专利名称：：胆酸派生物作为fxr配基预防或治疗fxr-介导的疾病或状况的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于治疗淤胆失调的法尼酯X受体(FXR)调节物，特别是胆酸派生物，其中C6包括乙烷基，而C24羧基转换为硫酸基团。
背景技术：
：法尼酯X受体(FXR)是一种最初从大鼠肺cDNA文库中鉴定的孑瓜JL^亥受体(BM.Forman,etal.，Cell81:687—693(1995)),其与昆虫蜕皮激素受体密切相关。FXR是包括类固醇，类维生素A,和曱状腺激素受体的配基-激活转录因子核受体家族的成员(DJ.Mangelsdorf,etal.,Cell83:841-850(1995))。Northern和原位分析显示FXR在肺，肠，肾，和肾上腺中大量表达(BM.Fo画netal.,Cell81:687-693(1995)和W。Seoletal.，Mol.Endocrinnol。9:72-85(1995))。FXR与9—顺式维生素A酸受体(RXR)形成异源二聚体与DNA结合。FXR/RXR异源二聚体优先与由共有AG(G/T)TCA的双核受体半位点组成的成分结合，其形成反向重复并被单一核苷分离(IR-l模体)(BM.Forman，etal.,Cell81:687—693(1995))。然而，这些4匕合物无法激活小鼠和人类FXR,使得内源性FXR配基的自然性还不确定。一些自然发生的月旦酸在生理浓度下结合并'激活FXR(PCTWO00/37077,2000年6月29日出版))。如此所述，作为FXR配基的胆酸包括鹅脱氧胆酸(CDCA),脱氧胆酸(DCA),石胆酸(LCA)，和这些胆酸的牛磺酸及氨基乙酸共辄物。胆酸是在肝脏中形成并分泌入十二指肠的胆固醇代谢产物，其在食物脂肪和维生素的溶解和吸收中具有重要作用。大多数胆酸(~95%)随后在回肠中吸收并通过肠肝循环系统回到肝脏。肝脏中胆固醇至胆酸的转变为反4贵调控胆酸下调细胞色素P4507a(CYP7a)的转录，其编码催化胆酸生物合成限速步骤的酶。数据显示FXR与胆酸对CYP7a表达的抑制有关，虽然精确的机制仍未明确(DW.Russell，Cell97:539-542(1999))。回肠中，胆酸"i秀导肠内胆酸结合蛋白(IBABP)的表达，其是一种以高亲和力与胆酸结合，并与其细胞摄取和转运相关的胞内蛋白。两组已经发5U旦酸通过激活FXR调节其对于IBABP表达的效应，FXR结合人类，大鼠，和小鼠IBABP基因启动子中^f呆守的IR-1型应答元件。这些FXR与胆酸和胆固醇平衡中的目标基因的激活(IBABP)牙口才中制(CYP7a)4目关。EP13927147>开了3a，7a—又又羟基-6oc-乙基—5P—胆烷-24-羧酸(这里也指6-乙基-鵝脱氧胆酸，6-EDCA)，其溶剂化物和氨基酸结合物用作FXR拮抗剂，其可用于制备预防或治疗FXR-介导的疾病或状况的药物。EP1568796公开了作为FXR拮抗剂的6-乙基-熊脱氧胆酸(6-EUDCA)派生物，及其在预防或治疗FXR-介导的疾病或状况中的应用。
发明内容根据第一方面，本发明提供了结构(I)的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中R是氢基或a-羟基，位置7的羟基在a或(3位点；及其药学上可接受的盐，溶剂化物或其氨基酸结合物。一个实施方案中，结构式(I)的化合物为鹅脱氧胆酸派生物的形式。另一实施方案中，结构式(I)的化合物为熊脱氧胆酸派生物的形式。而另一实施方案中，结构式(I)的化合物为胆酸派生物的形式。另一实施方案中，结构式(I)的化合物为三乙基铵盐形式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>另一实施方案中，结构式(I)的化合物为钠盐形式:另一方面，本发明^是供了一种预防或治疗FXR介导的疾病或状况的方法。本方法包4舌施用治疗有效量的结构式(I)的化合物。本发明也提供使用结构式(I)的化合物以制备预防或治疗FXR介导的疾病或^1犬况的药物。在特定实施方案中，FXR-介导的疾病或状况是心血管疾病，动脉粥样硬化，动脉硬化，高胆甾醇血，高血脂慢性肝炎疾病，胃肠疾病，肾病，心血管疾病，代j射疾病，癌症(例々0,结直肠癌)，或神经迹象如中风。特定实施方案中，慢性肝病是原发性硬化(PBC),脑腱性黄瘤症(CTX)，原发性硬化性胆嚢炎(PSC),药物导致的胆汁郁积，妊娠肝内胆汁淤积症，肠外吸收相关胆汁郁积(PNAC),细菌过度生长或脓血症月旦汁郁积，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，非酒精性脂肪性肝炎(NASH),肝移植相关移植物抗宿主病，活供体肝移植再生，先天性肝纤维化，胆总管结石，肉芽性肝病，肝内-或外恶性肿瘤，Sjogren综合征，结节病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或ocl-拍J夷蛋白酶缺乏症。特定实施方案中，胃肠疾病是炎症性肠病(IBD)(包括Crohn's疾病和溃疡性肠炎)，肠易激综合征(IBS)，细菌过度生长，营养吸收不良，反射-后结肠炎，或微小性结肠炎。特定实施方案中，肾病是糖尿病肾病，局灶节段性肾小球硬化症(FSGS),高血压肾病，慢性肾小球炎，慢性移植性肾小球病，慢性间质性肾炎，或多嚢肾病。特定实施方案中，心血管疾病是动脉硬化症，动脉硬10化，血脂障碍，高胆固醇血症，或高甘油三酯血症。特定实施方案中，代ii射疾病是力夷岛素抗性，I型和II型糖尿病，或肥胖。另一实施方案中，本发明提供了包括结构式(I)化合物和药学上可^妄受的载体或稀释物的药物组合物。另一实施方案中，本发明提供了制备结构式(I)和其药学上可4妄受的盐，溶剂化物或氨基酸结合物的方法。图1是以图表形式表示的反式激活测定结果。每个数据点是三次测定的平均值。CTRL:对照；INT-747:6-EDCDA;UPF-987。图2显示反式^敫活测定中INT-747和UPF-987的剂量岁文应。图3显示FXR目标基因体外表达。结果为两次定量实时PCR试一验的平均值。图4显示代表性FXR目标基因在来源于小鼠肝脏的细胞中的体内表达。数据为两次定量实时PCR试验的平均值。图5显示UPF-987对由TNBS诱导的重量丟失的影响。图6显示UPF-987对粪便形态的影响。图7显示UPF-987对粘膜损害程度的影响。图8显示UPF-987对小鼠结肠基因表达的影响。结果为两次定量实时PCRi式-3全的平均4直。ii图9显示UPF-987对ANIT-i秀导的胆汁郁积的血浆胆红素的影响。图10显示UPF-987对ANIT-i秀导的胆汁郁积的血浆AST的影响。图11显示UPF-987对ANIT-诱导的胆汁郁积的血浆ALP的影响。图12显示UPF-987对ANIT-i秀导的胆汁郁积的血浆gammaGT的影响。图13显示UPF-987对ANIT-谦导的胆汁郁积的血浆胆固醇的影响。图14显示UPF-987对ANIT-诱导的胆汁郁积的体重的影响。图15显示UPF-987对ANIT-i秀导的胆汁郁积的肝脏重量的影响。图16显示UPF-987对ANIT-i秀导的胆汁郁积大鼠肝脏中FXR目标基因表达的影响。结果为两次定量实时PCR试4t的平均值。图17显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆胆红素的影响。图18显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆AST的影响。图19显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆ALT的影响。图20显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆ALP的影响。图21显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆gammaGT的影响。图22显示INT-1103对ANIT-诱导的胆汁郁积大鼠的体重的影响。图23显示最终肝脏比例(肝脏重量/体重x100)。图24显示INT-1103对BDL-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆月旦纟工素的影响。图25显示INT-1103对BDL-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆AST的影响。图26显示INT-1103对BDL-i秀导的胆汁郁积大鼠的血浆ALT的#》响。图27显示INT-1103对BDL-i秀导的胆汁郁积大鼠的血浆ALP的#》响。图28显示INT-1103对BDL-诱导的胆汁郁积大鼠的血浆gammaGT的影响。图29显示INT-1103对BDL-裔导的胆汁郁积大鼠的体重的影响。13图30显示最终肝脏比例(肝脏重量/体重x100)。图31显示INT-1103和INT-747对自然大鼠胆汁流的影响。图32显示INT-1103和INT-747对estrogencolestatic大鼠胆汁流的影响。图33显示INT-1103和INT-747对estrogencolestatic大鼠肝脏比例的影响。图34显示INT—1103和INT—747对estrogencolestatic大鼠体重的影响。图35显示通过定量实时PCR确定的胰岛素基因表达。图36是水中胆盐浓度(mM)对K相对于表面张力(dyne/cm)的示意图。图37是0.15MNaCl中中胆盐浓度(mM)对数相对于表面张力(dyne/cm)的示意图。图38显示牛磺酸结合的INT-747的分泌速度。凄"居以月旦汁浓度才艮告并且以胆汁体积^修正。