骨形成蛋白及其受体的抗体以及它们的使用方法

专利名称：：骨形成蛋白及其受体的抗体以及它们的使用方法
技术领域：
：本发明总体上涉及免疫学和分子生物学领域。更具体地说，在此提供了针对骨形成蛋白(BMP)及其受体的抗体和其他治疗性蛋白，以及对所述抗体及治疗性蛋白进行编码的核酸，用于制备本发明的单克隆抗体及其他治疗性蛋白的方法，以及治疗疾病的方法，所述疾病例如是由BMP表达/活性所介导的骨疾病和癌症和/或与其受体的异常表达/活性相关的骨疾病和癌症。
背景技术：
：人类骨骼包括200多块由关节连接的骨。在胚胎发生过程中，由未分化的间充质根据决定时间和空间形成的遗传程序发育成骨骼。在健康的个体中，出生后的发育包括在骨折的位置通过骨再生启动新的骨成分。对骨骼发生的正常调节的改变会在软组织中导致异常的骨形成。Shafritzetal"N.Engl.J.Med.335:555-561(1996)和Kaplanetal.，丄Am.Acad.Orthop.Surg.2:288-296(1994)。在极端的情况下，这种异常的骨形成(也被称作异位骨化)会导致临床上明显的或灾难性的后果，这可能极大地损害患者的生活质量。异位骨化的原因各种各样，可能通过下述方式产生中枢神经系统或软组织损伤；血管疾病(例如，动脉粥样^哽化和心脏瓣膜病)；以及关节病(例如强直性脊稚炎、4艮屑病性关节炎、血清阴性关节病、以及弥漫性特发性骨肥厚)。在其他情况下，异位骨化可能由于遗传原因而发生，如进行性骨化性纤维发育不良或进行性骨发育异常。可参见Kaplan等人的综述，"HeterotopicOssification"J.Amer.Acad,ofOrth.Surg.12(2):116-125(2004)。脊推关节炎(SpA)是指以下一组疾病，它们的共同特征为脊推炎症、明显的疼痛、以及功能障碍；这些疾病严重地影响了患者的生活质量。Braunetal"ArthritisRhe亂化58-67(1998);Zinketal"J.Rheumatol.2:613-622(2000);和Dagfmrudetal"Ann.Rheum.Dis.^:1605-1610(2004)。例如SpA包括使人虛弱的病症，诸如强直性脊堆炎、银屑病性脊稚关节炎、反应性脊推关节炎、与炎性肠病相关的脊推关节炎和未分化脊推关节炎。强直性脊推炎(AS)和相关的脊推关节病是最常见的炎性风湿性疾病。在美国和北欧，估计这些病症的流行率大约为0.1%至0.3%,主要危害20岁至40岁之间的个体。Khan,"AWorldwideOverview:TheEpidemiologyofHLA-B27andAssociatedSpondyloarthritides，"(Oxford:OxfordUniversityPress(1998》andSarauxetal"J.Rheumatol.^:2622-2627(1999)。AS的特征性临床特征包括炎性背痛，常由骶镕关节炎和起止点炎所引起。AS典型地涉及中轴骨骼，但是也可影响外周关节(肩部和髋部)以及关节外结构。患有强直性脊稚炎的患者将由于新骨的形成导致韧带骨赘和关节强硬，表现出最严重的脊推累及。因此，AS是表现出异位骨化的多种疾病之一。Glad腦netal"ArthritisRheum.^:24-35(2004)与Edmundsetal"J.Rheumatol.1^:696-698(1991)。越来越多的证据显示，在AS中，一个被称为起止点的解剖学区域(肌腱和韧带附着在上的部位)是该病理学过程的主要革巴点。Ball,Ann.Rheum.Dis.^:213-223(1971)与BenjaminandMcGonagle，J.Anat.199:503-526(2001)。已经描述了强直性脊推炎与相关脊推关节病的动物模型系统，它们中大多数都M于AS与人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)表达的紧密关系。有关综述可参见Zhangetal"CurrentRheum.Reports4:507-512(2002)。在大鼠体内引入HLA-B27转基因会诱导包括脊推炎在内的多系统疾病的自发形成。Hammer等，Cell63:1099-1112(19卯)。HLA-B27转基因小鼠(C57BL/10)出现外周关节炎，伴有进行性的踝或跗关节僵硬，虽然脊推并不受影响。Weinreichetal.，Hum.Immunol.^:103-115(1995)。还有报道称，针对蛋白聚糖，聚集蛋白聚糖以及多能蛋白聚糖，的Gl结构域之任一的免疫可在BALB/c小鼠中诱导AS样病变，包括脊推炎、骶髂关节炎与起止点炎。Giantetal.，ArthritisRheum.^:201-212(1987)与Shietal.，ArthritisRheum.M:S240(2001)。DBA/1小鼠是关节炎、强直性脊稚炎以及异常骨形成的自发性才莫型。Loriesetal.，JClin.Invest115(6):1571國9(2005)。基质GLA蛋白缺陷型小鼠已被证实显示出动脉与软骨自发钙化，因此被用作血管钩化的模型系统。Luoetal.，Nature巡:78-81(1997)。骨形成蛋白(Bonemorphogenicprotein，BMPs)是转化生长因子p(TGFp)超家族中的一员，是多功能的生长因子。BMP信号传导在心脏、神经与软骨发育以及出生后骨形成中起作用。BMP异位诱导软骨内骨化级联反应，并且在骨骼与关节形态发生中起关键作用。Urist，Science，:893画899(1965);Olsenetal"Annu.Rev.CellDev.Biol.]^:191-220(2000);Kro腦berg，Nature423:332-336(2003);Thomasetal"Nat.Genet.11:315-317(1996);Thomasetal"Nat.Genet.12:58-64(1997);Polinkowskyetal.，Nat.Genet.12:18-19(1997);以及Stormetal"Nature368:639-643(1994)。已经识别了BMP家族的将近20个成员。BMP通过丝氨^/苏氨酸激酶受体(包括I型与II型)进行信号传导。三种I型受体结合BMP配体(IA型与IB型BMP受体以及I型激活素受体(ActRI))。Koenigetal.，Mol.Cell.Biol.M:5961-5974(1994)与TenDijkeetal"J.BiolChem,^:16985-16988(1994);与Macias-Silvaetal"丄Biol.Chem.273:25628-25636(1998)。BMP在细胞质中^皮合成并净皮折叠为大的二聚体前蛋白，在分泌时^皮蛋白酶剪切。作为前蛋白，每一个单体包括大约300个氨基酸。功能性羧基区域(每个单体中100-120个M酸)被释放至细胞外区室中以结合乾细胞上的膜受体。虽然BMP的二聚化依赖于两个亚基之间的几个二硫键，但是二聚化与切割的精确生物化学仍有待表征。此外，似乎一系列细胞外蛋白质可以拮抗或者以其它方式改变BMP的功能；这些蛋白质包括磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、头发生素(Noggin)、脊索发生素(Chordin)、Cerberus和滤泡素抑制素(Follistatin)。Fainsodetal.，Mech.Dev.^:39-50(1997);Grisaruetal"Dev.Biol.逃31-46(2001);Holleyetal.，Cell^:607-617(1996);Iemuraetal"Proc.Natl.Acad.U.S.A.2^:9337-9342(1998);Jacksonetal"Development，4113-4120(1997);Paine-Saundersetal"Dev.Biol.巡:179-187(2000);Piccoloetal"Cell^:589-598(1996);Re，em-Kalmaetal"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2^:12141-12145(1995);Sasaietal"Nature376:333-336(1995);andZimmermanetal.，Cell^:599-606(1996).还已经识别了三种BMP的II型受体(即BMPRI、ActRII与ActRIIB)。Yamashitaetal"J.Cell.Biol.雄:217-226(1995);Rosenzweigetal"Proe.Natl.Acad.Sci.U.S.A,^:7632-7636(1995);Kawabataetal"J.Biol.Chem.270:5625-5630(1995)。I型与II型BMP受体在多种组织中差异表达，但是都是信号转导所必不可少的。当与配体结合后，I型与II型BMP受体形成异四聚体的激活受体复合物，它包括两对I型与II型受体的复合物。MoustakasandHeidi,GenesDev.W:67-87(2002)。两种类型的受体都是信号转导所必需的。Hogan，GenesDev.j^:1580-1594(1996);Nellenetal"Cell]:225-237(1994);Ruberteetal"Cell^:889-897(1995);tenDijkeetal"Curr.Opin.CellBiol.&139-145(1996);Weis画GarciaandMassague,EMBOJ.j^:276腳289(1996);与Wranaetal"Nature370:341-347(1994)。II型受体具有组成型激活的激酶活性，该活性可以在配体结合后将I型受体磷酸化。磷酸化的I型受体将信号向下游的靶蛋白转导。I型BMP受体通过Smad蛋白(smad1/5)传导信号，Smad蛋白对于将BMP信号从受体传递到核内靼基因是重要的。一J9^受体上释放，磷酸化的Smad蛋白与充当共同伙伴的相关蛋白Smad4结合。这一复合物移位至细胞核内并与其他转录因子一起参与基因的转录。BMP信号传导在多个水平上受到调控，包括通过例如头发生素的胞外拮抗剂。Massague，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.i:169-178(2000)。已经表明，作为正常发育之基础的信号级联反应如果被不适时地或不希望地激活，将可能促进例如脊推关节病等疾病进程。通过头发生素的基因转移，已经描述了BMP信号传导对关节炎的发生与进程的影响。Loriesetal.，J.Clin.Invest.115(6):1571画1579(2005)。BMP与BMP受体信号传导在正常的骨形成(包括骨骼与肢体发育)中的生理学作用已经得到了研究，其最近的综述可参见Zhao,Genetics^:43-56(2003)。在软骨内骨化过程中，间充质细胞集聚并分化为软骨细胞。这些软骨细胞经历一个高度有序的分化过程而形成用于骨形成的模板。Kronenberg，Nature^:332-336(2003)与Olsenetal"Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.1^:191-220(2000)。通过BMP促进异位软骨与骨形成的能力，已经识别了各种BMP。Wozney，Prog.GrowthFactorRes.j_:267-280(1989)。不同的BMP配体对于三种1型受体(BMPR1A、BMPR1B与ActRl(I型激活素受体))的不同的亲和性有助于在发育过程中信号传导途径的多样性。这些受体参与软骨形成，它们每一种都具有不同的组织分布与功能。BMP2与BMP4缺陷型小鼠是不能存活的。纯合的BMP2突变体胚胎在胚胎期7.5天至10.5天时就会死亡，并且具有心脏发育缺陷。ZhangandBradley,Development1^:2977-2986(1996)。纯合BMP4突变体胚胎在胚胎期6.5天至9.5天时就会死亡，并且具有中胚层分化缺陷。Winnieretal.，GenesDev.2:2105-2116(1995)。Yoon等人描述了在软骨细胞中同时无Bmprla与Bmprlb的小鼠的产生。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102(14):5062-5067(2005)。这些研究者证实Bmprla条件性敲除的小鼠与无Bmprlb的小鼠类似，表现出很少的骨骼缺陷。然而，带有两种突变的小鼠会发生严重的泛发性软骨发育不良。这些数据表明BMPR1A与BMPR1B在软骨发生早期中具有相互重叠的功能，并且BMP信号传导是软骨细胞增殖、存活以及分化所需要的。BMPR1A基因的无效突变导致小鼠在胚胎期死亡；动物在胚胎期9.5天时死亡。具有形态学缺陷的纯合突变体在胚胎期7.5天时可以检测到，该胚胎在中胚层形成中具有缺陷。Mishinaetal.,GenesDev.2:3027-3037(1995)。缺乏BMPRIB的小鼠可以存活，但是在附肢骨中显示出缺陷。在BMPRIB缺陷型小鼠中，趾骨区域的前软骨生成细胞(prechondorgeniccell)的增殖与软骨细胞的分化都有所减少。在成年突变体小鼠体内，近端的趾间关节缺失，并且这些趾骨被单个的退化元件代替，而远端的趾骨未受到影响。桡骨、尺骨与胫骨的长度正常，但是掌骨与跖骨的长度缩短。Yietal.,Development127:621-630(2000)。已经提示BMPRIB很可能在体内的软骨形成中具有非冗余的作用。Gannonetal.，Hum.Pathol.^:339-343(1997)。在软骨与骨形成过程中BMP配体可能应用多种I型BMP受体来介导它们的信号传导，并且BMPRIB与ActRlA(Alk2)可能在体内的软骨与骨形成中起协同的和/或重叠的作用。Macias-Silvaetal.，丄Biol.Chem.273:25628-25636(1998)。头发生素是一种能够结合并使BMP-2与BMP4失活的分泌多肽。头发生素与BMPs的共结晶结构显示，头发生素通过阻断表位用于结合BMPI型与II型受体的的分子界面，从而抑制BMP信号。已经通过使用骨钙蛋白启动子驱动头发生素转基因而建立了一个转基因小鼠模型。这些模型动物发生骨质疏松症，表现为骨矿物质密度、骨体积与骨形成率的明显降低。Devlinetal.，Endocrinology1^:1972-1978(2003)与Wuetal.,丄Clin.Investig.112:924-924(2003)。总之，这些关于BMP拮抗剂的实發汪实对BMP信号传导蛋白的调节对于体内骨形成至关重要。已经描述了动物模型系统，并将它们用于评估BMP2通过启动软骨发生与骨形成来治疗骨缺陷的能力。BMP2的骨诱导能力与在大鼠、兔、狗、绵羊与非人类灵长动物中观察到的由该生长因子介合。Murakamietal.，J.Biomed.Mater.Res.^:169-174(2002)。在小鼠的颅盖表面上方局部注射BMP-2，诱导了在颅盖表面上的骨膜骨形成，而没有之前的软骨期。Chenetal"Calcif.TissueInt.^:283画2卯(1997)。此外，在小鼠^t型中系统性给予重组人类BMP2可以提高间充质干细胞活性，并且逆转卵巢切除术诱导的与年龄相关的骨丟失，这表明BMP2可能有效地治疗骨质疏松。Turgemanetal.，J.Cell.Biochem.^:461-474(2002)。BMP2与BMP4以及BMPR1A的过量表达与口腔上皮的恶性肿瘤相关，而且在前列腺癌细胞中BMP2的过量表达已经有报道。Jinetal.，OralOncol.2:225画233(2001)以及Harrisetal"Prostate^:204-211(1994)。已证实BMP会促进黑素瘤细胞系的转移行为。Rothhammeretal.，CancerRes.65(2):448-56(2005)。进行性骨化性纤维发育不良(FOP)是一种罕见的致残性遗传障碍，其特征为拇指的先天畸形以及具有可预测的解剖学模式的进行性异位软骨内骨化。在FOP患者体内已经发现了BMP4的异位表达。Gannonetal.，Hum.Pathol.^:339-343(1997)和Xuetal.，Clin.Genet.^:291-298(2000)。最近已经证明患有FOP的患者的I型BMP受体ACVRI具有激活性的突变。Shoreetal.,Nat.Gen.4月23日提前网上公布(2006)。还已经报道了具有受神经元特异性烯醇化酶(NSE)启动子调控的BMP4过量表达的转基因小鼠会出现FOP-样的表型。Kanetal.，Am.丄ofPath.165(4):1107-1115(2004)。将这些动物与过量表达头发生素的转基因小鼠交配可以防止该疾病，因此证实BMP4在该疾病的发病机理中的作用。SpA是另一种牵涉异位的或异常的骨形成的医学状况。Zochling等人在Curr.OpinRheumatol.12:418-425(2005)以及vanderHdjde等人在Ann.Rheum.Dis.a:24-32(2002)中综述了现有的SpA治疗方式，特别是强直性脊推炎的治疗方式。基线治疗包括使用非甾类抗炎剂(NSAID)与结构锻炼(structuredexercise)。Dougadosetal"ArthritisRheum.44:180-185(2001);Khan,Sem.ArthritisRheum.15(S卿ll):80-84(1985);Wasneretal.,JAMA^:2168-2172(1981);Hiddingetal"ArthritisCareRes.f:117-125(1993);Sweeneyetal"J.Rheumatol.^2:763-766(2002);andDagfinrudetal""TheCochraneDatabaseofSystematicReviews",Issue4,Art.No.:CD002822,DOI:10.1002/14651858.CD002822.pub2(2004)。使用抗风湿药物治疗强直性脊稚炎的尝试一直是令人失望的。柳氮磺吡啶改善与SpA相关的外周关节炎，但不能緩解脊推疼痛。Cleggetal.，ArthritisRheum.^2:2004-2012(1996);Cleggetal"ArthritisRheum.^:2325-2329(1999);Dougadosetal"ArthritisRheum.^:618-627(1995);以及Nissilaetal.，ArthritisRheum.11:1111-1116(1988)。类似地，对于类风湿性关节炎具有疗效的氨甲喋呤与来氟米特(leflunomide)对于强直性脊推炎仅有极小的效果。Chenetal""TheCochraneDatabaseofSystematicReviews",Iss.3，Art.No.:CD004524,DOI:10.1002/14651858.CD004524.pub2(2003);Haibeletal"Ann.RheumDis.0:124-126(2005);与VanDenderenetal"Ann.Rheum.Dis.63(S卿l1):397(2004)。最近，已尝试使用肿瘤坏死因子(TNF)阻断剂进行治疗，并获得了有限的成功。例如，VanderHeijdeetal"ArthritisRheum.^:582-591(2005)报道了在接受英夫利昔单抗(infliximab)治疗24周以后，治疗组中有61%的患者获得了ASAS20反应。还可参见Braunetal.，Ann.Rheum.Dis.0:229-234(2005);Braunetal"Lancet359:1187-1193(2002);以及Measeetal"Lancet356:385-390(2000)。类似地，最近使用依那西普(etanerc印t)的研究表明，对强直性脊推炎进行的治疗大约有60%的反应率，其中阳性反应包括脊推炎症、背痛与身体损伤的减少。Brandtetal.,ArthritisRheum.1^:1667-1675(2003)，Davisetal"ArthritisRheum.^:3230-3236(2003);与Gormanetal"N.Engl.J.Med，，1349-1356(2002).虽然仅是初步研究，但是使用阿达木单抗(adalimumab)(—种人源化的单克隆抗TNF抗体)进行的初始研究表明这种疗法在治疗强直性脊推炎方面和英夫利昔单抗与依那西普相当。Haibeletal.，ArthritisRheum.50(S,1V.S217(2004)。此外，还尝试了将阿那白滞素(anakinra)(—种重组的人类白细胞介素-1受体拮抗剂)；二膦酸盐与酞胺哌啶酮(thalidomide);以及抗生素用于强直性脊推炎的治疗，但是至今仍没有结论性的结果。参见Tanetal"Ann.Rheum.Dis.^:1041-1045(2004);Maksymowychetal"ArthritisRhe腿.处:766-773(2002);与Kveinetal"Ann.Rheum.Dis.^:1113-1119(2004)。整体上看，在开发用于治疗强直性脊推炎与其他脊推关节炎疾病的治疗方案方面仅取得了很小的i^艮，部分原因是由于这些治疗不能防止骨形成与脊推融合。为了能够完全控制该疾病，可能需要特异性靶向于软骨与骨形成的治疗策略，以作为现有的免疫抑制疗法的替代或补充疗法。因此，在本领域中仍然需要新疗法用于治疗与强直性脊推炎及其他脊推关节炎疾病相关的骨疾病以及与异常骨形成和骨化相关的其他疾病，所述疾病包括那些由骨形成蛋白及其受体的异常表达/活性引起的疾病。发明概述为了满足上述的以及其他的需求，本发明提供了针对骨形成蛋白及其受体的抗体以及其他的治疗性蛋白、对这些抗体与治疗性蛋白进行编码的核酸、制备抗BMP与抗BMPR的单克隆抗体以及其他治疗性蛋白的方法、以及治疗疾病的方法，所述疾病例如是骨疾病与癌症，包括但不限于进行性骨化性纤维发育不良(FOP)、进行性骨发育异常(POH)、脊髓损伤(spinechordinjury)、导致肌内血肿的钝伤、矫形手术、银屑病性关节炎、骨关节炎、强直性脊推炎、血清阴性关节病、骨肥厚、耳硬化、镫骨强直、骨癌、前列腺癌和外生骨疣、动脉粥样硬化、心脏瓣膜病、肺癌、黑素瘤、造血系统癌症(hematopoieticcancer)、肾癌、以及乳腺癌。因此，本发明提供了分离的单克隆抗体，尤其是鼠的、嵌合的、人源化的、以及完全人的单克隆抗体，它们可以与一种或多种骨形成蛋白及其受体相结合，并且展现一种或多种所需的功能特性。这类特性包括例如与人类骨形成蛋白例如BMP2和/或BMP4特异性结合的高亲和性，或与人类骨形成蛋白受体例如BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2特异性结合的高亲和性。还提供了利用本发明的抗体、蛋白以及组合物治疗多种骨形成蛋白介导的疾病的方法。在此披露的抗体与治疗性蛋白能够阻断(a)配体(即BMP2和/或BMP4)与关联受体(cognaterec印tor)(即BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2)的结合，和/或(b)受体异二聚体的形成，和/或(c)受体信号传导。在一方面，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体(a)以lxl(T7M或更低的KD结合至人类骨形成蛋白(例如BMP2或BMP4)或其受体(例如BMPR1A、BMPR1B、ACTR1或BMPR2)上；和/或(b)结合至细胞(例如人或CHO细胞)上，其中所述细胞表ii^类骨形成蛋白和/或其受体。在更具体的实施方案中，该抗体与人类骨形成蛋白或其受体结合的KD为5xl0—8M或更低、典型地为2xl(T8M或更低、更典型地为lxl(T8M或更低、再更典型地为6xl(T9M或更低、3xl0—9M或更低、或2xl0—9M或更低。在另一个实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与参照抗体交叉竟争结合骨形成蛋白或其受体，其中该参照抗体(a)与人类骨形成蛋白或其受体结合的Ko值为lxl(T7M或更低；和/或(b)与表达人类骨形成蛋白或其受体的细胞结合。在另一个实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与参照抗体交叉竟争结合BMP2或BMP4，该参照抗体包括(a)含有选自SEQIDNO:31、32或33的^J^酸序列的重链可变区；以及(b)含有选自SEQIDNO:34、35或36的^J^酸序列的轻链可变区。在不同的实施方案中，所述参照抗体包括(a)含有SEQIDNO:31的狄酸序列的重链可变区；以及(b)含有SEQIDNO:34的M酸序列的轻链可变区。或者，所述参照抗体包括(a)含有SEQIDNO:M的^J^酸序列的重链可变区；以及(b)含有SEQIDNO:35的^J^酸序列的轻链可变区。或者，所述参照抗体包括(a)含有SEQIDNO:33的M酸序列的重链可变区；以及(b)含有SEQIDNO:36的^iJ^断列的轻链可变区。在另一方面，本发明涉及包含产自或源自于人VH3-33基因的重链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。本发明还提供包含产自或源自于人VH4-34基因的重链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。本发明还提供包含产自或源自于人VH4-59基因的重链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。本发明还提供包含产自或源自于人VKA27基因的轻链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。本发明还提供包含产自或源自于人VKL6基因的轻链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。本发明甚至还提供包含产自或源自于人VKL15基因的轻链可变区的、分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。在一个优选的实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含(a)人Vh3-33、4-34或4-59基因的重链可变区；以及(b)人VkA27、L6或VKL15的轻链可变区；其中该抗体与BMP2或BMP4特异性结合。在一个优选实施方案中，该抗体包括人VH4-59基因的重链可变区与人VKA27基因的轻链可变区。在另一个优选实施方案中，该抗体包括人VH4-34基因的重链可变区与人VKL6基因的轻链可变区。在另一个优选实施方案中，该抗体包括人VH3-33基因的重链可变区与人VKL15基因的轻链可变区。在另一方面，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含含有CDR1、CDR2与CDR3序列的重链可变区；以及含有CDR1、CDR2与CDR3序列的轻链可变区，其中(a)该重链可变区CDR3序列包括一个M酸序列，该序列选自SEQIDNO:19、20与21的M酸序列，及其保守型修饰；(b)该轻链可变区CDR3序列包括一个M酸序列，该序列选自SEQIDNO:28、29与30的M酸序列及其保守型修饰；以及(c)该抗体以lxl(T7M或更低的Ko值与人类BMP2或BMP4相结合。优选地，该重链可变区CDR2序列包括一个M酸序列，该序列选自SEQIDNO:16、17与18的氨基酸序列及其保守型修饰；并且该轻链可变区CDR2序列包括一个tt酸序列，该序列选自SEQIDNO:25、26与27的M酸序列及其保守型修饰。优选地，该重链可变区CDR1序列包括一个^J^酸序列，该序列选自SEQIDNO:13、14与15的#^,列及其保守型修饰；并且该轻链可变区CDR1序列包括一个氨基酸序列，该序列选自SEQIDNO:22、23与24的M酸序列及其保守型修饰。一种优选的组合包括(a)包括SEQIDNO:13的重链可变区CDRl;(b)包括SEQIDNO:16的重链可变区CDR2;(c)包括SEQIDNO:19的重链可变区CDR3;(d)包括SEQIDNO:22的轻链可变区CDR1;(e)包括SEQIDNO:25的轻链可变区CDR2;以及(f)包括SEQIDNO:28的轻链可变区CDR3。另一种优选的组合包括(a)包括SEQIDNO:14的重链可变区CDRl;(b)包括SEQIDNO:17的重链可变区CDR2;(c)包括SEQIDNO:20的重链可变区CDR3;(d)包括SEQIDNO:23的轻链可变区CDR1;(e)包括SEQIDNO:26的轻链可变区CDR2;以及(f)包括SEQIDNO:29的轻链可变区CDR3。另一种优选的组合包括(a)包括SEQIDNO:15的重链可变区CDRl;(b)包括SEQIDNO:18的重链可变区CDR2;(c)包括SEQIDNO:21的重链可变区CDR3;(d)包括SEQIDNO:24的轻链可变区CDR1;(e)包括SEQIDNO:27的轻链可变区CDR2;以及(f)包括SEQIDNO:30的轻链可变区CDR3。本发明的其他优选的抗体或其抗原结合部分包括(a)重链可变区，它含有选自SEQIDNO:31、32和33的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区，它含有选自SEQIDNO:34、35和36的^J^,歹'J;其中该抗体特异性地结合BMP2或BMP4。一种优选的组合包括(a)重链可变区，它含有氨基酸序列SEQIDNO:31;以及(b)轻链可变区，它含有^J^酸序列SEQIDNO:34。另一种优选的组合包括(a)重链可变区，它含有氨基酸序列SEQIDNO:32;以及(b)轻链可变区，它含有^J^酸序列SEQIDNO:35。另一种优选的组合包括(a)重链可变区，它含有^J^酸序列SEQIDNO:33;以及(b)轻链可变区，它含有氨基酸序列SEQIDNO:36。在本发明的另一方面，提供了与任何上述抗体竟争结合BMP2或BMP4的抗体或其抗原结合部分。例如，本发明的抗体可以是全长抗体，典型地为IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同种型。可替代地，这些抗体可以是抗体片段，如Fab、Fab，或Fab，2片段，或单链抗体(例如scFv)。本发明还提供免疫缀合物，它包括与治疗剂(如细胞毒素或放射性同位素)连接的本发明的抗体或其抗原结合部分。本发明还提供双特异性分子，它包括本发明的抗体或其抗原结合部分以及与其连接的第二功能部分，该第二功能部分具有与所述抗体或抗原结合部分不同的结合特异性。本发明还提供针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、或BMPR2的Affibody、结构域抗体、纳米抗体(Nanobody)、UniBody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody、以及Duocalin。本发明还提供组合物，它包括本发明的抗体或其抗原结合部分或免疫缀合物或双特异性分子，以及药学上可接受的栽体。本发明还涵盖了对这些抗体或其抗原结合部分进行编码的核酸分子，以及含有此类核酸分子的表达载体，含有此类表达载体的宿主细胞，以及使用此类宿主细胞制备抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRlB、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体的方法。此外，本发明提供带有人类免疫球蛋白重链与轻链转基因的转基因小鼠，其中该小鼠表达本发明的抗体；还提供从这样的小鼠制备的杂交瘤，其中该杂交瘤产生本发明的抗体。而在另一方面，本发明提供治疗或预防疾病的方法，该疾病的特征为表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的骨细胞和/或肿瘤细胞的生长，该方法包括给予受试者对于治疗或预防该疾病而言有效的量的本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2人抗体。该疾病可以是骨疾病和/或可以是癌症。在又另一方面，本发明提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括给予受试者对于治疗该疾病有效的量的本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRlB、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2人抗体。本发明的其他特征与优点将从下文的详细叙述与实施例中变得很清楚，这些叙述与实施例不应被解释为是对本发明的限制。在本申请全文中引用的所有参考文献、Genbank登录号、专利以及公开的专利申请的内容都明确地通过引用并入此处。附图简要说明图la示出了6H4人单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:37)与氨基酸序列(SEQIDNO:31)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:13)、CDR2(SEQIDNO:16)以及CDR3(SEQIDNO:19)区域，并指明了V，D与J胚系来源(germlinederivations)。图lb示出了6H4人单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:40)与氨基酸序歹'J(SEQIDNO:34)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:22)、CDR2(SEQIDNO:25)以及CDR3(SEQIDNO:28)区域，并指明了V与J胚系来源。