专利名称：：原花青素b2的提取方法
技术领域：
：本发明涉及一种原花青素B2的提取方法。技术背景原花青素(proanthocyanidins或procyanidins，简称PC)是植物界中广泛存在的一大类多酚化合物的总称。起初统称为縮合鞣质或黄烷醇类。随着分离鉴定技术的不断发展以及对此类物质研究的不断深入，现已成为独立的一大类物质，统称之为原花青素。原花青素是由多羟基黄烷-3-醇单元构成的低聚体和多聚体，由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成[1]。原花青素具有抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、抗糖尿病、抗衰老、抗辐射、减肥美容等多种保健功效[2—3]。原花青素B2是原花青素中主要的活性成分，是由两个表儿茶素结构以4-8位连接而成。目前市场上销售的含有原花青素的植物提取物中原花青素B2的含量较低为1-15%。本发明将提供一种制备高含量原花青素B2的方法。参考文献[1]FulekiT,RicardodasilvaJM.Catechinandprocyanidincompositionofseedsfromgrapecultivategrowninontario[J]./々n'c尸oocCTem，1997，45:1156-1160.[2]ChangH.ResearchProgressinPharmacologicalactivityofOligomericProanthocyanidinsinGrapeSeedsExtracts[J].Fore/g72Me&'ca/5We"ces(Sec"o"0//fygz'e"W(国外医学卫生学分册)，2005，32:72-76.[3]ZhangBR,LaoYX,SuWW.ResearchandDevelopmentStatusQuoofOligomericProanthocyanidins[J].7on<"a/o/C/'"eseAfoafc/"a/Afafer/a/s(中药材)，2003，26:卯5-908.
发明内容本发明的目的是提供一种原花青素B2的提取方法。本发明的技术方案概述如下一种原花青素B2的提取方法，包括如下步骤(1)以松科松属植物的根、树皮、叶；或蔷薇科植物的根、茎、叶、果实、种子；或葡萄科葡萄属植物的根、茎、果实、种子；或豆科植物的茎或种皮为原料；向所述原料中加入4-10重量倍的水或4-10重量倍的体积百分比浓度为10%~95%的乙醇水溶液或4-10重量倍的10%~95%的甲醇水溶液，常压，70-95'C浸提取1~5小时，过滤，提取次数为1~5次，提取液合并静置至温度低于50度，弃沉淀，得上清液，在温度56(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮至糖度2-40，得到提取物；(2)将所述提取物以重量比为1:110的比例分散至水中，经大孔树脂吸附，用水及体积百分比浓度为10%~95%的乙醇水溶液或水及体积百分比浓度为10%~95%的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，得糖度为1040的浓縮物；(3)将步骤(2)的产物进行聚酰胺树脂分离，用水及体积百分比浓度为20-95%的乙醇水溶液或水及体积百分比浓度为20-95%的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC,真空度为0.060.08MPa减压浓縮，得糖度为10-20的原花青素B2。所述步骤还可以包括(4)将所述步骤(3)制备的原花青素B2进行0DS中低压柱层析，用水及体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^60。C，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，得糖度为10-20的原花青素B2。所述步骤还可以包括(5)将所述步骤(4)制备的原花青素B2进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10-30%的甲醇进行等浓度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为10-20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2。所述步骤(1)中过滤所用滤网的目数为80120。所述歩骤(2)中所述大孔树脂为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。所述步骤(3)中所述的薄层层析检测方法采用聚酰胺薄膜，展开溶剂为体积比为4:1:3的正丁醇-醋酸-水，显色剂为重量百分浓度为5%三氯化铁乙醇溶液，与原花青素B2标准品对照。本发明的优点市场上销售的含有原花青素B2的提取物含量相对较低，一般只有1-15%，本发明提供的方法可以制备20-98%不同含量的原花青素B2的提取物，使20-98%不同含量的原花青素B2的提取物能够达到产业化生产，为20-98%不同含量的原花青素B2提取物的进一步开发利用奠定基础。图1为本发明的原花青素B2的聚酰胺薄膜TLC检测图。图2为本发明的原花青素B2的液相分析图谱。图3为本发明的原花青素B2的ESI-MS图谱。图4为本发明的原花青素B2的^-NMR图谱。图5为本发明的原花青素B2的13C-NMR图谱。具体实施方式原花青素B2的分子结构如下OH本发明的植物来源广泛，松科植物如松科松属植物马尾松、野山松及其同属植物的根、树皮、松针等。蔷薇科山楂属山楂及其同属植物的果实及其叶，蔷薇科苹果属植物苹果及其同属植物的果实及其根、茎枝、树叶，蔷薇科蔷薇属植物含两个亚属单叶蔷薇亚属(Huhhemia)和蔷薇亚属(Rosa)。其中蔷薇亚属包括9个组芹叶组(Pimpinellifollae)、蔷薇组(Rosa)、桂味组(Cinnamomeae)、月季组(Chinenses)、合柱组(Synstylae)、木香组(Banksianae)、金樱子组(Laevigatae)、硕苞蔷薇组(Bractcatae)、小叶组(Microphyllae)，约有200种，本属植物广泛分布于亚、欧、北非、北美各洲寒温带至亚热带地区，我国产82种。到目前为止，国内外学者已对该属植物的30个品种进行过研究，本属植物所含的主要化学成分为原花青素类成分，是提供原花青素成分很好的植物原料。葡萄科葡萄属植物葡萄的根、茎枝、果实和种子。豆科植物落花生的种皮、茎，豆科植物黑大豆的种皮等。下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。—实施例190%以下的原花青素B2含量HPLC检测方法色谱柱C-18250x4.6mm检测波长280nm流速1.0ml/min流动相A:1%磷酸B:乙腈:水=80:20时间(min)0361530506066808385105B比例(％)004101523253050800Stop样品用50%乙醇溶解实施例298°/。原花青素B2的HPLC检测方法:色谱柱C-18250x4.6mm检测波长280nm流速l.Oml/min流动相乙腈:0.5%磷酸=20:80实施例3(1)提取500g葡萄籽中加入2000g的水常压95'C温浸提取5次，提取时间分别为5、4、3、2、l小时，过滤，滤网的目数为120，提取液合并静置至温度低于50度，弃沉淀，得上清液；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中提取液经HP20型大孔树脂吸附，用水、体积百分比ii度为10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度S60'C，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物。