图39显示甘氨酸结合的INT-747的分泌速度。数据以胆汁浓度才艮告并且以胆汁体积修正。图40显示INT-747的分泌速度。凄t据以胆汁浓度才艮告并且以月旦汁体积j奮正。图41显示INT-747异构体的分泌速度。婆t据以胆汁浓度才艮告并且以胆汁体积^f多正。图42显示牛磺酸结合的INT-747异构体的分泌速度。数据以胆汁浓度^艮告并且以胆汁体积修正。图43显示INT-1103的分泌速度。数据以胆汁浓度才艮告并且以月旦汁体积J奮正。图44显示INT-1103和其主要代谢物3-葡萄糖苷酸的分泌速度。相关数量以分析的信号表示。数据以胆汁浓度4艮告并且以胆汁体积修正。图45显示使用质谱分析的胆汁中INT-IIO主要代谢物的分泌速度。数据以胆汁浓度报告并且以胆汁体积修正。图46显示4吏用质i普变焦显示分一斤的胆汁中INT-110主要代谢物的分泌速度。数据以胆汁浓度才艮告并且以胆汁体积修正。图47显示人类粪^f更培养物中INT-747和INT-1103的代谢稳定性。鹅去氧胆酸作为天然类似物参考品使用。图48显示INT-1103在模拟胰腺流中的代谢稳定性。根据USP方案使用橄榄油作为参照。化合物非常稳定并且其酯键(硫酸盐)不纟皮胰酶水解，显示在人类十二指肠和上肠部位中的高度稳定性。具体实施例方式本发明涉及具有结构式(I)的化合物其中R是氢基或a-羟基，位置7的羟基在a或P位点；和药学上可接受的盐，溶剂化物或其氨基酸结合物。合适的本发明的药学上可接受的盐可以由本领域中的技术人员容易J也确定，并可包4舌，例如，碱式盐如由铝，钓，锂，4美，钾，钠，和锌制备的碱或碱-脂金属盐，或由N,N，-二千基亚乙基二胺，氯普鲁卡因，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，葡甲胺(N-曱基葡糖胺)，和普鲁卡因等制备的有机盐。带有如赖氨酸，精氨酸，氨基丁三醇，三乙胺和类似物等胺类的药学上可接受的盐也可以被使用。这些结构式(I)化合物的盐可以使用常规技术制备，例如将结构式(I)化合物与合适的碱基反应，由结构式(I)化合物制备。药物应用中，结构式(I)化合物盐应当为药学上可4妄受的，但是非药学上可接受的盐也可以便利地用于制备对应的游离碱或者其药学上可接受的盐。这里使用的术语"溶剂化物"是一种包括结构式(I)化合物或其药学上可接受的盐的晶体形态，可以为化学剂量或非-化学剂量的溶剂。溶剂，作为例子，包括水，曱醇，乙醇，或乙酸。以下，结构式(I)化合物指任何其化合物的物理形式，除非指明其特定的形式，盐或溶剂。这里使用的术语"氨基酸结合物"指带有任何合适的氨基酸的结构式(I)化合物的结合物。合适地，这些结构式(I)化合物的氨-基酸结合物将具有增强在胆汁或肠流液中完整性的优势。合适的氨基酸包括但不局限于甘氨酸和牛磺酸。这样，本发明包括^壬4可结构式(I)4b合物的甘氨酸和牛磺酸结合物。一个实施方案中，结构式I化合物是一种鹅去氧胆酸派生物，其中7位的羟基在a位置，而R是氢。另一实施方案中，结构式I化合物是一种熊去氧胆酸派生物，其中7位的羟基在P位置，而R是氢。另一实施方案中，结构式I化合物是一种胆酸派生物，其中74立的羟基在oc位置，而R是羟基。在此之后，所有"结构式I化合物"指上述所有描述的结构式I化合物和药学上可4妄受的盐，溶剂化物或其氨基酸结合物。结构式I化合物可以由6-乙基-7-酮基-胆酸制备，如EP1392714和EP1568796中描述所制备，合适地，通过包括在C24羟基中转入碟原子的反应序列，对3-羟基基团进行保护，将碘原子转化进入羟基，减少了7-酮基基团，以获得相应的3-a或3-P羟基，C24羟基选择性的磺酰化和3-羟基的去保护。在每一步中使用的反应方法和试剂在下列的方法中报导，其显示了三乙基胺盐形式的3a，7a,23-三羟基-6a-乙基-24_去曱基—5(3-月旦烷—23—石克酸盐(UPF—987或以下^f匕合净勿9)的制备。相同的方法可以^皮釆用，通过合适地替换药剂和/或17起始材料并且随意地改变反应序列和保护基团，制备其他结构式I化合物。a)3,4-二氢-27/-吡喃,p-TsOH，二氧六环，r丄;b)I2，Pb(AcO)4，hv，CCU;c)HClconTHF;d)TBDMSiCl，咪唑，CH2C12，r.t.;e)Ag2C03，丙酮，H20，回流；f)NaBH4THF，H20r.t.;g)C1S03H，(Et)3N，THF;h)CH3COCH3,PdCl2(CH3CN)2在每一步中^f吏用的反应方法和试剂在下列的方法中才艮导，其显示了钠盐形式的3a，7a,23-三羟基-6a-乙基一24-去曱基—5P-月旦》克-23-石克酸盐(INT-1103或以下化合物10)的制备。相同的方法可以被采用，通过合适地替换药剂和/或起始材料并且随意地改变反应序列和保护基团，制备其他结构式I药学上可接受的盐的形式。10a)3，4二氢-2if-吡喃，p-TsOH,二氧六环，t.a.;b)I2，Pb(AcO)4，hv，CCU;c)HClgas，DME;d)TBDMSCl,咪唑，CH2C12，t.a.;e)Ag2C03,丙酮，1120，回流；f)NaBH4，THF，H20，r.t.;g)C1S03H，(Et)3N，THF;h)H20,丙西同；PdCl2(CH3CN)2，i)NaOH，MeOH正如在试验阶段详细描述，化合物9在人类肝细胞系和施用alfa-nafthylsiotiocyanate(ANIT)引发胆汁阻塞的未处理小鼠和大鼠体内进行无细胞实验和反式激活实验。FRET方法中，化合物激活FXR的潜力比鹅去氧胆酸(CDCA)强将近1000倍。在反式激活实验中，化合物9导致胆酸转运物，BSEP(胆盐转运泵)和微小异源二聚体伙伴(SHP,—种缺失DNA-结合区域的非典型的核酸受体)，的2倍诱导。19其进一步有效地抑制Cyp7Al,SREPB-lc和脂肪酸合酶(FAS),这样表明本发明的化合物对FXR的激活准许基因的选择性《务饰，包4舌胆酸合成和脂，胆固醇和葡萄糖的代谢。因此，结构式(I)的化合物作为月旦酸转运物的选择性z修饰物和肝脏中胆酸流量的增强剂；进一步，其有效调整脂和胆固醇代谢中包括r的基因，因此其可以用于预防或治疗FXR-介导的疾病或状况，其包括慢性肝病(包括一种或多种胆汁郁积，脂肪变性，炎症，纤维化，和硬化)，胃肠疾病，肾病，心血管疾病，和代谢疾病。使用结构式(I)化合物预防或治疗的慢性肝病包括但不局限于原发性硬化(PBC)，原发性硬化性胆嚢炎(PSC),脑腱性黄瘤症(CTX)，药物介导的胆汁郁积，妊娠肝内胆汁淤积症，肠夕卜吸收相关胆汁郁积(PNAC)，细菌过度生长或脓血症胆汁郁积，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，肝移植相关移植物抗宿主病，活供体肝移植再生，先天性肝纤维化，胆总管结石，肉芽性肝病，肝内-或外恶性肿瘤，Sjogren综合征，结节病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1—4元月夷蛋白酶缺乏症。使用结构式(I)化合物预防或治疗的胃肠疾病包括4旦不局限于炎症性肠病(IBD)(包括Crohn's疾病和溃疡性肠炎)，肠易激综合征(IBS),细菌过度生长，营养吸收不良，反射-后结肠炎，或微小性结肠炎。使用结构式(I)化合物预防或治疗的肾病包括但不局限于糖尿病肾病，局灶节段性肾小球硬化症(FSGS),高血压肾病，慢性肾小球炎，慢性移植性肾小球病，慢性间质性肾炎，或多嚢肾病。使用结构式(I)化合物预防或治疗的心血管疾病包括^旦不局限于动脉硬化症，动脉硬化，血脂障碍，高胆固醇血症，或高甘油三酯血症。使用结构式(I)化合物预防或治疗的代i射疾病包括但不局限于胰岛素抗性，I型和II型4唐尿病，或月巴胖。本发明的方法包括施用有效剂量的结构式(I)化合物的方法。这里〗吏用的术语"治疗有效剂量，，指有效获得^见定效果的结构式(I)化合物的lt量。相应的，在预防或治疗FXR介导的疾病或状况的方法中4吏用的结构式(I)化合物的治疗有效剂量将是有岁文预防或治疗FXR介导的疾病或状况的凄t量。相似的，在治疗或预防淤胆肝病或增加胆汁流的方法中^f吏用的结构式(I)4匕合物的治疗有效剂量将是有效增加肠内胆汁流的有效量。需要获得期望生物学效应的结构式(I)化合物的剂量将依赖于多种因素，如使用的目的，给药的方法，和受体，并将最终由医生或兽医决定。通常，治疗FXR介导的疾病和一大况的典型日剂量，例如，将位于0.01mg/kg至100mg/kg范围内。该剂量可以通过单一剂量或通过^L次单独剂量或连续灌注纟会药。类似的剂量将应用于其他疾病，状况的治疗，包括预防和治疗胆汁淤积性肝病。这样，进一步，本发明提供了药物组合物，其包括作为活性成分的一种结构式(I)化合物，和与之共同的和/或混合的至少一种药物载体或稀释物。这些药物组合物可以用于预防和治疗前述的疾病或状况。载体必须是药学上可接受的，并且必须相容于组合物中的其他成分，例如，不具有有害效应。载体可以是一种固体或液体并且合适;也制备沉单位剂量形式，例如，一种包括0.05至95%重量活性成分的药片。如有期望，其他生理学活性成分也可以包括入本发明的药物组合物。可能的形式包括那些适用于口月艮，舌下，口腔，注射(例如，皮下，月几肉内，或静月永内)，直肠，局部，包4舌透皮，鼻月空内和吸入给药。对于特定病人的许多合适的给药方法将依赖于所治疗的疾病或状况的性质和严重性，或所采用的治疗的性质，和活性化合物的性质，但如有可能，口服给药适用于预防和治疗FXR介导的疾病和4犬况。适用于口服给药的形式可以以分离的单位提供，如药片，胶嚢，药包，锭剂，每一种包括预先确定数量的活性成分；如粉末或颗并立；如水或非水液体的卩容液或悬液；或如水包油或油包水乳剂。