图2a示出了11F2人单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列(SEQIDN():38)与氨基酸序列(SEQIDNO:32)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:14)、CDR2(SEQIDNO:17)以及CDR3(SEQIDNO:20)区域，并指明了V与J胚系来源。图2b示出了11F2人单克隆抗体轻链可变区的核香^列(SEQIDNO:41)与氨基酸序列(SEQIDNO:35)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:23)、CDR2(SEQIDNO:26)以及CDR3(SEQIDNO:29)区域，并指明了V与J胚系来源。图3a示出了12E3人单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列(SEQIDNO:39)与氨基酸序列(SEQIDNO:33)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:15)、CDR2(SEQIDNO:18)以及CDR3(SEQIDNO:21)区域，并指明了V与J胚系来源。图3b示出了12E3人单克隆抗体轻链可变区的核普序列(SEQIDNO:42)与氨基酸序列(SEQIDNO:36)。用线标出了CDR1(SEQIDNO:24)、CDR2(SEQIDNO:27)与CDR3(SEQIDNO:30)区域，并指明了V与J胚系来源。图4示出了6H4重链可变区的絲断列(SEQIDNO:31)与人类胚系VH4-34氨基断列(SEQIDNO:51)、位于V与J区域之间的人类胚系I)h3-10絲酸序列(SEQIDNO:52)、以;S^A类胚系JHJH1氨基酸序列(SEQIDNO:53)的比对。图5示出了11F2重链可变区的狄紗列(SEQIDNO:32)与人类胚系VH4-59^J^餅列(SEQIDNO:43)、位于V与J区域之间的人类胚系DH2-2氨基餅列(SEQIDNO:45)以;^A类胚系JHJH5b氨基麟列(SEQIDNO:46)的比对。图6示出了12E3重链可变区的^J^酸序列(SEQIDNO:33)与人类胚系V,i3-33^J^断列(SEQIDNO:44)以^A类胚系JHJH6b^J^紗列(SEQIDNO:47)的比对。图7示出了6H4轻链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:34)与人类胚系VKL6氨基餅列(SEQIDNO:54)以^A类胚系JKJK2氨基,列(SEQIDNO:55)的比对。图8示出了11F2轻链可变区的絲,列(SEQIDNO:35)与人类胚系VKA27氨基亂宇列(SEQIDNO:48)以AA类胚系JKJK4^J^絲列(SEQIDNO:50)的比对。图9示出了12E3轻链可变区的^J^齡列(SEQIDNO:36)与人类胚系VKL15^J^,列(SEQIDNO:49)以^A类胚系JKJK4^J^餅列(SEQIDNO:50)的比对。图10示出了通过Biacore分析得出的抗-BMP2/4单克隆抗体阻断BMP4与II型BMP受体(图10a)以及与I型BMP受体(图10b)结合的结果。图11示出了抗-BMP2/4抗体对BMP2与BMP4信号传导的抑制。将C2C12细胞与重组人类BMP2(图1la)或BMP4(图llb)、以及不同浓度的五种不同中和性抗-BMP2/4单克隆抗体或IgGl对照单克隆抗体共同孵育。将细胞固定、裂解并分析碱性磷酸酶活性。图12通过光密度扫描法示出了由本发明的抗-BMP2单克隆抗体明显减少了骨形成。骨形成蛋白序列的简要说明SEQIDNO:1为编码人类骨形成蛋白2(BMP2)的cDNA的核苷^列，该序列披露于GenBank，登录编号NM_001200。SEQIDNO:2为SEQIDNO:1所表示的核苷酸序列所编码的人类骨形成蛋白2(BMP2)的M餅列。SEQIDNO:3为编码人类骨形成蛋白4(BMP4)的cDNA的核苷^列，该序列披露于GenBank,登录编号NM—130851。SEQIDNO:4为SEQIDNO:3所表示的核苷酸序列所编码的人类骨形成蛋白4(BMP4)的列。SEQIDNO:5为编码人类骨形成蛋白受体IA(BMPRIA)的cDNA的核苷酸序列，该序列披露于GenBank，登录编号NM一004329。SEQIDNO:6为SEQIDNO:5所表示的核苷酸序列所编石马的人类骨形成蛋白受体1A(BMPR1A)的氨基,列。SEQIDNO:7为编码人类骨形成蛋白受体IB(BMPRIB)的cDNA的核苷酸序列，该序列披露于GenBank，登录编号NM—001203。SEQIDNO:8为SEQIDNO:7所表示的核苷酸序列所编码的人类骨形成蛋白受体1B(BMPRlB)的^i^絲列。SEQIDNO:9为编码人类I型激活素A受体(ACTRl)的cDNA的核苷酸序列，该序列披露于GenBank,登录编号BC033867。SEQIDNO:10为SEQIDNO:9所表示的核苷酸序列所编码的人类I型激活素A受体(ACTRl)的M酸序列。SEQIDNO:11为编码人类骨形成蛋白受体2(BMPR2)的cDNA的核苷酸序列，该序列披露于GenBank，登录编号NM_001204。SEQIDNO:12为SEQIDNO:11所表示的核苷酸序列所编码的人类骨形成蛋白受体2(BMPR2)的M^列。发明详述本发明涉及能够以高亲和性特异性结合一种或多种骨形成蛋白(BMP)或一种或多种骨形成蛋白受体(BMPR)和/或激活素A受体(ACTR1)的分离的单克隆抗体，特别是鼠单克隆抗体、嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体与完全人单克隆抗体。在某些实施方案中，本发明的抗体源于特定的重链与轻链胚系序列和/或包含特定的结构特征，例如含有特定M酸序列的CDR区域。因此本发明提供了分离的抗体、免疫缀合物、双特异性分子、affibody、结构域抗体、纳米抗体(nanobodies)、UniBody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody与Duocalin，制备上述分子的方法、以及包括所述分子与药学栽体的药物组合物。本发明还涉及使用所述抗体、免疫缀合物、双特异性分子、affibody、结构域抗体、纳米抗体(nanobodies)、UniBody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody以及Duocalin来治疗有异常骨形成的疾病以及癌症的方法。定义为了使本发明可以更容易地得到理解，首先对一些术语进行定义。其他定义则在整个详细说明中阐明。在此使用的术语"抗体"包括完整的抗体及其任何抗原结合片段(即"抗原结合部分")或其单链。"抗体"是指至少包括通过二硫键相连接的两条重链(H链)以及两条轻链(L链)或其抗原结合部分的糖蛋白。每一条重链都由一个重链可变区(在此缩写为VH)以及一个重链恒定区组成。该重链恒定区由三个結枸域Ch1、Ch2以及Ch3組成。每一条轻链都由一个轻链可变区(在此缩写为V。与一个轻链恒定区组成。该轻链恒定区由一个结构域，C,」组成。VH与VL区域还可再细分出被称为互补决定区(CDR)的高变区，其间散布更为保守的被称为构架区(FR)的区域。每个VH以及VL均由三个CDR以及四个FR构成，按照以下顺序从氨基端至羧基端排布FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链以及轻链的这些可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主的组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)及经典补体系统的第一组分(Clq)。在此使用的术语抗体的"抗原结合部分"(或"抗体部分")是指保留了与抗原(在此以BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2为示例)特异性结合的能力的、抗体的一个或多个片段。已经证实抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来实现。术语抗体的"抗原结合部分"所涵盖的结合性片段的实例包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL与CH1结构域构成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fab，片段它实质上是带有一部分铰链区的Fab片段(参见FundamentalImmunology(Pauled.，3rded.1993);(iv)由Vh与CH1结构域构成的Fd片段；(v)由抗体的一个单臂的VL与VH结构域构成的Fv片段；(vi)由VH结构域构成的dAb片段(Wardetal.，(1989)Nature341:544-546);以及(vii)分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域Vl与VH是由分离的基因编码的，但是可以使用重组方法通过一个合成接头将它们连接起来，使它们形成一个单蛋白链，其中VL与VH区域配对形成单价分子(被称为单链Fv(scFv);参见如Birdetal.(1988)Science242:423-426以及Hustonetal.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA^:5879-5883)。术语抗体的"抗原结合部分，，也旨在涵盖这类单链抗体。这些抗体片段可通过本领域技术人员已知的常规方法获得，并且可以筛选这些片段以获得能够以与完整抗体相同的方式应用的片段。在此使用的术语"分离的抗体"意指这样的抗体，它基本上不含有其他的具有不同抗原特异性的抗体(例如，特异性结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的分离的抗体是基本上不含有特异性结合非上述六种蛋白之任何一种或多种的抗原的抗体)。然而，特异性结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的分离的抗体对于其他抗原，例如来自其他物种的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2分子可具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含有其他细胞材料和/或化学物。在此使用的术语"单克隆抗体，，或"单克隆抗体组合物"是指具有单一分子組成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示出单一的针对特定表位的结合特异性和亲和性。在此使用的术语"人抗体，，或"人序列抗体，，旨在包括这样一类抗体它的可变区中的构架区与CDR区均来自人类胚系免疫球蛋白序列。此外，如果该抗体包含恒定区，则该恒定区也来自人类胚系免疫球蛋白序列。这些人抗体可以包括后来的修饰，包括天然的或人工的修饰。本发明的人抗体可以包含不是由人类胚系免疫球蛋白序列所编码的氨基酸残基(例如，由体外随机诱变或定点诱变引入的突变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，此处使用的术语"人抗体，，并不旨在包括这样的抗体在该抗体中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的胚系的CDR序列被移植到人构架区序列上。术语"人单克隆抗体，，(在"人"之后可以包括术语"序列")是指显示出单一结合特异性的抗体，该抗体所具有的可变区中的构架区与CDR区均来自人类胚系免疫球蛋白序列。在一个实施方案中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，该杂交瘤包括与永生化细胞融合的来自转基因非人动物的B细胞，所述转基因动物例如是具有包含人源重链转基因与轻链转基因的基因组的转基因小鼠。在此使用的术语"重组人抗体，，包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如(a)^vA类免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物(如小鼠)中分离的抗体或从制备自上述转基因动物的杂交瘤中分离的抗体(下文将进一步说明)；(b)从被转化而能表达人抗体的宿主细胞(如转染瘤)分离的抗体；(c)从重组的组合人抗体文库分离的抗体；以及(d)通过任何涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人抗体可以具有如下可变区，在该可变区中构架区与CDR区均来源于人类胚系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方案中，这类重组人抗体可以经历体外诱变(或者当使用含有人类Ig序列的转基因动物时，体内体细胞突变)，这样一来，该重组抗体的VH与VL区域的M^f列虽然是来源于人类胚系Vh与VL序列并与人类胚系Vh与VL序列相关，但是并不天然存在于体内人抗体胚系库之中。此处使用的"同种型"是指由重链恒定区基因所编码的抗体类型(例如IgM或IgGl)。短语"识别抗原的抗体，，与"对抗原具有特异性的抗体，，在本文中可以与术语"特异性结合抗原的抗体"互换使用。术语"人抗体衍生物"是指人抗体的任何经修饰的形式，例如，该抗体与另一种试剂或抗体的缀合物。术语"人源化抗体"旨在指以下抗体，其中来自另一哺乳动物物种(如小鼠)的胚系的CDR序列被移植到人构架区序列上。可以在人构架区序列中进行额外的构架区修饰。术语"嵌合抗体，，是意指以下抗体，其中可变区序列来自一个物种而恒定区序列来自另一个物种，例如可变区序列来自小鼠抗体而恒定区序列来自人抗体的抗体。此处使用的"特异性结合"的抗体是意指抗体与其关联抗原结合的KD值为lxlOM^或更低，特别是5xl0—8M或更低、更特别地为lxl0—8M或更低、再更特别地为6xl(T9M或更低、更特别地为3xl0-9M或更低、更特别地为2xl(T9M或更寸氐。在此使用的术语"基本上不结合"到蛋白质或细胞上是指不与该蛋白质或细胞结合，或者不以高亲和性结合到该蛋白质或细胞上，也就是，以1x10-6m或更大，更伊乙选为lxlO-5M或更大，更伊l选为lxlO"M或更大，更优选为lxl(^M或更大，甚至更优选为lxl(^M或更大的KD结合该蛋白质或细胞。此处使用的术语"Ka柳e"或"Ka"意指特定的抗体-抗原相互作用的结合速率，而此处使用的术语"Kdis"或"Kd"意指特定的抗体-抗原相互作用的解离速率。此处使用的术语"KD，，意指解离常数，它是由Kd与Ka之比(即Kd/IQ得到，并以摩尔浓度(M)表示。抗体的KD值可由本领域中已充分建立的方法测定。测定抗体KD值的一个优选方法是4吏用表面等离子体共振，通常使用诸如Biacore系统的生物传感器系统。在此^f吏用的针对IgG抗体的术语"高亲和性"是指抗体对于靶抗原具有的Ko值为lxl(T7M或更小，更典型地为10—SM或更小，更典型地为l(T9M或更小，甚至更典型地为lxlO"GM或更小。然而，对于其他的抗体同种型，"高亲和性"结合可以发生变化。例如，对于IgM同种型，"高亲和性，，结合是指抗体具有10-7M或更小，更典型地l(T8M或更小，甚至更典型地为10—9M或更小的KD。此处使用的术语"受试者"包括任何人或非人动物。术语"非人动物"包括所有脊推动物，如哺乳动物与非哺乳动物，例如非人灵长类、绵羊、犬类、猫类、马类、母牛类、家禽类、两栖类、鱼类、爬行动物、等等。术语"免疫应答"是指诸如淋巴细胞、抗原递呈细胞、吞噬细胞、粒细胞以及由以上细胞或肝脏制造的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子以及补体)的活动，该活动导致对侵入性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞，或者(在自身免疫或病理性炎症的情况下)正常的人细胞或组织的选捧性损伤、破坏或从人体清除。"信号转导途径"是指在将信号从细胞的一个部分传递到细胞的另一个部分的过程中起作用的各种信号转导分子之间的生物化学关系。在在此使用的术语"细胞表面受体"包括例如能够接受信号并将该信号传递通过细胞质膜的分子与分子的复合物。本发明中"细胞表面受体"的实例是BMPR1A、BMPR1B、ACTR1与BMPR2受体。在此使用的术语"BMP2，，是指人类骨形成蛋白2。人类BMP2的核苷酸序列为公众可得的，参考GenBank登录编号NM—001200,在此以SEQIDNO:1公开。相应的BMP2的氨基酸序列在此公开为SEQIDNO:2。在此使用的术语"BMP4，，是指人类骨形成蛋白4。人类BMP4的核苷酸序列为7>众可得的，参考GenBank登录编号NM—130851，在此公开为SEQIDNO:3。相应的BMP4的^J^酸序列在此公开为SEQIDNO:4。在此使用的术语"BMPR1A"(也被称为Alk3)是指人类骨形成蛋白受体1A。人类BMPR1A的核苷酸序列为公众可得的，参考GenBank登录编号NM—004329，在此公开为SEQIDNO:5。相应的BMPR1A的^J^酸序列在此公开为SEQIDNO:6。在此使用的术语"BMPR1B，，(也被称为Alk6)是指人类骨形成蛋白受体1B。人类BMPR1B的核苷酸序列为公众可得的，参考GenBank登录编号NM—001203，在此公开为SEQIDNO:7。相应的BMPR1B的氨基酸序列在此公开为SEQIDNO:8。在此使用的术语"ACTR1，，是指人类激活素A受体1。人类ACTR1的核苷酸序列为公众可得的，参考GenBank登录编号BC033867，在此公开为SEQIDNO:9。相应的ACTR1的^J^酸序列在此公开为SEQIDNO:10。在此使用的术语"BMPR2，，是指人类骨形成蛋白受体2。人类BMPR2的核苷酸序列为公众可得的，参考GenBank登录编号NM—001204，在此公开为SEQIDNO:11。相应的BMPR2的^^酸序列在此公开为SEQIDNO:12。在以下各分部中进一步详细描述了本发明的各个方面。抗BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1以及BMPR2的抗体本发明抗体的特征在于特定的功能性质或特性。例如，在某些实施方案中，抗体特异性地结合选自人类BMP2与人类BMP4的一种或多种骨形成蛋白。在另一些实施方案中，抗体特异性地结合选自BMPR1A、BMPR1B与BMPR2的一种或多种骨形成蛋白受体和/或选自ACTR1的一种或多种激活素1型受体。典型地，本发明的抗体以高亲和性实现结合，例如KD值为5xlO々M或更低，更典型地为5.5xlO力M或更低，再更典型地为3><10—9M或更低，再更典型地为2x10—9M或更低，再更典型地为1.5xl0'9M或更低。在一个实施方案中，该抗体优选地结合存在于BMP2或BMP4中但不存在于其他蛋白中的抗原性表位。该抗体典型地结合BMP2或BMP4，但不结合其他蛋白，或者与其他蛋白以低亲合性结合，例如Ko值为lxl(T6M或更高，更优选地为lxl(T5M或更高，更优选地为lxl0—4M或更高，更优选地为lxlO-3M或更高，再更优选地为lxl(T2M或更高。优选地，该抗体基本上不与相关蛋白结合，例如该抗体基本上不与BMP3或BMP8b结合。用于评估抗体对一种或多种骨形成蛋白或其受体的结合能力的标准测定方法在本领域是已知的，包括例如ELISA法、蛋白质印迹、流式细胞术与RIAs。在实施例中详述了合适的测定方法。还可以用本领域中已知的标准测定方法来评估该抗体的结合动力学(例如结合亲和性)，例如通过F丄ISA法、Scatchard与Biacore分析。作为另一实例，本发明的抗体可以结合骨细胞，例如前软骨细胞(prechondrocyte)和/或软骨细胞。抗BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的人单克隆抗体可以理解，可能期望针对BMP2的抗体与BMP4有交叉反应，并且可能期望针对BMP4的抗体与BMP2有交叉反应。类似地，可能期望针对BMPR1A、BMPR1B、ACTR1与BMPR2中任一种的抗体与其中任何可替代的BMP和/或ACV受体有交叉反应。因此，本发明考虑，可有利地将Vh与VL序列进行"混合和匹配"，从而产生本发明范围内的其他的抗原特异性结合分子。可以使用上文以及实施例中所述的结合测定法(例如FACS或ELISA法)来测试这类经"混合和匹配"的抗体的特异性结合。典型地，当对Vh与Vl链进行混合和匹配时，来自一个特定VH/Vt对的VH序列可以被一个结构相似的Vh序列置換。类似地，典型地，来自一个特定Vh/Vl封的Vl序列可以被一个結枸相似的Vt序列置换。本发明的优选抗体已如实例1与2中所述被分离出来并对其进行了结构表征，并且它们包括人单克隆抗体6H4、11F2与12E3。6H4、11F2与12E3的VH#J^^f列分别示于SEQIDNO:31、32与33。6H4、11F2与12E3的Vt氨基酸序列分别示于SEQIDNO:34、35以及36。在一方面，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含(a)重链可变区，它包括选自SEQIDNO:31、32以及33的^J^紗列；以及(b)轻链可变区，它包括选自SEQIDNO:34、35以及36的^i^耕列；其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4，优选地结合人类BMP2或BMP4。优选的重链与轻链组合包括(a)包括氨基酸序列SEQIDNO:31的重链可变区；以及(b)包括絲酸序列SEQIDNO:34的轻链可变区；或(a)包括氨基酸序列SEQIDNO:32的重链可变区；以及(b)包括^tj^酸序列SEQIDNO:35的轻链可变区；或(a)包括氨基酸序列SEQIDNO:33的重链可变区；以及(b)包括tt酸序列SEQIDNO:36的轻链可变区。在另一方面，本发明提供抗体，其包括6H4、11F2与12E3的重链与轻链CDR1、CDR2与CDR3，或它们的组合。6H4、11F2与12E3的VHCDR1的氨基*列示于SEQIDNO:13、14与15中。6H4、11F2与12E3的VHCDR2的氨基財列示于SEQIDNO:16、17与18中。6H4、11F2与12E3的VHCDR3的氨基,列示于SEQIDNO:19、20与21中。6H4、11F2与12E3的Vi^CDR1的氨基紗列示于SEQIDNO:22、23与24中。6H4、11F2与12E3的VLCDR2的^J^,列示于SEQIDNO:25、26与27中。6H4、11F2与12E3的VLCDR3的氨基^列示于SEQIDNO:28、29与30中。这些CDR区使用Kabat系统进行记述(Kabat，E.A"etal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)。鉴于本文提供的单克隆抗体每一种都能够结合(1)选自BMP2和BMP4的骨形成蛋白，或(2)选自BMPR1A、BMPR1B与BMPR2的骨形成蛋白受体和/或选自ACTR1的激活素1型受体，并且鉴于抗原结合特异性主要由CDR1、CDR2与CDR3区域提供，因此可以将这些VHCDR1、CDR2与CDR3序列与VKCDR1、CDR2与CDR3序歹U"混合并且匹配"(即来源于不同抗体的CDR可以被混合并且匹配，但是每种抗体都必须含有VHCDR1、CDR2与CDR3以及VkCDR1、CDR2与CDR3)，从而产生本发明的其他的抗原特异性结合分子。可以使用上文及实施例所述的结合测定法(例如FACS、ELISA法、Biacore分析)来检测这类"混合与匹配"的抗体的结合。典型地，当对VHCDR序列进行混合与匹配时，来自一个特定的Vh序列的CDR1、CDR2、和/或CDR3序列可以被结构相似的CDR序列置换。类似地，当对VKCDR序列进行混合并且匹配时，典型地来自一个特定的Vk序列的CDR1、CDR2、和/或CDR3序列可以4皮个结构相似的C1)R序列置换。对于本领域技术人员易于理解的是，可以利用来自针对本发明单克隆抗体而在本文中公开的CDR序列的结构相似序列，替换一个或多个Vh和/或Vi^CDR区序列，从而产生新的Vh和V^序列。在另一方面，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含(a)重链可变区CDR1;(b)重链可变区CDR2;(c)重链可变区CDR3;(d)轻链可变区CDR1;(e)轻链可变区CDR2;以及(f)轻链可变区CDR3;其中重链可变区CDR1、CDR2、和/或CDR3以及轻链可变区CDR1、CDR2、和/或CDR3中包含的氨基酸序列选自一种、两种、三种、四种、五种或六种骨形成蛋白受体结合性抗体；并且其中所述单克隆抗体特异性地结合BMP2和/或BMP4(典型地是人类BMP2和/或BMP4)。因此，在另一方面，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含(a)重链可变区CDRl,它包括选自SEQIDNO:13、14以及15的氨基酸序列；(b)重链可变区CDR2，它包括选自SEQIDNO:16、17以及18的(c)重链可变区CDR3，它包括选自SEQIDNO:19、20以及21的(d)轻链可变区CDRl,它包括选自SEQIDNO:22、23以及24的氨基酸序列；(e)轻链可变区CDR2，它包括选自SEQIDNO:25、26以及27的氨基酸序列；以及(f)轻链可变区CDR3，它包括选自SEQIDNO:28、29以及30的氨基酸序列；其中该抗体特异性地结合BMP2或BMP4,优选地人类BMP2或BMP4。在一个优选的实施方案中，该抗体包括(a)重链可变区CDR1，它包括SEQIDNO:13;(b)重链可变区CDR2，它包括SEQIDNO:16;(c)重链可变区CDR3，它包括SEQIDNO:19;(d)轻链可变区CDR1，它包括SEQIDNO:22;(e)轻链可变区CDR2，它包括SEQIDNO:25;以及(f)轻链可变区CDR3，它包括SEQIDNO:28。在另一个优选的实施方案中，该抗体包括(a)重链可变区CDR1，它包括SEQIDNO:14;(b)重链可变区CDR2,它包括SEQIDNO:17;(c)重链可变区CDR3,它包括SEQIDNO:20;(d)轻链可变区CDR1，它包括SEQIDNO:23;(e)轻链可变区CDR2，它包括SEQIDNO:26;以及(f)轻链可变区CDR3，它包括SEQIDNO:29。在另一个优选的实施方案中，该抗体包括(a)重链可变区CDR1，它包括SEQIDNO:15;(b)重链可变区CDR2，它包括SEQIDNO:18;(c)重链可变区CDR3，它包括SEQIDNO:21;(d)轻链可变区CDRl,它包括SEQIDNO:24;(e)轻链可变区CDR2，它包括SEQIDNO:27;以及(f)轻链可变区CDR3，它包括SEQIDNO:30。在本领域中众所周知的是，CDR3结构域可以独立于CDR1和/或CDR2结构域而独自决定抗体对于关联抗原的结合特异性，并且预期可以基于共同的CDR3序列而产生具有相同的结合特异性的多种抗体。例如，参见Klimkaetal"BritishJ.ofCancer83(2):252國260(2000)[描述了仅使用鼠抗CD30抗体Ki-4的重链可变结构域CDR3来产生人源化抗CD30抗体j;Beiboeretal.,J.Mol.Biol.296:833-849(2000)描述了仅使用亲代鼠类MOC-31抗EGP-2抗体的重链CDR3序列的重组上皮糖蛋白-2(EGP-2)抗体l;Raderetal"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2^:8910-8915(1998)[描述了使用鼠类抗整联蛋白(Xv(33抗体LM609的重链与轻链可变CDR3结构域产生一系列的人源化抗整联蛋白0^3抗体，其中每一抗体成员在CDR3结构域之外包含不同的序列，但是都能与亲代鼠类抗体结合相同的表位，并且其结合亲和性与亲代鼠类抗体相同或比亲代鼠类抗体更高l;Barbasetal.，,J.Am.Chem.Soc.1^:2161-2162(1994)披露了CDR3结构域对抗原结合的贡献度最大；Barbasetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.￡^:2529-2533(1995)[描述了将三个抗人类胎盘DNA的Fab(SI-l、SI-40与SI-32)的重链CDR3序列移植到抗破伤风类毒素Fab的重链上，藉此替换原先的重链CDR3，并证实了仅有CDR3结构域就赋予了结合特异性；以及Ditzeletal.，丄Immunol.157:739-749(1996)[描述了移植研究，其中仅将亲代多特异性FabLNA3的重链CDR3移植到单特异性IgG破伤风类毒素结合性Fabp313抗体的重链上，就足以保留所述亲代Fab的结合特异性]。上述每一篇文献均通过引用全文结合在此。因此，在某些方面，本发明提供了包括来源于非人抗体(例如小鼠或大鼠抗体)的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的单克隆抗体，其中该单克隆抗体能够特异性结合BMP2和/或BMP4(通常为人类BMP2和/或BMP4)或者结合BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2(典型地是人类BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2)。在一些实施方案中，这类包括来源于非人抗体的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的本发明抗体(a)能够与其相应的亲代非人抗体竟争结合；(b)保留了其相应的亲代非人抗体的功能特性；(c)与其相应的亲代非人抗体结合相同的表位；和/或(d)与其相应的亲代非人抗体具有相似的结合亲和性。在其他方面，本发明提供包括来源于第一人抗体(例如获自非人类动物的人抗体)的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的单克隆抗体，其中该第一人抗体能够特异性结合BMP2和/或BMP4(典型地是人类BMP2和/或BMP4)或者结合BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2(典型地是人类BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2)，并且其中来源于该第一人抗体的该CDR3结构域替换了不具有BMP2和/或BMP4或BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2结合特异性的人抗体中的CDR3结构域，以产生能够特异性结合BMP2和/或BMP4或者结合BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的第二人抗体。在一些实施方案中，这类包括来源于第一人抗体的一个或多个重链和/或轻链CDR3结构域的本发明的抗体(a)能够与其相应的亲代第一人抗体竟争结合；(b)保留了其相应的亲代第一人抗体的功能特性；(c)与其相应的亲代第一人抗体结合相同的表位；和/或(d)与其相应的亲代第一人抗体具有相似的结合亲和性。具有特定胚系序列的抗体在某些实施方案中，本发明的抗体包括来源于特定胚系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来源于特定胚系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区。如此处所用，如果一种人抗体的可变区由使用人类胚系免疫球蛋白基因的系统获得，则该人抗体将包含"产自"或者"源自，，该特定胚系序列的重链或轻链可变区。所述系统包括用目的抗原对携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠进行免疫或者用目的抗原对在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库进行筛查。"源自，，人类胚系免疫球蛋白序列或作为其"产物"的人抗体可以通过下述方式进行识别将该人抗体的氨基酸序列与人类胚系免疫球蛋白的氨基,列相比较，并选择在序列上与该人抗体的序列最接近(即同一性百分数最高的)人类胚系免疫球蛋白序列。例如，在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VH4-59基因的重链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VH4-34基因的重链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VH3-33基因的重链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VH1-69基因的重链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。在另一个实例中，在一个优选的实施方案中本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VKA27基因的轻链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。而在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VKL15基因的轻链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。而在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括产自或源自人类VKL6基因的轻链可变区，其中该抗体特异性结合BMP2或BMP4。