专利名称：肽合成的方法
技术领域：
本发明涉及固相肽合成领域，特别涉及在固相合成中通过将保
护的氨基酸如Fmoc-氨基酸连接至扩展肽的游离7V-末端以构建肽的 文良方法。
背景技术：
已知大氨基酸，特别是精氨酸、高精氨酸和去甲精氨酸 (norarginine)比其它氨基酸更难以偶联至扩展中的肽链。该问题存在 于多^:常用的偶耳关剂，并在固相合成中更为严重，在固相合成中树 脂表面可能带来额外的空间阻力。一^殳而言，该问题可通过使用比 标准量更高数量的待偶联氨基酸或寡肽，特别是通过重复偶联循环 得以克服。当然，该种过量使用多种试剂的方法将导致昂贵试剂的 大量浪费。
Di Bello等人(Semisynth. Pept. Proteins, Pap. Int. Meet. Protein Semisynth.， 会议日于间1977, "coupling of arginine peptides", 1978, 373-379)使用标准yV,/V-二环己基碳二亚胺(DCC)偶联化学物4佥查了 这一问题，详述了实验数据并测试了用于将二肽Z-Phe-Arg-OH或 Boc-Glu(OBzl)-Arg-OH偶耳关至与Merrifield聚笨乙烯冲对脂连4妾的保 护的戊聚体或九聚体的7V-末端的不同偶耳关辅剂。所有的偶耳关在室温 下进行。通过偶联剂DCC得到了最佳的结果，且添加剂1-羟基-苯
6并三唑(HOBt)带来了定量产率。该方法的缺陷是必然要求二肽和寡 聚体在A^V-二甲基甲酰胺中以5:1的摩尔比例重复偶联。
然而，尽管使用HOBt,相对高水平的外消旋化形成了碳二亚 胺偶耳关剂的多种缺陷，导致了随后形成完全不同偶耳关剂，如Jiang等 人，Tetrahedron 1998， 54， 14233-14254纟宗述的<9國(笨并三口生-1-基)-M/V,yV',vV'-四曱基脲六氟磷酸(HBTU)或苯并三唑-l-基氧基-三 (三曱氨基)磷六氟磷酸(BOP)。
根据Nishim編等人，Chem. Pharm. Bull. 1976, 24， 1568-1575，
为解决大精氨酸或高精氨酸偶联的问题，可通过，例如，将空间需 求更小的鸟氨酸偶联至肽链，然后(即，在最后的偶联步骤之后， 并在总体脱保护之前)通过胍基化(guanidation)将所述鸟氨酸转化为 精氨酸。该方法的缺陷是牵涉了附加的化学反应步骤，从而提高了 杂质水平。另一种不利作用是需要一种挑战保护策略，因为为了进 行后续胍基化，鸟氨酸必须一皮能够根据需要特异性裂解的正交保护 基团所封闭。最后，胍基化在从该树脂裂解之后进行。然而，传统 的聚苯乙烯树脂，例如Wang树脂和Rink树脂通常需要严格的裂解 条件，导致肽不利i也一皮部分或完全M/f呆护。
因此，非常需要将大氨基酸与赖氨酸残基或其同族体偶联的方 法，从而使包含该种引起兴趣的基序的肽可达到工业规模。 一种感
兴趣的肽是显示了抗樣t生物和抗菌活性的抗感染阳离子 "indolicidin"Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-
NH2。该种阳离子抗感染肽由于其C-末端酰胺化形式而通常更具活 性。US-A1 -2003/0219854 4皮露了作为广i普抗樣么生物物质的 indolicidin及其-进一步的书f生物，其可帮助克月良病原农t生物对标准 抗生素的多重抗药性的迅速传播。indolicidin的序列显示了在实现
7可接受的偶联产率上的实际挑战，因为两个精氨酸残基需要被偶联 至第一赖氨酸。
发明内容
因此，本发明的目标是i殳计能够克月l固相肽合成中与精氨酸残 基或其类似物的偶联问题，特别是在将精氨酸或其同族体偶联至对 空间有同样要求的赖氨酸或赖氨酸同族体时的偶联问题的方法。根 据本发明，通过采用侧链锚定策略，令人惊讶地解决了低偶联效率 的问题。本发明通过避免固相合成中不利的早期链终止，明显提高 了偶联产率。
