专利名称：一种提取橙皮苷与柚皮苷的方法
技术领域：
本发明属分析化学领域，涉及提取橙皮苷与柚皮苷的方法，具体涉及一种利 用微波辅助萃取技术提取橙皮苷与柚皮苷的方法。
技术背景橙皮苷(Hesperidin)是从枳实中提取的一种原料药，属维生素类药，可 以降低毛细血管的脆性及通透性，用于高血压病及毛细血管出血性疾患的辅助 治疗，对毛细血管抵抗力降低有改善作用(增强维生素C的作用)，具有抗炎、 抗病毒作用，是治疗高血压和心肌梗塞的药物，医药工业中用作制药的原料， 是中成药脉通的主要组成之一；柚皮苷(Naringin)是一种双氢黄酮类化合物。 柚皮苷显示多种生物学活性和药理作用，具有抗菌、抗炎、抗癌、解痉和利胆 作用，也可用作食品中的香料添加剂。流行病学研究表明经常食用柚类能起到 良好—的保护血管、预防冠心病的作用。已知橙皮苷存在于多种植物中，在芸香科柑桔属植物的果皮中(中药陈皮) 含量尤其丰富，具有理气健脾、祛湿化痰的功效，中医常用于治疗胸脘胀满、 食少吐泻、咳嗽痰多等病症；柚皮苷主要存在于芸香科植物葡萄柚、从柚、胡 柚的果实中，也是中草药骨碎补、枳实、枳壳、橘红的主要有效成分。目前市 场上果汁种类多达几百种，其中大部分为橙汁类饮品。本领域判断橙汁饮品优 劣的主要标准之一即其鲜橙汁的含量，判断柚子汁饮品优劣的主要标准之一即 其鲜柚汁的含量。因此，橙皮苷与柚皮苷的提取分析可用于评价果汁、新鲜橙 柚类水果及中药的质量。微波辅助萃取(MAE)是以微波能来提取植物中的可溶性材料的技术，主要 在有机溶剂中进行。微波具有很强的穿透力，可以在物料内外同时均匀、迅速 地加热能使细胞破裂，胞内有效成分自由流出，传递到周围介质被溶解。与传 统提取技术相比，MAE具有提取率高、提取时间短、样品用量少等优点。目前，已有报道的用于提取橙皮苷和柚皮苷的方法仅为有机溶剂提取法或 超声提取法，所述方法存在如下缺陷有机溶剂用量大、耗时长、提取效率低，单纯使用所述方法难以将果汁、水果或中药中的橙皮苷与柚皮苷提取完全，不 利于进一步的含量分析与测定。因此本领域需要建立一个快速，简单，高效、 可靠的提取方法，便于对不同介质中橙皮苷与柚皮苷的含量进行分离分析。 发明内容本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种橙皮苷与柚皮苷的提取方 法，涉及从固态或半固态或液态待测样品中提取橙皮苷与柚皮苷的方法。尤其是从果fK—新鲜水果的果皮、果肉和中药中提取橙皮苷与柚皮苷的方法。本方法采用微波辅助萃取技术提取果汁、新鲜水果的果皮、果肉或中药中的橙皮苷与柚皮苷，简便，快速，样品用量少，萃取效率高，重现性好，回收率高。 本方法与高效液相色谱结合，可准确测定橙皮苷与柚皮苷的含量，从一定角度评价果汁、水果和中药的质量。本发明所述的橙皮苷与柚皮苷具有图i的结构式。本发明的目的通过下述技术方案实现将样品用粉碎机搅碎，定量取样品，放入反应器中，加入提取溶剂后，将反 应器放置于微波辅助萃取装置中，选定提取溶剂、微波功率和萃取时间后，利用MAE—i取样品中的橙皮苷和柚皮苷，萃取后离心，取出上清液。本发明方法所述的提取溶剂是水与有机溶剂组成的混合溶剂，其中水有机 溶剂的比例范围为80: 20~20: 80。所述的有机溶剂选自二甲亚砜、甲醇、乙醇、或乙腈。本发明方法根据所测品的不同，采用相应的提取溶剂的用量(体积重量比或体积体积比)当样品为固态或半固态，如中药、水果果皮或果肉时，提取溶剂的用量(mL)是样品量(g)的5-20倍；当样品为液态，如果汁时，提取溶剂的用量 (mL)是样品量(mL)的2-10倍。本发明所述的微波辅助萃取(MAE)提取效率的影响因素有提取溶剂的种 类、岳，只，微波功率及微波时间。本发明上述提取橙皮苷与柚皮苷成分的方法中，使用的微波功率为100 1000瓦。本发明上述提取橙皮苷与柚皮苷成分的方法中，使用的萃取时间为1 10分钟。本发明通过下述试验进行影响因素的筛选确定，1) 提取溶剂种类的选择由于水是微波萃取中最佳的微波吸收剂，因此在提取溶剂种类优化的过程 中，本发明选用有机溶剂与水的混合溶剂。本方法分别选用了50%的甲醇水溶液， 40%、 50%、 55%、 60。/。的DMSO水溶液作为提取溶剂，在其他实验条件相同的 情况下，提取并分析样品中橙皮苷的含量，结果表明，DMSO水溶液作为溶剂时 的提敢—率远远大于甲醇水溶液，其中，50。