在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该抗体(a)包括重链可变区，该重链可变区产自或源自人类VH4-59、4-34或3-33基因(该基因所编码的^j^餅列分别在SEQIDNO:43、51以及44给出)；(b)包括轻链可变区，该轻链可变区产自或源自人类VKA27、L6或L15基因(该基因所编码的^j^餅列分别在SEQIDNO:48、54以及49给出)；并且(c)特异性结合BMP2或BMP4,优选为人类BMP2或BMP4。分别具有VH4-34与VKL6的Vh与VK的抗体的一个实例是6H4。分别具有VH4-59与VKA27的Vh与VK的抗体的一个实例是11F2。分别具有VH3-33与VKL15的VH与VK的抗体的一个实例是12E3。"产自"或"源自，，特定人类胚系免疫球蛋白序列的人抗体可以由于例如自然产生的体细胞突变或有意引入的定点突变而含有与胚系序列不同的氨基酸。然而，所选择的人抗体通常与人类胚系免疫球蛋白基因所编码的氨基酸序列具有至少90。/。的M酸序列同一性，而且该人抗体在与其他物种的胚系免疫球蛋白氨基,列(例如，鼠胚系序列)进行比较时，含有将其養定为人抗体的tt酸残基。在一些情况中，人抗体与该胚系免疫球蛋白基因所编码的氨基酸序列相比可以具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%或99%的氨基#列同一性。通常，源自特定人类胚系序列的人抗体不会显现出超过10个与由该人类胚系免疫球蛋白基因所编码的M,列不同的氨基酸。在一些情况中，人抗体可以显现不超过5个，或乃至不超过4、3、2或1个与由该人类胚系免疫球蛋白基因所编码的氨基^列不同的氨基酸。同源抗体在又另一个实施方案中，本发明的抗体包括含有与本文所描述的抗体的氨基*列同源的氨基,列的重链可变区与轻链可变区，并且其中，该抗体保留本发明抗体的期望功能特性。例如，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区与轻链可变区，其中(a)该重链可变区包括一个氨基酸序列，它与选自下组的一个M^列具有至少80%的同源性，该组的构成为SEQIDNO:31、32以及33;(b)该轻链可变区包括一个氨基酸序列，它与选自下组的一个M,列具有至少80。/。的同源性，该组的构成为SEQIDNO:34、35以及36;并且(c)该抗体与人类BMP2或BMP4的结合的Ko值为lxl(T7M或更低。该抗体还可以结合至CHO细胞，所述细胞具有与细胞表面结合的人类BMP2或BMP4。该BMP2或BMP4可以结合至细胞表面的受体或者细胞表面的二价实体上、或者可以表达为具有跨膜结构域的融合蛋白。在不同实施方案中，该抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在其他实施方案中，该VH与/或VLM酸序列可以与以上给出的序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同源性。含有与具有以上给出的序列的Vh与VL区具有高同源性(即，80%或更大)的Vh与Vl区的抗体，可以通过以下方式来获得对编码SEQIDNO:31、32、33、34、35以及36的核酸分子进行诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)，然后使用本文公开的测定方法来测试编码出的改变的抗体所保留的功能。本发明还提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包括重链可变区以及轻链可变区，其中(a)该重链可变区包括与本文所示重链可变区的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列，其中所述本文所示重链可变区来自能够特异性结合选自BMPR1A、BMPR1B、和/或BMPR2的骨形成蛋白受体和/或选自ACTR1的激活素1型受体的抗体；(b)该轻链可变区包括与本文所示的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80%同源性的氨基#列，其中所述本文所示轻链可变区来自能够特异性结合选自BMPR1A、BMPRlB和/或BMPR2的骨形成蛋白受体和/或选自ACTR1的激活素1型受体的抗体；并且(c)该抗体能够特异性结合选自BMPR1A、BMPR1B和/或BMPR2的骨形成蛋白受体和/或选自ACTR1的激活素1型受体。在其他实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以与本文给出的抗BMPR1A、BMPR1B和/或BMPR2抗体和/或抗-ACTRl序列具有85%、卯％、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。含有与具有本文所示序列的Vh和Vl区高度同一(即，80%或更大)的Vh和Vl区的抗体，可以如下获得对编码抗BMPR1A、BMPR1B、和/或BMPR2抗体、和/或抗-ACTR1抗体的Vh或VL区的核酸分子进行诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)。如在此所使用，两个序列之间的同一性百分数为这些序列共有的相同位置的数目的函数(即，同源性％=相同的位置lt/位置总数xl00),该函数考虑空位(gap)的数目以及每个空位的长度，这些空位需要被引入用于两条序列的最佳比对。正如在以下的非限制性实例中所说明的，使用数学算法可以完成两条序列之间的序列比较以及同一性百分比的确定。两条氨基酸序列之间的同一性百分比的确定可以运用E.Meyers与W.Miller(Comput.Appl.Biosci"4:11-17(1988)的算法来进行(此算法已经并入ALIGN程序中(版本2.0)),其中采用PAM120权重残基表(weightresiduetable)、12的空4立长度罚分(gaplengthpenalty)与4的空位罚分。此外，两条氨基酸序列的同一性百分比的确定还可使用Needleman与Wunsch(J.Mol.Biol.444-453(1970))算法进行(此算法已并入GCG软件包的GAP程序中(可从http:〃www.gcg.com获得))，其中应用BIossum62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度4又重。另外或者可替代地，本发明的蛋白质序列可进一步用作"查询序列"以对照公共数据库进行检索，以便(例如)鉴定相关序列。此类检索可采用Altschul,etal.(19卯)J.Mol.Biol,^i:403-10的XBLAST程序(版本2.0)进行。BLAST蛋白质检索可采用记分为50，字长为3的XBLAST程序进行，从而获得与本发明的抗体分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较的空位比对，可使用Altschuletal.((1997)NucleicAcidsRes.g(17):3389-3402)说明的空位BLAST。当运用BLAST与空位BLAST程序时，可使用相应程序(例如XBLAST与NBLAST)的缺省参数。(参见http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov)。具有保守性修饰的抗体在某些实施方案中，本发明的抗体包括含有CDR1、CDR2与CDR3序列的重链可变区与含有CDR1、CDR2与CDR3序列的轻链可变区，其中一个或多个上述CDR序列包含基于本文所述示例性抗体的具体M,列或其保守性修饰，并且其中该抗体保留了本发明的单克隆抗体的所需功能属性。因此，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，该单克隆抗体或其抗原结合部分包括含有CDR1、CDR2与CDR3序列的重链可变区与含有CDR1、CDR2与CDR3序列的轻链可变区，其中(a)该重链可变区CDR3序列包括一个^J^,列，它选自SEQIDNO:19、20以及21的氨基酸序列，以及其保守性修饰；(b)该轻链可变区CDR3序列包括一个^J^酸序列，它选自SEQIDNO:28、29以及30的氨基酸序列，以及其保守性修饰；并且(c)该抗体与人类BMP2或BMP4结合的KD值为lxl0—7M或更低。该抗体也可以结合至CHO细胞上，所述CHO细胞具有结合在细胞表面的BMP2或BMP4。在一个优选的实施方案中，重链可变区CDR2序列包括一个#^*列，它选自SEQIDNO:16、17以及18的氨基酸序列，以及其保守性修饰；并且轻链可变区CDR2序列包括一个M酸序列，它选自SEQIDNO:25、26以及27的^J^酸序列，以及其保守性修饰。在另一个优选的实施方案中，重链可变区CDR1序列包括一个M^列，它选自SEQIDNO:13、14以及15的^J^酸序列，以及其保守性修饰；并且轻链可变区CDRl序列包括一个M酸序列，它选自SEQIDNO:22、23以及24的M酸序列，以及其保守性修饰。在不同实施方案中，该抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。本发明还提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，该单克隆抗体或其抗原结合部分包括含有CDR1、CDR2与CDR3序列的重链可变区与含有CDR1、CDR2与CDR3序列的轻链可变区，其中(a)该重链可变区CDR3序列包括一个M酸序列，它选自在此披露的一种抗BMPR1A抗体、抗BMPR1B抗体、抗-ACTRl抗体与抗-BMPR2抗体，以及其保守性修饰；(b)该轻链可变区CDR3序列包括一个氨基酸序列，它选自在此披露的一种抗BMPR1A抗体、抗BMPR1B抗体、抗-ACTRl抗体与抗-BMPR2抗体，以及其保守性修饰；并且(c)该抗体特异性结合BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2。如在此所使用，术语"保守性序列修饰，，意指不会显著影响或改变含有该氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。这类保守性修饰包括M酸的置换、插入与缺失。修饰可通过例如定点诱变与PCR介导的诱变等本领域已知的标准技术引入本发明的抗体中。保守性氨基酸置换是其中的氨基酸残基^皮具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。在本领域中已经确定具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)，具有P-分支侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、与具有芳族側链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本发明的抗体的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同側链家族的其它氨基酸残基替代，并且可以使用此处说明的功能分析方法对变化的抗体的保留功能(即上述在(c)中所给出的功能)进行测试。与本发明的抗体结合相同表位的抗体在另一个实施方案中，本发明提供了与任何本发明的单克隆抗体结合人类BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2上的相同表位的抗体(即能够与任何本发明单克隆抗体交叉竟争结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的抗体)。在一些的实施方案中，在交叉竟争研究中使用的该参照抗体可以是在此披露的单克隆抗体。可以使用标准的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2结合试验，基于此类交叉竟争性抗体与在此披露的抗体交叉竟争的能力来识别这类交叉竟争性抗体。在优选的实施方案中，用于交叉竟争研究的参照抗体可以是单克隆抗体6H4(具有的Vh与Vl序列分別示于SEQIDNO:31与34)，单克隆抗体11F2(具有的VH与Vl序列分別示于SEQIDNO:32与35)，单克隆抗体12E3(具有的Vh与Vl序列分別示于SEQIDNO:33与36)，或实施例1与2中识别的任一单克隆抗体。可以在标准的BMP2或BMP4结合分析中基于与这些抗体交叉竟争的能力来识别这类交叉竟争性抗体。例如，可以使用BIAcore分析、ELISA测定法或流式细胞术来证明与本发明抗体的交叉竟争。如果一个待测抗体能够抑制例如6H4、11F2或12E3与人类BMP2或BMP4的结合，则证明该待测抗体能够与6H4、11F2或12E3竟争结合人类BMP2或BMP4，从而与6H4、11F2或12E3结合人类BMP2或BMP4上的相同表位。在一个优选的实施方案中，该能够与6H4、11F2或12E3结合人类BMP2或BMP4上的相同表位的抗体是人单克隆抗体。可以按照实施例中所述，制备与分离这类人单克隆抗体。工程化的与修饰的抗体还可以通过下述方式制备本发明的抗体使用具有一个或多个在此披露的Vh和/或Vt序列的抗体作为起始材料，工程化构建修饰的抗体，这种修饰的抗体可以具有与起始抗体不同的特性。可以通过改变一个或两个可变区(即Vh和/或VO中的一个或多个残基来对抗体进行工程化改造，例如可以改变一个或多个CDR区和/或一个或多个构架区中的残基。附加地或可替代地，可以通过改变恒定区中的残基来对抗体进行工程化改造，例如以改变该抗体的一种或多种效应子功能。可以进行的一类可变区工程化改造是CDR移植。抗体与靶抗原主要通过位于六个重链与轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基进行相互作用。因此，不同抗体之间，CDR中的氨基^列比在CDR之外的序列是更多样化的。因为CDR序列负责大部分的抗体-抗原相互作用，故可以通过构建包含被移植到构架序列(来自具有不同性质的不同抗体)上的来自特定天然抗体的CDR序列的表达载体，来表达模拟该特定天然抗体的性质的重组抗体。(参见例如，Riechmann,L.etal.(1998)Nature巡:323-327;Jones，P.etal.(1986)Nature^!:522画525;Queen,C.etal.(1989)Proc.Natl.Acad.See.U.S.A.^:10029画10033;Winter的美国专利号5,225,539，以及Queen等人的美国专利号5,530,101;5,585,089;5,693,762与6,180,370。)因此，本发明的另一实施方案涉及包括含有CDRI、CDR2与CDR3序列的重链可变区与含有CDR1、CDR2与CDR3序列的轻链可变区的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，该重链可变区含有来自如本文所示的第一抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体的氨基酸序列；该轻链可变区含有来自第二抗-BMP2、抗BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体的氨基酸序列。在一个优选实施方案中，提供了包括重链可变区与轻链可变区的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，该重链可变区含有CDR1、CDR2与CDR3序列，该CDR1、CDR2与CDR3序列包含分别选自SEQIDNO:13、14与15，SEQIDNO:16、17以及18,和SEQIDNO:19、20与21的氨基酸序列；该轻链可变区含有CDR1、CDR2与CDR3序列，该CDR1、CDR2与CDR3序列包含分别选自SEQIDNO:22、23与24，SEQIDNO:25、26与27,以及SEQIDNO:28、29与30的氨基#列。因此，这类抗体含有单克隆抗体6H4、11F2与12E3的VH与VL的CDR序列，但是可含有与这些抗体不同的构架序列。W^a厶古耽玄始乂太寞在W"乂v」或公布的文献。例如，人类重链与轻链可变区基因的胚系DNA序列可以在"VBase，，人类胚系序列数据库中找到(可以获自互联网站点www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)，以及在下述文献中找到Kabat，E,A.，etal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242;Tomlinson，I.M.，etal.(1992)。"TheRepertoireofHumanGermlineVHSequencesRevealsaboutFiftyGroupsofVhSegmentswithDifferentHypervariableLoops"J.Mol.Biol.^2:776-798;以及Cox，J.P.L.etal.(1994)"ADirectoryofHumanGerm-lineVhSegmentsRevealsaStrongBiasintheirUsage"Eur.J.Immunol.827-836;各文献的全文通过引用明确结合在此。作为另一个实例，人类重链与轻链可变区基因的胚系DNA序列可以在Genbank数据库中找到。例如，下列存在于HCo7HuMAb小鼠中的重链胚系序列可以从以下的所附Genbank登录号获得1-69(NG0010109、NT024637与BC070333),3-33(NG—0010109与NT—024637)以及3-7(NGJ)010109与NT—024637)。作为另一个实例，下列存在于HCol2HuMAb小鼠中的重链胚系序列可以从以下的所附Genbank登录号获得1-69(NG_0010109、NT024637与BC070333)、5-51(NG—0010109与NT024637)、4-34(NG—0010109与NT024637)、3-30.3(CAJ556644)与3-23(AJ406678)。可以使用本领域中众所周知的一种被称为GappedBLAST的序列相似性检索方法(Altschuletal.(1997)NucleicAcidsResearchg:3389腸3402)，将抗体蛋白质序列与汇编的蛋白质数据库进行比较。BLAST是探索式算法，其中抗体序列与数据库序列之间的具有统计学显著的比对有可能包括比对字符的高得分片段对(HSP)。其得分不能通过延伸或修剪加以提高的片段对被称为命中物(hit)。简言之，可翻译VBASE源的核苷序列(http:〃vbase,mrc-cpe.cam.ac.uk/vbasel/list2.php)，并且保留FRl至FR3构架区之间的区域(包括FRl和FR3区)。这些数据库序列具有平均长度98个残基。蛋白全长上完全匹配的重复序列被剔除。蛋白质BLAST检索采用程序blastp、以及缺省标准参数，但关闭低复杂度过滤器并使用BLOSUM62的替代矩阵和用于最高5个命中物的过滤器，从而产生序列匹配。核苷酸序列按全部六种读框翻译，在数据库序列的匹配片段中不具有终止密码子的读框被视为潜在的命中物。这反过来采用BLAST程序tblastx进行确认。该程序按全部六种读框翻译抗体序列，并且将这些翻译物与按全部六种读框动态翻译的VBASE核苷酸序列进行比较。同一性是在抗体序列与蛋白质数据库之间在序列全长上存在的确切的氨基酸匹配。阳性(positives)(同一性+替代匹配)是不相同的，而是由BLOSUM62替代矩阵所引导的M酸替代。如果抗体序列以一样的同一性匹配数据库序列中的两条序列，则具有最大阳性的命中物将净皮确定为匹配序列命中物。构架序列结构上类似的那些构架序列，例如与用于优选的本发明单克隆抗体的下列构架序列相似的序歹ij:vH4-59构架序列(SEQIDNO:43)和/或VH3-33构架序列(SEQIDNO:44)和/或VH4-34构架序列(SEQIDNO:51)和/或VH1-69构架序列和/或VKA27构架序列(SEQIDNO:48)和/或VKL15构架序列(SEQIDNO:49)和/或L6VK构架序列(SEQIDNO:54)。VHCDR1、CDR2与CDR3序歹'j，以及VkCDR1、CDR2与CDR3序歹j可净皮移植到如下构架区上，该构架区具有与其源自的胚系免疫球蛋白基因中发现的序列相同的序列，或者CDR序列可被移植到与胚系序列相比包括一个或多个突变的构架区上。例如，已经发现在一些情况中，使构架区中的残基突变对于保留或增强抗体的抗原结合能力是有益的(例如，参见Queen等人的美国专利号5,530,101;5,585,089;5,693,762以及6,180,370)。另一种类型的可变区修饰是^f吏Vh和/或VkCDR1、CDR2、和/或CDR3区中的氨基酸残基突变，由此改进所感兴趣的抗体的一种或多种结合性质(例如亲和性)。可以使用定向诱变或PCR介导的诱变来引入突变，并且可结合或其它目的功能性质的影响。通常引入保守性修饰(上述)。该突变可以是氮基酸置换、插入或缺失，但是典型地是置换。此外，典型地在一个CDR区域中改变不超过一个、两个、三个、四个或五个残基。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了分离的抗-BMP2/BMP4单克隆抗体或其抗原结合部分，它包括重链可变区，该重链可变区包括(a)VhCDR1区域，该区域包括选自SEQIDNO:13、14以及15的^j^餅列，或与SEQIDNO:13、14以及15相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失或插入的M酸序列；(1))VhCDR2区域，该区域包括选自SEQIDNO:16、17以及18的^j^酸序列，或与SEQIDNO:16、17以及18相比具有一个、两个、三个、四个或五个氛基酸置换、缺失或插入的^j^酸序列；(c)VHCDR3区域，该区域包括选自SEQIDNO:19、20以及21的^j^^列，或与SEQIDNO:19、20以及21相比具有一个、两个、三个、四个或五个氮基酸置换、缺失或插入的#^*列；(cJ)VkCDR1区域，该区域包括选自SEQIDNO:22、23以及24的#^酸序列，或与SEQIDNO:22、23以及24相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失或插入的tt酸序列；(e)VkCDR2区域，该区域包括选自SEQIDNO:25、26以及27的^j^酸序列，或与SEQIDNO:25、26以及27相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失或插入的^&酸序列；以及(f)VKCDR3区域，该区域包括选自SEQIDNO:28、29以及30的氨基酸序列，或与SEQIDNO:28、29以及30相比具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸置换、缺失或插入的氨基酸序列。在又一个实施方案中，本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，它包括重链可变区，包含(a)VHCDRl区域；(b)VHCDR2区域；(c)VHCDR3区域；(d)VKCDRl区域；(e)VKCDR2区域；以及①VkCDR3区域；其中VHCDR1、CDR2、和/或CDR3区域以及VKCDR1、CDR2、和/或CDR3区域来自于一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPRlA的抗体；一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPRlB的抗体；一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-ACTR1的抗体，和/或一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPR2抗体；或者来自如下氨基酸序列，所述氨基酸序列与该一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPRlA的抗体；一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPRlB抗体；一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-ACTRl抗体；和/或一种、两种、三种、四种、五种或六种不同的抗-BMPR2抗体相比，具有一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸的置换、缺失或插入。本发明的工程化抗体包括以下抗体其中已对Vh和/或VK中的构架残基进行了修饰，从而例如改进抗体的性质。典型地实施这类构架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一个方法是将一个或多个构架残基"回复突变"成为相应的胚系序列。更确切地说，已经经历了体细胞突变的抗体可包含与该抗体所源自的胚系序列不同的构架残基。这样的残基能通过将抗体构架序列与其来源自的胚系序列进行比较而鉴定。本发明也旨在涵盖这类"回复突变"的抗体。例如，对于6H4而言，使用Kabat编号系统，VH的氛基酸残基#3(第3位)(在FR1内)是组氨酸(SEQIDNO:31),而在相应的VH4-34胚系序列中这一残基是谷氨酰胺(SEQIDNO:51)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将6H4的Vh中的残基弁3(FR1中的残基#3)从组氨酸"回复突变"为谷氨酰胺)。作为另一个实例，对于11F2而言，VH的氨基酸残基弁27(在FR1中)是天冬氨酸(SEQIDNO:32)，而在相应的VH4-59胚系序列中这一残基是甘氨酸(SEQIDNO:43)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将11F2的VH的残基#27(FR1中的残基#27)从天冬氨酸"回复突变"为甘氨酸)。作为另一个实例，对于11F2而言，VH的氨基酸残基#30(在FR1中)是一个精氨酸(SEQIDNO:32)，而在相应的VH4-59胚系序列中这一残基是一个丝氨酸(SEQIDNO:43)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将11F2的VH中的残基弁30(FR1中的残基弁30)^Mt氨酸"回复突变"为丝氨酸)。作为另一个实例，对于11F2而言，VH的氨基酸残基#54(在CDR2中)是一个精氨酸(SEQIDNO:32)，而在相应的VH4-59胚系序列中这一残基是一个丝氨酸(SEQIDNO:43)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将11F2的VH中的残基#54(CDR2中的残基#5)从精氨酸"回复突变"为丝氨酸)。作为另一个实例，对于11F2而言，VH的氣基酸残基#58(在CDR2中)是一个组氨酸(SEQIDNO:32)，而在相应的VH4-59胚系序列中这一残基是一个天冬酰胺(SEQIDNO:43)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将11F2的VH中的残基#58(CDR2中的残基#9)从组氨酸"回复突变"为天冬酰胺)。作为另一个实例，对于12E3而言，Vh的氛基酸残基弁52A(在CDR2中)是一个天冬氨酸(SEQIDNO:33)，而在相应的VH3-33胚系序列中这一残基是一个酪氨酸(SEQIDNO:44)。为了《吏构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变，，为胚系序列(例如将12E3的VH中的残基弁52A(CDR2中的残基#4)从天冬氨酸"回复突变，，为酪氨酸)。作为另一个实例，对于12E3而言，Vh的氛基酸残基弁55(在CDR2中)是一个精氨酸(SEQIDNO:33),而在相应的VH3-33胚系序列中这一残基是一个丝氨酸(SEQIDNO:44)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变，，为胚系序列(例如将12E3的VH中的残基#55(CDR2中的残基#7)从精氨酸"回复突变"为丝氨酸)。而言，Vh的氛基酸残基弁56(在CDR2中)是一个赖氨酸(SEQIDNO:33)，而在相应的VH3-33胚系序列中这一残基是一个天冬酰胺(SEQIDNO:44)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将12E3的VH中的残基#56(CDR2中的残基#8)从赖氨酸"回复突变"为天冬酰胺)。作为另一个实例，对于11F2而言，VH的氨基酸残基弁82(在FR3中)是一个甲硫氨酸(SEQIDNO:32)，而在相应的VH4-59胚系序列中这一残基是一个亮氨酸(SEQIDNO:43)。为了使构架区序列变回至它们的胚系构型，可以通过例如位点定向诱变或者PCR介导的诱变将体细胞突变"回复突变"为胚系序列(例如将11F2的VH中的残基#82(FR3中的残基#17)从曱硫氨酸"回复突变"为亮氨酸)。另一种类型的构架修饰涉及对构架区内或甚至一个或多个CDR区域内的一个或多个残基进行突变，以除去T细胞表位从而降低抗体的潜在的免疫原性。这种方法也被称为"去免疫化"，并且Carr等人的美国专利公开号20030153043中更详细地说明了该方法。本发明的工程化抗体还包括以下抗体其中已对氨基酸残基进行修饰，由此通过能改变与抗体上的T细胞表位的相互作用的氨基酸修饰来增加或降低免疫原性反应(参见例如美国专利号6,835,550;6,897,049和6,936249)。作为在构架区或CDR区域内进行的修饰的补充或替代方案，可以对本发明的抗体进^f亍工程化^l其在Fc区域内包含修饰，以通常改变抗体的一种或多种功能性质，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本发明的抗体可以被化学修饰(例如，一个或多个化学结构部分可以被附着至抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变该抗体的一个或多个功能性质。下面将对这些实施方案中的每一个均进行更详细的说明。Fc区中的残基的编号是Kabat的EU索引(EUindex)的编号。在一个实施方案中，CH1的铰链区被修饰从而改变了(例如，增加或减少)铰链区中的半胱氨酸残基的个数。Bodmer等人的美国专利号5，677，425中更详细地说明了这一方法。将CH1的铰链区中的半胱氨酸残基的个数加以改变，例如以便于组装轻链和重链或者增加或减小抗体的稳定性。在另一个实施方案中，使抗体的Fc铰链区突变以减小该抗体的生物半衰期。更特别地，将一个或多个M酸突变引入Fc铰链片段的CH2-CH3结构域的界面区，以致相对于天然Fc铰链域与葡萄球菌A蛋白(StaphylococalproteinA，SpA)的结合而言，该抗体具有削弱了的SpA的结合。Ward等人的美国专利号6,165,745中更详细地说明了这一方法。在另一个实施方案中，对抗体进行修饰以增大其生物半衰期。多种方法都是可以的。例如，可以引入一个或多个下列突变如Ward的美国专利号6,277,375所述的T252L、T254S、T256F。作为替代，为增大生物半衰期，抗体可以在CH1或CL区域中发生变化以包含从IgG的Fc区域的CH2结构域的两个环处获得的补救受体(salvagereceptor)结合表位，如Presta等人的美国专利号5,869,046和6,121,022中所描述。在另一个实施方案中，按照WO/2007/059782所描述，以UniBody的形式产生抗体，该专利文献的全文通过引用结合在此。在又一些其他的实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基以改变Fc区，从而改变抗体的效应子功能。例如，选自氛基酸残基234、235、236、237、297、318、320以及322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基所替代，从而使抗体对于效应子配体(effectorligand)而言具有改变的亲和性，但仍保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和性被改变的效应子配体可以是例如Fc受体或补体的Cl成分。Winter等人的美国专利号5,624,821与5,648,260更详细地i兌明了这一方法。在另一个实例中，选自氨基酸残基329、331以及322的一个或多个氨基酸残基可以被不同的氨基酸残基所替代，以使抗体具有改变的Clq结合和/或减低或消失的依赖于补体的细胞毒性(CDC)。Idusogie等人的美国专利号6,194,551中更详细地i兌明了该方法。在另一个实例中，可以改变M酸位置231和239中的一个或多个氨基酸，从而改变抗体固定补体的能力。Bodmer等人的PCT公开号W094/29351中更详细地描述了这种方法。在又另一个实例中，为了提高抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或提高抗体对Fg受体的亲和性，通过修饰下列位置的一个或多个^J^酸对Fc区域进行修饰238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。Presta的PCT公开号WO00/42072中更详细地描述了这种方法。此外，已经对人类IgGl上的FcyRl、FcyRII、FqRlII和FcRn的结合位点进行了作图，并描述了具有改进结合的变体(参见Shields,R丄.etal.(2001)J.Biol.Chem.^:6591-6604)。已显示在位置256、290、298、333、334及339上特定突变可以改进对FcyRm的结合。