适用于舌下或口腔给药的形式包括锭剂，其包括活性化合物，和调味剂，如糖和阿拉伯树胶或黄芙胶，和药锭，其包括位于明胶和甘油或蔗糖阿拉伯树胶等惰性物质中的活性化合物。适用于注射给药的形式典型地包括无菌液体溶液，其包括一种预定浓度的活性化合物；溶液与受体的血液等渗。适用于注射给药的额外形式包括含有生理适配的复合-溶剂和/或药物复合物，如表面活性剂或环糊精。水包油乳剂也适用于注射形式。虽然这些溶液适宜通过静脉内给药，其也可以通过皮下或肌肉内注射给药。适用于直肠给药的形式以单位-剂量栓剂形式提供，其中活性成分包埋于一种或多种形成4全剂基础的固体中，例如，可可酯。适用于局部或鼻腔内使用的形式包括药膏，乳膏，洗液，膏剂，凝胶剂，喷雾剂，气雾剂和油。这些形式的合适的载体包括凡士才木，羊毛脂，聚乙二醇，乙醇，和其耳关合物。本发明的制剂可以由任何合适的方法制备，典型地通过均一地和紧密地将活性化合物与液体或良好划分的固体载体或其两者根据需要的比例混合，如需要，将最后的混合物制备成期望的形状。例力o,可以通过^夸一种包^舌活性成分并分末或颗粒和一种或多种合适的成分，如结合物，润滑剂，惰性稀释剂，或表面活性分散剂的混合物压缩制备药片，或通过将粉末状活性成分和惰性液体稀释剂混合物进行塑形。合适的吸入给药制剂包括颗粒粉剂或喷雾，其可以通过多种类型剂量的眼里压力气溶"交，喷雾剂，或吸入器产生。对于经口的肺部纟合药，4分末或颗粒的大小典型地在0.5-10jum之间，合适i也为1-5|um,以确保进入支气管4对。对于鼻腔给药，10-500jum大小的颗粒适合于确保在鼻腔中停留。定量吸入器是一种压力气溶胶分配器，典型地含有在液化推进物中的活性物质的悬液或溶液形式。当使用时，这些装置通过阀释放诉讼定量体积的药剂，典型地为10至150jLi1,以产生含有活性成分的良好的颗粒喷雾。合适的推进物包括特定的氯氟石友化合物，例如，二氯二氟曱烷，三氯氟曱烷，二氯四氟乙烷和其混合物。药剂可以额外含有一种或多种复合溶剂，例如，乙醇表面活性剂，如油酸或山梨聚糖，抗氧化剂和合适的调味剂。喷雾剂是一种商业提供的装置，通过空气或氧气等压力气体的加速作用，经狭小的文氏管孔，或通过超声振动方法，其使活性物质溶液或悬液转变为治疗性气溶胶喷雾。喷雾剂中使用的合适的制剂包括水相载体中的活性成分，其最高占制剂的40%w/w,合适地小于20。/。w/w。载体典型地为水或一种稀释的水和酒津奇溶液，合适地通过添加，例如，氯化钠制备成与体液等;參。23如果制剂是非无菌的，可选的添加物包括防腐剂，例如，甲基羟基苯曱酸，抗氧化剂，调味剂，挥发油，緩沖剂和表面活性剂。通过喷射给药的合适的制剂包括粉末，其可以通过一种吹药器丰lr送或通过鼻吸进入鼻腔。在吹药器中，4分末包^舌在胶嚢或药丸中，典型地由凝胶或塑料制成，其可以在原位刺破或打开使得粉末通过吹药器装置的空气流，或通过手动泵输送。吹药器中使用的4分末可以包括单一的活性成分，或包括活性成分和合适的粉末稀释物，如乳糖，和一种可选的表面活性剂的混合并分末。活性成分在制剂中的比例典型地为0.1至100w/w。上述的特异配方之外，已经注意到不确定的制剂类型，本发明的制剂也可以包括药物领域中的技术人员知道的其他成分。例如，适用于口力良给药的制剂可以包括调味剂，适用于鼻内给药的才几制可以包4舌芳香物。因此，根据本发明的进一步的方面，提供了使用结构式(I)的4匕合物制备药物以预防或治疗FXR介导的疾病或状况。以下实施例对本发明进行更详细i兌明。实施例1化学。熔点通过Buchi535电热装置测定，并为校正。通过BrukerAC200MHz分光计获得NMR光谱，化学位移以百万分之一(ppm)表示。这里l吏用的缩写为s,单一；bs，宽单态；d,二重态；dd,乂又二重态；m,多态；q，四重态；t，三重态。使用Merck硅胶60(0.040-0.063mm)进行快速层析色i普。在带有石圭月交60F-254(Merck)预包一皮的TLC板上进行TLC。通过磷钼酸盐试剂(5%的EtOH溶液)使斑点可见。在氮气保护下进行此反应。3a-四氣p比喊基氧一7—酉同_5|3—胆火克一24—叛酸(2)二氧杂玉不乙烷(12ml)中的3,4-二氢-2H—p比喃(1.74ml,19mmol)緩慢滴入含有p-曱苯石黄酸(115mg,0.6ml)和6a-乙坑一7-酉同基胆石酉吏(5.0g，12mmol)的二氧杂玉不乙》克(55ml)溶液。反应混合物室温搅动2小时。力。入(40ml)7jc，混合物通过真空部分浓缩并用EtOAc(4x25ml)抽提。有才几部分用盐水(lx50ml)洗涤，无水Na2S04干燥，真空蒸发以获得6g化合物2。未经加工的》派生物不经进一步纯4匕可用于下一步反应。HNMR:(200MHz,CDC13)5:0.68(3H，s，C-18Me);0.8(3H,t,J=4Hz，C-26);0,98(3H,d，J=6,5，C-21Me);1,17(3H,s,C-19Me);3.4-3,7(4H,m，C-23CH2,C-6);3.8-3.9(1H，m,c-3);2,6-2,8(1H，m,C-6)。13CNMR(50,3MHz,CDC13)5:212,41,179,42，54,75，52,10,21,79，18,30,12,04。3cx—四氢p比喃基氧-7—酉同-24—去甲—5P—胆烷—23-I(3)300w鴒灯照射下，CCU(75ml)中的》典(5g,20mmol)滴力口入溶液2(5.5g，llmmol)并引导入CC"(200ml)中由々四乙酸盐4.9g，llmmol)。反应混合物经冷却并以硅藻土过滤。有机相以5%Na2S203溶液，5%NaOH，盐水(15ml)洗涤，无水Na2S04干燥，真空蒸发。残留物以珪月交快速层析纯化，使用石油醚/EtOAc95/5作为流动相以获得4.6g化合物3(40%产量)。25H丽R:(200MHz，CDC13)5:0,54(3H,s，C-18Me);0。68(3H，t,J=7.36MHz,C-25);0,79(3H,d，J=5,2MHz,C-21);1,09(3H,s，C-19);2,55(1H,m，C-26);2,96(1H,m,c-23);3,16(1H,m,C-23);3,20(1H,m,C-6，)；3,76(1H，m，C-6，)；4,59(1H,m，C-2，)。13CNMR(50，3MHz，CDC13)5:212.50,96.56,95.99,74.90,74.60,62.63,54.63，54.08,50.78，50.58,49.84,48.91,43.38,42.70，40.11,38.90,36.92,35.81，34.34,34.10,31.07,30.06,29.61，28.26，27.85，25.97，25.42，24.54,23.49,21.75，19.76,19.59，18.88,17.84,12.05,11.98,5.26。3a-#5基—6oc-乙基—7—酮-24—去甲—5P—胆火克-23-I(4)化合物3(2.2g,3.8mmo1)在HC137%THF(50ml)溶液中室温搅拌过夜。反应混合物以饱和NaHC03(20ml),H20(20ml),盐水(20ml)洗涤，Na2S04干燥，真空蒸发以获得1.4g化合物4(80%产量)。未经加工的派生物不经进一步纯化可用于下一步反应o力NMR:(200MHz，CDC13)5:0,68(3H,s，C—18Me);0.82(3H,t,J=7,36MHz,C-21);0，93(3H，t,J=5，2MHz,C-21Me);1,26(3H,s,C-19Me);3,08(1H,m，C-23);3，37(1H,m,c-23);3.61(1H,m,C-3)。l3CNMR(50,3MHz,CDC13〉&212.81,71.09,54.63,51,93,50.60,49.84,48.93,43.64,42.70，40.11,38.92，36.92，35.63,34.19,31.71,31.06,29.78,28.25,27.89,25.96,25.42，24.51,23.48，21.79，19.56,18.77,18.22,17.85，12.02,11.95,5.22.3a—^又-丁基二曱基石圭氧一6a_乙火克—7—酉同—24—去曱-5P-胆烷-23-I(5)4匕合4勿4(1.4g，2.8mmol)的CH2C12(30ml)溶液，力口入^又_丁基二甲基曱桂烷基氯(496mg，3.22mmol)和咪峻(230mg，3.36mmol)，混合物于室温4觉4半过乂艾。，良应混合物以《包和NaHC03(30ml),盐7jc(20ml)洗;奈，无KNa2S04干;t喿。有才几相经真空蒸发以获得1.5g化合物5(87%产量)。未经加工的派生物不经进一步纯4匕可用于下一步反应。NMR:(200MHz,CDC13)5:0.02(6H,s,(CH3)2Si);0,65(3H，s,C-18Me);0.85(9H,s，(CH3)3CSi);1,19(3H,s,C-19);3,16(1H,m，C-23);3.30(1H,m,C-23);3.48(1Hm,C-3)."CNMR(50,3MHz,CDC13)<5:212.56，71.93,54.63，51.89，50.62，49.81，48.90，43.34，42.72,40.11，38.89，36.92,35.62,34.37，31.97，30,34，28.26,25.83，25.61,24.57,23.48,21.77,18.81'17.84,12-02，11.92,5.27,4.70.3a-#又-丁基二甲基石圭氧—6a—乙)t克—7-酮—24-去曱-5P-胆烷-23-ole(6)4匕合物5(l,2g,1.96mmol)的丙酮(12ml)溶液中，力口入Ag2C。3(l.lg,3.9mmol)。反应混合物回流过夜并冷却至室温，珪藻土过滤，丙酮洗涤，联合的有机相经浓缩获得lg化合物6.