专利名称：：一种具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，特别涉及一种具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物及其制备方法。
背景技术：
：斑蝥是我国民间治疗肿瘤的一种中药，临床证明其有效成分斑蝥素(Cantharidin)对多种肿瘤具有疗效，但是有比较大的毒副作用，尤其是对泌尿系统有明显的刺激作用。其结构改造衍生物去甲斑蝥素(Norcantharidin)是我国首先开发的、具有较强抗肿瘤活性、调节免疫作用及独特升白作用的抗肿瘤药物，目前已经在临床上广泛应用，与斑蝥素相比，其对泌尿系统的刺激性较小。最新研究表明，去甲斑蝥素是蛋白磷酸酶(ProteinPhosphatases)PP2A和PP1的强效抑制剂。蛋白磷酸酶能调控多种生理过程，是去甲斑蝥素抗肿瘤机制的一个新的作用靶点，该靶点的发现使(去甲)斑蝥素及其衍生物重新成为抗肿瘤药物研究的热点。2001年，McCluskey研究小组报道了一系列氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的合成及初步生物活性，其对PP1和PP2A的抑制活性均高于去甲斑蝥素，其合成方法是在密封试管中，三乙胺的存在下，甲苯溶剂中，等量的去甲斑蝥素与具有光学活性的氨基酸在20CTC下反应24小时，得到相应氨基酸的去甲斑蝥酰亚胺衍生物，收率约为8~40%。但是，McCluskey研究小组没有详细测定并报道这类化合物的光学活性及绝对构型，并且，其合成方法的实验条件苛刻，氨基酸的手性原子极有可能被消旋化，使其应用受到限制。自然界中的大量实例及现代科学已证实化合物的光学活性与其生物活性有密切的内在联系，具有光学活性的化合物各异构体之间的生物活性存在明显的差异。因此，合成并确定具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物是十分重要的。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种操作简便、产率高、纯度好的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物。本发明的另一目的在于提供一种上述具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法。本发明的目的通过下述技术方案实现本发明提供的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物，具有下述式(I)结构上述具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，包括下述步骤(1)将L-氨基酸与去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合体系，加热回流，得到含产物的反应液；(2)将上述反应液进行浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入有机溶剂进行析晶，静置，冷却，得到具有光学活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物。步骤1中，所述L-氨基酸为L-组氨酸、L-精氨酸或L-赖氨酸。步骤1中，所述醇可以是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇或叔丁醇；优选为乙醇。步骤1中，所述醇和水的混合体系的体积分数为50%~100%;优选体积分数为95%。歩骤1中，所述L-氨基酸与去甲斑蝥素的摩尔比为1:11.5;优选摩尔比为1:1.1。步骤2中，所述有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨；优选有机溶剂为丙酮。反应过程如式II所示其中，R为或—(，/V或—(CH2)4NH2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>本发明与现有技术相比具有如下优点和效果(1)本发明提供的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物，其对一些人体癌细胞株具有良好的抑制活性。(2)本发明制备方法条件简便易行，产物的收率高、纯度好。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1:L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将33mmol的去甲斑蝥素与30mmol的L-组氨酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加热回流48小时，得到反应液；然后将该反应液浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入适量丙酮(丙酮的用量加至使微沸的反应液达到饱和状态)，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓縮、重结晶；多次重结晶共得到8.88g白色针状晶体，即L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为97.0%。M.p.280。C(分解温度)。比旋光度[a]D20=-75.8(c=0.02507，H2〇)。(即2CTC以钠光为光源，以水为溶剂，样品的比旋光度是左旋75.8。。)IR(KBr)v:3469(N國H)，3160，3120，3006(C=C-H)，2965，2883(-CH2-)，1781(酰亚胺，vasymC=〇)，1708(酰亚胺，vsymC=0)，1637(羧酸根，vasymC=0)，1400(羧酸根,vsymC=0)，1189(C-0-C)cm—1。FAB-MS:m/z=306，[M+H+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):156-1.58(m'4H)，2.96(d'1H'J=7.2Hz)，3.02(d，1H，J=7.2Hz),3.09(dd，1H，J=15.0，10.4Hz)，3.22(dd，1H，J=15.0，4.8Hz)，4.58(s，1H)，4.64(dd，1H，J=10.4，4.8Hz)，4.67(s，1H)，5.52(br.)，6.74(s，1H)，7.64(s,1H)。元素分析，理论{|;:C，55.08;H，4.95;N，13.76;观U定^(直C，54.47;H，5.06;N，13.93(分子式C14H15N305)。实施例2:L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将45mmol的去甲斑蝥素与30mmol的L-组氮酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加热回流48小时，得到反应溶液；然后将该反应溶液浓缩，加热反应液至微沸状态，然后加入适量四氢呋喃，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓縮、重结晶；多次重结晶共得到8.24g白色针状晶体，即L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为90.1%。实施例3:L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将40mmol的去甲斑蝥素与30mmol的L-组氨酸溶于200ml95%异丙醇水溶液中，加热回流48小时，得到反应物的溶液；然后将该反应溶液浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入适量丙酮，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓縮、重结晶；多次重结晶共得到5.95g白色针状晶体，即L-组氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为65.0%。