另夕卜，已显示下列组合突变可以改进对FcyRm的结合T256A/S298A，S298A/E333A，S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。在再另一个实施方案中，对抗体的糖基化进行修饰。例如，可以制备无糖基化的抗体(即该抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化以例如提高抗体对抗原的亲和性。例如可以通过在抗体序列中改变一个或多个糖基化的位点来实现这类糖修饰。例如，可以进行一个或多个氨基酸的置换，从而消除一个或多个可变区构架的糖基化位点，由此在该位点处消除糖基化。这类无糖基化作用可以提高抗体对抗原的亲和性。Co等人的美国专利号5,714,350和6，350，861中更详细地说明了这类方法。作为附加的或替代的方案，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如具有减少的岩藻糖残基含量的低岩藻糖化抗体或具有增加的平分型(bisecting)GlcNac结构的抗体。已证实这种改变的糖基化模式可以提高抗体的ADCC能力。例如可以在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现这类糖修饰。具有改变的糖基化机制的细胞在本领域中是已知的，并可,皮用作表达本发明的重组抗体的宿主细胞，由此产生具有改变的糖基化的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖基转移酶基因，FUT8U(l，6)岩藻糖转移酶)，使得在Ms704、Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体在它们的糖上缺少岩藻糖。Ms704、Ms705和Ms709FUT8;细胞系是通过使用两个置换栽体对CHO/DG44细胞中的FUT8基因进行靶向破坏而产生的(参见Yamane等人的美国专利公开号20040110704和Yamane画Ohnukietal.(2004)BiotechnolBioeng^2:614-22)。作为另一个实例，Hanai等人的EP1,176,195描述了一种带有被功能性破坏的FUT8基因的细胞系，该基因编码岩藻糖基转移酶，这使得通过减少或消除此a1，6键相关的酶，在这种细胞系中表达的抗体表现出低岩藻糖基化。Hanai等人也描述了这样的细胞系，它们具有低的将岩藻糖添加至与抗体Fc区结合的N-乙酰葡糖胺上的酶活性，或者不具有该酶活性，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCCCRL1662)。Presta的PCT公开号WO03/035835描述了一种变体CHO细胞系，Lecl3细胞，该细胞系将岩藻糖附着至Asn(297)连结的碳水化合物上的能力降低，这也导致在该宿主细胞系中表达的抗体的低岩藻糖化(还可参见Shields,R丄.etal.(2002)丄Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等人的PCT公开号WO99/54342中描述了经过工程化而表达糖蛋白修饰性糖基转移酶(例如，P(l，4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶m(GnTin))的细胞系，使得在这种工程化细胞系中表达的抗体具有增多的平分型GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性提高(还可参见Umanaetal.(1999)Nat.Biotech.12:176-180)。作为替代，可以使用岩藻糖苷酶切去抗体的岩藻糖残基。例如，岩藻糖苷酶ot-L-岩藻糖苷酶从抗体上切去岩藻糖残基(Tarentino，A丄，etal.(1975)Biochem.Ji:5516-23)。还可以通过名称为"CellsProducingAntibodyCompositionswithIncreasedAntibodyDependentCytotoxicActivity，，的美国专利号6,946,292(KyowaHakkoKogyoCo.,Ltd,Tokyo,Japan)中所述的PotelligentTM方法学，实现去岩藻糖化。通过这种方法学，采用岩藻糖基转移酶缺陷的宿主细胞，用于产生具有增强水平的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性的抗体。一种可替代的用于产生本发明所述的去岩藻糖化抗体的方法，采用Zhu等人的"ProductionofHumanMonoclonalAntibodyinEggsofChimericChickens,"NatureBiotech.^:1159-1169(2005)中所述的方法。通过这种方法，在嵌合鸡蛋的蛋白中表达完全功能的单克隆抗体，产率大约为每只蛋3毫克[OrigenTherapeutics,Burlingame,CA。通过这种方法产生的抗体缺乏末端唾液酸和岩藻糖残基，并因此比在常规的哺乳动物细胞培养物(例如中国仓鼠卵巢细胞)中产生的抗体具有高多达100倍的抗体依赖性细胞毒性。通常，将本发明抗体的可变结构域克隆进入一个栽体系统中(在Zhu等人中有述)，将所述栽体系统转染至鸡胚干细胞中，并导入鸡胚中，由此产生嵌合的禽类生物反应器。在本发明考虑之列的对本文抗体的另一种修饰为聚乙二醇化。可以对抗体进行聚乙二醇化以例如增加抗体的生物半衰期(例如血清半衰期)。为了对抗体进行聚乙二醇化，通常在可以使一个或多个聚乙二醇(PEG)基团连接到抗体或其片段的条件下，将抗体或其抗体片段与PEG反应，例如与PEG的反应性酯类或醛类衍生物反应。通常使用反应性PEG分子(或类似的反应性水溶性聚合物)，通过酰基化反应或烷基化反应来实现聚乙二醇化。在此使用的术语"聚乙二醇"旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的PEG的任何形式，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待被聚乙二醇化的抗体为无糖基化的抗体。对蛋白质进行聚乙二醇化的方法为本领域中已知的，并可应用于本发明的抗体。参见例如，Nishimura等人的EP0154316和Ishikawa等人的EP0401384。抗体的物理性质类型的抗体。在一些实施方案中，本发明的抗体可在重链或轻链可变区中含有一个或多个糖基化位点。在可变区中一个或多个糖基化位点的存在可导致抗体的免疫原性提高或抗体的pK值发生变化，这是因为抗原结合的改变(Marshalletal(1972)AnnuRevBiochem^i:673誦702;GalaFAandMorrisonSL(2004)JImmunol121:5489-94;Wallicketal(1988)JExpMed巡:1099-109;SpiroRG(2002)GlycobiologyU:43R-56R;Parekhetal(1985)Nature^:452画7;Mimuraetal.(2000)MolImmunol^2:697-706)。已知糖基化会发生在含有N-X-S/T序列的基序中。可以使用Glycoblot测试法来检测可变区的糖基化，在该测试法中抗体被切割产生Fab,并接着使用测量高珙酸氧化和Schiff碱形成的测试法来检测糖基化。作为替代，可以使用Dionex光色i普(Dionex-LC)来检测可变区的糖基化，在该测试法中将来自Fab的糖切割为单糖并分析每种糖的含量。在某些情况下，优选使用不具有可变区糖基化的抗CD19抗体。这可以通过选择在可变区中不含有糖基化基序的抗体，或者通过使用本领域熟知的标准技术突变该糖基化基序中的残基来实现。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体不含有天冬酰胺同分异构位点。在N-G序列或D-G序列上可以分别发生脱酰胺或异天冬氨酸效应。脱酰胺或异天冬氨酸效应导致生成异天冬氨酸，这通过在侧链氛基端而不是主链上生成一个扭结结构从而降低抗体的稳定性。可以通过使用iso-quant测定法来测量异天冬氨酸的产生，该测试法使用反相HPLC来检测异天冬氨酸。每种抗体都具有独特的等电点(pl)，但是抗体通常都落在pH6至9.5之间的范围内。IgGl抗体的pi通常落在pH7至9.5的范围内，且IgG4抗体的pi通常落在pH6至8的范围内。抗体可能具有上述范围之外的pi值。虽然该效应通常并不清楚，但是推测pl在正常范围之外的抗体在体内条件下可能会有一定的解折叠(unfolding)和不稳定性。可以使用毛细管等电聚焦测定来测量等电点，该测定法产生一个pH梯度，并可以使用激光聚焦来提高准确性(Janinietal(2002)Electrophoresis^:1605-11;Maetal.(2001)Chromatographia^:S75-89;Huntetal(1998)JChromatogrA卿:355-67)。在某些情况下，优选使用pl值落在正常范围内的抗CD19抗体。这可以通过选择pl值在正常范围内的抗体，或者通过使用本领域熟知的标准技术突变带电荷的表面残基来实现。每种抗体都有解链温度(meltingtemperature)，这是热稳定性的指标(KrishnamurthyRandManningMC(2002)CurrPharmBiotechnol!361-71)。较高的热稳定性表明抗体在体内的总体稳定性较好。可以使用诸如差示扫描量热法等技术来测量抗体的解链温度(Chenetal(2003)PharmRes^:1952-60;Ghirlandoetal(1999)ImmunolLett^:47-52)。T^表示抗体开始解折叠的温度。TM2表示抗体完全解折叠的温度。通常优选地，本发明抗体的TM1高于60°C，优选地高于65°C，甚至更优选地高于70。C。作为替代，可以使用圆二色性来测量抗体的热稳定性(Murrayetal.(2002)J.ChromatogrSci迎:343-9)。在一个优选的实施方案中，选择不会快速降解的抗体。可以使用本领域充分理解的毛细管电泳(CE)和MALD1-MS来测量抗CD19抗体的片段化(AlexanderAJandHughesDE(1995)AnalChem^:3626-32)。在另一个优选的实施方案中，选择具有最小聚集效应的抗体。聚集可能导致引发不需要的免疫反应和/或变化的或不良的药代动力学性质。通常，可接受的抗体的聚集度为25%或更低，优选地20%或更低，甚至更优选地为15%或更低，甚至更优选地为10%或更低，并甚至更优选地为5%或更低。可以使用本领域熟知的几种技术来测量聚集以识别单体、二聚体、三聚体或多聚体，所述技术包括尺寸排阻柱(SEC)、高效液相色谱(HPLC)，和光散射法。对抗体进行工程化的方法如以上所讨论，可以通过修饰Vh和/或Vk序列或与其連結的恒定区，使用具有在此已披露的VH和Vk序列的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRlB、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2的抗体来产生新的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRlB、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2的抗体。因此，在本发明的另一方面，使用本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2的抗体的结构特征来产生结构相关的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2的抗体，它们保留了本发明抗体的至少一种功能性质，例如特异性结合至人类BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2。例如，如以上所讨论，可以将本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2抗体或它们的突变体的一个或多个CDR区与已知的构架区和/或其他CDR重组地组合，以产生本发明的另外的重组工程化抗体。其他类型的修饰包括上节中描述的那些修饰。用于工程化方法的起始材料为在此提供的一个或多个Vh和/或Vk序列或它們的一个或多个CDR区。为产生工程化抗体，并不必实际上制备(即表达为蛋白质)具有在此提供的一个或多个VH和/或VK序列或它们的一个或多个CDR区的抗体。相反，可以使用这个或这些序列中含有的信息作为起始材料，产生源自这个或这些原始序列的"第二代"序列，并接着制备此"第二代，，序列并将其表达为蛋白质。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了一种制备抗-BMP2、抗BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2的抗体的方法。在一个优选实施方案中，本发明提供了一种制备抗-BMP2/BMP4的抗体的方法，包括(a)提供(i)重链可变区抗体序列，它包括选自SEQIDNO:13、14,及15的CDR1序列、选自SEQIDNO:16、17，及18的CDR2序歹寸，和/或选自SEQIDNO:19、20，及21的CDR3序列；和/或(ii)轻链可变区抗体序列，它包括选自SEQIDNO:22、23，及24的CDR1序列、选自SEQIDNO:25、26,及27的CDR2序列，和/或选自SEQIDNO:28、29,及30的CDR3序列；(b)改变重链可变区抗体序列和/或轻链可变区抗体序列中的至少一个5氨基酸残基，以产生至少一个改变的抗体序列；并且(c)将改变的抗体序列表达为蛋白。可以使用标准的分子生物学技术来制备和表达改变的抗体序列。典型地，由改变的抗体序列所编码的抗体保留在此描述的一种或多种抗体的一种、一些或全部的功能性质，该功能性质包括但不限于特异性结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2。可以使用本领域可得的和/或在此所述的标准测试法(例如实施例中所给的测试法，例如流式细胞术，结合测定法)来评估改变的抗体的功能性质。在改造本发明抗体的方法的某些实施方案中，可以沿着抗-BMP2、抗画BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2抗体的编码序列的全长或部分随机地或选择性地引入突变，并篩选所得的经修饰的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗ACTR1、和/或抗-BMPR2抗体的结合活性和/或在此所述的其他功能性质。突变方法在本领域中已有描述。例如，Short的PCT公开号WO02/092780描述了使用饱和诱变、合成连接装配或它们的组合来生成并筛选抗体突变体的方法。作为替代，Lazar等人的PCT公开号WO03/074679描述了使用计算机筛选法来优化抗体的生理化学性质的方法。编码本发明抗体的核酸分子本发明的另一个方面涉及编码本发明抗体的核酸分子。该核酸可以存在于完整细胞中，细胞裂解液中，或者以部分纯化的形式或基本上纯的形式存在。如果通过标准技术将核酸从其他细胞组分或其他污染物(例如其他的细胞核酸或蛋白)中纯化出来，那么该核酸是"分离的"或是"基本上纯的"，其中所述标准技术包括4^/SDS处理，CsCl成带(banding)、柱层析、琼脂糖凝胶电泳及本领域的其他熟知技术。参见F.Ausubeleta1.(1987)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingandWileyInterscience，NewYork。本发明的核酸可以是，例如DNA或RNA，并且可以包含或不包含内含子序列。在一个优选的实施方案中，核酸为cDNA分子。可以使用标准的分子生物学技术获得本发明的核酸。对于通过杂交瘤表达的抗体(例如从下文进一步描述的携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)，可以通过标准的PCR扩增或cDNA克隆技术获得由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的编码cDNA。可回收从免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)获得的抗体编码核酸。本发明示例性的核酸分子是对在此提出的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2单克隆抗体的VH和Vt序列进行编码的那些核酸分子。本发明的优选核酸分子是对6H4、11F2，及12E3单克隆抗体的VH与vl序列进行编码的核酸分子。对6H4、11F2，及12E3的Vh序列迸行编码的DNA序列分别显示于SEQIDNO:37、38、以及39中。对6H4、UF2，及12E3的VL序列进行编码的DNA序列分别显示于SEQIDNO:40、41、以及42中。本发明其他的优选核酸为与在SEQIDNO:37、38、39、40、41，或42中所示的序列之一具有至少80。/。序列同一性，例如具有至少85%、至少90%、至少95%、至少98%，或至少99%的序列同一性的核酸，该核酸编码本发明的抗体，或其抗原结合部分。两种核酸序列之间的同一性百分比是考虑了空位数和每一空位长度之后序列中具有相同核苷酸的位置的数目，其中所述空位是为了两条序列的最佳比对而被需要引入的。两条序列之间的序列比较和同一性百分比的确定可以使用数学算法来实现，例如Meyers及Miller算法或上述的Altschul的XBLAST程序。在进一步，本发明优选的核酸包括SEQIDNO:37、38、39、40、41，及42所示的核酸序列中的一个或多个CDR编码部分。在这一实施方案中，核酸可以编码6H4、11F2，以及12E3的重链CDR1、CDR2、和/或CDR3序列，或6H4、11F2，以及12E3的轻链CDR1、CDR2、和/或CDR3序列。与SEQIDNO:37、38、39、40、41、或42的CDR编码部分具有至少80。/。序列同一性，例如具有至少85%、至少卯％、至少95%、至少98%或至少99。/。的序列同一性的核酸也是本发明优选的核酸。此类核酸可能在非CDR编码区和/或在CDR编码区与SEQIDNO:37、38、39、40、41，或42的相应部分有差异。当差异存在于CDR编码区中时，与6H4、11F2，以及12E3的相应CDR序列相比，由该核酸编码的CDR区通常包括如在此定义的一个或多个保守性序列修饰。一旦获得了编码Vh和Vl区段的DNA片段，那么可以通过标准的重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如将可变区基因转变成全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码V^或VH的DNA片段可操作地连接至编码另一种蛋白，例如抗体恒定区或柔性接头(flexiblelinker)的另一条DNA片段。在此使用的术语"可操作地连接"意指两条DNA片段被连接起来，使得由两条DNA片段编码的M^列均保留在阅读框内。可以通过将编码VH区的分离的DNA可操作地连接至另一个编码重链恒定区(CH1、CH2,和CH3)的DNA分子上，将编码vh区的DNA转化成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat，E.A.，elal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242,1991)，并且通过标准的PCR扩增可以获得涵盖这些区域的DNA片段。重链恒定区可以为IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、1gE、IgM或IgD恒定区，但最典型地是IgGl或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可以可操作地连接至另一个仅编码重链CHI恒定区的DNA分子上。可以通过将编码VL区的分离DNA可操作地连接至另一个编码轻链恒定区CL的DNA分子上，将编码VL区的DNA转化成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat，E.A.，etal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo,91-3242，1991)，并且通过标准的PCR扩增可以获得涵盖这些区域的DNA片段。轻链恒定区可以为k或X恒定区，但是最典型地是k恒定区。为产生scFv基因，可以将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至另一条编码柔性接头的片段，如编码氨基酸序列(Gly4-Ser3)的片段上，以使Vl和VH序列可表达为连续的单链蛋白，其中VH和VL区域通过柔性接头连接(例如，参见Birdetal.Science242:423-426,(1988);Hustonetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA5879-5883,(1988);和McCaffertyetal"Nature，552-554,(19卯))。本发明的单克隆抗体的生产可以通过多种技术生产本发明的单克隆抗体(mAb)，所述技术包括常规的单克隆抗体方法例如KohlerandMilsteinNature495(1975)的标准体细胞杂交技术。虽然优选体细胞杂交法，但是原则上可以采用其他用于生产单克隆抗体的技术，例如B淋巴细胞的病毒性转化或致癌性转化。用于制备杂交瘤的优选的动物系统是鼠系统。在小鼠中产生杂交瘤是已充分确立的程序。用于分离经免疫的脾细胞以进行融合的免疫方案和技术在本领域中是已知的。融合伴侣(例如鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。可以基于如上所述制备的鼠单克隆抗体的序列来制备本发明的嵌合抗体或人源化抗体。可以从感兴趣的鼠杂交瘤获得对重链和轻链免疫球蛋白进行编码的DNA,并且使用标准的分子生物学技术进行工程化改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为了形成嵌合抗体，可以使用本领域中已知的方法(参见例如Cabilly等人的美国专利号4,816,567)将鼠可变区连接至人恒定区。为了形成人源化抗体，可以使用本领域中已知的方法(参见例如Winter的美国专利号5,225,539，以及Queen等人的美国专利号5,530,101;5,585,089;5，693，762以及美国专利号6,180,370)将鼠CDR区插入至人的构架中。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体是人单克隆抗体。使用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因小鼠或转染色体小鼠，可以产生这类抗BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的人单克隆抗体。这些转基因小鼠和转染色体小鼠包括在此分别称为HuMAbmouse⑧和KMmouse⑧的小鼠，且它们在此统称为"人Ig小鼠"。HuMAbmouse(Medarex，Inc.)含有编码未重排的人重链(n和y)及k轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微座位(minilocus)，并含有使内源性fi和k链座位失活的靼向突变(参见例如Lonberg，etal.Nature368(6474):856-859,(1994))。因此，这些小鼠表现出小鼠IgM或k的降j氐的表达、并且响应于免疫作用，所引入的人重链和轻链转基因将经历类别转换以及体细胞突变以产生高亲和性人IgGK单克隆抗体(Lonbergetal.，同上引文；综述见LonbergHandbookofExperimentalPharmacology113:49-101(1994);LonbergandHuszarIntern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)及HardingandLonbergAnn.N.Y.Acad.Sci.764:536-546(1995))。HuMAb小鼠的制备和用途以及这种小鼠携带的基因组修饰进一步记载于Taylor,etal.NucleicAcidsResearch^:6287-6295，(1992);Chen,etal.InternationalImmunology旦647-656,(1993);Tuailkmetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA￡^:3720-3724,(1993);Choietal.NatureGenetics&117-123,(1993);Chen,etal.EMBOJ.821-830,(1993);Tuaillonetal.丄Immunol.152:2912-2920,(1994);Taylor,etal.InternationalImmunology579-591,(1994);和Fishwild,D.etal.NatureBiotechnology845-851,(1996)，所有这些文献的全文通过引用特异地结合在此。还可参见均为Lonberg和Kay的美国专利号5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,789,650;5,877,397;5,661,016;5,814,318;5,874,299;及5,770,429;Surani等人的美国专利号5,545,807;均为Lonberg和Kay的PCT公开号WO92/03918，WO93/12227，WO94/25585，WO97/13852，WO98/24884及WO99/45962;以及Korman等人的PCT公开号WO01/14424。在一个相关的实施方案中，可以对带有部分人类免疫球蛋白基因的小鼠进行免疫。例如，小鼠可仅带有人类免疫球蛋白基因的v区。对这些动物进行免疫可以产生嵌合抗体。在另一个实施方案中，可以使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠生产本发明的人抗体，所述小鼠例如是携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠。这类小鼠在此被称为"KMmouse",详细记载于Ishida等人的PCT公开号WO02/43478中。再进一步，替代性的表iiA免疫球蛋白基因的转基因动物系统在本领域中是可得到的，并可用于生产本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体。例如，可以4吏用,皮称作Xenomouse(Amgen，Inc.,ThousandOaks，CA)的替代性转基因系统；这种小鼠记载于例如Kucherlapat等人的美国专利号5,939,598;6,075,181;6,114,598;6,150,584和6,162,963中。而且，替代性的表达人免疫球蛋白基因的转染色体动物系统在本领域中是可得的，并可用于生产本发明的抗体。例如，可以使用被称作"TC小鼠，，的同时携带人重链转染色体和人轻链转染色体的小鼠；这种小鼠记载于Tomizukaetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA22:722-727,(2000)中。作为另一个实例，携带人重链和轻链转染色体的母牛在现有技术(Kuroiwaetal.NatureBiotechnology^:889-894，(2002))中有记载，并且可用于生产本发明的抗-BMP2、抗画BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体。此外，可以使用本领域中已知的棵DNA免疫技术(可以联合使用或者不使用纯化的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2相关蛋白，或者表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和Z或BMPR2的细胞)，对所编码的免疫原产生免疫应答(综述参见Donnellyetal"1997，Ann.Rev,Immunol.15:617-648，该文献的全文通过引用结合在此)。因此，本发明还包括使用BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2基因或它们的部分进行的DNA免疫。本发明的人单克隆抗体还能使用噬菌体展示技术筛选人免疫球蛋白基因文库而制备。这种用于分离人抗体的噬菌体展示技术在本领域内是已确立的。参见例如Ladner等人的美国专利号5,223,409;5,403,484;以及5,571,698;Dower等人的美国专利号5，427，卯8及5,580,717;McCafferty等人的美国专利号5,969,108及6,172,197;及Griffiths等人的美国专利号5,885,793;6,521,404;6,544,731;6,555,313;6,582,915以及6,593,081。本发明的人单克隆抗体还能使用SCID小鼠来制备，在该小鼠中人免疫细胞已被重新构建，这使其在免疫时可产生人抗体反应。这种小鼠记栽于例如Wilson等人的美国专利号5，476，996及5,698,767中。还可以通过LEXSystemTM和Plantibodies[Biolex，Inc"Pittsboro，NCI方法学产生根据本发明的抗体，其中本发明的抗体产生于转基因植物中。参见最近授库又的美国专利号6,852,319,名称为"MethodofUseofTransgenicPlantExpressedAntibodies"。LEXSystemTM将基因工程和蛋白质回收方法与一种小的绿色水生植物，浮萍(Lemnaceae)的自然特征相结合，产生出一种研发和生产方法，根据所考虑的精确应用，该技术可以比现有的细胞培养和转基因表达系统具有某些优势。参见美国专利号6，040，498，名称为"GeneticallyEngineeredDuckweed",以及PCT专利申请公开号WO99/07210(披露了转化和选择的方法，转基因植物再生的方法，生长和回收的方法，多种基因和载体的用途，以及转化的组织和植物)；PCT专利申请^^开号WO02/10414，名称为"ExpressionofBiologicallyActivePolypeptidesinDuckweed"(披露了用于表达的方法和组合物，用于回收的方法和组合物，用于增强表达水平的方法，以及用于指导分泌的方法)；PCT专利申请7>开号WO02/097029，名称为"PlateandMethodforHighThroughputScreening";PCT专利申请公开号WO02/097433,名称为"UseofDuckweedinHighThroughputScreening";以及美国专利号6,680,200，名称为"LEDArrayforIlluminatingCellWellPlatesandAutomatedRackSystemforHandlingtheSame"。用于在植物中表i^A抗体和其他抗体的PlantibodiesTM方法学披露于美国专利号6,417,429;5,202,422;5,639,947;5,959,177;和6,417,429。这些专利和专利申请的每一个的全文均通过引用结合在此。人Ig小鼠的免疫当人Ig小鼠用于生产本发明的人抗体时，那么这种小鼠可以用下列进行免疫本发明的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2抗体，本发明的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2抗体，对本发明的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2抗体进行表达的细胞系，纯化的或富集的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2抗原制品，和/或重组BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2，或BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2融合蛋白，如Lonbergetal.Nature368(6474)，(1994):856-859;Fishwild，D.etal.NatureBiotechnologyM:845-851,(1996);以及PCT公开号WO98/24884和WO01/14424中所述进4亍。通常，该小鼠在初次免疫时将是6至16周龄。例如，可以用纯化的或重组的抗原制品(5至50ng)经腹膜内免疫人lg小鼠。用于产生针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的完全人单克隆抗体的详细步骤将在下文实施例1中描述。在各种抗原上积累的经验显示在以下条件下转基因小鼠会产生应答用在完全弗氏佐剂中的抗原进行初始腹膜内(IP)免疫，之后每隔一周在不完全弗氏佐剂中用抗原进行IP免疫(多达共6次)。然而，也发现除弗氏佐剂之外的其他佐剂是有效的。另外，也发现在不存在佐剂的情况下全细胞具有高度的免疫原性。在免疫方案的过程中可以使用通过例如眶后IsUl得到的血浆样品监测免疫应答。通过ELISA可以筛选血浆，并且具有足够滴度的人免疫球蛋白的小鼠可被用于融合(如实施例1所述)。可以在处死并取脾脏之前的3天，通过静脉内对小鼠进行抗原加强免疫。