抗肝炎药物及其制备和用途的制作方法

文档序号:3562729阅读:264来源:国知局
专利名称:抗肝炎药物及其制备和用途的制作方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体地说是提供抗肝炎的治疗或辅助治疗药物——甘草酸衍生物及其制备和用途。
背景技术
目前,公开的文献仅报道了 18 a-甘草酸二铵或18 e-甘草酸二铵(Di ammoniumGlycyrrhizinate, C^HeAOw,分子量857),到目前为止,国内外尚没有公开的文献报道能够用于治疗肝炎、肝硬化、肝损害和肝功能的药物,即甘草酸衍生物——甘草酸二铵结晶水合物[(:4晶^2016 nH20, n=0. 5 4. O]及其制备方法和用途。

发明内容
本发明所涉及的是抗肝炎药物及其制备和用途,进一步说,是涉及抗肝炎、肝硬化、肝损害和肝功能异常肾综合症出血热、过敏性紫癜、寻常性银屑病及湿疹皮炎等的药物——甘草酸衍生物及其制备和用途,即18ct-甘草酸二铵和18e-甘草酸二铵水合物或18ci-甘草酸二铵结晶水合物和18p-甘草酸二铵结晶水合物的混合体[C42H68N2016 nH20, n=0. 5 4. 0, n可以是0.5、 1.0、 1.4, 1.5、 2、 2.23, 2.25、 2.28, 2.5、3.0、 3.5、 4或其之间的数字]及其制备方法和用途。
本发明获得的含有结晶水的甘草酸二铵包括18 a -甘草酸二铵结晶水合物或l邻-甘草酸二铵结晶水合物以及18 a -甘草酸二铵结晶水合物和l邻-甘草酸二铵结晶水合物的混合体。令人惊奇的是,不含结晶水的甘草酸二铵引湿性远高于含有结晶水的甘草酸二铵,含有结晶水的甘草酸二铵水合物比不含结晶水的更能稳定的存在,便于储存和运输,并在室温下具有良好的水溶性,易于制成水溶性的制剂。此外,无水物的潮解使得在处理时要隔绝空气防止粘连等,而水合物具有良好的滑动性,从而改善制剂的可操作性。
令人^C奇的是,特征性的,本发明的水合物的热分析(TG-DTG或者TG-DTA)图谱可以看出失重平台下具有强烈的、对应的吸热峰,热分析图谱显示出18a-甘草酸二铵1.5水合物、18 a -甘草酸二铵2水合物(C42HMN2016'2H2O)、 18 a -甘草酸二铵2.5水合物(C42H68N2016'2.5H2O)、 18 a-甘草酸二铵3水合物(C42H68N2016.1.5H2O)、 18 a -甘草酸二铵4水合物等,用卡尔费休法测定水分结果与热分析结果相吻合。本发明的同一构型的结晶水合物在同一的HPLC条件下具有相同的色谱行为,将本发明的实施例的水合物溶解后,两两或多个化合物溶液混合后进样,在本文本采用的检测条件下,在可检测的浓度范围内,在HPLC图谱上主峰均显示为单峰。
本发明的甘草酸二铵水合物,为白色或类白色结晶性粉末,能稳定存储。将上述甘草酸二铵水合物和甘草酸二铵无水物样品分别密闭与西林瓶中进行加速稳定性试验{色谱条件色谱柱C18(250 mrnX4.6 ram, 5wm);流动相0.02moL/L乙酸铵(用磷酸调pH值为3. 0)—乙腈(55: 45);流速lml/min;温度室温;检测波长252nm(18a -甘草酸二铵水合物)或257nm(18(3-甘草酸二铵水合物)},出人意料地发现,本发明的甘草酸二铵水合^^;购含量和有关物质没有明显变化,甘草酸二铵无水物加速试验6个月与0月相比(4CTC,朋75%下),有关物质增加的高于甘草酸二铵水合物。按中国药酸二铵无水物和本发明的水合物约5g,置于干燥恒重
的表面皿中,精密称重,25°C、相对湿度为75%,分别于试验0h和48h取样,计算引湿增重的百分率,结果显示,无水物引湿性比本发明的水合物都高得多,说明本发明的甘草酸二铵水合物具有更好的存储稳定性。结果见表1 3。