未经加工的派生物不经进一步纯化可用于下一步反应。■HNMR:(200MHz,CDClj)J:0.02(6H,s,(CH，hSi);0,65(3H,s,C-18Me);0.88(9H，s,(CH3)3CSi);3,16(1H,m,C-23);3.37(1Hm,C-3);3.69(2H,m,C-23).I3CNMR(50,3MHz,CDClj)&212.64,71.96，60.84,55.27,50.66，49.87,48.94，43.37,42.69,38.94，35.64,34.39，32.70，32.00,30-36,29.68,28.53,25.85,24.64,23.50,21.80,18.84,12.01,11.94,-4.68.273oc—*又—丁基二甲基石圭氧—7a—，至基—6a—乙》克—24—去曱-5|3-胆烷-23-油(7)化合物6(lg,1.96mmol)在THF(50ml)和H20(12.5ml)的混合5容液中，力口入NaBH4(740mg,19.6mmo1),于室温搅拌1小时30分4中。反应溶液真空部分浓缩并以CHCl3抽^是(3x20ml)。联合的有才几层以盐水(1x50ml)洗涤，无水Na2S04干燥并真空蒸发。未经加工的残留物4吏用CH2C12:MeOH99:1混合物作为流动相通过硅胶快速层析纯化，获得0.8g化合物7(81%产量)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>3a-*又—丁基二曱基石圭氧一7a—,》基—6a—乙》克-24-去曱-5P-胆烷-23-碌u酸三乙基铵盐(8)4匕合4勿7(0.5g,0.99mmo1)的THF(7ml)溶液冷3卩至-3。C,加入E^N(0.3ml,2.1mmol),混合物4觉拌10分4中。加入C1S03H(0.1ml，1.5mmol),混合物室温搅拌过夜。加入水(10ml)，混合物以CH2Cl2(3x15ml)抽提，无水Na2S04干燥并真空蒸发。未经力口工的辟^酸盐>派生物不经进一步纯^:可用于下一步反应。3oc，7a,23-三夹至基-6oc-乙烷—24—去甲—5p—胆烷—23-硫酸三乙基铵盐(9)4匕合#勿8(0.5g,0.77mmo1)6々丙酉同(8ml)溶液中，力口入PdCl2(CH3CN)2(10mg，0.05eq)，混合物于室温搅拌3小时。反应混合物经过滤，真空浓缩，使用MeOH/H208/2混合物作为流动相通过中压LichroprepRP-8纯化，以获得0.115g化合物9，mp118—121°C。'HNMR(200MHz,CD3OD)&0.70(3H,s,C-18Me);0.91(3H，m,C-21Me,3H,C-25);0.98(3H,d,/=6.4Hz，C-19Me);1.32(9H，t,/=7.3Hz,(CH3-CH2)3N);3.20(6H，q,/=7.31Hz,(CH3-CH2-)3N;3.31(1H,m,C-3);3.65(1H,bs，C-7);4.03(2H,m,CH2-23).I3CNMR(CD3OD)5:9.23,12.05,12.19,19.14,21.97,23.52,23.76,24.57,34.23,34.51,36.56,36.65,36.79,41.06,41.55,43.13,47.73,50.28,51.68，57.80，67.19,71.16,73.23.3a,7ot，23-三#5基-6a—乙烷—24_去曱—5(3—月旦*克-23-硫酸钠盐(9)〉VS合净勿8(0.4g,0.72mmol)在丙酉同(4ml)禾口H20(0.08ml)的混合溶液中加入PdCl2(CH3CN)2(10mg，0.05eq),室温4觉拌3小时。反应混合物经硅藻土过滤并真空浓缩。最后的产物以10%NaOH甲醇溶液处理2小时。最后的混合物以真空浓缩，使用CH3OH/H20(7:3)作为流动相以液相中压纯4匕，制备0.09g化合物10(25%产量)。实施例2生物活性首次进行实验以—险证与鹅去氧胆酸(CDCA)相比，UPF-987是否能调节FXR-相关基因。CDCA是一种主要的胆酸，其29具有法尼酯衍生物-x-受体(FXR;NR1H4)内源性配基的作用。通过4吏用荧光共振能量转移(FRET)细胞自由测定的体外实验首)欠测定UPF-987对于FXR活i生的生4勿活'性，如PellicciariR,etal.，JMedChem.200215;45:3569-72描述。简要的，反应包括了铕-标记的抗-GST抗体和抗生物生活蛋白-连接的别藻蓝蛋白，FXRGST-LBD融合蛋白和生物素化的SRC1传感器多肽。在FRET緩沖液(lOmMHepes,pH7.9,150mMNaCl，2mMMgCl2，1mMEDTA,O.lmg/mlBSA)中于室温反应1小时。以Victor1420多标计凄t器测定FRET。FRET无细胞实验中，Scr-1，一种FXR的共-激活因子，其产生的浓度几乎比自然FXR-配基CDCA需要的低300倍(表1)。表1FRET中UPF-987对人类FXR的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>1CDCA=100%时SRC1多肽对于FXR的相对补充。所有凄史4居为平均±SE，n=4。j吏用人类肝细月包系(HepG2)进行细胞实验评估UPF-987是否调节FXR-相关的基因。使用HepG2细胞系的细胞转染实验中，UPF-987提供了潜在的FXR配基。HepG2细胞暴露于UPF-987反式;敫活FXR。以带有FXR基因的病毒载体或克隆在荧光素酶基因下游的其他核酸受体转染的肝细胞的其他实验中，发现FPF-987作为小鼠，大鼠，和人类肝细胞中的选择性FXR配基。本方法的详细描述见一下参考FirucciS,etal.，Gastroenterology2004。简要的，荧光素酶方法中，HepG2细胞以补充1%青霉素/链霉素，1。/。L-谷氨酰胺和10%胎牛血清(高葡萄糖)(CELBIO)的E-MEM中培养。细胞于37。C,50/。032生长。所有转染1吏用钙石粦酸共沉淀方法进《亍，以25juM氯奎作为DNA降解的抑制剂。使用500ng受体载体phsp27-TKLUC进4亍瞬时转染，200ngPcmv-Bgal作为转染效果的内控，各50ng受体表达质粒pSG5-FXR,pSG5-RXR。加入pGEM载体以规范每个实验中DNA转染的tt量(2.5jag)。以pCMV-|3-gal质粒共转染细月包，才艮据P-gal表达评估转染效果。转染48小时后，H印G2细月包以1juMUPF-987刺激18小时。对照培养基只以i某介(0.1%DMSO)处理。以lOOial稀释的受体裂解緩冲液(Promega)裂解细胞，用焚光素酶分析系统(Promega)分析0.2jul细月包裂解物中焚光素酶的活性J吏用自动光度计测定发光。通过区分p-半乳糖肝酶活性的相对光单位，对转染效果荧光素酶活性进4于标化。HepG2细胞中UPF-987对FXR目标基因表达的调节为研究UPF-987是否为FXR的调节物并表现不同的活性，人类HepG2细胞暴露于UPF-987，CDCA(自然FXR配基)和其6-乙烷-》泉生物，6-ECDCA,其为一种潜在的FXR配基。通过定量反转录PCR(qRT-PCR)研究这些配基对于FXR应答基因的效应。简要的，利用NCBI数据库中的序列数据，使用PRIMER3-OUTPUT4欠件设计所有PCR引物。从肝脏中提取全部RNA(TRIzol试剂，Invitrogensrl，Milan,Italy)。1樣么克纯化的RNA以DNAseI室温处理10分钟，随后加入2.5mmol/LEDTA于95°C孵育3分钟。使用随机引物在20ju1反应体积中以SuperscriptIII(Invitrogen，Carsbad,CA)7十RNA反转录。lOOng才莫牙反溶解于25jul反应液中，其含有0.3/nL每种引物和12.5jul2xSYBRGreenPCRMasterMix(Fynnzimes-DyNAmoSYBRRGreenqPCRmix)。所有反应进4亍三次重复，在iCycleriQi殳备(Bio-Rad,Hercules,CA)上进行，循环条件如下2分钟95。C,随后进4亍95。C20秒，55°C20秒和72°C30秒循环50次。计算每个样本重复实验的平均值，以循环限度表示(CT;每个PCR反应达到子贞定的荧光限度时的循环It,对于所有反应都i殳置一个线性范围)。通过目标基因样本的CT值和内源性对照(GAPDH)的平均CT值的差值(ACT)计算基因表达的数量。以测定的对照样本和每个目标基因间ACT的差异(△ACT)计算相对表达。相对mRNA表达以2-△ACT显示(表3)。实时PCR中使用的引物为hGAPDH:gaaggtgaaggtcggagtandcatgggtggaatcatattggaa;hCYP7Al:caccttgaggacggttcctaandcgatccaaagggcatgtagt;hSHP:gctgtetggagtccttctggandccaatgatagggcgaaagaagag;hBSEP:gggccattgtacgagatcctaaandtgcaccgtettttcactttctg;hSREBPlc:gcaaggccatcgactacattandggtcagtgtgtcctccacct.相对于表3，使用定量反转录PCR体外实验的差异，显示暴露于任《可这些配基没有直4妄的细力包毒性，HepG2细月包暴露于CDCA和其6-ECDCA派生物，导致2-3倍的SHP,—种FXR调节基因的应答。通过比较，尽管UPF-987是一种FXR配基(见上述)，其刺激SHP的表达。所有测试的FXR配基，CDCA,6-ECDCA和UPF-987发挥相同的对于CYP7a1的效果(所有32试剂导致CYP7a1mRNA表达减少60-70%)。