预期对每个免疫可能需要进行2至3个融合。每种抗原通常免疫6至24只小鼠。通常使用HCo7和HCo12两个品系。HCo7和HCo12小鼠品系的产生分别描述于美国专利号5,770,429和PCT公开号WO01/09187的实施例2。另外，可以通过育种将HCo7和HCo12两种转基因一起导入单个小鼠，由此该小鼠同时具有两种不同的人重链转基因(HCo7/HCo12)。作为替代或附加的手段，可以如PCT公开号WO02/43478所述使用KM11101186@品系。生成产生本发明的人单克隆抗体的杂交瘤为了生成产生本发明的人单克隆抗体的杂交瘤，可从经免疫的小鼠中分离脾细胞和/或淋巴结细胞并与合适的永生化细胞系例如小鼠骨髓瘤细胞系融合。可以针对抗原特异性抗体的产生，对形成的杂交瘤进行筛选。例如，可以用50%的PEG将来自经免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液与六分之一数量的P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL1580)融合。作为替代，可以使用基于电场的电融合方法，通过CytoPulse大室细月包融合电穿孔仪(CytoPulseSciences,Inc.，GlenBurnie,MD)融合来自免疫小鼠的脾淋巴细胞单细胞悬液。将大约2xl05的细胞种于平底微量滴定板上，之后在如下培养基中孵育一周，该培养基为含有L谷氨酰胺和丙酮酸钠的DMEM高葡萄糖培养基(Mediatech，Inc.,Herndon，VA),并且还含有20%的胎牛血清(Hyclone，Logan，UT)、18%的P388DI条件培养基、5%的Origen杂交瘤克隆因子(BioVeris，Gaithersburg，VA)、4mM的L-谷氨酰胺、5mM的HEPES、0.055mM的卩-巯基乙醇、50单位/ml的青霉素、50mg/ml链霉素及lx次黄噪呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶脱氧核普(HAT)培养基(Sigma;在融合后24小时加入HAT)。一周后，可以将细胞培养于以HT替换HAT的培养基中。然后可以通过ELISA筛选各单个孔中的人单克隆IgM和IgG抗体。通常在10至14天后可以观察到杂交瘤的生长。可以将分泌抗体的杂交瘤再铺板，再次篩选，并且如果仍是人IgG阳性的，那么可以通过有限稀释将单克隆抗体亚克隆至少2次。然后可以在体外培养稳定的亚克隆以便在组织培养基中产生小量抗体用于表征。为了纯化人单克隆抗体，可以将已选择的杂交瘤培养于2升的转瓶中用于单克隆抗体纯化。可以将上清液进行过滤并浓缩，之后用蛋白A-琼脂糖(Pharmacia,Piscataway，N.J.)进行亲和层析。可以通过凝胶电泳和高效液相色镨检测洗脱的IgG以确保纯度。可以将緩冲液换为PBS，并通过OD28o使用1.43的消光系数确定浓度。可以将单克隆抗体分成等份，并保存于-80。C。生成产生本发明的单克隆抗体的转染瘤也可以使用例如重组DNA技术和基因转染方法的结合在宿主细胞转染瘤中产生本发明的抗体，这是本领域中熟知的(例如Morrison,Science229:1202,(1985))。例如，为了表达抗体或它们的片段，可以通过标准的分子生物学技术(例如，j吏用表达感兴趣的抗体的杂交瘤进行PCR扩增或cDNA克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的DNA,并且可将DNA插入至表达栽体中，使得基因可操作地连接转录和翻译的控制序列。术语"可操作地连接"在此上下文中意指抗体基因被连接进入载体，使得栽体中的转录和翻译控制序列可以起到其调节抗体基因的转录和翻译的预期功能。对表达载体和表达控制序列进行选择以便与所使用的表达宿主细胞相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入至分开的载体中，或者更典型地是将两个基因均插入至相同的表达载体中。可以通过标准的方法将抗体基因插入至表达载体中(例如，连接抗体基因片段和栽体上的互补限制性位点，或者如果不存在限制性位点时进行平端连接)。可以通过以下方法将本文所述抗体的轻链和重链可变区用于形成任何抗体同种型的全长抗体基因将轻链和重链可变区插入至已经编码期望同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得VH片段可操作地连接栽体中的Ch片段，并且Vk片段可操作地連接栽体中的Cl片段。作为附加或替代的手段，该重组表达载体可以编码有利于从宿主细胞中分泌抗体链的信号肽。可以将抗体链基因克隆进入载体，使得信号肽在读框内连接至抗体链基因的氨基末端。信号肽可以M疫球蛋白信号肽或者异源的信号肽(即来自非免疫球蛋白的信号肽)。本发明的重组表达载体除了携带抗体链基因之外还携带在宿主细胞中控制抗体链基因表达的调节序列。术语"调节序列"意在包括启动子、增强子及控制抗体链基因的转录或翻译的其他表达控制元件(例如多腺苷酸化信号)。这些调节序列记栽于例如Goeddel(GeneExpressionTechnology.MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego,CA(1990))中。本领域技术人员将会了解，表达载体的设计，包括调节序列的选择，可能要依赖于以下因素，如待转化的宿主细胞的选择、所希望的蛋白质的表达水平等。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调节序列包括指导蛋白质在哺乳动物细胞中高水平表达的病毒元件，例如衍生自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒的启动子和/或增强子。作为替代，可以使用非病毒调节序列，例如泛素启动子或P-珠蛋白启动子。再者，调节元件可以由不同来源的序列组成，例如包含来自SV40早期启动子的序列和I型人类T细胞白血病病毒的长末端重复的SRa启动子系统(Takebe，Y.etal.Mol.Cell.Biol.且:466-472，(1988))。本发明的重组表达载体除了携带抗体链基因和调节序列之外还可携带额外的序列，例如在宿主细胞中调节载体复制的序列(例如复制起点)和可选择的标记基因。可选择的标记基因有利于对其中已导入了载体的宿主细胞的选择(参见例如均为Axel等人的美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常可选择的标记基因赋予已导入栽体的宿主细胞对例如G418、潮霉素或氨甲喋呤等药物的抗性。优选的可选择的标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(与氨甲喋呤选择/扩增一起用于dhfr-宿主细胞中)和neo基因(用于G418的选择)。为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体(一或多种)转染至宿主细胞中。术语"转染"的各种形式意在涵盖范围宽广的多种技术，这些技术一般用于将外源DNA导入原核的或真核的宿主细胞，例如电穿孔、磷酸钓沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。虽然在理论上可以在原核宿主细胞或在真核宿主细胞中表达本发明的抗体，但是在真核细胞并且最典型地在哺乳动物宿主细胞中表达抗体是最优选的，这是因为这些真核细胞并且特别是哺乳动物细胞比原核细胞更有可能组装并分泌正确折叠的具有免疫学活性的抗体。已经报道了抗体基因的原核表达不能有效产生大量活性抗体(Boss,andWood,ImmunologyTodayf:12-13，(1985))。优选的用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，记载于UrlaubandChasin，Proc,Natl.Acad.Sci.U.S.A.22:4216-4220，(1980),与DHFR选择标i己一起使用，例如KaufmanandSharpMol.Biol.JJ2:601陽621，(1982)中描述的)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞，以及SP2细胞。尤其是，对于用于NSO骨髓瘤细胞的情况，另一个优选的表达系统是记栽于WO87/04462、WO89/01036和EP338,841的GS基因表达系统。如果将编码抗体基因的重组表达栽体导入哺乳动物宿主细胞，那么可通过对宿主细胞培养一段时间以产生抗体，其中所述时间将足以使抗体在所述宿主细胞内得到表达，或者更典型地使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中。可以使用标准的蛋白纯化方法从培养基中回收抗体。可以通过例如流式细胞术来测试本发明的抗体与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的结合。简言之，从组织培养瓶中新鲜收获表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1，和/或BMPR2的细胞并制备单细胞悬液。可以用一抗对表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1，和/或BMPR2的细胞的悬液直接染色，或者在经过含1%多聚曱醛的PBS固定后(经过或不经过透化处理)，再对细力包染色。将大约一百万个细胞重悬于含有0.5%BSA和50至200ng/ml的一抗的PBS中，并在冰上孵育30分钟。将细胞用含有0.1%BSA、0.01%NaN3的PBS洗涤两次，重悬于100^1的1:100稀释的FITC缀合的山羊抗人IgG抗体(JacksonImmunoResearch，WestGrove,PA)中，并在冰上再孵育30分钟。再将细胞洗涤两次，并重悬于0.5ml的洗涤緩沖液中，并用FACSCalibur细胞计数器(Becton-Dickinson,SanJose,CA)分析荧光染色。对抗体结合抗原的表征作为替代，可以使用标准ELISA来测试本发明的抗体与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的结合。简言之，将孩吏量滴定板用PBS中0.25jig/ml的经纯化的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2包被，并接着用PBS中5%的牛血清白蛋白进行封闭。在每个孔中加入抗体的稀释液(例如来自BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2免疫的小鼠的血浆稀释液)，并于37。C下赙育1至2小时。将板用PBS/吐温洗涤，并接着用缀合碱性磷酸酶的二级试剂(例如对于人抗体而言，山羊抗人IgGFc特异性的多克隆试剂)于37。C下孵育1小时。洗涤后，用pNPP底物(1mg/ml)对板进行显色，并在OD405至650下进行分析。通常，将形成最高滴度的小鼠用于融合。如以上描述的ELISA测定法还可用于筛选对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2免疫原显示阳性反应的杂交瘤。将以高亲合力结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的杂交瘤进行亚克隆并进行进一步的表征。可以自每个杂交瘤选择一个克隆(它保持亲本细胞的反应性(通过ELISA))用于制备5至10小瓶的细胞库，将其保存于-140。C并用于抗体纯化。为了纯化抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl，和/或抗-BMPR2的抗体，可以将已选择的杂交瘤培养于2升的转瓶中用于单克隆抗体纯化。可以将上清液进行过滤并浓缩，之后用蛋白A-琼脂糖(Pharmacia,Piscataway，N.J.)进行亲和层析。可以通过凝胶电泳和高效液相色语检查洗脱的igG以确保纯度。可以将緩冲液换为PBS，且通过OD28o使用1.43的消光系数确定浓度。可以将单克隆抗体分成等份，并保存于-80。C。为了确定已选择的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTR1、和/或抗-BMPR2的单克隆抗体是否结合至独特的表位，可使用可商购的试剂(Pierce，Rockford，IL)将每种抗体生物素化。>使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体进行竟争性研究，该研究可以用上文描述的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2包被的ELISA板来进行。可以使用链霉亲和素-碱性磷酸酶探针检测生物素化的mAb的结合。作为替代，如下述实施例中进一步所述，可以使用经放射性标记的抗体进行竟争性研究，并可以用Scatchard分析来检测未标记的竟争性抗体。为了确定纯化的抗体的同种型，可以使用对特定同种型的抗体具特异性的试剂进行同种型ELISA。例如，为了确定人单克隆抗体的同种型，可以用l照/ml的抗人免疫球蛋白抗体于4°C下过夜包^皮微量滴定板的孑L。用1%的BSA封闭后，所述板与lng/ml或更低的待测单克隆抗体或者经纯化的同种型对照在环境温度下反应1至2小时。随后将该孔与人IgGl或人IgM-特异的碱性磷酸酶缀合的探针进行反应。如上文所述对板进行显色并分析。可以通过蛋白质印迹法进一步测试抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPR1A、抗-BMPR1B、抗-ACTR1、和/或抗BMPR2的人IgG与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2抗原的反应性。简言之，可制备BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2并进行十二烷基石克酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后将分离的抗原转移至硝酸纤维素膜上，用10。/。的胎牛血清进行封闭，并用待测试的单克隆抗体进行探测。人IgG的结合可以用抗人IgG碱性磷酸酶进行检测并用BCIP/NBT底物片进行显色(SigmaChem.Co"St.Louis,Mo.)。免疫缀合物在另一方面，本发明涉及缀合至治疗性结构部分(moiety)的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRlB、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体，或它们的片段，所述治疗性结构部分例如是细胞毒素、药物(例如免疫抑制剂)或放射性毒素。这类缀合物在此被称为"免疫缀合物"。包括一种或多种细胞毒素的免疫缀合物被称为"免疫毒素"。细胞毒素或者细胞毒性物质包括任何对细胞有害(例如杀伤细胞)的物质。实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐才Mi、丝裂霉素、依托泊普、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋7JC仙素、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌、光辉霉素、放射菌素D、l-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔(propranolol)及噤呤霉素及它们的类似物或同系物。治疗性物质还包括例如抗代谢物(如氨甲蝶呤、6-巯基噤呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧咬峻卡巴嗪)、烷基化试剂(如氮芥、噻替派(thiotepa)、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)及洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C及顺二氯二^J^G(II)(DDP)顺铂、蒽环类(如柔红比星(以前为柔红霉素)及多柔比星)，抗生素(如更生霉素(以前为放线菌素)、博来霉素、光辉霉素及安曲霉素(AMC)),以及抗有丝分裂剂(如长春新碱和长春碱)。在本发明的某些方面中提供了免疫缀合物，其包含与治疗性结构部分缀合的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体或它们的片段，其中治疗性结构部分为下述文献所才皮露的超强治疗剂(Ultra-potentTherapeutic)(UPT顶；Medarex，Inc.,Milpitas,CA):美国专利号6,1003,236与6，638，509[描述了毒素缀合物，其中毒素(例如长春碱、蓖麻毒素(risin)、白喉毒素、相思豆毒素、长春碱酰肼、氨甲喋呤酰肼、蒽环类、铟和钇的螯合物、金属螯合物，及蒽环类)通过可切割的间隔物结合至例如抗体或其片段上的残基，所述间隔物包括聚乙二醇和二肽；美国专利号6，989，452和美国专利申请号10/160,972、10/161,234、11/133,970、11/134,685、11/134,826、11/224,580，及11/398,854[描述了细胞毒性物质、二硫化物前药、肽基前药，及包括化学接头的连接物。可与本发明的抗体相缀合的治疗性细胞毒素的其他优选的实例包括多卡霉素(duocarmycin)、加利车霉素、美登素及阿里斯达汀(auristatin)以及它们的衍生物。加利车霉素抗体缀合物的实例是可商购的(Mylotarg⑧;AmericanHomeProducts)。可以使用本领域可得的接头技术将细胞毒素缀合至本发明的抗体上。已用于将细胞毒素缀合至抗体的接头类型的实例包括但不限于腙、硫醚、酯，二硫化物及含有肽的接头。接头可被选择为，例如，使其在溶酶体区室中通过低pH易于断裂，或者易于被蛋白酶剪切，所述蛋白酶诸如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶，诸如組织蛋白酶(例如组织蛋白酶B、C、D)。细胞毒素的实例描述于例如美国专利号6,989,452、7,087,600和7,129,261，以及PCT申请号PCT/US02/17210、PCT/US2005/017804、PCT/US06/37793、PC1YUS06/060050、PCT/US2006/060711、WO/2006/110476,以及美国专利申请号60/891,028之中，上述文献的全文均通过引用结合在此。对于将治疗剂缀合至抗体的方法、细胞毒素的类型、接头的进一步讨论，还可以参见Saito，G.etal.(2003)Adv.DrugDeliv.Rev.199-215;Trail,P.A.etal.(2003)CancerImmunol.Immunother.^:328-337;Payne,G.(2003)CancerCell:207-212;Allen,T.M.(2002)Nat.Rev.Cancer^:750-763;Pastan，I.andKreitman，R.丄(2002)Curr.Opin.I曙stig.Drugs圣:1089-1091;Senter，P.D.andSpringer,C丄(2001)Adv.DrugDeliv.Rev.^:247-264。本发明的抗体还可以缀合至放射性同位素上以产生细胞毒性的放射性药物，也被称为放射免疫缀合物。可缀合至抗体上用于诊断或治疗的放射性同位素的实例包括但不限于碘131、碘125、铟川、钇90和镥177。制备放射免疫缀合物的方法在本领域内已经建立。放射免疫缀合物的实例是可商购的，包括Zevalin(BiogenIDEC)和Bexxar(Glaxo画SmithKline)和⑧(CorixaPharmaceuticals),并且4吏用类似的方法可以制备用于本发明抗体的放射免疫缀合物。本发明的抗体缀合物可被用于修饰给定的生物学应答，并且药物部分不应被理解为限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所希望的生物活性的蛋白或多肽。这类蛋白质可包括例如酶活性毒素或其活性片段，例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质例如肿瘤坏死因子或干扰素-y;或者生物反应调节剂例如淋巴因子、白细胞介素-1("IL-1")、白细胞介素-2("IL-2")、白细胞介素-6("IL-6")、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子("GM-CSF")、粒细胞集落刺激因子("G-CSF")或其他生长因子。用于将这类治疗性结构部分缀合至抗体上的技术是熟知的，参见例如Arnonetal""MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapypp.243-56(Reisfeldetal"eds"AlanR.Liss，Inc.1985);Hellstrometal""AntibodiesForDrugDelivery",inControlledDrugDeliverypp.623-53(2ndEd.，Robinsonetal"eds"MarcelDekker，Inc.1987);Thorpe,"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",inMonoclonalAntibodies'84:BiologicalandClinicalApplications,pp.475-506(1985);"Analysis,ResultsandFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy,pp.303-16(AcademicPress1985);以及Thorpeetal""ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates",Immunol.Rev.0:119-58(1982)。双特异性分子在另一方面，本发明涉及含有本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRlB、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体或它们的片段的双特异性分子。这种抗体或其抗原结合部分可祐:衍生化或连接至另一种功能分子，例如另一种肽或蛋白(例如另一种抗体或受体的配体)，以便于生成能结合至少两种不同的结合位点或者靶分子的双特异性分子。事实上，本发明的抗体可以被衍生化或连接至多于一个的其他功能分子上，以便生成能结合两种以上不同的结合位点和/或靶分子的多特异性分子；在此所使用的术语"双特异性分子"也旨在涵盖这类多特异性分子。为了生成本发明的双特异性分子，可将本发明的抗体功能性地连接至(例如通过化学偶联、遗传融合、非共价连接或者其他)一个或多个其他的结合分子，例如另一种抗体、抗体片段、肽或结合模拟物上，从而得到双特异性分子。因此，本发明包括双特异性分子，所述双特异性分子含有针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的至少一种第一结合特异性和针对第二靶表位的第二结合特异性。在本发明的一个具体实施方案中，第二乾表位是Fc受体，例如人类FqrRI(CD64)或人类Fccx受体(CD89)。因此，本发明包括双特异性分子，它们能够结合表达FcyR或FcaR的效应细胞(例如单核细胞、巨噬细胞或多形核细胞(PMN))，及表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的靼细胞。这些双特异性分子可以将表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的细胞靶向至效应细胞，并触发Fc受体介导的效应细胞活性，例如，对表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的细胞的吞噬作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、细胞因子的释放或超氧化物负离子的生成。在本发明的一个实施方案中，其中该双特异性分子是多特异性的，该分子除了含有抗-Fc结合特异性及抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2结合特异性之外，还可以含有第三结合特异性。在一个实施方案中，第三结合特异性是抗增强因子(Enhancementfateor，EF)部分，例如，能结合至参与细胞毒性活性的表面蛋白上并由此增强针对靶细胞的免疫应答的分子。"抗增强因子部分"可以是结合至给定分子(例如抗原或受体)的抗体、功能性抗体片段或配体，所述结合导致增强Fc受体或靶细胞抗原的结合决定簇的效果。"抗增强因子部分"可以结合Fc受体或靶细胞抗原。作为替代，抗增强因子部分可以结合如下实体，该实体不同于第一以及第二结合特异性所结合的实体。例如，抗增强因子部分可结合细胞毒性T细胞(如，经CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40、ICAM-1或其他免疫细胞，导致针对靼细胞的免疫应答的增强)。在一个实施方案中，本发明的双特异性分子包括至少一种抗体或其抗体片段(包括如Fab、Fab,、F(ab，)2、Fv、Fd、dAb,或单链Fv)作为结合特异性。抗体还可以是轻链或重链二聚物，或是其任何最小片段，如Fv或单链构建体，如Ladner等人的美国专利号4，946，778所述，其内容通过引用结合在此。在另一个实施方案中，针对Fq受体的结合特异性由单克隆抗体提供，其结合并不祐人免疫球蛋白G(IgG)所阻断。在此所使用的术语"IgG受体"指位于1号染色体上的8个Y链基因之任一个。这些基因总共编码12种跨膜或可溶性受体同种型，它们被分为三类Fey受体FqrRI(CD64)、FqRlI(CD32)和FqrRlII(CD16)。在一个优选的实施方案中，Fqr受体是人类高亲合性FqRI。人类FqrRI是一种72kDa的分子，它对单体IgG具有高亲合性(K)8至109M—1)。在Fanger等人的PCT公开号WO88/00052和美国专利号4,954,617中描述了某些抗FcY单克隆抗体的制备和表征，其中教导的内容通过引用全部结合在此。这些抗体结合FcyRI、FcyRlI或FcyRni上的表位，该表位所在的位置不同于受体的Fq结合位置，并因此它们的结合基本上不会被IgG的生理水平所阻碍。可用于本发明的特异性抗FcyRI抗体是mAb22、mAb32、mAb44、mAb62以及mAb197。产生mAb32的杂交瘤可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得，ATCC保藏号HB9469。在其他的实施方案中，抗FcY受体抗体是单克隆抗体22(H22)的人源化形式。H22抗体的制备和表征记载于Graziano,etal.丄Immunol(10):4996-5002，(1995)和Tempest等人的PCT公开号WO94/10332中。产生H22抗体的细胞系被命名为HA022CL1,保藏于美国典型培养物保藏中心，^f呆藏号为CRL11177。在又一些其他的实施方案中，对于Fc受体的结合特异性由结合至人类IgA受体的抗体提供，该人类IgA受体例如是Fca受体((FcaRI(CD89))，这种结合通常不会被人类免疫球蛋白A(IgA)所阻断。术语"IgA受体"意在包括位于19号染色体上的一个a基因(FcaRI)的基因产物。已知这一基因编码几种55至110kDa的可变剪切的跨膜同种型。FcaRI(CD89)在单核细胞/巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞中组成型地表达，但在非效应细胞群中不表达。FcaRI对于IgAl和IgA2都具有中等的亲合性(5xl07M—1),该亲合性在暴露于细胞因子例如G-CSF或GM-CSF时会增力口(Morton,H.C.etal.CriticalReviewsinImmunology!^:423-440，(1996))。已经描述了四种FcaRI特异性的单克隆抗体，标识为A3、A59、A62和A77,它们结合IgA配体结合域外的FcaRI(Monteiro，R.C.etal.J.Immunol.148:1764,(1992))。FcaRI和FqRI是可用于本发明双特异性分子的优选的触发受体，因为它们(1)主要在免疫效应细胞例如单核细胞、PMN、巨噬细胞和树突细胞上表达；(2)表达水平高(例如5,000至100，000/细胞)；(3)是细胞毒性活性(例如ADCC、吞噬作用)的介导物；以及(4)介导靶向它们的抗原(包括自体抗原)的增强抗原呈现。可以使用本领域中已知的方法，通过缀合结合特异性组分(例如，抗FcR和抗画BMP2、抗-BMP4、抗画BMPR1A、抗画BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2结合特异性)来制备本发明的双特异性分子。例如，可以单独地生成双特异性分子中的每一种结合特异性，并接着将它们缀合在一起。当结合特异性是蛋白或肽时，可以使用多种偶联试剂或交联试剂来进行共价缀合。交联试剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5，5，-二硫双(2-硝基苯曱酸)(DTNB)、邻-亚苯基二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥銷酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、以及4-(N-马来酰亚氨基曱基)环己烷-l-羧酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-SMCC)(参见例如，Karpovskyetal.丄Exp.Med.巡:1686,(1984);Liu，etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA^:8648，(1985))。其他方法包括PaulusBehringIns.Mitt.No.78，118-132，(1985);Brennanetal.Science^￡:81-83,(1985)，和Glennieetal.J.Immunol.139:2367-2375,(1987)中所述的方法。优选的缀合试剂是SATA和磺基-SMCC，都可从PierceChemicalCo.(Rockford，IL)/^司购得。当这些结合特异性是抗体时，它们之间可以通过两个重链的C端铰链区的巯基键接而缀合。在一个特别优选的实施方案中，在缀合之前对铰链区进行修饰，使其含有奇数个巯基残基，典型地一个。作为替代，两种结合特异性均可以由相同的载体编码并在同一宿主细胞中表达和组装。当双特异性分子是mAbxmAb、mAbxFab、FabxF(ab，)2或配体xFab融合蛋白时，这一方法特别有用。本发明的双特异性分子可以是含有一条单链抗体和结合决定簇的单链分子，或可以是含有两个结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性分子可以含有至少两种单链分子。制备双特异性分子的方法记载于例如美国专利号5,260,203;5,455,030;4,881,175;5,132,405;5,091,513;5,476,786;5,013,653;5,258,498;以及5,482,858，上述每一篇文献的全文均通过引用结合在此。双特异性分子结合至它们的特异性靶可以通过下列方法来确认，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、FACS分析、生物测定(例如生长抑制)或蛋白质印迹分析。这些测定法的每一种通常通过采用特异于感兴趣的蛋白质-抗体复合物的标记的试剂(例如抗体)，来检测该特定感兴趣的复合物的存在。例如，可以使用识别和特异性结合抗体-FcR复合物的酶联抗体或抗体片段来检测FcR-抗体复合物。作为替代，可以使用多种其他免疫测定法之任一种来检测复合物。例如，可对抗体进行放射性标记并用于放射免疫测定(R1A)中(参见例如，Weintraub，B.,PrinciplesofRadioimmunoassays,SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques,TheEndocrineSociety,March,1986，它通过引用结合在此)。可以使用例如y计数器或闪烁计数器或通过》文射自显影来检测放射性同位素。抗体片段和抗体模拟物本发明不限于传统的抗体，并可以通过使用抗体片段和抗体模拟物进行实施。如以下详述，已经开发了多种抗体片段和抗体模拟物技术，且这些技术在本领域内是广泛熟知的。这些技术中有一些(例如结构域抗体、纳米抗体，和UniBody)使用传统抗体结构的片段或对传统抗体结构的其他修饰，但是还有一些可替代的技术(例如Affibody、DARPin、Anticalin、Avimer，和Versabody)采用结合性结构，这些结构尽管模拟传统抗体的结合，但是产生自不同的机制并通过不同的机制发挥功能。结构域抗体(domainantibody,dAb)是抗体的最小功能性结合单位，对应于人抗体的重链(VH)或轻链(VL)的可变区。结构域抗体的分子量约为13kDa。DomantisLimited开发了一系列由完全人VH和VLdAb组成的大型高功能性文库(每一文库中有超过一百亿种不同的序列)，并使用这些文库来选择对治疗靶标特异的dAb。与许多常规抗体不同，结构域抗体在细菌、酵母，和哺乳动物细胞系统中很好地表达。