表1本友明18a -甘草酸二铵水合物加速稳定性试验结果
取样时间(月)o月6月
样品性状含量(%)性状含量(%)18。i -甘草酸二铵1. 5水合物类白色粉末98. 1类白色粉末98.218。 -甘草酸二铵2水合物类白色粉末98.2类白色粉末98.318。!-甘草酸二铵2. 5水合物类白色粉末98.5类白色粉末98. 318。i -甘草酸二铵3水合物类白色粉末98. 3类白色粉末98.218。 -甘草酸二铵4水合物类白色粉末98.2类白色粉末98.3
表2.本发明1邻-甘草酸二铵水合物加速稳定性试验结果
取样时间(月)o月6月
样品性状含量ft)性状含量(%)
18|3-甘草酸二铵4水合物类白色粉末98. 3类白色粉末98.2
18p-甘草酸二铵3水合物类白色粉末98. 1类白色粉末98.0
l邻-甘草酸二铵2. 5水合物类白色粉末98.4类白色粉末98.6
l邻-甘草酸二铵2水合物类白色粉末98.5类白色粉末98.3
18p-甘草酸二铵1. 5水合物类白色粉末98. 1类白色粉末98.2
表3.引湿试验结果
取样时间(48小时)
18a-甘草酸二铵l水合物18a-甘草酸二铵1.5水合物18 a -甘草酸二铵2水合物18 a -甘草酸二铵3水合物18a-甘草酸二铵4水合物l邻-甘草酸二铵4水合物18p-甘草酸二铵2水合物18p-甘草酸二铵1. 5水合物不含结晶水的18 a -甘草酸二铵无水物不含结晶水的l邻-甘草酸二铵无水物
——^2尘且祖些二,重%6. 07
4. 63
3. 75
1. 49
0.05
0.07
3.89
4.85
8.12
8.25
甘草酸衍生物——甘草酸二铵水合物的制备包括如下方法
方法A:将18 a -甘草酸或18 0 -甘草酸或18 a -甘草酸单铵或18 e -甘草酸单铵于反应容器中,加水,搅拌下通氨气或加氨水,使溶解,使pH值在6. 5. 0-8. 5之间,pH值优选在6.0-7.2之间,搅拌反应0.2-10小时,用酸及其溶液包括冰醋酸,盐酸、硫酸溶液等控制反应液的pH值在5. 0-6. 2之间,加入低分子醇Cl-C5如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲垸、二氯乙垸、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环垸烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种,进行结晶,过滤,干燥,得18a-甘草酸二铵结晶水合物或18P-甘草酸二铵结晶水合物;用水、低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链垸烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己垸,芳香烃,如苯,甲苯中的的一种或几种重结晶,过滤,干燥,得18ci-甘草酸二铵结晶水合物或18e-甘草酸二铵结晶水合物;
或者方法B:将18 a -甘草酸或18 e -甘草酸或18 a -甘草酸单铵或18 P -甘草酸单铵与碳酸氢铵在水溶液中,搅拌,反应0.2-10小时,加入低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯的的一种或几种进行结晶;或用水、低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链垸烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种重结晶,白色晶体析出,过滤,干燥,得18a-甘草酸二铵结晶水合物或18 3 -甘草酸二铵结晶水合物;
18ct-甘草酸或18P-甘草酸与碳酸氢铵反应摩尔比一般为1: 1.9~2.2; 18a-甘草酸单铵或18e-甘草酸单铵与碳酸氢铵的反应摩尔比一般为1: 0.9~1.2;