此夕卜，暴露于UPF-987引导了BSEP和SHPmRNA表达(大约2-3倍)。UPF-987相比其他FXR酉己基的效应更明显。进一步，相似于其他配基，暴露于UPF-987造成潜在的抑制SREPB-lc和FASmRNA表达的结果。综述，这些lt据显示UPF-987是一种作为潜在的FXR配基的FXR调节物，并意外地改变FXR调节基因，导致胆酸转运(例如BSEP)的显著减少和脂质相关基因的抑制。此外，UPF-987抑制CYP7al的表达，其为一种由胆固醇合成胆酸过程中涉及的基因。这些FXR目标基因的调节显示UPF-987是一种基因-选择性FXR配基，其通过经典途径增加肝脏中胆酸的分泌抑制胆酸的生物合成，而不影响SHP表达。该效应是所期望的，因其减小了这些FXR配基的药物学活性，并可以预防SHP相关的代谢活性。表2显示了对于UPF-987的体外药物学实验结果。表2UPF-987的体外药物学结果细胞实验材料剂量物种终点结果简述无细胞^实验UPF-987CDCA浓度范围由lnM至100MMn/aUPF-987作为FXR配基在无细力包实验FRET方法中的效果这些实—验结果显示UPF-987是一种潜在的FXR配基(EC5。~14nM)肝细胞UPF-浓度对FXR和UPF-987导致系987范围人类FXR相关基FXR的反式激活。(HepCDCA由1因(SHP，UPF-987是一种33<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>素，Alc。碌酸酉旨酶和月s固醇)，施用UPF-987减少了ANIT引发的胆汁郁积并调节肝脏NTCP,BSEP和CYP7A1mRNA表达实施例3UPF-987对FXR目标基因的体内调节背景化合物9也指UPF-987。FXR在胆酸代谢和脂/胆固醇和葡萄糖动态平衡中涉及的基因的转录调节中起关键作用。这些交互作用的调节是高度复杂的并包括多重反馈回路以自身-调节转录循环。竟争性和拮抗配基，以及FXR与其他包括PPARs和LXR的代i射核酸受体共享的目标基因的重叠范围，可以作为多余的保护才几制以引起保护反应，从而当一种途径折衷时，补救的途径可以替代。假设的代谢核酸受体收敛和发散功能复杂性的关键是其转录共刺激物和共抑制物，其在多种FXR调节方式中被引发。FXR调节物可以用于治疗-睑证，淤胆，纤维性肝失调，和代谢失调，包括高甘油三酯血症和高胆固醇血症，以及，扩展的，动月永》更^:症和其并发症。综述，FXR不仅仅由于其与调节相关的应用，也由于其配基识别和基因激活中的特定机制，可以作为特别期望的治疗药物。材沣牛和方法动物6—8周龄雌性Balb/c小鼠由CharlesRiver(CharlesRiver实l全室，Inc，Wilmington,MA)获4孚。动物以才示准chowpelletdiet喂食，有々大水自由通道，12小时的黑暗/光亮循环。本研究中的所有方法4艮据政府动物1呆护指导由Perugia大学(意大利)动物研究委员会提供。动物5天内通过腹腔内注射6-ECDCA,5mg/Kg/天，对照动物仅以々某介处理(曱基-纤维素)。实验末期处死小鼠，分离肝脏进行实时PCR分析FXR目标基因。35定量实时PCR如上述进行(见1.1材料和方法)。使用的引物为mGAPDH:ctgagtatgtcgtggagtctacandgttggtggtgcaggatgcattgmBSEP:aaatcggatggtttgactgeandtgacagcgagaatcaccaagmSHP:tctcttcttccgccctatcaandaagggcttgctggacagttamCYP7Al:aagccatgatgcaaaaccteandgccggaaatacttggtcaaamSREBPlc:gatcaaagaggagccagtgcandtagatggtggctgctgagtg结果完整小鼠中以5mg/kg剂量体内施用UPF-9874天后，肝脏中产生潜在的BSEP和SHP诱导。尽管通过上述体外实验初步讨^仑获得了激发性的，然而是矛盾的目标基因表达数据，体内数据显示Cyp7al潜在的下调(60-70%)作用。UPF-987也导致肝脏中SREBP-lc和FASmRNA表达的90%水卩制。(图5)实施例4大肠炎TNBS小鼠模型中评估UPF-987抗-炎症活性材料和方法大肠炎模型半抗原TNBS的结肠内应用引起啮齿类动物急性和慢性大肠炎。TNBS-大肠炎粘膜炎症具有显著的嗜中性渗透作用，但也包4舌CCRl+和CCR5+巨噬细胞和单核细胞的渗透和显著的IL-12和IFN-依赖的T淋巴细胞(Thl)激活。组治病理学特征类似于人类节^殳性回肠炎，透壁的炎症，肉芽肿病，裂隙溃疡和"跳;夭性病变"(溃疡范围被正常粘膜范围分离)。TNBS-大肠炎可作为有用的测i式建立和创達斤节,殳性回肠炎治疗方法的临床前模型。动物动物每天监控腹泻，体重减轻，和存活情况。实验末期，处死存活的小鼠，心脏刺石皮采集血液样本，切离7cm结肠片断，称重，i平估宏观损伤。大肠炎诱导和研究设计在BALB/c小鼠(8周龄)中通过直肠内施用TNBS(0.5mg/小鼠)-诱导大肠炎。开始3小时之后连续以24小时为间隔，5天内，小鼠腹月空内施用UPF—987(0.3—1-3mg/kg)或J某介(曱基纤维素1%)。每组包括5至7只小鼠。最后施用测试药物或媒介18小时后处死小鼠。通过评估宏观损伤对大肠炎严重程度分级。后者是组织中粒细月包浸润的指标。大肠炎的宏^L分级的详细描述见Fiomcci等，包括O盲分(正常)至4(严重损害)级别。体重和粪便密度在研究的开始和最后进行纪录。收集每个小鼠末端纟*.肠纟且织才羊-本并^口前戶斤Hii4亍实一验。大肠炎的宏观分级结肠在解剖镜(5x)下观察并根据宏观损害分级，基于反应炎症的标准，如充血，肠增厚，和溃疡程度分为10级。定量实时PCR^口前所述通过定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)评估小鼠大肠基因表达。从结肠末端组织提取全部RNA。使用NCBI数据库发表的序列数据，以PRIMER3-OUTPUT软件设计引物37mGAPDH:ctgagtatgtogtggagtctac油dgttggtggtgcaggatgcattgmTNFa:acggcatggatctcaaagacandgtgggtgagcacgtagtmILip:tcacagcagcacatcaacaaandtgtcctcatcctcgaaggtcmlL6:ccggagaggagacttcacagandtccacgatttcccagagaacmINPy:gctttgcagctcttcctcatandgtcaccatccttttgccagtmiNOS:acgagacggataggcagagaandcacatgcaaggaagggaactmTGFpi:ttgcttcagctccacagagaandtggttgtagagggcaaggacmFXR:tgtgagggctgcaaaggtttandacatccccatctctctgcac实施例5"i平4古UPF-987在大鼠淤胆才莫型(ANIT)中的效应背景肝脏内堆积细胞毒性胆酸造成胆汁郁积，其引发肝脏损害最后导致胆汁纤维化和硬化。淤胆肝损害可被多种内在的肝保护机制抑制。这些防卫机制包括抑制肝胆酸的表达和新胆酸的合成。此外，I相和II相胆酸解毒被引发使得胆酸亲水性增强。除了通过微管4t出系统的"直立行走"输出，这些化合物也可以通过基底外侧的"选择性"输出系统输出至系统循环并通过肾排除。亲水性胆酸的被动性肾小球过滤，活性肾管分泌，和管胆酸再吸收的抑制促进了胆汁郁积时肾胆酸的排除。根本的分子机制主要为通过包括核酸受体和其他转录因子的复杂网络的转录水平调节。法尼酯X受体FXR，孕烷X受体PXR，和维生素D受体VDR已经^皮鉴定为胆酸的核酸受体。然而，对于胆酸的纟艮本的对应应答不能完全防止胆汁郁积肝脏损害。因此，需要额外的治疗策略如核酸受体的定位激活，以增强肝脏对毒性胆酸的防御。材料和方法动物才艮据Pemgia大学动物研究委员会批准进行wistar大鼠研究。从CharlesRiverBreeding实-g全室(Portage,MI)获4寻名,寸生wistar大鼠(200-250g),以标准实-验室大鼠^泉饲养，12小时光亮/黑暗循环。淤胆模型方法a-萘基-异硫氰酸盐(ANIT)第一组大鼠(N-6)以100mg/kg,每天，通过强饲法以ANIT处理(引发淤胆)，第二组和第三组(N=6)以ANIT100mg/kg强饲法加上每天腹腔内施用5和3mg/kgUPF-987。对照大鼠(N=4)施用4某介(生理溶液I.P.)。研究末期，大鼠以戊巴比妥钠麻醉处死(50mg/kgi.p.)并通过心脏穿刺采血；分离肝脏并称重测^式，收集血液纟羊本。定量实时PCR如前所述通过定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)评估大鼠基因表达。使用NCBI数据库发表的序列数据，以PRIMER3-OUTPUT软件设计引物39rGAPDH:atgactctacccacggcaagandatgactctacccacggcaagrSHPcctggagcagccctcgtctcagandaacactgtatgcaaaccgaggarBSEP:aaggcaagaactcgagataccagandtttcactttcaatgtccaccaacrCYP7Al:ctgcagcgagctttatccacandcctgggttgctaagggactorCYP8Bl:cccctatctctcagtacacatggandgaccataaggaggacaaaggtctrNTCP:gcatgatgccactcctcttatacandtacatagtgtggccttttggactrMdrl:cgttgcctacatccaggtttandgccattgcctgaaagaacatrMdr2:gttctcgctggtcttcttggandcgtctgtggcgagtcttgtarMMP2:gatggatacccgtttgatggandtgaacaggaaggggaacttg结果测定UPF-987对oc-萘基异硫氰酸盐(ANIT)诱导的大鼠胆汁郁积的体内保护作用。