原花青素B2的含量为37.4%。步骤(3)中所述的薄层层析检测方法采用聚酰胺薄膜，展开溶剂为体积比为4:1:3的正丁醇-醋酸-水，显色剂为重量百分浓度为5%三氯化铁乙醇溶液，与原花青素B2标准品对照。实施例4步骤(1)-(3)同实施例3;(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原-花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%、20%、30%、40%、50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^6(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为IO，用实施例l的方法测定原花青素B2的含量为75.3。/。。实施例5步骤(1)-(4)同实施例4;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比30%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^6(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2(260mg)。利用ESI-MS、^-NMR和BC-NMR等光谱手段并于文献数据进行对照，鉴定了根据上述方法分离得到的原花青素B的结构。在此基础上利用标准品(美国CHROMDEX公司购买)进行标定，测定原花青素素B2含量为98n/。。原花青素B2淡黄色粉末，聚酰胺薄膜以正丁醇-醋酸-水(4:1:3)展开，Rf为0.3，5%三氯化铁乙醇溶液显单一蓝色斑点。阴离子ESI-MS中给出了准分子离子峰[M-H]-577禾口[M-H+Cl]-612，其'H-NMRG00MHz，inDMSO)中信号交叠较严重，其"C-NMR(75MHz，inDMSO)中信号清晰，与文献相对照进行了全归属，鉴定为原花青素B2，结果见下表。表1本发明中化合物的。C-NMR数据<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>用葡萄的根、茎或果替代实施例3、4、5中的原料，可以获得原花青素B2。实施例6(1)提fe:500g山楂中加入5000g的水常压70。C温浸提取2次，每次4小时，过滤，滤网的目数为80，提取液合并静置至温度低于50度，弃沉淀，得上清液；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中提取液经大孔树脂D101吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50°/。、70%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离:大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，根据原花青素B2的含量高低不同将洗脱液分成三个组分合并，分别在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓缩，糖度为IO，得原花青素B2的富集物。原花青素82的含量为65.9%;用山楂的根、茎和叶取代本实施例的原料，可以获得原花青素B2的含量为33.1%、36.8%。实施例7步骤(1)-步骤(3)同实施例6;(4)ODS中低压柱层析分离将经步骤(.1)-步骤(3)分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%、20%、30%、40%、50°/。的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20,得到的原花青素B2提取物含量分别78.1%。用山楂的根、茎和叶取代本实施例的原料，可以获得原花青素B2的含量为51.4%、71.2%。实施例8步骤(1)-步骤(4)同实施例7;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比30%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为10的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(185mg)。用山楂的根、茎和叶取代本实施例的原料，可以获得较纯的原花青素B2。实施例9(1)提取500g苹果的果树枝加入5000g的体积百分比浓度为10。/。的乙醇水溶液常压7(TC.温浸提取1次，浸提5小时，过滤，滤网的目数为100，提取液在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:3)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂AB-8吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(重量比为1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物，原花青素B2含量为19.4%。实施例10步骤(1)-步骤(3)同实施例9;(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度56(TC，真空度为0.06(T.08MPa减压浓縮，糖度为10，原花青素B2含量为51.2%。实施例11步骤(1)-步骤(4)同实施例10;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^6(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(68mg)。实施例12(1)提取500g青苹果加入5000g的体积百分比浓度为10%的乙醇水溶液常压7(TC温浸提取1次，浸提5小时，过滤，提取液合并在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为IO，得原花青素B2的富集物。(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:3)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂AB-8吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测,收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物。G)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(重量比为1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度《(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物，原花青素82含量为41.2%;(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，原花青素B2含量为89.2%;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^60'C,真空度为0.06-0.08MPa减压浓缩，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(132mg)。