人工重组的六联体蛋白a及其构建方法与用途的制作方法

文档序号:3541460阅读:209来源:国知局
专利名称:人工重组的六联体蛋白a及其构建方法与用途的制作方法
技术领域
本发明属于基因工程技术领域,涉及一种人工重组的六联体蛋白A以及其 构建方法与用途。
背景技术
蛋白A的发现从一开始就与IgG (免疫球蛋白G)相关联,早在1940年, Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中,含有一种在双向扩散试验中能与正常人 血清形成沉淀的物质。Jensen ( 1959)也发现类似现象,并将其命名为A抗原。 直到1963年Lofkvist等分离了该抗原,并证明它是一种蛋白质。为与糖相区别, Grov ( 1960)将其命名为葡萄球菌蛋白A,简称SPA或蛋白A。 1978年,有研 究者将加热灭活并经福尔马林固定的金黄色葡萄球菌用于一种癌症的治疗,显 示出一定的疗效,这是世界上第一次利用蛋白A的抗体吸附性治疗相关疾病的 报道。Uhlen等在1984年阐明了蛋白A的全基因序列和相应的氨基酸序列。2003 年L.Yang等应用表面张力探针证明每个蛋白A分子可结合两个IgG分子。SPA 基因的核苷酸序列及其编码蛋白质的氨基酸序列已有报道(Uhl6n M, Guss B, Nilsson B, Gatenbeck S, Philipson L, Lindberg M. Complete sequence of the staphylococcal gene encoding protein A. A gene evolved through multiple duplications. J Biol Chem. 1984 Feb 10;259(3): 1695-702.)。
蛋白A的基因编码序列由1464个碱基组成(若加上氨基端信号肽序列则 为1572个碱基),共编码488个氨基酸,分子量约42KD。整个SPA分子包含 六个结构域E、 D、 A、 B、 C和X (从氨基端至羧基端),其中,E、 D、 A、 B、 C这五个结构域均具备结合IgG的能力。X结构域的作用是将蛋白A嵌合 入金黄色葡萄球菌的细胞壁。
蛋白A主要被应用于科研领域的抗体分离和纯化,其产品来源主要是从金 黄色葡萄球菌中提纯而得到的天然蛋白A,例如,美国Sigma公司生产的天然
蛋白A (进口 SPA)。由于金黄色葡萄球菌是致病菌,且蛋白A在该菌体的含 量并不高(约占细胞壁蛋白成分的6.7%),因此,从发酵培养的金黄色葡萄球 菌中提纯蛋白A的方法风险较大且难以满足大规模生产的需要。近年来,人们 开始转向采用基因工程法来生产蛋白A,寻求既能避免致病菌的危险,又能大 规模生产蛋白A的可行而有效的途径。
名称为"重组蛋白A基因及其表达产物的制备与应用"的中国发明专利申请 (申请号03105360.2,申请日2003年2月26日,公开号CN1432578,公 开日2003年7月30日)以及名称为"重组蛋白A基因及其表达产物的制备与 应用"的中国发明专利申请(申请号03149982.1,申请日2003年8月1日,
发明者余波光, 张旭锋, 涛 彭, 陈校园 申请人:广州康盛生物科技有限公司
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