/。的DMSO水溶液提取率优于40。/。、 55% 和60% (图2)，本发明的提取溶剂优选50。/。DMSO水溶液。2) 提取溶剂量的选择提取中药中橙皮苷，称取样品量约lg置于反应器，分别使用5ml， 10ml， 20ml 的50。/。DMSO水溶液进行微波提取，结果表明，5ml与10ml的提取溶剂的提取率 无明显区别，其中采用5ml溶剂时，出现部分样品变焦结块；20ml的溶剂进行微 波时会出现溶液冲出冷凝管的现象，优选提取溶剂量为10ml，为样品量的10倍；提取果肉和果皮中橙皮苷与柚皮苷，称取约lg果肉或果皮置于反应器，结果 表明，优选的提取溶剂的量为5mL，是样品量的5倍；提取果汁中橙皮苷与柚皮苷，量取lmL样品置于反应器，结果表明，优选的 提取溶剂的量为5mL，是样品量的5倍。3) 微波功率与微波时间的选择上述提取中药中橙皮苷的结果表明，优选的提取条件是提取功率400W， 提取时间3分钟；上述提取果汁、果肉或果皮中橙皮苷与柚皮苷的结果表明，优选的提取条件是提取功率500W，提取时间3分钟；分别比较了微波辅助萃取和超声处理提取果汁和中药样品后，用HPLC测定 的橙皮苷的含量，结果表明，通过微波辅助萃取所提取得到橙皮苷的含量远远高 于超声提取法(图3)，证明微波萃取提取率高，且所需时间短，优势明显。本发明提取橙皮苷与柚皮苷成分的方法简便、准确、可靠，快速，样品用量 少，萃取效率高，萃取时间短，重现性好，回收率高。本法与高效液相色谱结合， 可用于准确测定果汁、水果和中药中橙皮苷与柚皮苷的含量，从一定角度评价它们的质量。
图1为橙皮苷与柚皮苷的结构式。图2为不同提取溶剂条件下，橙皮苷的提取量差异图，其中，50%的DMSO水溶液作为提取溶剂，其提取率优于40%、 55%和60%。图3为超声提取法与微波萃取法提取果汁中橙皮苷含量的比较图，其中，通过微波辅助萃取所提取得到橙皮苷的含量远远高于超声提取法。图4为不同品牌果汁中橙皮苷的含量差异图，其—中，农夫果园牌果汁中橙皮苷的含量最高，约为0.4mg/ml，说明其原料 鲜橙汁的含量最高。图5为不同品牌果汁中柚皮苷的含量差异图，其中，味全牌柚子汁中柚皮苷的含量高于美丽果牌，约为0.065mg/ml，其 原料鲜柚汁的含量更高。
具体实施方式
实施例1MAE-HPLC分析不同品牌橙汁中橙皮苷的含量 仪器与材料仪器岛津CL-10型液相色谱仪，包括SPD-10A紫外检测器以及CTO-10A 柱温箱，2(HiL手动进样系统，色谱工作站，LWMC-205型可调功率微波化学反 应器，Millipore Direct-Q纯净水发生器。材料各品牌橙汁饮品。甲醇(Merck，色谱纯)，三氟乙酸和二甲亚砜均 为分析纯，去离子纯水由Millipore Direct-Q纯净水发生器制得，橙皮苷标准品来 源于中国药品生物制品检定所。样品前处理各取lml果汁于50ml圆底烧瓶中，加入5ml50。/。DMSO水溶液，振摇，在 功率为500W的条件下，微波萃取3分钟后，离心取上清液过滤稀释后进样，得 测定结果，显示农夫果园牌果汁中橙皮苷的含量最高，约为0.4mg/ml，说明 其原料鲜橙汁的含量最高(图4)。加样回收率精密吸取果汁lml，分别精密加入一定浓度的质控标准溶液，然后按照样品 制备方法进行微波萃取，取滤液稀释后进样进行HPLC分析，平均回收率分别为 (99.81 ±1. 56)o/。 (n=3)。重复性实验-精密吸取果汁lml，按照样品制备方法进行微波萃取，取滤液稀释后进样进 行HPLC分析，重复测定三次，RSD为3. 15%。实施例2 MAE-HPLC分析西柚汁中橙皮苷与柚皮苷的含量 仪器与材料仪器岛津CL-10型液相色谱仪，包括SPD-10A紫外检测器以及CTO-10A 柱温箱，20pL手动进样系统，色谱工作站，LWMC-205型可调功率微波化学反 应器，Millipore Direct-Q纯净水发生器。材料2种品牌的西柚橙汁混合饮品。甲醇(Merck，色谱纯)，三氟乙酸和 二甲亚砜均为分析纯，去离子纯水由MilliporeDirect-Q纯净水发生器制得，橙皮 苷标准品来源于中国药品生物制品检定所。样品前处理各取lml果汁于50ml圆底烧瓶中，加入5ml 50%DMSO水溶液，振摇。