上述目标可通过权利要求1所述的方法得以实现。采用权利要 求1所述的方法时衍生得到的化合物同样是本发明的目标。
申请人发现了由式I的化合物起始的肽合成方法
其中A为固相支持物或嫁接至固相支持物的接头；n为O和10 之间的整数；X是C,v烷氧基，芳基取代的C,—6烷氧基，芳氧 基，烯丙氧基，可选地保护的氨基酸残基，可选地保护的肽残 基或NR1112,其中R'和R"独立地为氢或Cwo烷基；且Y是与 A和该氨基官能团之间的4定正交的保护基团；并包含如下步骤
(a) 将W-末端a-氨基官能团脱保护，
N
H(b) 将具有游离或激活羧酸官能团的至少yv-末端保护的氨基
酸或肽与步骤(a)的该脱保护a-氨基官能团相偶联，从而延 长该式I的化合物，
(c) 可选地重复步骤(a)和(b)至少一次，其中至少iV末端保护 的氨基酸或肽与在先步骤(b)相同或不同，
(d) 将所得肽,人A上裂解，
(e) 可选地去除步骤(d)后残留的所有保护基团，
(f) 分离并可选i也纯4匕所;彈的肽。
此处和下文的术语"C,-n烷基"应理解为表示包含1至n个碳原 子的线性或支链烷基基团。例如，术语"Cw)烷基"包括例如曱基， 乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异 戊基(3-曱基丁基)，新戊基(2，2-二曱基丙基)，己基，异己基(4-甲基
戊基)等基团。
相应地，术语"C"。烷氧基"指由上文定义的Cu，烷基和通过单 个共伤、4建连4妾的氧原子组成的基团。
术语"芳基取代的CNn烷基"应理解为表示由在线性或支链碳链 上的任意位置上被至少一个苯基基团取代的上文定义的C,-n烷基组 成的基团。该苯基基团可以可选地-故至少一个选自羟基，Cw烷氧 基和卣素的取代基所取代。芳基取代的d-n烷基基团的范例为苄基，
1-(3-羟苯基)-丙烷-2-基或l-(3-曱氧基苯基)丙烷-2-基。
此处和下文的术语"烯丙氧基"应理解为表示可被Cw烷基或卤
素可选地取代的烯丙基基团。在本发明方法的优选实施方式中，该式I的化合物中的Y是选 自Fmoc, Boc, Cbz， Npys和Alloc的正交《呆护基团；其条4牛是当 X为烯丙氧基时Y不是AUoc。
此处和下文的"Fmoc"是芴-9-基甲氧基羰基的缩写，"Boc，，是叔 丁氧基羰基的缩写，"Cbz"是苄氧基羰基的缩写，"Npys"是3-硝基 -2-他啶石克酰的缩写，而"Alloc"是蜂丙氧基羰基的缩写。
此处和下文涉及两种不同保护基团的术语"正交，，应理解为表 示在相同的反应条件下，可去除一种保护基团，同时另一种基团保 持稳定。相应地，涉及保护基团与赖氨酸侧链或其同族体的氨基官 能团与固相支持物或嫁接至固相支持物的接头A之间的键的术语 "正交的"应理解为表示在相同的反应条件下，可除去该保护基团， 同时所述键保持稳定。
手性时，包括其L或D构型或外消旋体的任意肽。非天然氨基酸的 范例为高半胱氨酸，高精氨酸，环己基丙氨酸，青霉素酰胺(Pen) 或鸟氨酸(Orn)。术语"肽骨架"，"主链"，"侧链"和前缀"去甲"和"高" 可参照IUPAC-IUB定义进4亍解释(Joint IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, "Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides", Pure Appl. Chem. 1984, 56, 595-624)。
在其广义含义中，"高"应理解为表示以线性方式添加至赖氨酸 侧链的最多九个额外的亚甲基基团。在其较窄和优选的含义中，"高" 表示在侧《连中仅有一个额外的亚甲基基团。在上下文中的"去曱"始