或者方法C:分别将甘草酸三铵盐与氢氧化钠或氢氧化钾等碱溶液,升温回流7-8小时后,降至室温后,分别用酸调PHM-2,加入正丁醇,搅拌,静置,分去水层,有机层用PH=l-2的酸水溶液洗涤,水洗,洗后的有机层通氨气,使pH值在6.5-8.5之间,pH值优选在6. 0-7. 2之间,再用酸如冰醋酸,盐酸、硫酸溶液等回调pH在5.0,6.2之间,分离水层,有机层减压蒸去正丁醇,得固体;将固体加到乙醇和水的溶液中,加热回流,活性炭脱色,过滤,加异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙垸、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链垸烃(C5-C8),环垸烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种,冷却,静置析晶,过滤,干燥,即得;或将所得再用水、低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代卤代烃(Cl-C6),包括二氯甲垸、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环垸烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种重结晶,过滤,干燥,得到高纯度的18a-甘草酸二铵结晶水合物;
或者方法D:将方法A或者方法B或者方法C结晶后未干燥的湿品或其方法A
或B或者方法C的最终产物,加水溶解,将其冷冻到一70 一30°C,真空冷冻干燥,得甘草酸二铵水合物。
甘草酸二铵水合物的结晶或重结晶溶剂选自水、低分子醇Cl-C5,包括甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,包括丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲垸、二氯乙垸、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链垸烃(C5-C8),环垸烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种;甘草酸二铵水合物的结晶或重结晶溶剂,优选水、乙醇、异丙醇,丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、苯中的一种或几种。更优选水、乙醇、异丙醇,丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚中的一种或几种。
本发明的甘草酸二铵水合物用途本发明的甘草酸二铵水合物用于制备注射用冻
6干粉针制剂、或者无菌分装粉针制剂、或者大输液制剂、或者小水针注射剂,经肠道给药制剂,包括片剂、胶囊、颗粒剂、溶液剂、经皮肤给药的软膏和凝胶等。适用于制备用于治疗或预防肝炎的药物或健康食品中的应用。
用于制备经肠道给药制剂的片剂、胶囊、颗粒剂,其中可含有药学上可接受的填充剂,如淀粉、变性淀粉、乳糖、微晶纤维素、环糊精、山梨醇、甘露醇、磷酸钙、氨基酸等;药学上可接受的崩解剂,如淀粉、变性淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯垸酮、低取代羟丙基纤维素、表面活性剂;药学上可接受的润湿剂和粘合剂,如胶化淀粉、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其盐;药学上可接受的润滑剂和助流剂,如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇4000—6000、滑石粉、微粉硅胶、十二垸基硫酸镁等;药学上可接受的甜味剂和香精,如阿斯巴甜、甜蜜素、糖精钠、三氯蔗糖、食用香精等。