施用ANIT导致严重胆汁淤积，Fiomcci等先前的研究(未出版)已经显示6-ECDCA在本模型中不能有效减少肝脏损害。通过评估三种胆汁淤积和血浆胆固醇标志物，血清水平的AST,yGT和碱性磷酸酯酶，施用UPF-987减弱了ANIT处理大鼠的肝脏损害。此外，UPF-987,调节NTCP，CYP7A1和BSEP表达。实施例6评估INT-1103在大鼠淤胆才莫型(ANIT)中的效应背景INT-1103是6-乙烷-鹅去氧胆酸(6E-CDCA或INT-747)的石jUt》泉生物，其描述于美国专利号7138390，通过引述在此合并于本文。材泮十和方法淤胆模型根据Perugia大学动物研究委员会批准进行a-萘基-异石危氰酸盐(ANIT)wistar大鼠研究。从CharlesRiverBreeding实-验室(Portage,MI)获4寻i禽性wistar大鼠(200—250g),以才示准实马全室大鼠4泉飼养，12小时光亮/黑暗循环。第一《且大鼠(N=8)以100mg/kg,每天，通过强饲法以ANIT处理(引发淤胆)，第二组和第三组(N=8)以ANIT100mg/kg强饲法加上每天腹腔内施用5mg/kgINT-1103。对照大鼠(N=8)施用々某介(生理溶液I.P.)。研究末期，大鼠以戊巴比妥钠麻醉处死(50mg/kgi.p.)并通过心脏穿刺采血；分离肝脏并称重测试，收集血液样本。定量实时PCR如前所述通过定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)评估大鼠FXR目标基因表达。使用NCBI数据库发表的序列数据，以PRIMER3-OUTPUT软件设计引物rGAPDH:3tgactctacccacggc幼gandatgactctacccacggcaagrSHPcctggagcagccctcgtctcagandaacactgtatgcaaaccgaggarBSEP:aaggcaagaactcgagataccagandtttcactttcaatgtccaccaacrCYP7Al:ctgcagcgagctttatccacandcctgggttgctaagggacterCYP犯l:cccctatctctcagtacacatggandgaccataaggaggacaaaggtctrNTCP:gcatgatgccactcctcttatacandtacatagtgtggccttttggactrMdrl:cgttgcctacatccaggtttandgccattgcctgaaagaacatrMdr2:gttctcgctggtcttcttggandcgtctgtggcgagtcttgtarMMP2:gatggatacccgtttgatggandtgaacaggaaggggaacttg41实施例7评估INT-1103在大鼠淤胆才莫型(BTL)中的效应才才料禾。方法(BTL)肝淤胆模型通过225-250g老年雄性Wistar大鼠胆管结扎(BDL)诱导。对Sham-operated大鼠(N=8)进行相同的腹腔镜手术，除了所操作胆管没有被结扎和分段。共处理24只大鼠。手术3天后，存活的大鼠随机通过腹腔内给予安慰剂，(fisioogic溶液)(N=6)或5mg/kgINT-1103(N=8)。动物实验进行7天。研究末期，大鼠以戊巴比妥钠麻醉处死(50mg/kgi.p.)并通过心脏穿刺采血；分离肝脏并称重测试，收集血液4羊本。实施例8评估未处J里大鼠中INT-1103和INT-747对胆汁流的作用才才料禾口方法200至250g成年^M生Wistar大鼠用于本研究。实-睑前，动物给予标准饮食和随意饮水，房间温度(21-23°C)，湿度(45-50%),12小时光亮/黑暗循环。所有研究根据Perugia大学动物研究委员会批准进^亍。动物以单剂量戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg体重，腹腔内)并在整个实验中维持该条件，测定胆汁流。使用PE—50聚乙丈希管(Intramedic;ClayAdams,Parsippany,NJ)颈静脉导管插入后，腹部开中等切口，胆总管导管插入(PE-10,ntramedic;ClayAdams)。以热灯使体温维持在37.0至38.5°C以防止胆汁流受体温过低影响。通过胆外瘘在195min内每15min收集胆汁样本并且称重以测定胆汁流量。假设l.Og/ml的胆汁浓度，通过重量测量法测定胆汁流。在9:00-11:OOAM之间收42集胆汁，使节律的影响最小。通过颈静脉插管施用3jumoli/kg/min药物，对照组Y又4妻受々某介(2%BSAfisilogic溶液)。实施例9评估J难激素瘀胆大鼠中INT-1103和INT-747对胆汁流的作用材料和方法300至350g成年孟,性Wistar大鼠用于本研究。实-验前，动物给予标准々大食和随意々大水，房间温度(21-23°C)，湿度(45-50%),12小时光亮/黑暗循环。所有研究根据Perugia大学动物研究委员会批准进行。动物被随机分成4个实验组1.未处理，(N=5)2.以5mg/kg腹月空内5天施用17—乙炔基站,二酉事，(N=8)3.腹腔内5天施用5mg/kg17-乙炔基雌二醇+5mg/kgINT-747,(N=7)4.腹腔内5天施用5mg/kg17-乙炔基雌二醇+5mg/kgINT-1103,(N-7)在第6天(施用最后剂量的E217后1天)进行手术，收集胆汁。动物以单剂量戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg体重，腹腔内)并在整个实—验中维持该条件，测定胆汁流。腹部开中等切口，胆总、管导管4悉入(PE—10，ntramedic;ClayAdams)。以热灯l吏体温维持在37.0至38.5。C以防止胆汁流受体温过低影响。在9:00-11:OOAM之间收集胆汁，使节律的影响最小。在120min内每15min收集胆汁样本，胆汁流通过重量测定法测定。在实验的最后，称量大鼠的体重和肝重。实施例10INT-747相对INT-1103对胰岛素基因调节的体外研究材料和方法RT-PCR分析，在1%青霉素/链霉素，1%L-谷氨酰胺和10%胎牛血清(高葡萄糖)(CELBIO)的D-MEM中培养B-TC6胰细胞。细胞于37。C，5。/。C02生长并用最终浓度1nM的INT-1103和INT-747处理18小时。实验末期收集细胞以提取RNA。实时PCR通过定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)对小鼠基因表达进行定量。使用NCBI数据库发表的序列数据，以PRIMER3-OUTPUT软件设计所有引物。从肝脏中4是取全部RNA(TRIzol^式剂，Invitrogensrl,Milan,Italy)。1孩t克纟屯4b的RNA以DNAseI室温处理10分钟，随后加入2.5mmol/LEDTA于95。C孵育3分4f。4吏用随机引物在20ju1反应体积中以SuperscriptIII(Invitrogen,Carsbad，CA)对RNA反转录。100ng模板溶解于25jul反应液中，其含有0.3nL每种引物和12.5jul2xSYBRGreenPCRMasterMix(Fynnzimes-DyNAmoSYBRRGreenqPCRmix)。所有反应进4亍三次重复，在iCycleriQ设备(Bio-Rad,Hercules,CA)上进行，循环条件如下2分钟95。C，随后进行95。C20秒，55°C20秒和72°C30秒循环50次。计算每个才羊本重复实-险的平均值，以循环限度表示(CT;每个PCR反应达到预定的荧光限度时的循环数，对于所有反应都设置一个线性范围)。通过目标基因样本的CT值和内源性对照(GAPDH)的平均CT值的差值(ACT)计算基因表达的数量。以测定的对照样本和每个目标基因间ACT的差异(AACT)计算相对表达。相对mRNA表达以2-△ACT表示。实时PCR中使用的引物为m<5APDH:gaaggtgaaggtcggagtandcatgggtggaatcatattggaa;mSHP:gctgtctggagtccttctggandccaatgatagggcgaaagaagag;mSREBPlc:gcaaggccatcgactacattandggtcagtgtgtcctccacct.mINS:tgttggtgcacttcctacccandttgttccacttgtgggtcctmSHP:aagggcttgctggacagttaandtctcttcttcctccctatcamGLUT2:ccctgggtactcttcaccaaandgccaagtaggatgtgccaat实施例11INT-747和INT-1103的物理化学特性背景两种胆酸类似物，INT-747和INT-1103,才艮据先前发现并经我们实-睑室优化的方法，具有完全的物理-化学特征，并先前经R.Pellicciari实-睑室研究应用于完全扫描大量系列的胆酸类A乂物(UDCA类似物)。选择物理-化学特征以精确定义緩冲溶液和生理体液的特性，并建立其对生理成分的潜在毒性，其在不同生物体液和器官中的药^动力学和药效学及生物分布。与自然类似物的比较数据也一皮提供并讨论。水溶解性454义<又研究旁链羧基BAINT-747,CDCA和UDCA。