终解释为从￡-天然赖—氮酸的侧链除去一个间隔的亚曱基基团。在上下文中氨基酸侧链的"CO-氨基基团，，应理解为表示该侧链 的"末端"氨基基团，且其与石炭<随长度无关。
在本发明的优选实施方式中，式I的化合物的n为O, 1, 2， 3, 4， 5， 6， 7, 8, 9, 10;《尤选的n为0， 1， 2, 3, 4;即，通过其 氨基侧链锚定的该氨基酸残基为e-赖氨酰基，co-高赖氨酰基或co-
去甲赖氨酰基。
本发明的另一优选的实施方式中，式I的化合物的Rt和《_2独 立地为氢，甲基，乙基，丙基和丁基；优选氩，曱基和乙基；最优选氢。
在优选的实施方式中，步骤(b)的该W-末端保护的氨基酸为琴 末端保护的精氨酸(Arg)或高精氨酸(Har)。在另一优选的实施方式 中，步骤(b)的该iV-末端保护的肽包含作为C-末端残基的Arg或Har。
Arg或Har的胍基基团可^皮保护或未4皮保护。本领i或l支术人员 已知的任意适用的胍基保护基团均可〗吏用，例如可4吏用Cbz， 2,3,6-三甲基-4-曱氧基苯磺酰基(Mtr),硝基，甲笨磺酰，5-磺酰基-2,2,4，6，7-五曱基-笨并呋喃(Pbf)， 2,2，5,7,8-五曱基色满-6-磺酰基(Pmc),金烷 氧基羰基，叔丁氣基羰基(Boc)或三苯甲基(Trt)。
在更优选的实施方式中，该Arg或Har侧链4皮Pbf保护。根据 本发明的，另一种优选方式可优选在作为Fmoc-Arg或Fmoc-Har 使用时，不经共价连4妻的胍基保护基团，而采用非共价保护化学品 来偶联Arg或Har。这可通过如下方式实现确保单个Arg或Har 残基偶联后该胍基基团在任何进一步偶耳关反应之前被定量质子化， 从而与该质子供体在有机溶剂内形成稳定的离子对。在实践中，该树脂结合的肽可以过量的酸性偶联辅剂(例如可在芳香核上^皮进一
步取代的l-羟基苯并三唑(HOBt),笨并三嗪衍生物或氮杂笨并三 嗪)进行处理。另一种清除胍阳离子基团的电荷的可能性在于使用 四笨基硼酸酯作为例如US 4，954，616中列举的质子化Fmoc-保护的 Har的平tf离子。
本领域公知在固相合成中，在氨基酸侧链中的大多数，或者优 选所有的官能团必须以不受肽链装配过程中采用的反应条件所影 响的永久保护基团进行掩蔽。除了待偶联的最后一个氨基酸外，每 个待偶联氨基酸的a-氨基基团被保护基团临时保护，该保护基团优 选与该侧链保护基团正交，从而可用与该侧链保护基团相同的去封 闭化学物去除。当该侧《连如本发明所述锚定该第一氨基酸后，该临 时a-氨基保护基团被去除。
本领域4t术人员已知的所有适用的保护基团均可同时用于保
护在本发明的步骤(b)和(c)中所用的该侧链官能团和该氨基酸或肽 的a-氨基基团。适用的保护基团包括但不限于芴-9-基甲氧基羰基 (Fmoc)，节氧基羰基(Cbz)，叔丁氧基羰基(Boc), 2-(4-双苯基基)_ 异丙氧基羰基(Bpoc),乙酰胺基甲基(Acm)，乙酰基(Ac),烯丙基 (All),烯丙氧基-羰基(Alloc)，苯甲酰基(Bz),苄基(BzI), 3-羧基丙 酰基(Sue), 5-磺酰基-2,2,4，6，7-五甲基苯并呋喃(Pbf)和三苯甲基 (Trt)。
在本发明方法的Y尤选实施方式中，式l的4t合物的Y为Fmoc， 且除了#皮与Fmoc正交的保护基团(优选Boc)保护的最后重复步 骤的iV-末端保护的氨基酸或肽以外，步骤(b)和(c)的7V-末端保护的 虞、基酸或肽4皮Fmoc保护。
12在本发明方法的优选实施方式中，式I的化合物的Y为Alloc, 且除了被与Fmoc正交的保护基团(优选Boc)保护的最后重复步 骤的TV-末端保护的氨基酸或肽以外，步骤(b)和(c)的ZV-末端保护的 -氮基酸或肽一皮Fmoc保护。