本发明的结晶水合物不同于无水物的潮解使得在处理时要隔绝空气防止粘连等,而结晶水合物具有良好的滑动性,从而改善制剂的可操作性;并使制备的固体制剂具
有良好的溶出性能,使得其容易被吸收进入血液循环,改善生物利用度,并有利于快速发挥其作用。
甘i酸二铵水合物较易溶解于水,所以其制备的凝胶剂具有良好的释放性能,使得其容易被吸收进入血液循环,提高生物利用度,并有利于快速发挥其抗炎、抗过敏等作用。
甘草酸二铵水合物的软膏或凝胶制备将甘草酸二铵水合物与50 95%基质混匀,基质可以是乙醇、甘油、三乙醇胺、甘油明胶、聚乙二醇200 8000、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯垸酮、半合成硬脂肪酸脂、水溶性单甘酯、卡波姆系列(931、 934、 940、 974、AA-1、 1342等)、吐温60—80,凡士林;软膏或凝胶中可含有药学上可接收的防腐剂和稳定剂,凝胶的制备时可分别将卡波姆用水分散,加入甘油、聚乙二醇200 8000、加热,搅拌混合,加处方量的甘草酸二铵水合物、搅拌、用药学上可接收的无机碱或者有机碱调节pH二4.5 7.5左右,加水至全量、搅拌至匀、分装,即得。
甘草酸二铵水合物可作为添加剂用于制备预防或治疗肝炎等疾病的健康食品。
甘草酸二铵水合物针剂,其制备方法为甘草酸二铵水合物无菌分装粉针制剂可按照常规方法制备。
冻干粉针制剂的制备方法为取甘草酸二铵水合物,可以加药学上可接受的冻干支持剂或辅形剂,加注射用水搅拌使溶解,若需要,可用药学上可接受的酸碱调节pH为4.5 7.5,加活性碳0.005 0.5% (W/V)搅拌15 45min,过滤,补水,无菌过滤,按20 600mg/瓶(以主药计)分装,冷冻干燥,压塞,得成品。
甘草酸二铵水合物小容量注射液及其制备工艺甘草酸二铵水合物加注射用水和药学上可接受的附加剂,例如药学上可接受的pH调节剂、药学上可接受的抗氧剂、惰性气体,过滤、除菌制成灭菌小容量注射液,其pH值在4.5 7.5之间。
其药学上可接受的pH调节剂可以是药学上可接受的无机酸或有机酸、无机碱或有机碱,也可以是广义的路易斯酸或碱,可以含有一种或者几种,可以是盐酸、磷酸、丙酸、醋酸及醋酸盐、如醋酸钠等,乳酸以及乳酸药用盐、枸橼酸药用盐、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸盐、酒石酸及其药用盐、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、三羟基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、2-氨基-2-(羟甲基)1, 3-丙二醇胺、1, 2-己二胺、N-甲基葡萄胺、二异丙胺以及它们的盐,多羟基羧酸及药用盐,如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、苹果酸、苏糖酸、葡庚糖酸、氨基酸及氨基酸盐等中的一种或者几种。
其药学上可接受的抗氧剂和稳定剂可以是亚硫酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、焦亚
7硫酸盐、连二亚硫酸盐、硫代硫酸盐,有机硫化合物硫脲、谷胱甘肽、二巯基丙醇、 巯基乙酸及盐、硫代乳酸及盐、硫代二丙酸及盐、苯酚类化合物,如没食子酸及盐、 咖啡酸、咖啡酸盐、阿魏酸、阿魏酸盐、二叔丁基对苯酚、2, 5-二羟基苯甲酸、2, 5-二羟基苯甲酸盐、苯酚或其衍生物、水杨酸或其盐;氨基酸以及其盐;抗坏血酸及 抗坏血酸盐、异抗坏血酸及异抗坏血酸盐、烟酰胺、酒石酸、硝酸盐、磷酸盐、醋酸 药用盐、柠檬酸盐、EDTA及EDTA盐、如EDTA二钠、EDTA四钠、N—二 (2 —羟 乙基)甘氨酸等中的一种或者几种。