固体BA悬浮于5mlO.IMHC1。孵育1周后，饱和溶液经Millipore过;虑(0.22nm),<吏用C18谗主子(150mmx2mmi.d.4jam)以HPLC-ESI-MS/MS测定BA的浓度，水流动相包括15mMpH5乙酸和乙腈。流速为150jal/分钟。使用阴离子ESI源多重反应监控模型进ff质谱采集。緩沖溶液以inmoi/升表示表3:胆酸研究的緩沖溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>*水溶性指BA作为质子化物质因此不对INT-1103评估测定pH值为1时羧酸盐胆酸的不溶性质子化物质的水溶性。碗酸盐化合物，UPF1103在低pH时仍是电离的并且在所有生理体液的生理环境下是始终可溶的。INT-747的水溶性是9"M，其比CDCA低，与UDCA相当。因为INT-747的CMC相对较低(见下一章节)，INT-747的低水溶性并不折衷胶束相化合物的特性；对于UDCA，高CMC相关的低水溶性折衷于使溶液中质子化酸形成胶束的pH。事实上，UDCA的CMpH是8.4,如果不在十二指肠中显现餐后碱化作用，其是过高的。临界孩i团浓度(CMC)<吏用最大泡压法通过测定表面张力测定该值。张力计是Sensadyne6000(Chem-DyneResearchCorp.,Milwaukee,WI),配备与氮气源连接的0.5和4.0mm直径的玻璃探针。气泡频率为26。C去离子水中1气泡/秒(P=2.7atm),以双去离子水和曱醇标化。BA钠盐溶液的表面张力在水和0.15MNaCl中以不同浓度范围进4亍测定，分另'J为0.2—75mM禾口0.3—100mM。4夸表面张力对于胆酸浓度的对数值作用；4吏用最小平方计算对应于曲线两个部分(单节显性和胶束相)的回归线，线的交点作为CMC值。表4:研究的胆酸的临界微团浓度胆酸CMC(mM)STcmcST50H20NaCl0,15MDyne/cmDy加/cmINT-7474.52.948.843.2INT-11033.91.347.943.3CDCA7.53.055.648.5UDCA266.063.050.4TUDCA8.0*2.2*TCDCA7.0*3.0*_-STCMC:水中CMC的表面张力，ST50:50mM緩冲溶液中的表面张力；*:文献值在非平衡条件，例如，杂质不影响结果的条件下通过表面张力测定的INT-747和INT-1103的CMC值是相当低的，相似于CDCA自然类似物。INT-1103在7jc中和存在150mM反相Na+离子时都具有更低的CMC值。INT-747的低CMC值与乙烷基和羟基的局部解剖学分布相关第6位的乙烷基定向于I3方位，类固醇的后位，其有助于增加亲脂性范围和该配基的表面积，因此趋向于形成樣i团。INT-1103由于侧链上第6位的乙烷基和第23位的硫酸盐，具有更低的CMC值。由于带有表面亲脂性基47团的阴离子头部和脂质尾，硫酸盐基团的特殊性质给予INT-1103阴离子表面活性剂相似特性(类似于十二烷基磺酸钠)。CMC和胶束相(50mM)的表面张力活性值与已有的CMC数据一致，两种化合物都具有表面活性，并且在^艮大程度上可以降低UDCA和TUDCA的表面张力。这些数据进一步支持该化合物是类似于并且甚于CDCA类似物的去污剂。相对高浓度>60mM的INT-747及存在0.15MNa+时形成月交束相，i兌明了该条件下发现的相关非#青确ST数据(图1)。这些结果是不惊奇的，因为其他去污剂自然BA,4。去氧胆酸类似;也形成该凌是"交(通常为黏弹性的)，特别是在反相离子如Na+和Ca—的作用下。该相位发展出相对低动力学的胶束相。此外该现象发生在非常高的非生理浓度下。辛醇/水划分凌文应使用常规^罢弁瓦方法;平估1-辛醇/水划分效应(logP)。实验在pH8O.lmM月旦盐溶液和0.1M磷酸緩冲液中进行以确保BA的完全电离；logP值指电离形式的BA,非质子化物质，每种BA的最初;农度在其CMC值之下。緩沖溶液预先以1-辛醇预-々包和，加入5ml水预-饱和的1-辛醇，样本于室温连续搅拌平衡2周。离心后分离两相。4吏用C184主子(150mmx2mmi.d.,4jum)HPLC-ESI—MS/MS测定水相中BA浓度，流动相A:15mM乙酸水溶液pH5，B:乙腈。流速为150jul/分钟，柱子维持在45°C。使用阴离子ESI源在多种反应监控模型中进行质镨分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>计算电离物质的1-辛醇-水分离系数以促进羧基和石危酸盐胆酸的比4交，而后者在非常低的pH时不被质子化。INT-747相对于其他二羟基胆酸如UDCA和CDCA,具有略高的亲脂性。增加的亲脂性是位点6引入乙烷基团的结果。在脂质范围中的分布趋势因而更高。由于石危酸基团和侧《连长度，UPF1103显示lpgP为2.0，略低于INT-747和自然CDCA和UDCA类似物。此夕卜，INT-1103的亲脂性类似于非结合的BA并高于牛磺酸连4妻的TCDCA，其logP为0.9。相反的，7jc相中的牛碌酸连才妄物，INT-1103类似于INT-747具有在脂质区i或聚集的趋势。白蛋白结合通过固定BA-白蛋白比例平衡透析评估白蛋白结合。BA溶解于100juM5。/。牛血清白蛋白-盐溶液并放置于25°C24小时。2ml该溶液置于分子量截留值为12-14000的纤维素嚢中，以25ml盐溶液透析。系统通过机械振动在25。C平《軒72小时。用HPLC-EIS-MS/MS以前述相同的条件测定透析溶液和起始溶液的BA浓度。表6:研究的月旦酸的白蛋白结合*:文献值<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>INT-747和UPF1103都表现了类似于自然双羟基胆酸，如CDCA和UDCA的与白蛋白的强交互作用，显示肝脏吸收的类似动力学。三羟基胆酸如胆酸或牛石黄酸连接的胆酸显示较低的白蛋白交互作用，-说明了显示的肠吸收中更低的血清浓度，造成更高的第一4仑清除结果。未结合的片断(与许多药物类似)调节肝脏吸收片断增力口吸收。INT-747和INT-1103具有更低的非结合片断因此作为相对较低的第一轮清除，其血清浓度更高，其特性相似于自然类似物。临界胶束pH该一f直可以通过评估给定BA开始由月交束、溶液沉淀的pH{直测定。可以由CMC计算。质子4匕物质水〉容液和pKa为以下形式CMpH=pKa+logCMC/WS。表1描述了研究的化合物与自然类合乂物比4交的CMpH。表7:研究的胆酸临界胶束pH<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>INT747的CMpH值相似于CDCA而低于UDCA。根据该值INT747没有肠内可〉容性的问题，并且需要pH7.6的溶解生理条件。例如UDCA的CMpH值为8.4,需要十二指肠中的更高碱性，并且只在々大食后阶—敬以月交束相溶解。UP1103具有錄b酸基团，不具有该问题，其在2至9的生理pH下都为可溶，因此pKa非常^f氐，化合物并不质子化形成非可溶性分子。其性质类似于牛磺酸连接的胆酸。实施例12大鼠iv灌$#3jumol/Kg/分钟INT-747和INT-1103—'J、时后的肝脏^i射和分泌背景大鼠胆管灌输BA,7小时内每15分钟收集胆汁。测定胆汁流，HPLC-ES-MS-MS分析胆汁以鉴定胆汁分泌速度并评估主要肝脏代i射。HPLC-ES-MS/MS方法通过液相色谱-串写关质谱(HPLC-ES-MS/MS)方法使用阴离子才莫型电喷射(ESI)源测定胆酸和其代i射物。大鼠胆汁样本置于室温并以15mM醋酸铵缓冲液(pH5)1:100v/v-1:1000v/v稀释。10juL注射入色讀-柱。4吏用WatersAlliance2695分离单元及自动近样装置进4亍液相色i普。4吏用SynergiHydro-RPC18柱子(150x2.0mmi.d.，4/am粒径)分析胆酸，SecurityGuardODS4x2.0mmi.d。寸呆护^主寸呆护，由Phenomenex才是供。4吏用15mM醋酸铵《爰沖液(pH=5.00)作为流动相A及乙腈作为流动相B以洗脱梯度分离胆酸。流动相B在12分钟内由30%增加至64%，随后在8分钟内增加至70%,最后在IO分钟内达到100%并维持1分4f。流速为150juL/分钟，柱子维持45。C。多重反应监控(MRM)获得冲莫型操作，用Quattro-LC"鼓小质量)三四质谱以ESI-MS/MS分析柱子流出物。MassLynx软件4.0版用于获得和才喿作^:据。结果INT-747主要以牛石黄酸结合物分泌入胆汁中并且其回^li:是几乎完全的给药剂量时超过99%的灌输分子分泌入胆汁中，如图3显示。胆汁收集的最后点在胆汁中仍分泌相当高数量的牛磺酸结合化合物。在输送末120分钟后达到最大分泌速度。随后30分钟维持稳定的浓度阶段。牛磺酸结合方法开始于非常早期，并且在给药剂量上显示效果。痕量的化合物也与甘氨酸结合，其少于0.2%并且显示的数量分泌入胆汁中。INT-747的特性与自然乂又羟基类似物如CDCA活UDCA类似，其^f又以牛磺-酸和甘氨酸结合物形式分泌入月旦汁中。不同的，商羟基BA如CA，也可以部分以非结合形式分泌。非修饰BA的分泌范围依赖于其亲脂性和剂量及物种。该分子的肝脏吸收和分泌特性与自然类似物如CDCA非常52显示，并且肝脏分泌的速度与CoA活性介导的牛》黄酸结合和牛磺酸肝脏利用率相关。与牛石黄酸的结合是大鼠和其他物种(狗，小鼠，...)特有的，人类中该化合物主要与甘氨酸结合给药。根据这些凄t据显示INT-747可以有效的被肝脏吸收和分泌。INT-747的肝脏代谢过程主要为牛石黄酸结合形式。痕量的甘氨酸结合物在胆汁中分泌，并且分泌量非常少(图37和38)。