偶联剂，偶联添加剂和疏质子性、极性溶剂如二曱基甲酰胺或 ,V-曱基吡咯烷酮或其混合物已为本领域^^知，且描述于，例如， Bodanszky , "Principles of Peptide Synthesis" ， 2nd ed. ， Springer Verlag, 1993)。偶联剂的范例为二异丙基碳二亚胺(D1C), 1,3-二环 己基碳二亚胺(DCC)， vV-乙基-V-(3-三甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC), 笨并三唑-l-基-氧基-三吡咯烷磷六氟磷酸(PyBOB)，O-(lH-苯并三唑 -I-基)-AW，AW"-四甲基脲四氟硼酸(HBTU)和0-(lH-6-氯苯并三唑 -1-基)-A^V,A^,A/1-四甲.基脲四氟硼酸(TCTU)。偶联添加剂的范例为 /V-羟基笨并三口坐(HOBt)， 6-氯-7V-羟基苯并三唑(6-氯-HOBt)， yV-羟 基丁二酰亚胺和7V-羟基-3，4-二氢-4-氧-l ,2,3-苯并三。秦(HOOBt)。优 选采用DIC或TCTU作为偶联剂，并采用HOBt或6-氯-HOBt作为 偶写关添加剂。
根据本发明，在步骤(b)和(c)中使用的每个氨基酸或肽的数量介 于1和3当量。优选地，使用介于1.5和2.5当量的W-末端保护的 Arg或Har。
该固相支持物可以是任意常用的固相树脂，优选活化的卤素、 活化的羟基或羧基衍生物功能化的树脂或嫁接的接头-树脂复合物。 该树脂的聚合物基质可以是，例如，聚苯乙烯，聚乙二醇(PEG), 交联的PEG，聚酰胺，聚乙烯醇(PVA)或聚氧化烯烃。它可以是纯 的或是混合的树脂，包括嵌^史共聚物或^家接树脂，例如PVA 4家接 的PEG树脂，PEG嫁接的聚苯乙烯-二乙烯苯(PS-DVB)树脂，嫁接在内部聚苯乙烯基质上的聚氧乙烯树脂，其中进行偶联的功能化 基团被暴露在聚氧乙烯支链上。
常见的范例为2-氯三笨曱基氯聚苯乙烯(2-CTC)树脂，溴-(4-甲基-笨基)-甲基聚笨乙烯树脂，溴-(4-曱氧基苯基)-甲基聚苯乙烯树 脂，Merri-field树脂或Wang树脂。
在本发明的优选实施方式中，A可由选自2-氯三苯曱基氯聚苯 乙烯树脂，溴-(4-甲基苯基)-甲基聚苯乙烯树脂，溴-(4-甲氧基苯基)-曱基聚苯乙烯树脂和激活的羟基-(4-曱基苯基)-甲基聚苯乙烯树脂
的活化嫁接的接头-树脂复合物形成。
在优选的实施方式中，通过本发明的方法获得的肽为 Trp-Arg-Arg-Lys-NH2 ， Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2 或 lie-Leu-Arg-Tq>Pro-Trp-Trp-Pro-Tip-Arg-Arg-Lys-NH2。
本发明的另 一 目标是提供式I的化合物
其中A为固相支持物或嫁接至固相支持物的接头；n为O和10 之间的整数；X是d—6烷氧基，芳基取代的d-6烷氧基，芳氧基， 烯丙氧基，可选地保护的氨基酸残基，可选地保护的肽残基或 NR!R2,其中R'和1^独立地为氢或Q—,。烷基；且Y是与A和该氨
N H
14基官能团之间的键正交的保护基团，或者可选地进一步保护的(X-氨基保护的或未保护的氨基酸或肽残基。
该式I的化合物可在本发明的方法中用作中间体。
在优选的实施方式中，该式I的化合物中的Y是选自Fmoc, Boc, Cbz, Npys和Alloc的正交4呆护基团；其条件是当X为烯丙 氧基时Y不是Alloc 。
优选的是式I的化合物，其中n为介于0和IO之间的整数
在另一优选的实施方式中，该式I的化合物中的X为NRW 其中R1和R2独立地为氢或d-,o烷基；且Y为Fmoc， Boc, Cbz， Npys或Alloc。