其药学上可接受的等渗调节剂可以是葡萄糖、果糖、木糖醇、山梨醇、甘露醇、 转化糖、麦芽糖、右旋糖酐、氯化钠、氯化钾、乳酸钠等中的一种或几种。
去热源和除菌方式可以是加入配液量0.005 3%的活性炭去热源,微孔滤膜除菌 和热压灭菌,也可以采用超滤除菌、去热源。超滤方法中,超滤器可选用平板式、巻 式、管式、中空纤维式或圆盒式等,优选巻式和中空纤维式超滤器,采用截留相对分 子质量为5万至30万的滤膜除去大部分发热性物质和细菌后,再采用截留相对分子质 量1000 30000的超滤膜除去剩余热源,优选相对分子质量1000 10000的超滤膜。
本发明的甘草酸二铵水合物,适用于制备下列对所引起的人和动物感染的治疗或 预防的药物中的应用制备用于于临床上各型肝炎、肝硬化、肝损害和肝功能异常的 治疗或辅助治疗、以及心肌缺血再灌注损伤、流行性乙型脑炎、肾综合征出血热、过 敏性紫癜、寻常性银屑病、湿疹皮炎的治疗或预防的药物中的应用。
用量用法 一般情况下,于成人,口服, 一次20 400mg, 一日1 3次。取本发 明药物0. 02 0. 5g于0. 9%氯化钠或者5 10%葡萄糖20 500亳升中,作静脉推注或 滴注,每日1 2次;取本发明药物0.02 0.2g溶于注射用水中,肌内注射,每日l 2次;经胃肠道给药用量用法10~70 kg体重的人或动物, 一般情况下50 500mg/天, 分1-3次给药;儿童减半量以上使用。


图1为18 a -甘草酸二铵4水合物的热分析图谱。 图2为18P -甘草酸二铵4水合物的热分析图谱。 图3为18 a -甘草酸二铵3水合物的热分析图谱。 图4为18 a -甘草酸二铵2水合物的热分析图谱。 图5为18 a -甘草酸二铵1.5水合物的热分析图谱。 图6为l邻-甘草酸二铵1.5水合物的热分析图谱。
测试条件Setaram公司Setsys 16,样品量约5mg,升温速度10K/min, &流速: 50ml/min,室温 400。C。
具体实施例方式
实施例1 18 a -甘草酸二铵4水合物的制备将l邻-甘草酸单铵盐300g与20% 氢氧化钠或氢氧化钾溶液1600ml,升温回流8h后,降至室温后,用盐酸调节pH二l-2, 加正丁醇2000ml,搅拌45min,静止分层,分离水层,有机层用1N盐酸溶液洗涤2次, 水洗,分离水层,然后有机层通氨气,使p^8为止,冰醋酸回调pH至5.8左右,分 离下层料液,减压蒸发正丁醇,得粗品;将粗品加到90%乙醇中,加热回流,溶液变清, 活性炭脱色,过滤,加异丙醇,低温冷却,结晶,过滤,固体3(TC左右干燥72小时,
8得类白色结晶性粉末156.2g,易溶解于水,熔点144.2°C分解(未校正),[a]D25 +25.8°(H20, l%w/v);紫外光谱入H2°max252nm (lg e >4, 0.1MHC1); ESI-MS: m/z:857,821;红外光谱v,狀cm-13450 (宽)、2973、 1716、 1651、 1455、 1401、 1045,卡氏法测定水分为7.86%, TG-DTG:平台失重约7.55%,这与样品含有4个结 晶水的结果(理论值7. 76%)在误差范围内(见附图1),元素分析理论值C 54.30%, H8.25%, N3.02%; 实测值C 54.43%, H8.13%, N2.92%。
