节pH值至6～8，在30～45℃下反应，在反应1～11小时期间，加入共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的5～10％的分子筛，继续保持在30～45℃反应，全反应过程为12～24h，然后，加入甲醇终止反应，过滤去掉分子筛和脂肪酶或固定化酶，原料投料重量比共轭亚油酸∶左旋肉碱为4∶1～8，游离脂肪酶或固定化酶的用量为共轭亚油酸和左旋肉碱总重量的2-10％；(2)取上述过滤后的甲醇层，加入正己烷萃取，洗去游离脂肪酸，取甲醇层浓缩至干，加入蒸馏水洗涤，洗去未反应的左旋肉碱，即得无色或淡黄色半固体共轭亚油酸左旋肉碱酯。
5.根据权利要求4所述的共轭亚油酸衍生物的制备方法，其特征在于所说的原料共轭亚油酸为顺9，反11-十八碳二烯酸，所制得的产品为R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(I)，用反10，顺12-十八碳二烯酸为原料，所制得的产品为R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(II)，共轭亚油酸中含有顺9，反11-十八碳二烯酸和反10，顺12-十八碳二烯酸，所制得的产品共轭亚油酸左旋肉碱酯中含有R-3-(顺9，反11-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(I)和R-3-(反10，顺12-十八碳二烯酰氧基)-4-N，N，N-三甲铵丁酸(II)。
6.一种如权利要求1所述的共轭亚油酸左旋肉碱酯新化合物的用途，在于制备治疗肥胖、降血脂、降血糖、降血压、防治骨质疏松的药物或食品或饲料添加剂。
全文摘要
新的共轭亚油酸衍生物及它的制备方法与用途，涉及化学药物领域。该化合物是由共轭亚油酸和左旋肉碱为原料，用化学合成法或生物技术法制备得到的共轭亚油酸左旋肉碱酯，化学名为R－3－十八碳二烯酰氧基－4－N，N，N－三甲铵丁酸，分子式为C
文档编号C07C227/00GK101066932SQ20071002837
公开日2007年11月7日 申请日期2007年6月1日 优先权日2007年6月1日
发明者杨得坡, 李珍, 梁淑明, 冀军峰, 王冬梅, 冀红斌, 朱龙平 申请人:中山市尤利卡天然药物有限公司, 中山大学