实施例4:L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将33mmol的去甲斑蝥素与30mmol的L-精氨酸溶于200ml无水乙醇中，加热回流48小时，得到反应物的溶液；然后将该反应溶液浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入丙酮至饱和状态，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓縮、重结晶；多次重结晶共得到9.43g白色针状晶体，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为97.0%。分解点260°C。FAB國MS:m/z=325，[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):1.04，(t,3H，J=6.8Hz),1.19-1.21'(m,2H),1.58-1.61,(m，4H),1.80-1.90，(m,1H)，2.15-2.30，(m，1H)'2.88-2.93,(m，2H)'3.01画3.10,(m,2H),3.39-3.45,(q，2H),4.06-4.10,(dd，1H),4.38，(s，1H),4.65，(s，2H),7,49'(s，1H),7.75,(s,2H)，9.13，(s，1H)。IR(KBr)v:3367(N國H)，3176，(C=C-H)，2964，2879(-CH2-)，1770，(酰亚胺，vasymC=0)，1697(酰亚胺，vsymC=0)，1452(羧酸根,vsymC=0)，"33(C-0-C)cm-1。HRFAB-MS，理论值325.1506，[M+H]+;测定值325.1503，[M+H]+(分子式。141"12。1\1405)。实施例5:L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将45mmo1的去甲斑蝥素与30mmol的L-精氨酸于200ml甲醇中，加热回流48小时，得到反应物的溶液；然后将该反应溶液浓缩，加热反应液至微沸状态，然后加入适量四氢呋喃，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓缩、重结晶；多次重结晶共得到8.46g白色针状晶体，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为87.0%。实施例6:L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺的合成将40mmol的去甲斑蝥素与30mmol的L-精氨酸于250ml80%异丙醇水溶液中，加热回流48小时，得到反应物的溶液；然后将该反应溶液浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入适量丙酮，静置，冷却，重结晶；结晶母液可继续浓縮、重结晶；多次重结晶共得到6.12g白色针状晶体，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亚胺，收率为63.0%。测试例1:MTT法评价L-氨基酸去甲斑蝥酰亚胺的抗肿瘤活性取对数生长期的肿瘤细胞，接种于96孔板中，37°C、5。/。C02孵箱中培养12h后，加入不同浓度的样品。培养72h，离心弃上清，加入MTT溶液(5mg/mL)，放置37°C、5%。02孵箱中继续培养。4h后离心弃上清，每孔加入100^iLDMSO，振荡。溶解15min后，用酶标仪490nm测定OD值，并用SPSS法计算IC5。值，结果见表1。表l:对人体癌细胞株的生长抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>aA549(人肺腺癌细胞)，CNE-1(高分化人鼻咽癌细胞)，CNE-2(低分化人鼻咽癌细胞)，MGC-803(人胃癌细胞)，H印G-2(人肝癌细胞)，KB-3-1(人表皮癌细胞)，HL-60(白血病细胞)。bIC5C)，半数抑制浓度，药物作用72小时后由MTT法测得。如表1所示，本发明的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物在生长抑制活性试验中对一些人体癌细胞株显示了良好的抑制活性。测试例2对照实验在相同的实验条件下，即加热L-组氨酸的95%EtOH/H2〇溶液，回流48小时；然后将加热回流的溶液浓縮，并加热至微沸状态，然后加入丙酮至饱和状态，静置，冷却，重结晶。比旋光度数据如下原料L-组氨酸[a]D2Q=-37.4°(文献值-39.4°)。对照实验L-组氨酸晶体[a]D2Q=-38.4°。可见，对照实验前后的氨基酸旋光度为一常数，即实验条件并未改变氨基酸的光学活性，即本发明制备的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物会保持相应的氨基酸光学活性。权利要求1、一种具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物，具有下述结构式id="icf0001"file="S2008100277714C00011.gif"wi="53"he="34"top="50"left="75"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R为id="icf0002"file="S2008100277714C00012.gif"wi="27"he="17"top="93"left="66"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或id="icf0003"file="S2008100277714C00013.gif"wi="34"he="18"top="89"left="102"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或-(CH2)4NH22、一种权利要求1所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于包括下述步骤(1)将L-氨基酸与去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合体系，加热回流，得到含产物的反应液；(2)将上述反应液进行浓縮，加热反应液至微沸状态，然后加入有机溶剂进行析晶，静置，冷却，得到具有光学活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物。3、根据权利要求2所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤1中，所述L-氨基酸为L-组氨酸、L-精氨酸或L-赖氨酸。4、根据权利要求2所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤1中，所述醇是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇或叔丁醇。5、根据权利要求2所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤1中，所述醇和水的混合体系的体积分数为50%~100%。6、根据权利要求2所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤1中，所述L-氨基酸与去甲斑蝥素的摩尔比为1:11.5。7、根据权利要求2所述的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤2中，所述有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨。全文摘要本发明公开了一种具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物及其制备方法，将L-氨基酸与去甲斑蝥素溶于醇或醇/水体系，加热回流，得到反应液，然后浓缩上述反应液进行，并加入有机溶剂析晶，静置冷却，得到具有光学活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物。本发明提供的具有光学活性的氨基酸去甲斑蝥酰亚胺衍生物，对人体癌细胞株具有良好的抑制活性；该制备方法简便易行，产物的收率高、纯度好。文档编号C07D491/18GK101270122SQ20081002777公开日2008年9月24日申请日期2008年4月29日优先权日2008年4月29日发明者冼励坚,吴明玮,李永强,永邹,陈大峰申请人:中国科学院广州化学研究所