实施例2 l邻-甘草酸二铵4水合物的制备称取57g碳酸氢铵于500ml反应瓶中, 加水180ml使溶解,搅拌下逐渐加入605g 18p-甘草酸单铵,搅拌反应2h,加热到50~70 °C,搅拌30 min,加入350ml无水乙醇,加热回流30min,活性炭脱色,滤除活性炭, 加异丙醇100ml,冷却放置,有白色晶体析出,过滤,3(TC干燥72小时得类白色粉末16g, 得18p-甘草酸二铵495g,收率82X;熔点145。C分解(未校正),紫外光谱A"^股257nm (lge〉4, H20); ESI-MS: m/z:857,821;卡氏法测定水分为7.83%, TG-DTG:平台 失重约7.52%,这与样品含有4个结晶水的结果(理论值7.76%)在误差范围内(见附 图2),元素分析理论值C 54.30%, H8.25%, N3.02%;实测值C 54.47%, H8.16%, N2.95%
实施例3 18a-甘草酸二铵3水合物的制备将甘草酸三铵盐100g与5M氢氧化 钠或5M氢氧化钾溶液500ml置于反应瓶中,升温回流7-8小时后,降至室温后,分别 用3M硫酸调PH^1 3,加入正丁醇,搅拌,静置,分去水层,有机层用pl^l 2的酸 水溶液洗涤,洗后的有机层通氨气,使pH在7.0 8.1之间,再用乙酸溶液回调pH在 5.5~6.2之间,将下层的料液分出,减压蒸发正丁醇,得固体,将固体加到90%乙醇中, 加热回流,加90%乙醇使溶液变清,活性炭脱色,过滤,滤液中加异丙醇30ml和丙酮 10ml,冷却,静置析晶,过滤,固体物60'C左右干燥6h得到18a-甘草酸二铵3水合 物56.6克,易溶解于水,[a]D30 +24.3°(H20, l%w/v);紫外光谱A H20max252nm (lg e 〉4, 45ug/ml); ESI-MS: m/z:857,821;卡氏法测定水分为6. 16%, TG-DTG:平 台失重约5.87P6. 10%,这与样品含有3个结晶水的结果(理论值5.93%)在误差范 围内(见附图3);元素分析理论值C 55.37%, H8.19%, N3.07%;实测值C 55.49%, H8.08%, N2.91%。
实施例4依照实施例3的方法类似的制备l邻-甘草酸二铵3水合物,得52. 3 克,易溶解于水,紫外光谱入"^max257腿(lge >4, 45ug/ml); ESI-MS: m/z:857,821; 卡氏法测定水分为6. 25%, TG-DTG:平台失重约6. 30%。
实施例5甘草酸二铵2水合物的制备,称取100g碳酸氢铵于1000ml反应瓶中, 加水1500ml使溶解,搅拌下逐渐加入520g 18 a-甘草酸,搅拌反应4h,加热到6(TC, 搅拌30min,加入3000ml无水乙醇,加热回流30min,活性炭脱色,过滤除炭,加异 丙醇1500ml和乙酸乙酯100ml,低温冷却,放置,待晶体析出完全,过滤,76。C左右干 燥4h,得类白色晶体18ci-甘草酸二铵2水合物436g,收率83%,易溶于水;熔点 148.3。C分解(未校正);[a]D25 +26.5°(H20, l%w/v);紫外光谱入"^隨252nm (lg e 〉4, 0. 1MHC1); ESI-MS: m/z:857, 821;水分(卡氏法)4.18%, TG-DTG:平台 容重约4. 09%%,这与样品含有2个结晶水(理论值4. 04% )在误差范围内(见附图4); 元素分析理论值C 56.49%, H8.13%, N3.14%;实测值C 56.38%, H8.16%, N3.05%。
实施例6甘草酸二铵1.5水合物的制备取18 a -甘草酸单铵60g于1000ml反应瓶 中,加8(^的乙醇水溶液300ml,加热使溶解,搅拌下滴加氨水,控制pH值在6.8-8 之间,搅拌反应2小时,用乙酸溶液回调PH在5.4^6.2之间,升温回流30min,活性 炭脱色,过滤除炭,滤液加入异丙醇150ml,冷却,过夜,有白色晶体析出,过滤,80