胆汁中存在非结合的和牛磺酸结合的小差向异构体(图39和40)。^口图41显示INT-1103在月旦汁中部分以非^修饰形式分泌。胆汁中INT-1103的分泌量约为《会药剂量的30-40%，其分泌速度相对4交{氐，收集末期相当高婆史量的分子仍分泌入胆汁中。大鼠中给药剂量的INT-1103的主要肝脏代谢物为3-葡萄糖甘酸，如图42所示。由于没有纯〗匕的参考标准物，没有对该化合物定量。其他分泌入月旦汁的代i射产物描述于图43，更详细见图43和图44。奠定的主要代谢产物是3-硫酸盐结合物，一种羟基类似物(超过一个羟基)，酮派生物和INT-1103差向异构体。由于没有纯化的参考标准物，没有对这些化合物定量。这些凄《据显示INT-1103可以以该方式分泌入胆汁，并且其特性与需要与牛磺酸和甘氨酸结合分泌入胆汁的自然双羟基类似物如CDCA和INT-747不同。这是这些分子亲脂性所需的主要方面。相反，可以分泌入胆汁的三羟基BA如CA或UCA也部分如此。INT1103中的硫酸基团促进分泌过程，即使该分子仍是亲脂性的，并且其特性在非连接和牛磺酸连接胆酸之间。此外肝脏主要将该化合物代谢形成更具亲水性的化合物，如3-葡萄糖甘酸，3-辟b酸盐和羟基化类似物。^呆留化合物的广泛代i射作用与动物种类和给药剂量相关，并且根据这些数据我们可以推测该化合物的代谢相似于"酸甾体"，稍不同于通常的胆酸，但可能具有相同的特性。我们不知道人体中的代i射，但如果其特性更53类似于一种甾体，其在人类体中可能转化为3-葡醛酸。化合物通过ivi合药并且需要进一步的数据以评估其肠吸收的程度，例如类似牛磺酸结合物的去活性或激活性。实施例13人类粪便培养的体外代谢稳定性对于肠道细菌的稳定性；7a-脱羟基均质新鲜人类粪便(500mg)转移至无菌小并瓦中，加入5mL无菌碎肉-葡萄4唐i咅养基(ScottLab,Fiskville,RI)。力口入BA至纟冬;农度0.05mM。小弁瓦于37。Ci咅养；加入BA0,4，8,16,20,24和72消失后，加入150L30%KOH终止反应.样本经3500rpm离心10分钟；以C-18固相分离上清液中的BA并用TLC和HPLC-ES-MS/MS分才斤。4吏用0.25m厚度石圭月交4反(Merck，Darmstat，德国)薄层色谱(TLC)，进行第一次筛选实验。用于分离结合BA的溶剂系统包括丙酸/乙酸异戊酉旨/水/N-丙醇(3:4:1:2,v/v/v/v;溶剂I)，非结合BA的溶剂为乙酸/四氯化碳/异丙醚/乙酸异戊酯/水/N-丙醇/苯(1:4:6:8:2:2,v/v/v/v/v/v;;容剂II)。分离的BA以5%石粦钼酸乙醇-容液显色。INT-747和INT-1103经人类粪侵J备养都非常稳定，如图45显示甚至24小时后可以回收超过85%的非修饰化合物。相反，参考自然类似物CDCA的半衰期为1小时，孵育8小时后几乎完全代谢(双羟基化)形成石胆酸。结果图46的数据显示，第6位乙烷基团的存在通过空间位阻保护了7鞋基基团的氧化或去除。此外，两种类似物，特别是INT-1103非常稳定。侧链酯键在人类粪便培养物中非常稳定。通过HPLC-ES-MS/MS没有发现微小代谢物。实施例14十二指肠/胰液刺激的体外稳定性(USP规范)材料和方法本研究仅针对INT1103,由于侧链其含有酯键，目的是-睑证存在胰酶时的稳定性，如在十二指肠和胰液中。以0.05M磷酸緩沖液溶解胰酶(SigmaP8096:来源于猪胰腺的胰酶，1xUSP规范的活性)制备10g/L胰液，pH-7.2±0.1.4mL胰液中加入50luMINT-1103并于37。C孵育不同时间(0，30，60，90，120,180，和240分钟)。孵育后，2mL每种溶液加入2mL0.1MNaOH,通过SPE提取胆酸，以前述薄层色谱和质谱进行分析。权利要求1.结构式(I)的化合物其中R是氢或α-羟基位置7上的羟基基团是α或β位的和药学上可接受的盐，溶剂化物或其氨基酸结合物。2.一种结构式(I)的化合物，并且R为氢。3.一种结构式(I)的化合物,并且R为氢。4.一种结构式(I)的化合物，并且R为oc-羟基。其中位置7的羟基基团在ot位其中位置7的羟基基团在p位其中位置7的羟基基团在a位5.—种结构式(I)的化合物，其中药学上可接受的盐为:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>6.—种结构式(I)的化合物，其中药学上可接受的盐为7.—种在哺乳动物中预防或治疗FXR-介导的疾病或状况的方法，包4舌对患有FXR-介导的疾病或状况的哺乳动物施用治疗有效剂量的根据权利要求1-4中任意一项所述的结构式(I)的化合物。8.4艮才居4又利要求5的方法，其中FXR-介导的疾病或状况选自由十曼'l"生肝病，胃肠疾病，肾病，心血管疾病，和代j射疾病所-纟且成的《且中。9.根据权利要求6的方法，其中慢性肝病选自由以下疾病所组成的组中，原发性石更化(PBC),脑腱性黄瘤症(CTX),原发性硬化性胆嚢炎(PSC),药物导致的胆汁郁积，妊娠肝内胆汁淤积症，肠外吸收相关胆汁郁积(PNAC)，细菌过度生长或脓血症胆汁郁积，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，肝移植相关移植物抗宿主病，活供体肝移植再生，先天性肝纤维化，胆总管结石，肉芽性肝病，肝内-或外恶性肿瘤，Sjogren综合征，结节病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1—抗月夷蛋白酶缺乏症。10.才艮据权利要求6的方法，其中胃肠疾病是选自由以下疾病所组成的组中炎症性肠病(IBD),包括Crohn，s疾病，溃疡性肠炎，肠易激综合征(IBS),细菌过度生长，营养吸收不良，反射-后结肠炎，和孩i小性结肠炎。11.才艮据权利要求6的方法，其中肾疾病是选自由以下疾病所组成的组中糖尿病肾病，局灶节段性肾小球硬化症(FSGS),高血压肾病，慢性肾小球炎，慢性移植性肾小球病，慢性间质性肾炎，和多嚢肾病。12.才艮据4又利要求6的方法，其中心血管疾病是选自由以下疾病所组成的组中动脉石更化症，动脉石更化，血脂障碍，高胆固醇血症，禾口高甘油三酯血症。13.才艮据4又利要求6的方法，其中代谢疾病是选自由以下疾病所组成的组中胰岛素抗性，I型和II型糖尿病，或月巴胖。14.一种药物组合物，包^"4艮据4又利要求1-4中的任意一项所述的结构式(I)的化合物和一种药学上可接受的载体或稀释剂。15.根据权利要求1-4中任意一项所定义的结构式(I)化合物在制备用于预防或者治疗FXR-介导的疾病或状况的药物中的应用。16.根据权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于子贞防或治疗FXR-介导的疾病或状况的药物中的应用，所述FXR-介导的疾病或状况选自由慢性肝病，胃肠疾病，肾病，心血管疾病，,n^i射疾病，心脏血管疾病，动月永》更<匕症，动月永》更化，高胆甾醇血，和高脂血所组成的组。17.才艮据权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于预防或治疗淤胆肝疾病'漫性肝疾病的药物中的应用，所述淤胆肝疾病慢性肝疾病选自由原发性硬化(PBC),脑腱性黄瘤症(CTX),原发性硬化性胆嚢炎(PSC)，药物导致的月旦汁郁积，妊娠肝内胆汁淤积症，肠外吸收相关胆汁郁积(PNAC),细菌过度生长或脓血症胆汁郁积，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH),肝移植相关移植物抗宿主病，活供体肝移植再生，先天性肝纤维化，胆总管结石，肉芽性肝病，肝内-或外恶性肿瘤，Sjogren综合征，结节病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1-抗胰蛋白酶缺乏症所组成的组。18.才艮才居权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于预防或治疗胃肠疾病的药物中的应用，所述胃肠疾病选自炎症性肠病(IBD),Crohn's疾病，溃疡性肠炎，肠易激综合征(IBS),细菌过度生长，营养吸收不良，反射-后结肠炎，和樣史小性结肠炎所组成的组中。19.根据权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于预防或治疗肾病的药物中的应用，所述肾病选自由糖尿病肾病，局灶节段性肾小球硬化症(FSGS),高血压肾病，慢性肾小球炎，慢性移植性肾小球病，慢性间质性肾炎，和多嚢肾病所组成的组中。20.根据权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于"页防或治疗心血管疾病的药物中的应用，所述心血管疾病选自由动月永石更化症，动厨"更4匕，血脂障^碍，高胆固醇血症，和高甘油三酯血症。动力永石更^f匕症，动&;M更化，高月旦固商事血症，和高血脂所组成的《且中。21.根据权利要求1-4中任意一项所定义结构式(I)化合物在制备用于预防或治疗代i射疾病的药物中的应用，所述代i射疾病选自由fl夷岛素抗性，I型和II型糖尿病，或月巴胖所组成的组中。22.药物组合物，包括混合有药学上可接受的载体和/或稀释剂的根据权利要求1-4中任意一项所定义的结构式(I)化合物。全文摘要本发明涉及结构(I)的化合物其中R是氢或α-羟基；位置7上的羟基基团是α或β位；和药学上可接受的盐，溶剂化物或其氨基酸结合物。文档编号C07J9/00GK101522703SQ200780032111公开日2009年9月2日申请日期2007年6月27日优先权日2006年6月27日发明者M·普鲁泽斯基,R·佩里恰里,S·菲奥鲁西申请人:英特塞普特医药品公司