进一步优选的实施方式为该式I的化合物，其中Y为选自 Y'-Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp隱Pro-Trp-Arg-Arg , Y'-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg, Y'-Trp-Arg-Arg ， Y'-Arg-Arg详口 Y'-Arg
的a-氨基保护或未保护的氨基酸残基或可选地进一步保护的肽残 基，其中Y'为氢或适当的保护基团，且其中该氨基酸残基在其侧链 被适当的保护基团可选地保护。
本发明的另 一 目标是式II的化合物其中n为介于0和10之间的整数；X为C—6烷氧基，芳基取 代的Q—6烷氧基，芳氧基，烯丙氧基或NR"R2，其中R'和RS独立 地为氬或C卜,o烷基；Y是Fmoc, Boc, Cbz, Npys, Alloc， a-氨基 保护的或未保护的氨基酸残基或可选地进一步保护的肽残基；其条 件是当X为烯丙氧基时Y不是Alloc。
实验
以下实验进一步阐述了本发明，但并非以任何方式对其进行限制。
实施例1: lle-TLeu-Arg-Trp-Pro誦Trp-Trp画Pro國Trp-Arg-Arg-
Lys-NH2的固相合成
实施例1中采用的所有氨基酸均为L构型。通过与Fmoc-氯化 物和10% Na2C03在二噁烷/水(l:l)中反应，将33 g的 Ii-Lys(Boc)-NH2 (来自Genzyme )转化为Fmoc-Lys(Boc)-NH2。然 后，在环i竟温度下以含于二氯甲烷的50。/。三氟乙酸(TFA)除去侧4连 保护性Boc基团。添加曱基4又丁醚后，该Fmoc-Lys-NH2以其TFA 盐的形式沉淀。回收该盐，溶解于石咸性水溶液中，并进行萃取，拔二 供溶解于有机相中的无盐Fmoc-Lys-NH2。将30g的2-氯三苯曱基氯聚苯乙烯树脂(来自CBL-Patras )添 加至在先萃取的有机相中，并在有机碱(优选二异丙基乙胺)的存 在下搅拌。s-氨基基团与该树脂反应后，其装载量为约O.50mmol/g， 产生式111的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>然后，通过与20%哌啶反应将式111的化合物脱保护。在7V-曱 基吡咯烷酮中制备2当量Fmoc-Arg(Pbf)-OH、 1当量HOBt和1当
量二异丙基-碳二亚胺的混合物，并添加至该脱保护的氨基酸树脂。 在室温下经历60和90分钟之间的偶联期后，无需进一步重复该步 骤，便可得到>99%的偶联效率。
用W-甲基吡咯烷酮洗涤该二肽树脂，除了最后的氨基酸 Boc-Tie-OH外，可在含于二氯甲烷的1当量6-氯-HOBt, TCTU和 二异丙基乙胺的存在下，在30-60分钟的偶联时间中，于环境温度 下采用2当量的各种相应Fmoc-氨基酸相继装配其它氨基酸。以, 曱基吡咯烷酮进行洗涤。每个偶联步骤^又进行一次，即，不对单独 的偶联步骤进行重复。在最后的氨基酸偶联后，获得肽树脂 Boc-Tle-Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Pro-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Pro國Trp(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys (固相)-NH2,通过以TFA 60%、茴香石克醚 5%、笨酚5%、三异丙基硅烷(T1S) 1%、 二硫苏糖醇(DTT) 2.5%、 水5%和二氯甲烷21.5。/。的混合物处理进行脱保护并从树脂上去除，
固相获得 28.2 g 白色固体状的4且 Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2 (经MS确i人结构)。