9。C左右真空干燥4h,得18 a -甘草酸二铵结晶1. 5水合物47. 3g,产物易溶于水,熔点 152。C分解(未校正),[a]D25 +26.1°(H20, l%w/v);紫外光谱入H2Umax252nm (lge 〉4); ESI-MS: m/z:857,821;卡氏法测定水分为3.16%, TG-DTG:平台失重约3.11 %,这与样品含有1.5个结晶水的结果(理论值3.06%)在误差范围内(见附图5)。 元素分析理论值C 57.06%, H8.10%, N3.17%;实测值C 56.92%, H8.19%, N3.05%。
实施例7依实施例6方法以i8 e -甘草酸单铵为反应起始物制备的is e -甘草酸
二铵1.5水合物,为类白色粉末,熔点151°C分解(未校正);紫外光谱A ^^^57nm (lge〉4); ESI-MS: m/z:857, 821,卡氏法测定水分为3.20%, TG-DTG:平台失重 约2.99% (见附图6),元素分析理论值C 57.06%, H8.10%, N3.17%; 实测值 C 56.95%, H8.22%, N3.07%。
实施例8甘草酸二铵1水合物的制备,称取5g碳酸氢铵于250ml反应瓶中,加 水70ml使溶解,搅拌下逐渐加入26gl8a-甘草酸,搅拌反应2h,加热到6(TC,搅拌 30min,加入120ml无水乙醇,加热回流30min,活性炭脱色,过滤除炭,加异丙醇100ml 和丙酮20ml,冷却,5'C以下放置过夜,有类白色晶体析出,过滤,IO(TC左右真空干燥 4h,得类白色晶体18a-甘草酸二铵2水合物18.6g,收率72%,易溶于水;熔点152 °C分解(未校正);[a]D25 +27.0°(H2O, l%w/v);紫外光谱入H2°max252nm (lge〉4, 0. 1MHC1); ESI-MS: m/z:857,821;水分(卡氏法)2.01%, TG-DTG:平台失重约 2. 16%%,这与样品含有l个结晶水(理论值2.06%)在误差范围内;元素分析理 论值C 57.65%, H8.06%, N3.20%;实测值C 57.52%, H8.23%, N3.08%。
实施例9甘草酸二铵2.5水合物的制备或者方法D:将方法A或者方法B或者 方法C结晶后未干燥的湿品或其方法A或B或者方法C的最终产物,加水溶解,将其 冷冻到一70 一30°C,真空冷冻干燥,得甘草酸二铵水合物。将所得固体加水使溶解, 置于冻干机中,冷冻3 6个小时,使温度达到-35 -65。C,使机内真空度为6 30Pa, 低温真空干燥20 28小时,将温度升至20-3(TC左右,真空干燥3 6小时,得类白色 粉末,易溶于水,紫外光谱A^m狀252nm (lg e >4); , ESI-MS: m/z:857,821;卡 氏法测定水分为5.07%, TG-DTG: 150°0前平台失重约4.69%,这与样品含有2.5个结 晶水的结果在误差范围内;元素分析理论值C 55.92%, H8.16%, N3.11% ;实测 值C 56.05%, H8.04%, N3.19%。
实施例IO取甘草酸二铵2水合物10Kg (按干品计),加葡萄糖或甘露醇或木糖醇 200 2000g,加新鲜的注射用水400 600L搅拌使溶解,用药学上可接受的酸或碱调节 pH为4.0 6.5,加活性碳0.01 0.5% (W/V)搅拌15 45min,过滤,用0.22微米微孔滤 膜过滤,按20mg/瓶、50mg/瓶或100mg/瓶或150mg/瓶或200mg/瓶(以主药计)分装, 置于冻干机中,冷冻3 6个小时,使温度达到-40 -55。C,使机内真空度为5 20Pa, -20°(:真空干燥30小时,将温度升至3(TC左右,真空干燥6小时,压塞,得成品。