实施例13(1)提取500g月季的根加入5000g的体积百分比浓度为95%的乙醇水溶液常压70。C温浸提取3次，浸提5小时，过滤，提取液合并静置至温度低于50度，弃沉淀，得上清液；在温度56CTC，真空度为0.060.08MPa减压浓缩至无醇，'糖度为40，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物分散至水中(重量比为1:10)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂X-5吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30°/。、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度《(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20，得原花青素B2的富集物，原花青素B2含量为38.9%;(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10,原花青素B2含量为76.3e/。；(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比20%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接收体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^60'C，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(275mg)。实施例14(1)提取500g葡萄藤加入2000g的体积百分比浓度为60%的乙醇水溶液常压70。C温浸提取1次，浸提5小时，过滤，提取液合并在温度^60。C，真空度为0.060.08MPa减压浓缩，糖度为20，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:4)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂HPD-100吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检领!)，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度S6(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物；原花青素B2含量为19.2。/。；(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20，原花青素B2含量为55.6%(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法^结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度S60。C，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为10的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(78mg)。实施例15(1)提取500g玫瑰花干品加入2.5L的体积百分比浓度为60%的乙醇水溶液常压70°C温浸提取1次，浸提5小时，过滤，提取液合并在温度56(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为20，得原花青素B2的富集物。(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:4)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂HPD-100A吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度56(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物。(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物，含量为21.8%(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20，含量为53.4%(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10°/。的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为10的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(214mg)。实施例16(1)提取500g松树皮加入4L的体积百分比浓度为10%的甲醇水溶液常压70。C温浸提取l次，浸提5小时，过滤，提取液合并在温度^6(TC，真空度为0.'060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为l:l)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂NKA-II吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、70%、95%的甲醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为15，得原花青素B2的富集物；(1)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(重量比为1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10,得原花青素B2的富集物，原花青素B2含量为17.3%;(2)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为20，原花青素B2含量为59.P/o;(3)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为15的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(65mg)。实施例17(1)提取500g豆科植物黑大豆的种皮加入3L的体积百分比浓度为95。/。的甲醇水溶液常压70。