实施例2: Ile画Leu-Arg画Trp-Pro画Trp-Trp誦Pro-Trp画Arg画Arg誦
Lys-NH2的固相合成
实施例3中采用的所有氨基酸均为L构型。通过与含于二噁烷 的Alloc-OSu (烯丙氧基羰氧基丁二酰亚胺)和三乙胺反应，将54 g 的 H-Lys(Boc)-NH2 x HC1 (来自 Genzyme ) 转化为 Alloc-Lys(Boc)-NH2。然后，在0。C下以含于二氯甲烷的氯化氬除去 侧链保护性Boc基团。反应后，Alloc-Lys-NH2以HC1盐形式沉淀。 过滤并以二氯曱烷洗涤。在升高的温度和含于TV-甲基吡咯烷酮的二 异丙基乙胺的存在下，偶联50g的溴-(4-甲基苯基)-甲基聚苯乙烯树 脂(来自CBL-Patras)和31.7g的Alloc-Lys-NH2 x HC1。 s-氨基基 团与该树脂J之应后，其装载量为约0.55 mmol/g,产生式IV的化合 物
然后，在对曱苯磺酸钠的存在下以含于Ayv-二甲基曱酰胺的
Pd[PPh3]4处理对该式IV的化合物进行脱保护。除了在每个偶联步 骤使用的偶联混合物由含于W-甲基吡咯烷酮的1当量HOBt和1当 量的二异丙基石灰二亚胺组成外，接下来的步骤与实施例1中类似。
18获4寻41,3g的Ile-Leu-Arg-TYp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-LyS-NH2
(通过MS确i/v结构)。
与实施例1类似，在4又<又一个偶4关步艰《中，该Fmoc-Arg(Pbf) 以>99%的效率偶联至该脱保护的式IV的氨基酸树脂。
比较实施例Cl: Ile-Leu画Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2的固相合成
除了 一般通过其C-末端将第 一氨基酸残基锚定至树脂，从而提 4共Fmoc-Lys(Boc)-固相以外，重复实施例1的步-骤。4妄下来与 Fmoc-Arg(Pbf)的偶联需要长得多的偶联时间(8小时)，且在每个 周期中至少重复两次以4当量的Fmoc-Arg(Pbf)进行的偶联步骤。
权利要求
1. 由式I的化合物起始的肽合成方法其中A为固相支持物或嫁接至固相支持物的接头；n为0和10之间的整数；X是C1-6烷氧基，芳基取代的C1-6烷氧基，芳氧基，烯丙氧基，可选地保护的氨基酸残基，可选地保护的肽残基或NR1R2，其中R1和R2独立地为氢或C1-10烷基；且Y是与A和该氨基官能团之间的键正交的保护基团；并包含如下步骤(a)将N-末端α-氨基官能团脱保护，(b)将具有游离或激活羧酸官能团的至少N-末端保护的氨基酸或肽与步骤(a)的该脱保护α-氨基官能团相偶联，从而延长该式I的化合物，(c)可选地重复步骤(a)和(b)至少一次，其中至少N末端保护的氨基酸或肽与在先步骤(b)相同或不同，(d)将所得肽从A上裂解，(e)可选地去除步骤(d)后残留的所有保护基团，(f)分离并可选地纯化所得的肽。
2. 如一又利要求1所述的方法，其中Y是选自Fmoc, Boc, Cbz， Npys和Alloc的正交保护基团；其条件是当X为烯丙氧基时 Y不是Alloc。
3. 如权利要求1或2所述的方法，其中n为介于0和4之间的整 数；R'和R"独立地为氲，曱基或乙基。
4. 如权利要求1至3任意一项所述的方法，其中n为1; X为 NR1112,其中R1和R2均为氢；且Y为Fmoc或Alloc。
5. 如权利要求1至4任意一项所述的方法，其中步骤(b)的该N-末端保护的氨基酸为N-末端保护的Arg或Har;或者其中步 骤(b)的该N-末端保护的肽包含作为C-末端残基的Arg或Har。