结构域抗体及其生产方法的进一步细节可在美国专利6,291,158;6,582,915;6,593,081;6,172,197;6,696,245;美国系列号2004/0110941;欧洲专利申请号1433846以及欧洲专利0368684和0616640;WO2005/035572、2004/101790、2004/081026、2004/058821、2004/003019以及2003/002609中找到，其中每一项的全文均通过引用结合在此。纳米抗体(Nanobody)是包含天然重链抗体的独特结构及功能性质的源自抗体的治疗性蛋白质。这些重链抗体包含单一可变区(VHH)和两个恒定区(CH2和CH3)。重要的是，该经克隆并分离的VHH域是携带原始重链抗体的全部抗原结合能力的、完全稳定的多肽。纳米抗体与人抗体的VH区具有高同源性，并可进一步被人源化而不会损失任何活性。重要的是，纳米抗体具有低免疫原性潜力，这在使用源自纳米抗体先锋化合物的灵长类动物研究中已得到证实。纳米抗体将常规抗体的优点与小分子药物的重要特征相结合。与常规抗体类似，纳米抗体显示出高靶特异性，对其靶的高亲和性及低固有毒性。然而，与小分子药物类似的是，它们能够抑制酶类并容易接近受体裂隙。此外，纳米抗体非常稳定，可以通过注射之外的方法给药(例如，参见WO2004/041867，其全文通过引用结合在此)，并且易于制造。纳米抗体的其他优点包括由于其尺寸小而可以识别不常见的或隐藏的表位，由于其独特的三维的、药物形式的柔性，而可以以高亲和性及选择性结合入蛋白靼的腔或活性位点、可以适应性调整(tailor)半衰期和容易及快速地实现药物开发。纳米抗体由单基因进行编码，并在几乎全部的原核宿主和真核宿主中都能被有效生产，所述宿主例如是大肠杆菌(E.coli)(例如，参见US6,765,087，其全文通过引用结合在此)、霉菌(例如曲霉属(Aspergillus)或木霉属(Trichoderma))和酵母(例如酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、汉逊酵母属(Hansenula)或毕赤酵母属(Pichia))(例如，参见US6,838,254,其全文通过引用结合在此)。该生产过程可以放大规模，且已经生产了几千克量的纳米抗体。由于纳米抗体比常规抗体的稳定性高，所以它们可被配制成保质期长，立即可用型溶液。纳米克隆(nanoclone)方法(例如，参见WO06/079372，其全文通过引用结合在此)是一种用于产生抗所希望的靶的纳米抗体的专利方法，它基于B细胞的自动高通量选择来进行，并且能够在本发明的情况中使用。UniBody是另一种抗体片段技术，然而它基于的是IgG4抗体的铰链区的移除。删除铰链区得到基本上是传统IgG4抗体一半尺寸的分子，并且该分子具有单价结合区而不是IgG4抗体的二价结合区。已熟知的是，IgG4抗体是惰性的，并因此不与免疫系统相互作用，这对于不希望发生免疫反应的疾病的治疗可能是有利的，而这一优势被传递至UniBody。例如，UniBody的功能可以是抑制或沉默它们所结合的细胞但不会杀死该细胞。此外，与癌细胞结合的UniBody不会刺激它们增殖。此外，因为UniBbody只有传统IgG4抗体的大约一半尺寸，因此它们可以在较大的实体瘤上显示出更好的分布，具有潜在的有利功效。UniBbody从体内清除的速度与完整的IgG4抗体相似，且它们与其抗原结合的亲和性也与完整IgG4抗体相似。Unibody的更多细节可通过参考PCT公开号WO2007/059782号而获得，其全文通过引用结合在此。Affibody分子代表了一类新的亲和性蛋白，基于来自葡萄球菌A蛋白的一个IgG结合结构域的58个氨基酸残基的蛋白域。这个三螺旋束结构域已被作为支架用于构建组合的噬菌粒文库(combinatorialphagemidlibrary),使用噬菌体展示技术可从该文库中选择靶向期望分子的Affibody变体(NordK，Gu腿riussonE，RingdahlJ，StahlS,UhlenM，NygrenPA，Bindingproteinsselectedfromcombinatoriallibrariesofana-helicalbacterialreceptordomain,NatBiotechnol1997;15:772-7.Ro画arkJ，GronlundH，UhlenM，NygrenPA，HumanimmunoglobulinA(IgA)-specificligandsfromcombinatorialengineeringofproteinA,EurJBiochem2002;269:2647-55.)。Affibody分子的结构简单坚固并且它们的分子量低(6kDa)，这使它们适于各种广泛的应用，如检测试剂(RonmarkJ，HanssonM,NguyenT，etal，Constructionandcharacterizationofaffibody画FcchimerasproducedinEscherichiacoli，JImmunolMethods2002;261:199-211)以及抑制受体相互作用(SandstormK，XuZ，ForsbergG，NygrenPA,InhibitionoftheCD28-CD80co-stimulationsignalbyaCD28-bindingAffibodyliganddevelopedbycombinatorialproteinengineering,ProteinEng2003;16:691-7)。Affibody及其生产的方法的更多细节可参考美国专利号5,831,012而获得，其全文通过引用结合在此。标记的Affibody对于用于确定同种型的丰度的成像应用也可以是有用的。I)ARPin(设计的锚蛋白重复序列蛋白)是抗体模拟物DRP(设计的重复序列蛋白)技术的一个实例，该技术已被开发用于研究非抗体多肽的结合能力。重复序列蛋白，例如锚蛋白或富含亮氨酸的重复序列蛋白，是普遍存在的结合分子，与抗体不同，它们出现在细胞内和细胞外。它们独特的模块结构以重复结构单元(重复序列)为特征，这些单元堆叠在一起以形成延长的重复域，从而展示出可变的模块靶结合表面。基于该模块性，可以生成具有高度多样性的结合特异性的多肽组合文库。该策略包括对展示可变表面残基的自相容重复序列(self-compatiblerepeat)的共有设计并将它们随纟几组装成重复域。DARPin可以在细菌表达系统中以相当高的产率生产，且它们属于已知的最稳定的蛋白质。已经针对广泛靶蛋白选择出了高特异性、高亲和性的DARPin，所述靶蛋白包括人类受体、细胞因子、激酶、人类蛋白酶、病毒和膜蛋白。可以获得亲和性为几纳摩尔至几皮摩尔的DARPin。DARPin已4皮用于广泛的应用中，包括ELISA、夹心ELISA、流式细胞术分析(FACS)、免疫组织化学分析(IHC)、芯片应用、亲和纯化或蛋白质印迹。还证明了DARPin在胞内区室中具有高活性，例如作为胞内标记物蛋白融合至绿色荧光蛋白(GFP)时。DARPin还被用于抑制病毒ii7v，其ICso在pM范围内。DARPin不仅在阻断蛋白-蛋白相互作用方面十分理想，还可用于抑制酶类。已经成功地抑制了蛋白酶、激酶和转运蛋白，最通常是通过别构抑制模式。由于非常快速并特异的在肿瘤上的富集以及非常有利的肿瘤与血液的比例，使DARPin非常适于体内诊断或治疗方法。有关DARPin和其他DRP技术的另外的信息在美国专利申请公开号2004/0132028和国际专利申请公开号WO02/20565中均可找到，它们的全文均通过引用结合在此。Anticalin是另一种抗体模拟技术，然而在这种情况下，结合的特异性是源自脂笼蛋白，一种在人体组织和体液中天然地丰富地表达的低分子量蛋白家族。脂笼蛋白已经进化成在体内具有与化学敏感或不溶性化合物的生理运输和存储有关的多种功能。脂笼蛋白具有坚固的内在结构，包括高度保守的B-桶，其支持着蛋白质一端的四个环。这些环形成结合口袋的入口，并且分子这一部分的构象差异是不同脂笼蛋白之间的结合特异性变化的原因。尽管由保守的B-片层构架支持的超变环的整体结构能够让人联想起免疫球蛋白，然而脂笼蛋白与抗体在大小上存在显著差异，它由160至180个氨基酸的单一多肽链构成，微微地大于单个免疫球蛋白结构域。对脂笼蛋白进行克隆，并使它们的环经受工程化处理以便产生Anticalin。已经生成了在结构上多样的Anticalin的文库，并且Anticalin的展示允许对结合功能进行选择和筛选，随后在原核或真核体系中通it^达和生成可溶蛋白质以进一步分析。多项研究已经成功地证明对几乎任何人类靶蛋白都可以开发出特异性的Anticalin，可以将其分离，并且可以获得在纳摩尔或更高范围内的结合亲和性。Anticalin还可以形成双靶向性蛋白的形式，这^皮称为Duocalin。使用标准的生产方法,Duocalin可以在易于生产的一个单体蛋白质中结合两种不同的治疗性耙标，同时保持耙特异性和亲和性，而无论它的两个结合结构域的结构取向如何。通过单个分子对多个靶标进行调节在已知涉及不止一种致病因子的疾病中特别有优势。此外，例如Duocalin等二价或多价结合形式在靶向疾病的细胞表面分子、通过细胞表面受体的结合和集簇来介导对信号转导途径的激动剂效应或诱导增强的内化效应方面具有显著的潜力。此外，Duocalin的高固有稳定性与单体Anticalin相似，这使得Duocalin具有灵活的配制和送递潜力。关于Anticalin的另外信息可以在美国专利号7,250,297和国际专利申请公开号WO99/16873中找到，其全文均通过引用结合在此。Avimers是可用于本发明的另一种抗体模拟技术。Avimers由人细胞外受体域大家族通过体外的外显子改组和噬菌体展示而演化而来，产生具有结合和抑制性质的多域蛋白。已经显示出连接多种独立的结合结构域可以产生亲和力，且与传统的单表位结合蛋白比较，这种连接导致改善的亲和性和特异性。其他潜在的优点包括在大肠杆菌中简单且有效地生成多靶特异性的分子，改善的热稳定性及对蛋白酶的抵抗力。已经得到了针对多种靶的具有亚纳摩尔亲和性的Avimers。关于Avimers的另外信息可在美国专利申请公开号2006/0286603、2006/0234299、2006/0223114、2006/0177831、2006/0008844、2005/0221384、2005/0164301、2005/0089932、2005/0053973、2005/0048512、2004/0175756中找到，它们所有的全文均通过引用结合在此。Versabody是可用于本发明的另一种抗体模拟技术。Versabody是具有大于15%的半胱氨酸的小蛋白(3至5kDa),它形成高二硫键密度的支架，从而代替典型蛋白质所具有的疏水核芯。这种用少量的二硫键替换大量疏水性氨基酸(包括疏水核)，将使得蛋白质更小，更加亲水(聚集和非特异性结合更少)，对于蛋白酶和热具有更大的抵抗力，且具有较低密度的T细胞表位，这是因为对MHC呈递贡献最多的残基是疏水性的。这些性质中的全部四种都熟知会影响免疫原性，并预期它们一起将导致免疫原性大幅度降低。Versabody的启示来自于水蛭、蛇、蜘蛛、蝎子、蜗牛，和海葵(anemone)产生的天然可注射生物药剂，已知这些生物药剂可以表现出预料不到的低免疫原性。从经选择的天然蛋白质家族出发，通过设计和筛选，可以将尺寸、疏水性、蛋白水解性抗原加工、和表位密度都最小化至远远低于天然可注射蛋白质的平均值的水平。鉴于Versabody的结构，这些抗体模拟物可以提供多种多样的形式，包括多价、多特异性、多样化的半衰期机制、组织靶向模块和抗体Fc区的缺乏。此外，Versabody可以在大肠杆菌中以高产率生产，且由于它们的亲水性和小尺寸，Versabody高度可溶，并能够被配制成高浓度。Versabody极具热稳定性(它们可被煮沸)，并具有长的保质期。关于Versabody的另外信息可在美国专利申请公开号2007/0191272中找到，其全文通过引用结合在此。以上提供的抗体片段和抗体模拟技术的详细说明并非旨在成为可在本说明书的上下文中使用的所有技术的全面列表。例如，但并非作为限制，多种另外的冲支术，包括备选的基于多肽的才支术，如在Quietal.，NatureBiotechnology,25(8)921-929(2007))中概述的互补决定区的融合(其全文通过引用结合在此)，以及基于核酸的技术，如在美国专利号5，789，157;5,864,026;5,712,375;5,763,566;6,013,443;6,376,474;6,613,526;6,114,120;6,261,774和6,387,620中描述的RNA适体技术(这些文献全部均通过引用结合在此)，都可用于本发明中。药物组合物在另一方面，本发明提供组合物，例如药物组合物，它包含一种本发明的单克隆抗体或其抗原结合部分、或包含多种本发明的单克隆抗体或其抗原结合部分的组合，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分与药学上可接受的栽体配制在一起。这种组合物可以包括一种本发明的抗体或免疫缀合物或双特异性分子、或者多种(例如两种或两种以上不同的)本发明抗体或免疫缀合物或双特异性分子的组合。例如，本发明的药物组合物可以包含在靶抗原上结合不同表位的多种抗体(或免疫缀合物或双特异性分子)的组合，或者具有互补活性的多种抗体的组合。本发明的药物组合物还可以用于組合疗法中，即与其他活性剂相组合。例如，組合疗法可以包括本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRlB、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的抗体以及至少一种其他的抗炎剂或免疫抑制剂、一种或多种其他的对骨疾病或癌症有效的抗体，和/或一种或多种化疗形式。可以理解的是，有多种共治疗方法将被认为具有如下优势本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体的剂量降低可导致治疗副作用的降低。在其他实施方案中，本发明披露的治疗性抗体可与一种或多种阻抑免疫抑制途径的抗体组合使用，例如，与抗CTLA-4抗体(在此以名为MDX-010的抗体作为示例)组合使用。CTLA-4蛋白存在于某些淋巴细胞中，这些^^巴细胞一旦识别到外源物质例如病毒或细菌，将会启动免疫应答来对抗感染。CTLA-4蛋白通过减少对抗病毒或细菌的免疫细胞的数量来帮助停止免疫应答。然而，当免疫应答^皮建立以对抗骨和/或肿瘤细胞时，不停止该免疫应答而相反地保持大量可用的淋巴细胞是有好处的。因此，可以将抗CTLA-4抗体(例如MDX-010)有利地与本发明的一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体组合使用，以封闭CTLA-4并保持免疫活性。如此处使用的"药学上可接受的载体，，包括任何和全部的生理学上相容的溶剂、M介质、包衣料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延緩剂等。通常，载体适宜于静脉、肌内、皮下、胃肠外、脊髓或表皮给药(例如通过注射或输注)。依据给药途径，活性化合物(即抗体、免疫缀合物或双特异性分子)可用材料包被以保护该化合物免受可能导致该化合物失活的酸和其他自然条件的作用。本发明的药物化合物可以包括一种或多种药学上可接受的盐。"药学上可接受的盐"是指保持母体化合物所希望的生物活性且不会造成任何不希望的毒理学效应的盐(例如参见Berge,S.M.,etal.,J.Pharm.Sd.1-19,(1977))。这类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括f汴生自无毒无机酸的盐，所述无机酸例如是盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢硪酸和亚磷酸等，以及衍生自无毒有机酸的盐，所述有机酸例如是脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳族酸、脂肪族和芳香族磺酸等。碱加成盐包括来自碱土金属，如钠、钾、镁和钙等的盐，以及来自无毒有机胺的盐，所述无毒有机胺例如N，N'-二节基乙二胺、N-曱基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺和普鲁卡因等。本发明的药物组合物还可以包括药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和亚硫酸钠等；(2)脂溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)，丁基羟基曱苯(BHT)、卵磚脂、没食子酸丙酯和a-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸和磷酸等。可用于本发明的药物组合物的适宜的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和聚乙二醇等)及它们的适宜的混合物，植物油，如橄榄油，以及可注射的有机酯，如油酸乙酯。例如通过使用包衣材料(如卵磷脂)、通过维持分散体中所需的颗粒大小及通过使用表面活性剂，可维持适当的流动性。这些组合物还可包含助剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可通过灭菌步骤(见上文)及通过包括各种抗细菌剂与抗真菌剂，例如尼泊金酯、三氯叔丁醇和苯酚山梨酸等，确保防止^t生物的存在。还可能期望在这些组合物中包含等渗剂(如糖、氯化钠以及类似物)。另外，通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶可实现可注射药物形式的延长吸收。药学上可接受的载体包括无菌水溶液或*体和用于无菌注射溶液或分散体的即时配制的无菌粉末。用于药学活性物质的这类介质和试剂的使用在本领域中是已知的。任何常规介质或试剂只要不是与活性化合物不相容，均可考虑用于本发明药物组合物中。还可以在这些组合物中加入补充性活性化合物。治疗性组合物典型地必须是无菌的并且在制造和存储条件下是稳定的。组合物可以被配制成溶液、微乳、脂质体或者其他适于高药物浓度的有序结构。载体可以是溶剂或^t介质，包含例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等))，以及它们的适宜的混合物。例如，通过使用包M(如卵磷脂)、通过维持^L体中所需的颗粒大小及通过使用表面活性剂，可维持适合的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包含能延迟吸收的试剂(如单硬脂酸盐和明胶)来实现。可以通过将在适当的溶剂中的所需量的活性化合物与以上列举的多种组分中的一种或其组合(按照需要)相混合、然后进行微量过滤除菌，制备无菌注射溶液。一般来讲，^t体可以通过将活性化合物加入至无菌赋形剂(包含基础M介质和所需的上述列举的其他组分)来制备。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，从包含活性組分及任何其它期望组分的预先经无菌过滤的溶液产生活性组分加任何其它期望组分的粉末。能与载体物质组合以产生单个剂量形式的活性组分的量将随着正在治疗的受试者和给药的特定方式而变化。可以与载体物质组合以产生单个剂量形式的活性组分的量一般是能产生治疗效果的组合物的量。一般地，按100%计，该量为大约0.01%到约99%的活性成分，典型地大约0.1%到约70%,最典型地大约1%到约30%的活性成分，与药学上可接受载体组合。可以对剂量方案进行调整以提供最佳的期望反应(如治疗反应)。例如，可给予单个大剂量(bolus)，或可以在一段时间分剂量给予，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。为给药方便及剂量统一，配制单位剂型的肠胃外用组合物尤为有利。此处使用的单位剂型是指适宜作为单个剂量给予待治疗的受试者的、物理上不连续的单位；每个单位包含经计算能产生期望疗效的预定量的活性化合物以及所需的药学栽体。对本发明的单位剂量形式的规定由以下因素决定并直接取决于以下因素(a)活性组合物的独特性质和待实现的特定疗效，以及(b)配制此类活性化合物以处理个体敏感性时本领域所固有的限制。对于抗体的给药，根据使用者的体重，剂量在约0.0001至100mg/kg的范围内，并更经常是0.01至25mg/kg。例如，剂量可以是0.3mg/kg体重，lmg/kg体重，3mg/kg体重，5mg/kg体重或10mg/kg体重，或者在1至10mg/kg的范围内。如果需要还可以使用更高剂量，例如15mg/kg体重，20mg/kg体重或25mg/kg体重。一个示例性治疗方案需要每周给药一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每三个月一次或每3至6个月一次。本发明抗体的具体剂量方案可以包括通过静脉给药lmg/kg体重或3mg/kg体重，其中利用以下给药时间表之一给予该抗体(i)6个剂量以每4周的方式给药，之后每3个月给药；(ii)每三周给药；(iii)3mg/kg体重一次给药，接着每三周1mg/kg体重给药。在一些方法中，同时给予两种或多种具有不同结合特异性的本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗画BMPR1A、抗画BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的单克隆抗体，在这种情况下，所给予的每种抗体的剂量均在所给出的范围之内。通常多次给予抗体。单个剂量之间的间隔可以是例如一周、一个月、每三个月或一年。间隔也可以是不规则的，通过测量患者中针对粑抗原的抗体的血液水平来确定。在一些方法中，调整剂量使血浆抗体浓度大约是1至1000ng/ml,并且在一些方法中大约是25至300ng/ml。在其他方法中，将本发明的一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRlB、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2的单克隆抗体与具有不同的结合特异性的抗体(例如抗CTLA-4抗体和/或抗PD-1抗体)同时给予，在这种情况下，所给予的每种抗体的剂量均在所指出的范围之内。可替代地，抗体可以以緩释制剂的形式给药，在这种情况中需要频率较低的给药。剂量和频率随抗体在患者体内的半衰期而变。通常，人抗体半衰期最长，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。给药的剂量和频率可根据治疗是预防性的还是治疗性的而变。进行预防性应用时，在很长一段时间内以相对较低的频率给予相对较少的剂量。一些患者可以在其余生持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要在相对较短的间隔内给予相对较高的剂量直至疾病#得以緩减或终止，典型地直至患者表现出部分或完全的疾病症状的改善。之后，患者可以接受预防性方案的给药。可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以获得针对特定患者、組合物和给药方式可以有效实现期望疗效的活性成分量，而对患者无毒。所选的剂量水平将取决于各种药物代谢动力学因素，包括采用的本发明的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性、给药途径、给药时间、所用的特定化合物的排泄速率、疗程、以及与所用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、患者的年龄、性别、体重、状态、总体健康状态和病史，以及在医学领域众所周知的类似因素。本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体的"治疗有效剂量"典型地将导致减轻疾病症状的严重程度、增加无病症期的频率和持续时间或防止由于病痛产生的损害或残疾。例如，治疗与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2细胞相关的骨疾病或癌症或肿瘤时，与未纟皮治疗的受试者相比，"治疗有效剂量"典型地使细胞生长或肿瘤生长受到至少约20%,更典型地至少约40%，甚至更典型地至少约60%，更典型地至少约80%的抑制。化合物抑制肺瘤生长的能力可在预测对人肿瘤的功效的动物模型系统中进行评价。可替代地，组合物的这种性质可通过检验所述化合物抑制细胞生长的能力来评价，这种抑制可通过本领域技术人员已知的测定法进行体外测定。治疗有效量的治疗化合物可减小肿瘤的大小，或者緩解受试者的症状。本领域的一般技术人员将能根据受试者的体积、受试者症状的严重程度和所选具体組合物或给药途径而确定该量。本发明的组合物可采用本领域中已知的一种或多种方法经由一种或多种施用途径施用。如本领域技术人员可以理解的，施用途径和/或方式随期望结果而变。本发明的抗体的优选施用途径包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊髓或其他胃肠外途径(例如通过注射或输注)。此处使用的短语"胃肠外施用(给药)"指的是除了肠内和局部给药外的其他给药方式，通常通过注射，并包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、嚢内、眼眶内、心内、皮内、皿内、经气管、皮下、表皮下、关节内、嚢下、蛛网膜下、脊推内、硬脑膜外和胸骨内注射及输注。可替代地，本发明的抗体可经由非胃肠外途径给药，如局部、表皮或粘膜途径给药，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部途径给药。活性化合物可用载体配制，所述栽体将保护所述化合物免于快速释放，如控释制剂，包括植入剂、经皮贴剂和微嚢化递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这类制剂的许多方法已获得专利，或者是本领域才支术人员所众所周知。参见，例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems(J.R.Robinson,ed.，MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978)。治疗性组合物可利用本领域中已知的医用装置给药。例如，在一个优选的实施方案中，本发明的治疗性组合物可利用无针头皮下注射装置给药，例如美国专利号5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4，7卯，824或4,596,556中披露的装置。对于本发明有用的众所周知的植入剂和装置的实例包括美国专利号4,487,603，它披露了用于以受控速度释放药物的一种可植入式微量输注泵；美国专利号4,486,194，它披露了用于通过皮肤给药的一种治疗装置；美国专利号4,447,233，它披露了一种用于以精确的输注速度送递药物的投药输注泵；美国专利号4,447,224，它披露了一种用于持续药物送递的可变流速可植入输注装置；美国专利号4,439,196，它披露了一种具有多腔区室的渗透性药物送递系统；以及美国专利号4,475,196，它披露了一种渗透性药物送递系统。这些专利通过引用结合在此。许多其他的这类植入剂、送递系统和装置是本领域技术人员已知的。在一些实施方案中，对本发明的人单克隆抗体进行配制以确保其在体内分布适宜。例如，血脑屏障(BBB)阻止了许多高亲水性化合物。为确保本发明的治疗性化合物通过BBB(如果需要的话)，例如它们可以被配制在脂质体中。配制脂质体的方法参见例如美国专利号4，522，811;5,374,548;和5，399，331。脂质体可包含一个或多个结构部分，所述结构部分可以选择性地净皮运送到特定的细胞或器官中，由此增强靶向性药物递送(参见，例如V.V.RanadeJ.Clin.Pharmacol.^2:685，(1989))。示例性乾向结构部分包括叶酸或生物素(参见，例如Low等人的美国专利号5,416,016);甘露糖普(Umezawaetal.，Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038,(1988));抗体(Bloemanetal.FEBSLett.^2:140,(1995);Owaisetal.Antimicrob.AgentsChemother.^2:180，(1995));表面活性剂蛋白A受体(Briscoeetal.Am.J.Physiol.1233:134，(1995));(Schreieretal.丄Biol.Chem.巡卯90，(1994));还可参见Kei國enandLaukkanenFEBSLett.346:123,(1994);以及KillionandFidlerImmunomethods4:273，(1994)。本发明的用途和方法本发明的抗体，特别是人抗体、抗体组合物和方法具有多种体外和体内诊断和治疗用途，包括i貪断和治疗BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2介导的病症。例如，这些分子可在体外或离体地祐:给予培养物中的细胞，或者例如体内给予人类受试者，以便治疗、预防和诊断多种病症。在此所使用的术语"受试者，，旨在包括人类和非人类动物。非人类动物包括所有脊推动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，例如，非人灵长类、羊、狗、猫、牛、马、鸡、两栖动物和爬行动物。优选的受试者包括患有由BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的活性所介导的病症的人类患者。所述方法特别地适于治疗患有由BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的表达或功能介导的病症的人类患者。当针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的抗体与其它药剂联合给药时，这两种物质可相继或者同时给药。鉴于本发明的抗体对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的特异性结合，本发明的抗体可用于特异地检测BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2在组织和细胞中的表达，并且还可用于通过免疫亲和纯化方法纯化BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2。如上所述，BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2与多种涉及炎症和异常骨形成和骨化的疾病相关。这些疾病包括脊稚关节炎(SpA)疾病，此类SpA疾病的共同特征是脊推发炎、明显的疼痛和功能障碍。SpA疾病包括例如强直性脊推炎、银屑病性脊推关节炎、反应性脊推关节炎、与炎性肠病相关的脊推关节炎和未分化脊推关节炎。特别地，本发明的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体可有效地治疗强直性脊推炎(AS)、其他脊推关节病和相关的炎性风湿性疾病(它们典型的特征是由骶髂关节炎和起止点炎引起的炎症性背痛)。因此，本发明涵盖了治疗上述疾病的方法，包括给予受试者在此披露的单克隆抗体。对于许多AS患者当前标准的治疗方法包括TNFa阻断。使用TNFa阻断的治疗已显示出它可能通过减少在疾病病理中起作用的慢性炎症来有效减少该病症的症状。然而，在长期使用TNFa阻断剂后可能发生负面后果。这些后果包括例如结核病的发病率增高、变态反应和血液学病症例如贫血。此外，TNFa阻断剂对于患有充血性心力衰竭的患者而言是禁忌药物。为了克服与TNFa阻断治疗相关的困难，可以将本发明的抗体与TNFa阻断剂组合使用来治疗AS。一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPR1A、抗-BMPRlB、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体与TNFa阻断剂的组合的优势在于这种组合可以引发两种治疗之间的协同作用，从而治疗疾病或阻止疾病的发展。确实，当与本发明的抗体组合使用时，可以减少TNFa阻断剂的用量和频率。这种组合疗法可以緩解长期4吏用TNFa阻断剂的一些不良后果。据才艮道(Kaplanetal，丄ofBoneandJointSurgery200789:347-357),一旦诱导了软骨内原基(endochondralanlagen)，发炎的停止对于抑制异位骨形成是没有效果的。因此，将一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体与例如TNFa阻断剂的治标剂(palliative)组合4吏用可净皮证实能够有效地治疗或防止AS疾病的进程和緩解其症状。另外，还可以使用抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2的抗体来治疗其他与异常的骨形成或骨化相关的疾病或医学病症，包括进行性骨化性纤维发育不良(FOP)(Kanetal.，Am.J.Path.165(4):1107-15(2004))，进行性骨发育异常(POH)、脊髓损伤、导致肌内血肿的钝性创伤、矫形手术、银屑病性关节炎、骨关节炎、强直性脊推炎、血清阴性关节病、骨肥厚、耳硬化、镫骨强直、骨癌、前列腺癌和外生骨疣、动脉粥样硬化、心脏瓣膜病和术后重新骨性联拉(resynostosis)。涉及异位骨形成的医学病症有时也包括正常骨中的骨丢失和骨质溶解。因此，本发明包括治疗具有异位骨形成的患者，所述治疗中使用一种或多种抗-BMP2、抗画BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗画ACTR1和/或抗-BMPR2的抗体与骨吸收抑制剂相组合，所述骨吸收抑制剂包括但不限于二膦酸盐，PTH抑制剂，RANKL的直接和间接抑制剂，以及其他破骨因子，例如MCSF的抑制剂(参见WO2005/068503，其内容明确地通过引用结合在此)。BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2也在多种人类癌症中表达，包括骨癌、前列腺癌、肺癌、黑素瘤以及其他造血系统癌症和乳腺癌。可以单独4吏用一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRIA、抗-BMPRlB、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体抑制癌性肿瘤的生长或转移。可替代地，如在此所述，一种或多种抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体可与其他免疫原性药剂、标准癌症治疗法或其他抗体联合使用。优选的可以使用本发明的抗体抑制其生长或转移的癌症包括典型地对免疫疗法有应答的癌症。优选的可治疗的癌症的非限制性实例包括乳癌(例如乳腺细胞癌)、卵巢癌(例如卵巢细胞癌)、脑瘤、慢性或急性白血病(包括急性髓样白血病、慢性髓样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、原发性CNS淋巴瘤、T细胞淋巴瘤)和鼻咽癌。可使用本发明的方法治疗的其他癌症的实例包括黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、直肠癌、肛区癌症、胃癌、肾癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、夕卜阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、乳腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、胸腔癌症(carcinomaofthebreastpelvis)、中枢神经系统(CNS)赘生物、肿瘤血管发生、脊推轴肺瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌症、鳞状上皮细胞癌、环境诱导性癌症，包括由石棉诱导的那些(例如间皮瘤)，以及所述癌症的组合。此外，鉴于多种肺瘤细胞上的BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的表达，本发明的人抗体、抗体组合物和方法可用于治疗患有致瘤性病症的受试者，所述致瘤性病症例如是以存在表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的肿瘤细胞为特征的病症，包括例如，乳癌(包括乳腺细胞癌)、卵巢癌(包括卵巢细胞癌)、成胶质细胞瘤、脑瘤、鼻咽癌、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、伯基特淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、多发性骨髓瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、滤泡型小裂细胞淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、周围T细胞淋巴瘤、伦纳特淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、成人T细胞白血病(T-ALL)、中心母细胞性/中心细胞性((cb/cc))滤泡型淋巴瘤、B细胞系弥漫型大细胞性淋巴瘤、血管免疫母细胞性淋巴结病(AILD)样T细胞淋巴瘤、HIV相关的基于体腔的淋巴瘤、鼻咽的未分化癌、胚胎性癌(例如Schmincke瘤)、castleman氏病、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症和其他B细胞淋巴瘤。因此，在一个实施方案中，本发明提供抑制受试者体内肿瘤细胞生长的方法，包括向受试者给予治疗有效量的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体或其抗原结合部分。典型地，所述抗体是人抗体。此外或者可替代地，所述抗体可以是嵌合的或人源化的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTR1和/或抗-BMPR2的抗体。在一个实施方案中，本发明的抗体(例如，人单克隆抗体、多特异性和双特异性分子和组合物)可用于检测BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的水平或细胞膜表面上含有BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的细胞的水平，然后可将这些水平与某些疾病症状相关联。可替代地，所述抗体可用于抑制或阻断BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的功能，这进而又可能与某些疾病症状的防止或緩解相关联，由此暗示BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2是该疾病的介导物。这可通过使实验样本和对照样本在以下条件下与抗-BMP2、抗BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体相接触来实现，所述条件允许抗体与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2之间形成复合物。对抗体与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2之间形成的任何复合物进行检测，并比较实验样本和对照样本中的复合物。在另一个实施方案中，可以针对与治疗或"i貪断用途相关的结合活性，对本发明的抗体(例如，人抗体、人源化抗体、多特异性和双特异性分子和组合物)进4亍体外初始测试。例如，可用以下实施例中所述的流式细胞测定法测试本发明的组合物。本发明的抗体(例如，人抗体、人源化抗体、多特异性和双特异性分子、免疫缀合物和组合物)具有在BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2相关疾病的治疗和诊断方面的其他用途。例如，人单克隆抗体、多特异性或双特异性分子和免疫缀合物可用于在体内或体外'H以下的一种或多种生物学活性抑制表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的细胞的生长和/或杀伤该细胞；在人效应细胞存在时介导对表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的细胞的吞噬作用或ADCC效应；或者，阻断BMP2和/或BMP4与BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的结合。体内和体外施用本发明抗体组合物(例如，人单克隆抗体、人源化抗体、多特异性和双特异性分子和免疫缀合物)的合适给药途径是本领域众所周知的，并可由本领域普通技术人员选择。例如，所述抗体组合物可通过注射(例如静脉内或皮下)施用。所用分子的合适剂量将取决于受试者的年龄和体重、所述抗体组合物的浓度和/或配制。如前所述，本发明的人抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRIB、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体可与一种或其他多种治疗剂(例如细胞毒性剂、放射性毒性剂或免疫抑制剂)联合施用。所述抗体可与所述治疗剂连接(作为免疫复合物)，或者可与所述治疗剂分开施用。在后一种情况(分开施用)下，所述抗体可在该治疗剂之前、之后或和该治疗剂同时施用，或者可以和其他已知疗法例如抗癌疗法(如辐射)联合实施。这类治疗剂包括例如其自身只有在对患者有毒性或亚毒性的水平时才显示有效的抗肿瘤剂，例如多柔比星(阿霉素)、顺铂石克酸博来霉素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥和环磷酰胺羟基脲等。顺铂以每四周一次100mg/kg的剂量静脉内给药，阿霉素以每21天一次60-75mg的剂量静脉内给药。本发明的人抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体或其抗原结合片段与化学治疗剂的共同施用可提供两种抗癌剂，这两种抗癌剂通过不同的、可以获得针对人类肺瘤细胞的细胞毒效应的机制起作用。这类共同施用可解决肿瘤细胞产生药物抗性或者抗原性发生改变方面的问题，该问题可能会导致肿瘤细胞对抗体不反应。本发明的靶特异性效应细胞，例如与组合物(例如，人抗体、多特异性和双特异性分子)相连的效应细胞，也可用作治疗剂。用于打靶的效应细胞可以是人白细胞，例如，巨嗟细胞、嗜中性粒细胞或单核细胞。其他细胞包括嗜酸性粒细胞、天然杀伤细胞和其他带有IgG-或IgA-受体的细胞。如果需要，效应细胞可从待治疗的受试者中获得。所述靶特异性效应细胞可以以在生理学上可接受的溶液中的细胞悬液形式来给药。给予的细胞数可以是108-109数量级，但会根据治疗目的而变化。通常，该量足以获得在耙细胞处的定位并且通过如吞噬作用产生细胞杀伤作用，所述耙细胞例如有表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的胂瘤细胞。施用途径也可以改变。实施。例如，使用本发明的组合物(例如，人抗体、多特异性和双特异性分子)和/或带有这些组合物的效应细胞的抗肿瘤疗法可以和化学疗法联合使用。此外，联合免疫疗法可用于指导两种不同的细胞毒性效应群体对肿瘤细月包的排斥作用。例如，与抗FqRI或抗CD3相连的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体可以和IgG-或IgA-受体特异性结合剂联合使用。或FcyR水平，例如可通过遮盖和去除细胞表面上的受体实现。抗Fqr受体的混合物也可用于该目的。还可在存在补体时使用具有补体结合位点的本发明的组合物(例如，人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体、多特异性和双特异性分子和免疫缀合物)，所述补体结合位点例如是来自IgGl、IgG2或IgG3或IgM的可结合补体的部分。在一个实施方案中，可通过加入补体或含补体的血清来补充对包含靶细胞的细胞群的离体处理，所述处理使用本发明的结合剂和合适的效应细胞来进行。对被本发明的结合剂包被的靶细胞的吞噬作用可通过补体蛋白的结合来加强。在另一个实施方案中，也可通过补体来溶解被本发明的组合物(例如，人抗体、多特异性和双特异性分子)包^皮的靼细胞。在又一个实施方案中，本发明的组合物不激活补体。本发明的组合物(例如，人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体、多特异性和双特异性分子和免疫缀合物)也可以和补体一起施用。因此，本发明的范围内涵盖包含人抗体、人源化抗体、多特异性或双特异性分子与血清或补体的组合物。这些组合物的优点在于补体位于紧靠人抗体、多特异性或双特异性分子的位置。可替代地，本发明的人抗体、多特异性或双特异性分子与补体或血清可分开施用。本发明的范围还包括试剂盒，所述试剂盒含有本发明的抗体組合物(例如人抗体、双特异性或多特异性分子或免疫缀合物)和使用说明书。该试剂盒还可含有一种或多种其他试剂，例如，免疫抑制剂、细胞毒性剂或方文射性毒性剂，或者一种或多种本发明的其它人抗体(例如，与第一人抗体结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗原中的不同表位的、具有互补活性的人抗体)。因此，对于接受本发明的抗体组合物治疗的患者还可(在给予本发明的人抗体之前、同时或之后)给予其它治疗剂，例如细胞毒性剂或放射性毒性剂，这样可加强或提高所iiA抗体的治疗效果。在其他的实施方案中，可额外地用能够调节(例如增强或抑制)FcY或Fcy受体的表达或活性的药剂来治疗受试者，例如用细胞因子治疗受试者。在用多特异性分子治疗过程中给予的优选的细胞因子包括粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素y(IFN-y)和肿瘤坏死因子(TNF)。本发明的组合物(例如，人抗体、人源化抗体、多特异性和双特异性分子)也可用于靼向表达FcYR或BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2中的一种或多种的细胞，例如用于标记此类细胞。对于此种用途，可将所述结合剂与可检测的分子相连。因此，本发明提供离体地或在体外定位表达Fc受体例如FcyR和/或BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和Z或BMPR2中的一种或多种的细胞的方法。可检测的标记可以是例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。在一个具体的实施方案中，本发明提供了用于检测样本中是否存在BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗原或者用于测量BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗原的量的方法，该方法包括将能特异性结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的人单克隆抗体或其抗原结合部分与所述样本和对照样本相接触，这是在允许该人单克隆抗体或其抗原结合部分与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2形成复合物的条件下进行的。然后检测所述复合物的形成，其中所述样本与对照样本相比表现出不同的复合物形成即表明在该样本中存在BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗原。在又另一个实施方案中，可以通过将化合物(例如治疗剂、标记物、细胞毒素、放射性毒素、免疫抑制剂等等)与本发明抗体连接，用本发明的免疫缀合物将所述化合物导向具有BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2细胞表面受体的细胞。例如，如美国专利号6,989,452、美国专利申请号10/160,972、10/161,234、11/134,826、11/134,685以及美国临时专利申请号60/720,499中所述，可以将BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗体与UPT缀合；和/或如美国专利号6,281,354和6,548,530、美国专利申请号20030050331、20030064984、20030073852和20040087497或PCT申请公布WO03/022806所述，可以将BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2抗体与任何毒性化合物缀合；上述文献的全文通过引用结合在此。因此，本发明还提供了用于在离体或体内定位表达BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的细胞的方法(例如使用可检测的标记物，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子)。可替代地，可以使用免疫缀合物，通过将细胞毒素或放射性毒素靶向BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2,来杀伤具有BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2细胞表面受体的细胞。本发明通过以下实施例进一步进行说明，这些实施例不应解释为对本发明的进一步限制。本申请通篇引用的所有附图和所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容均通过引用的方式明确地结合在此。实施例实施例1抗BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和BMPR2的人单克隆抗体的生成本实施例披露了产生特异性结合人类BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1,和BMPR2的人单克隆抗体的方法学。抗原寸吏用重组人类BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2对小鼠进行免疫。具体地，使用市售的重组人类BMP2或BMP4对小鼠进行免疫。人类重组BMP-2获得自R&DSystems,Inc.(CatalogNo.355-BM/CF,Lot.-MSA10605H)或Medtronic,Inc.(Lot.-M115006AAJ)。人类重组BMP4获得自R&DSystems,Inc.(CatalogNo.31國BP/CF，LotsBEM186051和BEM316071和MSA10605H)。按照厂商的说明书将冻干的抗原复原(reconstituted),并储存于-20。C。转基因小鼠HuMAbMouse⑧和KMMouse可以使用表iiA抗体基因的HuMab转基因小鼠的HCo7、HCo12和HCo17品系或KM转基因小鼠来制名4十对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和BMPR2的完全人单克隆抗体。在这些小鼠品系中，内源性的小鼠k轻链基因已经按照Chenetal.(1993)EMBOJ.H:811-820所述被纯合地破坏，并且内源性的小鼠重链基因已按照PCT申请公开号WO01/09187的实施例1所述被纯合地破坏。.此外，如Fishwildetal.NatureBiotechnologyJJ:845-851(1996)所述，此小鼠品系携带人类k轻链转基因KCo5，并且如PCT申请公开号WO01/09187的实施例2所述，携带人类重链转基因HCo7、HCo12或HCo17。使用转基因小鼠HuMAbMouse⑧的HCo20:02{M/K}(Balb)Fl和HCo27:04(M/K)品系以及转基因转染色体小鼠的KM品系(它们中每一种都表达人抗体基因)来制备针对BMP-2和BMP-4的完全人单克隆抗体。如WO2005/058815所述构建了HCo20:02{M/K}(Balb)Fl和HCo27:04《M/KH、鼠，该文献的全文通过引用结合在此。如WO02/43478所描述的方法构建了KM品系，该文献的全文通过引用结合在此。HuMAbMouse⑧和KM]\101186@的免疫为了产生针对人类BMP2和BMP4的完全人单克隆抗体，使用人类重组BMP2或BMP4免疫HuMAbMouse⑧和KMMouse⑧的小鼠。对于HuMAbMouse⑧的通用免疫方法描述于Lonberg，N.etal(1994)Nature塁(6474):856-859;Fishwild，D.etal.(1996)NatureBiotechnology!^:845-851和PCT申请公开号WO98/24884中。第一次输注抗原时小鼠是6-16周龄。使用经纯化的重组BMP2或BMP4制剂(10-15照)来免疫每只HuMabmouse⑧和KMmouse⑧小鼠。使用在Ribi佐剂中乳化的抗原经腹膜内和皮下或通过足垫对转基因小鼠进行免疫，每隔一周免疫1次，直到12次。被选择用于B细胞融合的小鼠在脾切除前3天和1天进一步经静脉内和,内用抗原进行免疫。通过眶后取血监测免疫应答。通过ELISA筛选血浆(如下文所述)，并使用具有足够的抗BMP2和BMP4人免疫球蛋白滴度的小鼠进行融合。在处死小鼠并取出脾之前3天和1天对小鼠经静脉用抗原进行增强免疫。进行了4个融合并且对总共33只小鼠进行了免疫。对产生抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗-BMPRlB、抗-ACTRl和抗-BMPR2抗体的HuMabMouse⑧或KMMouse⑧小鼠的选择为了选择能产生结合BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的抗体的HuMabMouseTM或KMMouseTM小鼠，通过ELISA方法，使用吸附在微量滴定板上的经纯化的抗原，对来自祐JL疫小鼠的血清进行筛选，如以上Fishwildetal.(1996)所述。具体而言，用含有1至2pg/ml的经纯4匕的重组BMP2或BMP4的PBS包被微量滴定板，每孔50pi,在室温下孵育过夜，用PBS/吐温溶液(0.05%)洗涤四次，随后用补充了0,5%牛血清白蛋白(BSA)的PBS/吐温溶液(0.05%)以每孔200进行封闭。将取自被BMP2或BMP4免疫的小鼠的血浆的稀释液加至每孔，并在室温下孵育1至2小时。用PBS/吐温(0.05%)清洗平板，然后用偶合辣根过氧化物酶(HRP)的山羊抗人IgGFc特异性多克隆抗体在室温下孵育1小时。洗涤后，用ABTS底物(Moss,Inc.Cat.No.ABTS-1000)对滴定板显色，并用分光光度计在OD415至495处进行分析。形成最高滴度的抗原特异性抗体的小鼠可被用于融合。按照以下描述进行融合，并通过ELISA测试杂交瘤上清液的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2的活性。与吸附至微量板的抗原结合的抗体，可以，例如，在CHO细胞(但不是亲本CHO细胞)中作为融合蛋白进行表达。通过流式细胞术识别与表达重组人类抗原的细胞系结合、但不与不表勤目应抗原的对照细胞系结合的抗体。例如可以通过将表达抗原的CHO细胞与浓度是20ng/ml的所感兴趣的抗体进行孵育来评估抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl以及抗-BMPR2抗体的结合。洗涤细胞并用与标记物诸如FITC缀合的抗人IgGAb来检测结合。使用FACScan流式细胞4义(BectonDickinson,SanJose，CA)进行流式细胞术分析。产生针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和BMPR2的人单克隆抗体的杂交瘤的生成例如，使用以下方法生成产生针对BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和BMPR2的人单克隆抗体的杂交瘤。具体而言，使用CytoPulse大室细胞融合电穿孔仪(CytoPulseSciences,Inc.,GlenBurnie，MD)，通过基于电场的电融合，将从BMP2免疫的HuMabmouse或KM11101186@小鼠分离出的小鼠脾细胞融合。然后使用抗体捕获ELISA实验筛选所产生的杂交瘤，以确定抗原特异性抗体的产生。使用CytoPulse大室细胞融合电穿孔仪(CytoPulseSciences,lne.，GlenBurnie,MD),通过基于电场的电融合，将来自被免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液与Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL1580)进行融合。将细胞以约lxl(^个细胞/孔种于平底微量滴定板上，然后在选择性培养基中培养两周，所述选择性培养基在补充有10mMHEPES、0.055mM2-巯基乙醇以及lxHAT(Sigma，CRLP-7185)的DMEM(Mediated!,CRL10013，含有高葡萄糖、L-谷氨酰胺和丙酮酸钠)中含有10%胎牛血清)3幼D1(ATCC，CRLTIB-63)条件培养基、3至5%的杂交瘤克隆因子(Bioveris，Inc.)。l至2周后，用其中HAT被HT替换的培养基培养细胞。然后采用ELISA(如上所述)对各孔筛选人抗-BMP2或BMP4单克隆IgG抗体。一旦发生杂交瘤的广泛生长(10至14天)，通常在10至14天后监测培养基以确定抗体的产生。将分泌抗体的杂交瘤进一步在更大的培养瓶中扩大培养，并再次针对抗原特异性抗体的产生进行筛选。将选出的克隆进行冷藏并通过有限稀释克隆一次或两次。然后对稳定的亚克隆进行冷藏并体外扩大培养，以产生足量的抗体用于进一步的表征。从用BMP2免疫的小鼠中一共产生了495个产生人类抗-BMP2/4抗体的杂交瘤克隆。选择35个克隆进行克隆以及随后的扩大培养以用于进一步分析。在这35个克隆中有6H4、11F2、12E3、1F6、10F6、10H6、16b7、71)6、8B3、33F7和15F3杂交瘤细胞系。实施例2人单克隆抗体的结构表征本实施例披露特异性结合至BMP2和BMP4的人单克隆抗体的结构特征。具体而言，在本实施例中披露了抗-BMP2/4单克隆抗体6H4、11F2、12E3、1F6、10F6、10H6、16b7、7D6、8B3、33F7和15F3的结构。可以通过标准PCR技术，从抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRIB、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2杂交瘤中分别获得对通过实施例1的方法学得到的单克隆抗体的重链和轻链可变区进行编码的cDNA序列，并通过标准DNA测序纟支术进4于测序。通过标准PCR技术，从6H4、11F2和12E3杂交瘤中分别获得了编码6H4、11F2和12E3单克隆抗体的重链和轻链可变区的cDNA序列，并通过标准DNA测序技术进行了测序。6H4的重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在图1A和SEQIDNO:31和37中。6H4的轻链可变区的核苷酸序列和^J^酸序列分别显示在图1B以及SEQIDNO:34和40中。将6H4重链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白重链序列进行比较，证明了6H4重链利用了来自于人类胚系VH4-34的VH区段(SEQIDNO:51)、来自于人类胚系3-10的D区段(SEQIDNO:52)，以及来自于人类胚系JH1的JH区段(SEQIDNO:53)。6H4的VH序列与胚系VH4-34序列的比对显示在图4中。使用确定CDR区域的Kabat系统对6H4的vh序列进一步分析，得到分别如图1A和图4，以及SEQIDNO:13、16和19所示的重链CDR1、CDR2和CD3区域。将6H4轻链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白轻链序列进行比较，证明了6H4轻链利用了来自于人类胚系VKL6的VL区段(SEQIDNO:54)和来自于人类胚系JK2的JK区段(SEQIDNO:55)。6H4的Vk序列与胚系VkL6序列的比对显示在图7中。使用确定CDR区域的Kabat系统对6H4的vl序列进一步分析，得到分别如图IB和图7，以及SEQIDNO:22、25和28所示的轻链CDR1、CDR2和CD3区域。11F2的重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在图2A和SEQIDNO:32和38中。11F2的轻链可变区的核苷絲列和氨基,列分别显示在图2B和SEQIDNO:35和41中。将11F2重链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白重链序列进行比较，证明了6H4重链利用了来自于人类胚系VH4-59的VH区段(SEQIDNO:43)、来自于人类胚系2-2的D区段(SEQIDNO:45)，以及来自于人类胚系JH5b的JH区段(SEQIDNO:46)。11F2的Vh序列与胚系VH4-59序列的比对显示在图5中。使用确定CDR区域的Kabat系统对11F2的vh序列进一步分析，得到分别如图2A和图5，以及SEQIDNO:14、17和20所示的重链CDR1、CDR2和CD3区域。将11F2轻链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白轻链序列进行比较，证明了11F2轻链利用了来自于人类胚系VKA27的Vl区段(SEQIDNO:48)以及来自于人类胚系JK4的JK区段(SEQIDNO:50)。UF2的Vk序列与胚系VKA27序列的比对显示在图8中。使用确定CDR区域的Kabat系统对11F2的V^序列进一步分析，得到分别如图2B和图8，以及SEQIDNO:23、26和29所示的轻链CDR1、CDR2和CD3区域。12E3的重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在图3A和SEQIDNO:33和39中。12E3的轻链可变区的核苷絲列和^j^,列分别显示在图3B和SEQIDNO:36和42中。将12E3重链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白重链序列进行比较，证明了12E3重链利用了来自于人类胚系VH3-33的VH区段(SEQIDNO:44)，以及来自于人类胚系JH6b的JH区段(SEQIDNO:47)。12E3的VH序列与胚系VH4-33序列的比对显示在图6中。使用确定CDR区域的Kabat系统对12E3的vh序列进一步分析，得到分别如图3A和图6，以及SEQIDNO:15、18和21所示的重链CDR1、CDR2和CD3区域。将12E3轻链免疫球蛋白序列与已知的人类胚系免疫球蛋白轻链序列进行比较，证明了12E3轻链利用了来自于人类胚系VKL15的Vl区段(SEQIDNO:49)以及来自于人类胚系JK4的JK区段(SEQIDNO:50)。12E3的VK序列与胚系VKL15序列的比对显示在图9中。使用确定CDR区域的Kabat系统对12E3的vl序列进一步分析，得到分别如图3B和图9，以及SEQIDNO:24、27和30所示的轻链CDRl、CDR2和CD3区域。使用标准PCR技术，从10F6、10H6和16b7杂交瘤中分别获得了编码10F6、10H6和16b7单克隆抗体的重链和轻链可变区的cDNA序列，并通过标准DNA测序技术进行了测序。10F6和10H6单克隆抗体的重链利用了人类胚系VH3-33(SEQIDNO:44)、DH6-13，以及JhJH41)基因(SEQIDNO:88)。10F6和10H6单克隆抗体的轻链利用了人类胚系VKL15和JKJK4基因。16B7单克隆抗体的重链使用了人类胚系VH3-33、DH6-13,以及JhJH2(SEQIDNO:89)基因。16B7单克隆抗体的轻链使用了人类胚系VKL15以及JkJK4基因。使用标准PCR技术，从1F6杂交瘤中获得了编码1F6单克隆抗体的重链和轻链可变区的cDNA序列，并通过标准DNA测序技术进行了测序。1F6单克隆抗体的重链利用了人类胚系VH4-59、DH2-2，以及JHJH5b基因。1F6单克隆抗体的轻链使用了人类胚系VKA27以及JKJK4基因。使用标准PCR技术，从7D6、8B3、33F7和15F3杂交瘤中分别获得了编码7D6、8B3、33F7和15F3单克隆抗体的重链和轻链可变区的cDNA序列，并通过标准DNA测序技术进行了测序。这些单克隆抗体的重链利用了人类胚系VH1-69(SEQIDNO:91)以及JHJH3b基因(SEQIDNO:90)。这些单克隆抗体的轻链使用了人类胚系VKA27和JKJK2基因。实施例3抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗画BMPR1B、抗画ACTR1和抗-BMPR2单克隆抗体的结合特异性的表征本实施例披露了用于进行如下比较的方法学通过ELISA和蛋白质印迹测定法比较抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2的抗体与免疫纯化的抗原的结合，或者通过使用免疫组织化学比较所述抗体与组织中的BMP2/4的结合，以检查抗原结合特异性。将重组的带有His标签或myc标签的抗原过夜包被在板上，然后检测该抗原与通过实施例1披露的方法学产生的人单克隆抗体的结合。执行标准的ELISA程序。抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗-BMPRlB、抗-ACTR1和/或抗-BMPR2的人单克隆抗体的施加浓度是1ng/ml，并按1:2系列稀释进行向下滴定。使用缀合有辣根过氧化物酶(HRP)的山羊抗人IgG(Fc或k链特异性)多克隆抗体作为二级抗体。通过利用蛋白A的层析法，从被B7H4-Ig构建体转染的293T细胞的上清液中纯化重组的B7H4-Ig。用人抗体包被ELISA板，随后加入纯化的蛋白，然后使用兔抗-B7H4抗血清进行检测。通过使用2A7亲和柱的层析法，从3皮Penta-B7H4-C9构建体转染的293T细胞的上清液中纯化出带有C-9标签的重组Penta-B7H4蛋白。可以先用抗-小鼠Fc,再用单克隆抗-C9抗体(0.6ng/ml)包被ELISA板，然后使用所述Penta-B7H4，然后使用1ng/ml的人单克隆抗体进行滴定。以抗-小鼠Fc，再用单克隆抗-C9抗体(0.6ng/ml)进行了包,皮，然后用Penta-BMP2、Penta-BMP4、Penta-BMPR1A、Penta-BMPR1B、Penta-ACTR1和/或Penta-BMPR2，然后使用1照/ml的人单克隆抗体进行滴定。在还原条件和非还原条件下，通过蛋白质印迹对抗-BMP2/4抗体与BMP2的结合进行表征。0.5jug的重组人类BMP2蛋白(Medtronic)被直接稀释入含有或不含有还原剂的样品緩冲液(CellSignaling,Cat#SB7722)中。