在 功率为500W的条件下，微波萃取3分钟后，离心取上清液过滤稀释后进样，得 测定结果，显示，味全牌柚子汁中柚皮苷的含量高于美丽果牌，约为0.065mg/ml， 其原料鲜柚汁的含量更高(图5)。实施例3 MAE分析中药材陈皮中橙皮苷含量 仪器与材料仪器岛津CL-10型液相色谱仪，包括SPD-10A紫外检测器以及CTO-10A 柱温箱，20pL手动进样系统，色谱工作站，LWMC-205型可调功率微波化学反 应器，MilliporeDirect-Q纯净水发生器。材料中药陈皮(出产地上海)，甲醇(Merck，色谱纯)，三氟乙酸和二 甲亚砜均为分析纯，去离子纯水由Millipore Direct-Q纯净水发生器制得，橙皮苷 标准品来源于中国药品生物制品检定所(纯度>99%)。样品前处理精密称取陈皮粉末约lg，置50ml圆底烧瓶中，加10ml50。/。DMSO水溶液，微 波辅助萃取(功率400W) 3min，放冷，高速离心(10000rpm)10min，取上清液过滤， 稀释后取2(Hil进样。加样回收率精密称取陈皮样品约1.00g,分别精密加入100pL浓度为14ng/ml质控标准溶 液，然后按照样品制备方法进行微波萃取，取滤液稀释后进样进行HPLC分析， 平均回收率分别为(101.68±0. 21)%(n=3)。重复性和样品测定结果精密称取陈皮样品约1.00g，按照样品制备方法进行微波萃取，取滤液稀释 后进袖进行HPLC分析，重复测定三次，中药陈皮中橙皮苷的含量为(54.10± 1.17)mg/g， RSD为2. 16%。与文献报道的中药陈皮中橙皮苷含量相近(文献中为 4%左右)，结果可靠。
权利要求
1. 一种提取橙皮苷与柚皮苷的方法，其特征在于通过下述步骤1)取待测样品，加入提取溶剂，所述的提取溶剂是水与有机溶剂组成的混合溶剂，其中，水与有机溶剂的比例为80∶20～20∶80；2)放置于微波辅助萃取装置中进行微波萃取，其中，微波功率为100～1000瓦，萃取时间为1～10分钟；3)提取后离心，取出上清液。
2、 根据权利要求1所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征在于所述步骤l的有机溶剂选自二甲亚砜、甲醇、乙醇或乙腈。
3、 根据权利要求1所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征是所述的提 取溶剂是50%的二甲亚砜水溶液。
4、 根据权利要求1所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征是所述待测 样品为固态或半固态或液态，所述固态或半固态样品的提取溶剂用量为样品量的 5-20倍7所述液态样品的提取溶剂的用量为样品量)的2-10倍。
5、 根据权利要求4所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征是所述固态 或半固态样品选自中药、水果果皮或果肉；所述液态样品选自果汁。
6、 根据权利要求5所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征是所述中药 样品的提取条件是提取功率400W，提取时间3分钟。
7、 根据权利要求5所述的橙皮苷与柚皮苷的提取方法，其特征在于所述 果汁、果肉和果皮的提取条件是提取功率500W，提取时间3分钟。
全文摘要
本发明属分析化学领域，涉及一种提取化合物橙皮苷与柚皮苷的方法。该方法采用微波辅助萃取技术(MAE)，定量取样品，以水与有机溶剂的混合溶剂为提取溶剂，置于微波辅助萃取装置中，选定提取溶剂、微波功率和萃取时间后，利用MAE提取样品中的橙皮苷和柚皮苷，萃取后离心，取上清液稀释后用高效液相色谱分析测定橙皮苷与柚皮苷的含量。本方法简便，快速，样品用量少，萃取效率高，重现性好，回收率高。本法与高效液相色谱结合，可用于准确测定果汁、新鲜水果和中药中橙皮苷与柚皮苷的含量，并评价其质量。
文档编号C07H17/00GK101265283SQ200810036498
公开日2008年9月17日 申请日期2008年4月22日 优先权日2008年4月22日
发明者干志彬, 李晓雯, 段更利, 郁颖佳 申请人:复旦大学