C温浸提取3次，浸提3小时，过滤，提取液合并在温度56(TC，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:10)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂HPD-300吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30%、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为30，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(重量比为1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70°/。、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物，原花青素B2含量为52.7°/。；(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，原花青素B2含量为88.9%;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^6(TC，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(95mg)。实施例18(1)提取500g豆科植物落花生的种皮加入3L的体积百分比浓度为95%的甲醇水溶液常压70'C温浸提取3次，浸提3小时，过滤，提取液合并在温度S60'C，真空度为0.06~0.08MPa减压浓縮，糖度为40，得原花青素B2的富集物；(2)大孔树脂吸附分离将(1)中B2提取物用水分散(重量比为1:10)，静置2小时，弃去沉淀，上清液经大孔树脂HPD-300吸附，用水、体积百分比浓度为10%、30°/。、50%、70%、95%的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将其合并，在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为30，得原花青素B2的富集物；(3)聚酰胺树脂分离大孔树脂吸附分离后得到的原花青素B2的富集物分散至水中(重量比1:4)进行聚酰胺树脂分离，用水、体积百分比浓度为20%、50%、70%、95%的乙醇水溶液，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度56(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，得原花青素B2的富集物，原花青素B2含量为56.4%;(4)ODS中低压柱层析分离将通过聚酰胺分离后富含原花青素B2的组分进行ODS中低压柱层析，用水、体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，每50ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度^60'C，真空度为0.060.08MPa减压浓縮，糖度为10，原花青素B2含量为85.1%;(5)SephadexLH-20进行纯化将(4)中得到的含有原花青素B2的组分进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10%的甲醇进行洗脱，每10ml作为一个接受体积，通过薄层层析等方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度560'C,真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2的纯品(219mg)。权利要求1.一种原花青素B2的提取方法，其特征是包括如下步骤(1)以松科松属植物的根、树皮、叶；或蔷薇科植物的根、茎、叶、果实、种子；或葡萄科葡萄属植物的根、茎、果实、种子；或豆科植物的茎或种皮为原料；向所述原料中加入4-10重量倍的水或4-10重量倍的体积百分比浓度为10％～95％的乙醇水溶液或4-10重量倍的10％～95％的甲醇水溶液，常压，70-95℃浸提取1～5小时，过滤，提取次数为1～5次，提取液合并静置至温度低于50度，弃沉淀，得上清液，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度2-40，得到提取物；(2)将所述提取物以重量比为1∶1～10的比例分散至水中，经大孔树脂吸附，用水及体积百分比浓度为10％～95％的乙醇水溶液或水及体积百分比浓度为10％～95％的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10～40的浓缩物；(3)将步骤(2)的产物进行聚酰胺树脂分离，用水及体积百分比浓度为20-95％的乙醇水溶液或水及体积百分比浓度为20-95％的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10-20的原花青素B2。2.根据权利要求1所述的一种原花青素B2的提取方法，其特征是所述步骤包括(4)将所述步骤(3)制备的原花青素B2进行0DS中低压柱层析，用水及体积百分比为10%-50%的甲醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，并将其在温度S6(TC，真空度为0.060.08MPa减压浓缩，得糖度为10-20的原花青素B2。3.根据权利要求2所述的一种原花青素B2的提取方法，其特征是所述步骤包括(5)将所述步骤(4)制备的原花青素B2进行SephadexLH-20柱层析纯化，用体积百分比10-30%的甲醇进行等浓度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，以原花青素B2纯品作为对照品，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液在温度^60'C，真空度为0.06-0.08MPa减压浓縮，得到糖度为10-20的组分，冷冻干燥得到原花青素B2。4.根据权利要求1或2或3所述的一种原花青素B2的提取方法，其特征是所述步骤(1)中过滤所用滤网的目数为80-120。5.根据权利要求1或2或3所述的一种原花青素B2的提取方法，其特征是所述步骤(2)中所述大孔树脂为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。6.根据权利要求1或2或3所述的一种原花青素B2的提取方法，其特征是所述步骤(3)中所述的薄层层析检测方法采用聚酰胺薄膜，展开溶剂为体积比为4:1:3的正丁醇-醋酸-水，显色剂为重量百分浓度为5%三氯化铁乙醇溶液，与原花青素B2标准品对照。全文摘要本发明公开了一种原花青素B2的提取方法，步骤为(1)以松科、蔷薇科等植物的根、茎或叶为原料，加乙醇水溶液，浸提，过滤，上清液减压浓缩至糖度2-40的提取物；(2)将提取物分散至水中，经大孔树脂吸附，用乙醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，减压浓缩，得糖度为10～40的浓缩物；(3)将浓缩物进行聚酰胺树脂分离，用乙醇水溶液梯度洗脱，通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含原花青素B2的组分，将洗脱液减压浓缩，得糖度为10-20的原花青素B2重量百分含量为20％-50％的提取物。用本发明的方法可以获得高含量的原花青素B2提取物。文档编号C07D311/00GK101125844SQ20071006121公开日2008年2月20日申请日期2007年9月28日优先权日2007年9月28日发明者丹刘,刘岱琳申请人:天津市尖峰天然产物研究开发有限公司