将样品在100°C加热3分钟使蛋白变性，然后进行电泳和蛋白质印迹。膜结合蛋白的探测使用了0.5吗/ml的受试抗体，然后用缀合有碱性磷酸酶的Fab2山羊抗人IgG(JacksonImmunoReseachLabs,cat#109-056-09)进行检测，并用BCIP/NBT(Pierce,cat#34042)进行染色。结果显示，所有受试的单克隆抗体均识别对应于BMP2同型二聚体的约36kDa的一个非还原条带。此外，一些单克隆抗体(例如8B3)还能识别还原条件下的BMP2。揭示出对应于BMP单体的两条约17至18kDa的条带。对于免疫组织化学而言，使用2,000的小鼠组织核心(IMGENEXHisto-Array;ImgenexCorp.,SanDiego,CA)。在干燥30分钟后，用丙酮固定切片(室温下10分钟)，然后在空气中干燥5分钟。用PBS沖洗涤玻片，然后用含有10。/。的正常山羊血清的PBS预孵育20min，并接着用含有10jig/ml异硫氰酸焚光素化抗体的含有10。/。的正常山羊血清的PBS在室温下孵育30分钟。然后，用PBS洗涤玻片三次，并与小鼠抗FITC抗体(10ng/mlDAKO)在室温下孵育30分钟。再用PBS洗涤玻片，并用HRP缀合的山羊抗小鼠抗体(DAKO)在室温下孵育30分钟。再用PBS洗涤玻片三次。使用二氨基联苯胺(Sigma)作为底物，得到棕色染色。在用蒸馏水洗涤之后，使用苏木精对玻片进行复染1分钟。然后用流动的蒸馏水洗涤玻片10秒钟并用glycergel(DAKO)封片。被抗-BMP2/4单克隆抗体亚组识别的表位通过下述方法被确定使用与生物素缀合并被链霉亲和素芯片(SAchip，BIAcore)捕获的受体肽，并用BIAcore进行了分析。抗体以40ng/ml流过芯片。8B3和7D6体与一个BMP2表位(ISMLYLDENEKVVLK)(SEQIDNO:92)结合，该表位结合一个2型BMP2受体。12E3、11F2以及16B7抗体与一个BMP2表位(QAKHKQRKRLKSSCKRH)(SEQIDNO:93)结合，该表位结合肝素。另外，抗-BMP2/4人单克隆抗体33F7(SEQIDNOS:63和71)阻断BMP2/4与肝素之间的相互作用。这也阻断了BMP2/4的功能。实施例4表征抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体与软骨细胞系表面表达的对应抗原的结合本实施例披露的流式细胞术方法学用于检测抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体与CHO抗原转染子以及在细胞表面表达BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的软骨细胞的结合。对转染了BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的CHO细胞系以及软骨细胞系ATDC5(RIKENBiosource，RCB0565)或成纤维细胞系MC3T3(ATCC保藏号CRL-2595、CRL-2596、CRL-2594和CRL-2593)针对抗体的结合进行测试。洗涤细胞并用FITC标记的抗人IgGAb检测结合。4吏用FACScan流式细胞4义(BectonDickinson,SanJose,CA)进行流式细胞术分析。实施例5抗画BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗画BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2单克隆抗体的结合亲和性分析本实施例披露了用于检测单克隆抗体与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2的特异性结合亲和性的方法。在一种方法学中，使用标准技术用全长BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2转染HEK细胞，并在含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中培养细胞。用胰蛋白酶消化细胞并用基于Tris的结合緩冲液(24mMTris,pH7.2，137mMNaCl，2.7mMKC1,2mM葡萄糖，1mMCaCl2,1mMMgCl2，0.1%BSA)洗涤一次，并调整至2xl06个细胞/ml。用1。/o的脱脂奶粉水溶液包被Millipore板(MAFBNOB)并贮存于4°C过夜。用0.2ml的结合緩冲液将这些板洗涤三次。将50孩史升的緩沖液单独加入至最大结合的孔中(总结合)。将25微升的緩冲液单独加入至对照孔中(非特异性结合)。将25nl不同浓度的1251标记的抗体加入所有的孔中。将25nl体积的不同浓度的未标记抗体(IOO倍过量)加入对照孔中，并将25nl体积的含有经BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2转染的CHO细胞(2xl()6个细胞/inl)的结合緩冲液加入至所有孔中。然后将这些板置于200RPM的摇床上，于4。C孵育2小时。孵育后，用0.2ml水冷的洗涤緩冲液(24mMTris，pH7.2，500mMNaCl，2.7mMKC1，2mM葡萄糖，1mMCaCl2，1mMMgCl2，0.1%BSA)洗涤Millipore板三次。除去滤器并在Y计数器上计数。使用Prism软件(SanDiego，CA)利用单位点结合参数进行平衡结合的评估。使用S型剂量反应(PRIZMTM)通过非线性回归对数据进行分析，得到EC50的计算值，它被用于根据EC50和95%CI对抗体进行分级。在另一种方法学中，通过Biacore分析(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)表征抗-BMP2/4单克隆抗体的亲和性和结合动力学。抗BMP-2/4抗体被捕获在芯片上，所述芯片带有通过伯胺与CM5芯片(羧甲基葡聚糖包被的芯片)共价连接的抗人Fc抗体，所述共价连接使用标准的胺缀合化学作用和Biacore提供的试剂盒。通过使含有浓度是10nM的BMP2或BMP4的HBS-EP緩冲液(pH7.4)以25nl/min的流速流过，测量结合。对抗原-抗体结合动力学跟踪2分钟，并对解离动力学跟踪8分钟。使用BIA评估软件(Biacore,AB)以1:1的Langmuir结合模型拟合结合曲线和解离曲线。所测定的Kd、k^和koff值在表l中示出。表l.抗BMP-2和BMP-4单克隆抗体(mAb)的结合亲和性。<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>实施例6抗-BMP2/4单克隆抗体与一组BMP的交叉反应性。使用Biacore分析，通过测量抗-BMP2/4单克隆抗体与BMP-3、5、6、7和8b以及与GDF-5和7的结合亲和性，对这些抗体与BMP家族的交叉反应性进行表征。使用标准的胺缀合化学作用和由Biacore提供的试剂盒，将这些BMP和GDF通过伯胺共价连接在CM5芯片(羧曱基葡聚糖包被的芯片)上。通过使含有浓度为20jig/ml的抗体的HBS-EP緩冲液(pH7.4)以流速为20nl/min流过来测量结合。对抗原-抗体结合动力学跟踪4分钟，对解离动力学跟踪6分钟。使用BIA评估软件(Biacore，AB)，以1:1的Langmuir结合^f莫型，拟合结合曲线和解离曲线。所测定的Kd值在表2中示出。<table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>实施例7:I型和II型BMP受体的阻断使用Biacore测定了抗-BMP2/4单克隆抗体阻断BMP4与I型和H型BMP受体(R&Dsystems,Minneapolis,MN)结合的能力。使用标准的胺缀合化学作用和由Biacore提供的试剂盒，将I型和II型BMP受体通过伯胺共价均连接在CM5芯片(羧甲基葡聚糖包被的芯片)上。使抗体-抗原复合物的混合物流过被固定的受体。对抗体浓度进行两倍系列稀释，对于II型受体，抗体的起始浓度是400nM;对于I型受体，抗体的起始浓度是200nM。BMP4的浓度在3至10nM之间。在注射前将抗体和BMP-4预孵育至少1小时。以5pl/min的流速注入抗体-抗原混合物3分钟。具有重叠表位的抗体将会竟争结合(随着抗体浓度的升高而应答下降)，而具有不同表位的抗体将会同时结合在抗原上(随着抗体浓度的升高而应答升高)。这一分析显示，1F6、11F2、16B7、12E3、10F6、6H4、7D6、8B3、15F3和33F7都能够在从强阻断至弱阻断的范围内阻断BMP与II型受体的结合(图10a)。另外，一些单克隆抗体也能够阻断I型受体的结合，而另一些仅能阻断II型受体的结合(图10b)。单克隆抗体阻断BMP2与肝素的结合使用AlphaScreen测试(BertholdTechnologies)测定了抗-BMP2/4单克隆抗体阻断BMP-2与肝素(Sigma)结合的能力。使用链霉亲和素包被的供体珠(25ng/ml)捕获浓度是5nM的生物素化肝素(Sigma)，并使用蛋白A包被的受体珠捕获抗体(5nM)。从20nM开始以两倍稀释系列滴定BMP/2。如果抗体阻断了肝素与BMP-2的结合，那么将不会在肝素、BMP2和人单克隆抗体之间形成复合物，并且不会观察到信号。如果抗体不阻断肝素与BMP2的结合，那么将会形成三元复合物，并且信号会随着BMP2浓度的增加而增加。在这一测试中，仅有33F7单克隆抗体阻断肝素与BMP2的结合。33F7与肝素和BMP2都能结合，并且也能阻断肝素和BMP2之间的相互作用。实施例8:抗体稳定性抗-BMP2/4单克隆抗体的热稳定性通过抗体的解链温度的量热分析测定了抗-BMP2/4单克隆抗体的热稳定性。在与自动采样仪(MicroCalLLC,Northampton,MA，USA)相组合的VP-CapillaryDSC差示扫描微型量热计平台上进行解链温度(Tm)的量热测量。样本池的体积是0.144mL。通过将浓度为0.25mg/ml的样品以l。C/min的速度由30°C加热至95°C，获得抗体的变性数据。抗体样品存在于pH7.4的磷酸盐緩冲液(PBS)中。将同样的緩冲液用于参照池中以通过比较获得摩尔热容。使用OriginV7.0软件，基于一种非二态模型对观察到的温语图进行基线校正和标化数据的分析。如表3所示，11F2是最稳定的抗-BMP2/4抗体。对于其主峰，它显示最高的Tm值。表3.抗-BMP2/4单克隆抗体的差示扫描量热数据<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>抗-BMP2/4的单克隆抗体的化学稳定性通过荧光光语学测量各抗-BMP2/4的单克隆抗体的化学变性中点，比较了它们的稳定性。使用装配有Micromax板读数器的SPEXFluorolog3.22(SPEX，Edison,NJ)进行化学变性的焚光测量。将抗体样本置于16种不同浓度的盐酸胍的PBS緩沖液中20小时以使其达到平衡，从而进行测量。在黑色小体积非结合表面的384孔板(Corning,Acton,MA)上进行测量，并且在12pL孔体积中要求1nM抗体。在280nm处激发荧光，并在300至400nm之间测量发射光i普。扫描速度是1秒/nm,狭缝设置为5nm带通。使用PBS作为緩冲液空白对照，并从数据结果中自动扣除该对照值。使用GraphPadPrism软件将数据拟合成二态变性模型。如表4所示，15F3是最稳定的抗-BMP2/4单克隆抗体。它具有最高的解折叠中点。表4:由荧光光谱学测得的抗BMP-2/4的单克隆抗体的化学变性。<table>tableseeoriginaldocumentpage112</column></row><table>实施例9抗-BMP2/4抗体阻断BMP的细胞信号传导通过观察碱性磷酸酶在C2C12细胞中的表达，测定了BMP2/4单克隆抗体对于细胞信号传导的影响。为了测量单克隆抗体中和BMP2和BMP4的生物活性的能力，将C2C12细胞以8000细胞/孔的密度种于平底96孔板上，在含有10。/。胎牛血清和lx青霉素/链霉素的DMEM培养基中37°C用C02孵育过夜。第二天早上将培养基替换为含有单克隆抗体的100nl新鲜培养基，然后为100pi含有1.6ng/ml重组人类BMP2蛋白(Medtronic)或BMP4蛋白(R&D，Cat#314-BP/CF)的培养物。将板在37°C和C02中孵育2天。在第二天，利用细胞透化方法测试细胞的碱性磷酸酶活性。在该方法中，将培养物从孔中移去，并用100nl冰冷的丙酮/乙醇溶液(50:50v/v)固定细胞。立即移去丙酮/乙醇溶液，并替换成100pl对硝基苯基磷酸盐液体底物(Sigma,Cat.#N7653)。将板置于暗处在室温放置3分钟，通过在每孔中加入50pi的3NNaOH终止反应。底物的切割导致显色反应，该反应与细胞中碱性磷酸酶的量成比例。使用SpectraMAx340(MolecularDevices)在波长405nm处对板进行读数。在这些条件下，各单克隆抗体的戰0值为1至5ng/ml。如图11所示，由BMP2(图lla)和BMP4(图lib)引起的碱性磷酸酶的表达被BMP2/4单克隆抗体抑制。因此，本发明披露的抗体能够中和BMP蛋白。实施例10抗-BMP2/4抗体在体内阻断由BMP2诱导的异位骨化本实施例表明，抗-BMP2/4单克隆抗体阻断由BMP2诱导的异位骨形成。当BMP2械败原凝胶吸附并被皮下植入小鼠的后肢时，它可诱导异位骨形成。BMP2在档人位置募集软骨祖先细胞和脉管细胞以启动骨形成。经3周，胶原凝胶逐渐被成熟的骨替代(Nakamura，Y.et.al.JBoneMinerRes.2003Oct;18(10):1854-62)。为显示抗-BMP2/4抗体能够在体内阻断异位骨形成，将注入了BMP2的胶原凝胶植入小鼠并立即用抗-BMP2/4抗体或对照无关IgG(BDPharmingen，cat#A6618M)进4亍处理。将96pg/ml的BMP2(Medtronic,InfuseBonegraft)注入(infuse)可吸收的胶原海绵(HelistatBoneGraft,IntegraLifeSciencescat#1690-ZZ)，并将海绵切成最终重量是每块0.23克的才"物。将注入了BMP2的胶原海绵皮下植入至36只雄性成年C57BL6小鼠的左和右后肢。为了进行植入手术，根据标准方法用氯胺酮/甲苯噻溱麻醉小鼠。在小鼠的右后肢，用电动推子将覆盖半腱肌的皮肤刮去毛，并用氯己定和乙醇准备。将小鼠置于侧躺体位。使用解剖刀或解剖剪和长骨成一直线在皮肤上切出0.5cm的切口。通过钝性解剖制成一个皮下植入袋。通过无菌操作将每个植入物样品(注入了约25网BMP2的胶原海绵)置于袋中。对左后肢进行同样的植入操作。使用不锈钢缝合夹进行伤口缝合。在手术后，立即将动物分成6个处理组(表5)，并以1.25mg/ml的浓度、单次快速浓注300nl的适宜抗体至每只小鼠的^M腔内。第1组使用无关的对照IgG处理。第2至6组使用BMP2/4中和性单克隆抗体处理(表5)。在21天后，将植入物及其邻近组织切出并置于10。/。中性緩冲福尔马林中。对切下来的植入物进行光密度测定扫描(PIXI，GELunar,Madison，Wisconsin)。针对每个植入物，将骨矿物质面积(BMA)列成表。如图12所示，全部5种单克隆抗体均能有效地阻止由BMP2诱导的植入物中的骨形成。<table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table>实施例11抗画BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2单克隆抗体的内化本实施例描述了用于如下的方法学使用Hum-Zap内化测定法测试抗-BMPRlA、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2/4人单克隆抗体内化至表达BMPR1A、BMPR1B、ACTR1和/或BMPR2的CHO细胞中的能力。Hum-Zap测定法通过缀合有毒素肥皂草毒蛋白的、对人类IgG具有亲和性的二级抗体的结合，测试一级人抗体的内化。以1.25xl(^个细胞/孔的密度在100nl孔中接种表达抗原的细胞过夜。在孔中加入10pM浓度的相应的抗原特异性人单克隆抗体。使用对于任何抗原均无特异性的同种型对照抗体作为阴性对照。加入11nM浓度的Hum-Zap(AdvancedTargetingSystems,SanDiego,CA,IT-22-25)，并将板孵育72小时。然后将板用1.0nCi的3H-胸腺嘧啶脉冲24小时，收获并在TopCount闪烁计数器(PackardInstruments,Meriden，CT)上读数。使用如实施例1所述产生的人单克隆抗体，测定表达抗原的CHO细胞中肥皂草毒蛋白缀合物的内化活性，剂量反应从约500pM至1pM范围。使用CHO亲本细胞系和HuIgG-SAP作为阴性对照，测量背景毒性或非特异性内化。实施例12评估与毒素缀合的抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl和/或抗-BMPR2抗体对软骨细胞系的细胞杀伤本实施例披露的方法学用于在细胞增殖测定法中测试与毒素缀合的抗BMP2、抗-BMP4、抗画BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2单克隆抗体杀伤表达抗原的软骨细胞系的能力。由实施例1的方法学制备的HuMAb抗体可通过接头(例如肽基、腙或二硫化物接头)与毒素相缀合。将表达抗原的软骨细胞或成骨细胞的细胞系，例如ATDC5或MC3T3细胞，以约1至3xl04个细胞/孔接种于100Hl孔中培养3小时。将抗体-毒素缀合物加入至孔中，起始浓度是30nM，并以1:3的系列稀释进行向下滴定。使用对于抗原没有特异性的同种型对照抗体作为阴性对照。将板孵育69小时。然后将板用1.0pCi的3H-胸腺嘧啶脉冲24小时、收获、并在T叩Count闪烁计数器(PackardInstruments,Meriden，CT)上读数。细胞杀伤显示为表达抗原的软骨细胞中抗体-毒素成浓度依赖性的311-胸腺嘧咬掺入的降低。实施例13抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗画ACTR1和/或抗-BMPR2抗体的ADCC活性的评估本实施例披露的方法学用于在焚光细胞毒性测定法中，检测抗-BMP2、抗-BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2单克隆抗体通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)在效应细胞存在的条件下杀伤抗原+细胞系的能力。按照下述方法从全血中制备人类效应细胞。从肝素化的全血中，通过标准的Ficoll-paque分离，纯化出人类外周血单核细胞。将细胞重悬于含有10%FBS和200U/ml人类IL-2的RPMI1640培养基中，并在37°C培养过夜。第二天，收集细胞并在培养基中洗涤四次，并以2xl(f个细胞/ml重悬。将靶抗原阳性的细胞与BATDA试剂(PerkinElmer，Wellesley,MA)一起孵育，其中每lxl06个靶细胞/mL有2.5nlBATDA试剂，于37°C孵育进行20分钟。将靶细胞洗涤四次，离心，并制成lxl()S个细胞/mL的最终体积。按照以下所述使用Delfia荧光发射分析，测试人单克隆抗体对抗原阳性细胞的抗体特异性ADCC。将每种靶细胞系(100nl被标记的靶细胞)与50nl效应细胞和50fil抗体共同孵育。在整个实验中靶与效应物的比例是1:50。在所有研究中使用人类IgGl同种型对照作为阴性对照。在2000rpm脉冲式离心及37。C孵育1小时后，收集上清液，再次快速离心，并将20pl上清液转移到一个平底板中，然后加入180nl的Eu溶液(PerkinElmer,Wellesley，MA)，然后在RubyStar读数器(BMGLabtech)上读数。按照下述方法计算裂解百分比(样本释放-自发释放xlOO)/(最大释放-自发释放)，其中所述自发释放是来自仅含有靶细胞的孔的荧光，且最大释放是来自含有乾细胞并经2%Triton-X处理的孔的荧光。实施例14用棵露的并与细胞毒素缀合的抗-BMP2、抗-BMP4、抗-BMPRlA、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2抗体在体内治疗肿瘤异种移植物模型本实施例披露了用于使用与毒素缀合的抗体在体内治疗移植了癌症肿瘤细胞的小鼠的方法学，以检测抗体在体内对于肿瘤生长的影响。使用标准的实验室方法在体外增殖癌细胞。对6至8周龄之间的雄性Ncr无胸腺棵鼠(Taconic，Hudson,NY)，每只于右侧腹皮下植入含有7.5><106个细胞的0.2mlPBS/Matrigel(1:1)。植入后，每周两次对小鼠进行称重并用电测径器测量肿瘤的三维尺寸。按照长x宽x高计算肿瘤体积。将肺瘤体积平均是110至270mm3的小鼠随机分入处理组。在第0天，将PBS载体、与毒素缀合的同种型对照抗体、或与毒素缀合的抗-BMP2、抗隱BMP4、抗BMPR1A、抗BMPR1B、抗-ACTRl、和/或抗-BMPR2HuMAb由腹膜内途径给予小鼠。可以与本发明的抗体缀合的毒素化合物的实例描述于PCT申请^〉开号WO2005/112919中。《吏用三种不同的毒素化合物对接受抗原特异性人单克隆抗体的小鼠进行测试。在给药后对小鼠的肿瘤生长进行60天监测。当肿瘤达到肿瘤终点体积(2000mm3)时将小鼠安乐死。与毒素缀合的适宜的抗原特异性抗体将延长到达肿瘤终点体积(2000mm3)的平均时间，并延緩肿瘤生长的过程。因此，使用这类抗体-毒素缀合物进行的治疗对于肺瘤生长具有直接的体内抑制效果。实施例15去岩藻糖基化的人单克隆抗体的生产本实施例披露了用于生产缺少岩藻糖残基的人单克隆抗体的方法学。已经证实具有减少量的岩藻糖残基的抗体具有提高的抗体的ADCC活性。使用表达抗原特异性HuMAb的重链和轻链的栽体对缺少岩藻糖基转移酶基因FUT8的CHO细胞系Ms704-PF(Biowa，Inc.,Princeton,NJ)进行电穿孔。通过在含有6mML-谷氨酰胺和500pg/mlG418(Invitrogen，Carlsbad,CA)的Ex-Cell325-PFCHO培养基(JRHBiosciences,Lenexa，KS)中的生长来选择药物抗性克隆。通过标准ELISA测定来筛选表达IgG的克隆。产生两个单独的克隆B8A6和B8C11，其生产速度在1.0至3.8皮克/细胞/天的范围内。实施例16去岩藻糖基化的抗体的ADCC活性评估本实施例披露了通过焚光细胞毒性测定法，检测去岩藻糖化的和未去岩藻糖化的单克隆抗体在效应细胞存在的条件下通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)杀伤BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2阳性细胞的能力。人抗原特异性单克隆抗体按照上述方法被去岩藻糖基化。按照下述方法从全血中制备人类效应细胞。从肝素化的全血中，通过标准的Ficoll-paque分离，纯化出人类外周血单核细胞。将细胞重悬于含有10%FBS(培养基)和200U/ml人类IL-2的RPMI1640培养基中，并在37°C培养过夜。第二天，收集细胞并用培养基洗涤一次，再以2xl0个细胞/ml的密度重悬。将靶抗原阳性细胞以lxl(^个靶细胞/mL有2.5fUBATDA试剂(PerkinElmer，Wellesley，MA)的比例与BATDA试剂一起在添加2.5mM丙磺舒的培养基(测试介质)中孵育，于37。C进行20分钟。将靶细胞用含有20mMHEPES和2.5mM丙磺舒的PBS洗涤四次，离心，并在测试介质中配制成lxl()5个细胞/mL的最终体积。在整个实验中靶与效应物的比例是l:100。使用人类IgGl同种型作为阴性对照。在2100rpm脉冲式离心(pulsespin)和在37°C孵育1小时后，收集上清液，再次快速离心，并将20nl上清液转移到一个平底板中，力口入180pi的Eu溶液(PerkinElmer，Wellesley，MA)，并在FusionAlphaTRF板读数器(PerkinElmer)上读数。按照下述方法计算裂解百分比(样本释放-自发释放xlOO)/(最大释放-自发释放)，其中自发释放是来自仅含有靶细胞的孔的荧光，最大释放是来自含有靶细胞并经3%lysol处理的孔的荧光。抗原阳性表达的细胞系将表现出由HuMAb抗原特异性抗体产生的抗体介导的细胞毒性，以及与抗原特异性抗体的去岩藻糖基化形式相关的特异性裂解的百分比增加。因此，去岩藻糖基化HuMAb抗体增加对于表达抗原的细胞的特异性细胞毒性。***本发明并不限于在此所描述的具体实施方式的范围内。确实，从以上描述和附图，除了在此所描述的内容以外，本发明的各种修改方案对于本领域的普通技术人员而言也都是清楚。这类修改方案旨在落入所附的权利要求的范围之内。在本申请中引用了专利、专利申请、出版物、产品说明书、以及操作规程，这些文献的披露内容为了所有目的均通过引用而全文结合在此。序列表概述<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table>权利要求1.能够结合人类BMP2或BMP4上的表位的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、抗体片段、或抗体模拟物，其中所述表位被包括含有SEQIDNO32所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO35所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体识别。2.如权利要求l所述的分离的抗体，其中所述抗体是IgGl、IgG2、IgG3、或lgG4同种型的全长抗体。3.如权利要求l所述的分离的抗体，其中所述抗体选自全抗体、抗体片段、人源化抗体、单链抗体、免疫缀合物、去岩藻糖基化抗体、以及双特异性抗体。4.如权利要求l所述的抗体片段，其中该片段选自UniBody、结构域抗体、以及纳米抗体。5.如权利要求1所述的抗体模拟物，其中该模拟物选自Affibody、l)ARPin、Anticalin、Avimer、Versabody、以及Duocalin。6.如权利要求3所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物包含治疗剂。7.如权利要求3所述的免疫缀合物，其中该治疗剂为细胞毒素或放射性同位素。8.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体以5.5xlO力M或更小的KD与人类BMP2或BMP4结合。9.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体以3xl(T9M或更小的Ko与人类BMP2或BMP4结合。10.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体以2xl(T9M或更小的Ko值与人类BMP2或BMP4结合。11.包含如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体的组合物。12.分离的核酸分子，其编码权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合部分的重链或轻链。13.表达载体，包含如权利要求12所述的核酸分子。14.宿主细胞，包含如权利要求13所述的表达载体。15.用于制备抗-BMP2或抗-BMP4的抗体的方法，所述方法包括以下步骤a)获得宿主细胞，该宿主细胞含有一种或多种编码权利要求1的抗体的核酸分子；b)在宿主细胞培养物中培养该宿主细胞；c)为宿主细胞培养物提供条件，在该条件下该一种或多种核酸分子表达；和d)从该宿主细胞或该宿主细胞培养物中回收该抗体。16.用于治疗或预防与异常的骨形成和骨化相关的疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效治疗或预防该疾病的量的抗-BMP2或抗-BMP4抗体或其抗原结合部分。17.如权利要求14所述的方法，其中所述疾病选自进行性骨化性纤维发育不良(FOP)，进行性骨发育异常(POH)、脊髓损伤、肌内血肿、源自矫形手术的并发症、银屑病性关节炎、骨关节炎、强直性脊推炎(AS)、血清阴性关节病、骨肥厚、耳硬化、镫骨强直、骨癌、前列腺癌、外生骨疣、动脉粥样^更化、心脏瓣膜病。18.如权利要求16所述的方法，其中该疾病为癌症，选自骨癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤、造血系统癌症、肾癌和乳癌。19.能够与人类BMP2或BMP4上的表位结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、抗体片段、或抗体模拟物，其中所述表位被包括重链可变区与轻链可变区的抗体识别，该重链可变区与轻链可变区选自a.含有SEQIDNO:33所示^J^酸序列的重链可变区与含有在SEQ1DNO:36中所给出的M財列的轻链可变区；b.含有SEQIDNO:34所示^i^酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:37所示氨基酸序列的轻链可变区；c.含有SEQIDNO:56所示絲酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:64所示M酸序列的轻链可变区；d.含有SEQIDNO:57所示M^jf列的重链可变区与含有SEQIDNO:65所示M酸序列的轻链可变区；e.含有SEQIDNO:58所示M酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:66所示M酸序列的轻链可变区；f.含有SEQIDNO:59所示M酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:67所示M酸序列的轻链可变区；g.含有SEQIDNO:60所示絲酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:68所示^J^酸序列的轻链可变区；h.含有SEQIDNO:61所示^J^酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:69所示^tj^酸序列的轻链可变区；i.含有SEQIDNO:62所示M酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:70所示#^酸序列的轻链可变区；j.含有SEQIDNO:63所示氨基酸序列的重链可变区与含有SEQIDNO:71所示^^酸序列的轻链可变区。20.如权利要求19所述的分离的抗体，其中该抗体选自全抗体、抗体片段、人源化抗体、单链抗体、免疫缀合物、去岩藻糖基化抗体、与双特异性抗体。21.如权利要求19所述的抗体片段，其中该抗体片段选自UniBody、结构域抗体、以及纳米抗体。22.如权利要求19所述的抗体模拟物，其中该模拟物选自Affibody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody、以及Duocalin。23.组合物，其包含如权利要求19所述的分离的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的栽体。24.分离的核酸分子，其编码权利要求19所述的分离的抗体或其抗原结合部分的重链或轻链。25.表达载体，包含如权利要求24所述的核酸分子。26.宿主细胞，包含如权利要求25所述的表达载体。27.杂交瘤，该杂交瘤表达如权利要求1或19的任何一项所述的抗体或其抗原结合部分。28.制备如权利要求1或19的任何一项所述的抗体的方法，包括以下步骤a.用BMP2或BMP4肽对含有人类免疫球蛋白基因的转基因动物进行免疫；b.从所述转基因动物中回收B细胞；c.由所述B细胞制备杂交瘤；d.筛选表达能够与BMP2或BMP4结合的抗体的杂交瘤；并且e.从所述筛选出的杂交瘤中回收所述能够与BMP2或BMP4结合的抗体。29.制备抗-BMP2或抗-BMP4的抗体的方法，包括以下步骤a.用BMP2或BMP4肽对含有人类免疫球蛋白基因的转基因动物进4于免疫；b.从所述转基因动物的B细胞中回收mRNA;c.将所述mRNA转化为cDNA;d.在嗟菌体中表达所述cDNA，从而将所述cDNA编码的抗-BMP2或抗-BMP4抗体呈现在所述谨菌体的表面上；e.筛选呈现抗-BMP2或抗-BMP4抗体的逸菌体；f.从所述篩选出的、编码所述抗-BMP2或抗-BMP4免疫球蛋白的噬菌体中，回收核酸分子；g.在宿主细胞中表达所述回收的核酸分子；并且从所述宿主细胞中回收能够与BMP2或BMP4结合的抗体。全文摘要本发明提供分离的单克隆抗体，特别是以高亲和性与BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR1、和/或BMPR2特异性结合的人单克隆抗体。还提供编码本发明抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞以及表达本发明抗体的方法。还提供免疫缀合物、双特异性分子以及包含本发明抗体和任选地一种或多种其它治疗剂的药物组合物。本发明还提供治疗疾病的方法，所述疾病与由BMP2、BMP4、BMPR1A、BMPR1B、ACTR15、和/或BMPR2介导的异常骨形成和骨化相关。文档编号C07K16/00GK101627055SQ200780040982公开日2010年1月13日申请日期2007年9月5日优先权日2006年9月5日发明者A·贝尔,H·N·勒布朗,K·D·岑斯,M·塞尔比,M·斯里尼瓦桑,R·小西奥利斯,S·辛格,T·W·斯普劳尔,德博拉·L·齐默尔曼申请人:梅达雷克斯公司;德博拉·L·齐默尔曼