6. 如权利要求1至5任意一项所述的方法，其中Y为Fmoc或 Alloc,且其中步骤(b)和(c)的该N-末端保护的氨基酸或肽为 Fmoc-保护的氨基酸或肽。
7. 如权利要求6所述的方法，其中最后重复的步骤(c)中的该至 少N-末端^呆护的氨基酸或肽受到与Fmoc正交的保护基团所保护。
8. 如权利要求7所述的方法，其中该正交保护基团为Boc。
9. 如一又利要求1至8 ^壬意一项所述的方法，其中A为选自2-氯 三苯曱基氯聚苯乙烯树脂，溴-(4-甲基苯基)-甲基聚苯乙烯树 脂和溴—(4-曱氧基-笨基)-甲基聚笨乙烯树脂的活化的嫁接接头 -树脂复合物。
10. 如权利要求1至9任意一项所述的方法，其中在步骤(f)中获得 的 肽 为Tie-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2。
11.如权利要求1至9任意一项所述的方法，其中在步骤(f)中获得 的月太为Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2。
12.如权利要求1至9任意一项所述的方法，其中在步骤(f)中获得 的肽为Trp-Arg-Arg-Lys-NH2 。
13. 式(I)的化合物<formula>formula see original document page 4</formula>其中A为固相支持物或嫁接至固相支持物的接头；n为0和 IO之间的整数；X是Cw烷氧基，芳基取代的C,-6烷氧基， 芳氧基，烯丙氧基，可选地保护的氨基酸残基，可选地保护的 肽残基或NR'R2,其中R"和r^独立i也为氢或C,—1()》克基；且Y 是与A和该氨基官能团之间的键正交的保护基团，或者可选 地进一步保护的a-氨基保护的或未保护的氨基酸或肽残基。
14. 如权利要求13所述的化合物，其中Y是选自Fmoc，Boc,Cbz, Npys和Alloc的正交的^f呆护基团；其条件是当X为烯丙氧基 时Y不是Alloc。
15. 如斗又利要求13或14所述的^匕合物，其中n为介于0和10之间的整数。
16. 如权利要求13至15任意一项所述的化合物，其中X为NR1112， 其中R'和R2独立i也为氬或CwJ克基；且Y为Fmoc, Boc, Cbz, Npys或Alloc。
17. 如权利要求13至16任意一项所述的化合物，其中Y为选自 Y'-lle-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg , Y'層Trp-丁rp-Pro-Trp-Arg-Arg， Y'画Trp-Arg-Arg ， Y'-Arg-Arg和 Y'-Arg的a-氨基保护或未保护的氨基酸残基或可选地进一步 保护的肽残基，其中Y'为氢或适当的保护基团，且其中该氨 基酸残基在其侧《连^皮适当的^f呆护基团可选M/床护。
18. 式(II)的4匕合物其中n为介于0和IO之间的整数；X为Q-6烷氧基，芳基:f又 代的Cw，烷氧基，芳氧基，烯丙氧基或NR'R2，其中R'和R2 独立地为氬或Cw。烷基；Y是Fmoc， Boc, Cbz， Npys， Alloc, a-氨基保护的或未保护的氨基酸残基或可选地进一步保护的 肽残基；其条件是当X为烯丙氧基时Y不是Alloc。
全文摘要
设计了在化学合成过程中将扩展中的肽链(growing peptidechain)锚定至固相支持物的新型方法。还提供了未结合和结合至固相支持物的新型氨基酸衍生物和肽衍生物。
文档编号C07K1/04GK101522704SQ200780037419
公开日2009年9月2日 申请日期2007年10月3日 优先权日2006年10月5日
发明者卡特娅·森, 奥列格·韦布特斯基, 弗朗西斯卡·夸特里尼, 费尔南多·阿尔贝利西欧, 迈克拉·维利讷, 马蒂厄·吉罗 申请人:隆萨股份公司