实施例ll取甘草酸二铵水合物20g (按干品计),加甘露醇5g,力fJ40-6(TC注射用 水1200ml搅拌使溶解,用lM的L-谷氨酸或氢氧化钠调节pH为4.5 7.5,加活性碳0.01 0.5% (W/V)搅拌30min,过滤,测定中间体含量,用0.22微米微孔滤膜过滤或者采用 截留相对分子质量1000-8000的超滤膜过滤,按25、 50mg/瓶或100mg/瓶或200mg/瓶(按 无水物计)分装,真空冷冻干燥,压塞,得成品。
实施例ll取无菌的甘草酸二铵水合物25Kg(按干品计),以无菌分装工艺按25mg/ 瓶、50mg/瓶或100mg/瓶或150mg/瓶分装,加塞、压塞,轧铝盖得成品。
实施例12甘草酸二铵水合物(按干品计)50 g,加盐酸半胱氨酸0.6g, EDTA二
10和L-精氨酸溶液调节pH为5.0 8.0,加活性碳 0.01% (W/V)搅拌15 45min,过滤,补水至5000ml,用0.22微米微孔滤膜过滤或者采 用截留相对分子质量1000-8000的超滤膜过滤,按10ml/瓶分装,灭菌得成品。
实施例13甘草酸二铵水合物(按干品计)10g,加注射用水800ml搅拌使溶解,加 活性碳0.01% (W/V)搅拌15 45min,过滤,用0.22微米微孔滤膜过滤或者采用截留相 对分子质量1000-8000的超滤膜过滤,测定中间体含量,按2-5ml/瓶分装,冷冻干燥, 压塞,得成品。
实施例14甘草酸二铵水合物大容量注射液的制备称取葡萄糖500g加入注射用水 中,搅拌使溶解完全,加入配液量0.05%的活性炭,加热10-30分钟左右,放冷,经 砂滤棒过滤脱炭;将甘草酸二铵水合物(以甘草酸二铵计)10.1g用新鲜的注射用水溶 解完全后,与上述滤液混合均匀,甘氨酸10g,加盐酸L-半胱氨酸lg, £01八二钠0.28, 加注射用水至5000ml,用lM盐酸溶液调节pH值在4.2-5.3的范围内,加配液量0.05%的 活性炭,加热搅拌10-30分钟左右,过滤脱炭,再经0.22um微孔滤膜精滤或者采用截 留相对分子质量1000-8000的超滤膜过滤,经半成品化验,待其含量、pH值和澄明度合 格后,灌封于50ml或100ml或200ml的玻璃瓶中,灭菌,成品检查,包装即得。
实施例15甘草酸二铵水合物氯化钠输液的制备将甘草酸二铵水合物(按无水 物计)10g、氯化钠85g、焦亚硫酸钠l.lg、 £01八二钠0.28,加入注射用水中,搅拌使 溶解完全,用lM的枸橼酸和枸橼酸钠溶液调节pH值在4.3-6.5的范围内,加注射用水至 10000ml,加配液量0.05%的活性炭,加热搅拌10-30分钟左右,过滤脱炭,再经0.22um 微孔滤膜精滤或者采用截留相对分子质量1000-8000的超滤膜过滤,经半成品化验,待 其含量、pH值和澄明度合格后,灌封于50ml或100ml或200ml的玻璃瓶中,灭菌,成 品检查,包装即得。
实施例16.甘草酸二铵水合物片剂(50mg/片)
处方甘草酸二铵3水合物 50g
微晶纤维素 130g
羧甲基淀粉钠 20g
聚乙烯吡咯垸酮5% 适量
硬脂酸镁 2g
将甘草酸二铵3水合物、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、过IOO目筛,用5%的聚乙 烯吡咯烷酮适量制软材,过18—24目筛制粒,干燥,过14一20目筛整粒后,加微粉 硅胶、硬脂酸镁混合,压片。
实施例17甘草酸二铵3水合物胶囊(25mg/粒)
处方甘草酸二铵3水合物 25g
微晶纤维素 55g
乳糖 20g
胶化淀粉10% 适量
硬脂酸镁 2g
将甘草酸二铵3水合物、微晶纤维素、乳糖过IOO目筛,用10%的胶化淀粉适量 制软材,过18—24目筛制粒,干燥,过14一20目筛整粒后,加硬脂酸镁混合,灌装胶囊。
实施例18甘草酸二铵水合物颗粒包括乳甘草酸二铵4水合物或甘草酸二铵3 水合物或甘草酸二铵2水合物或甘草酸二铵1. 5水合物或甘草酸二铵1水合物等颗粒 (25mg/包)
处方甘草酸二铵水合物 25g (以无水物计)聚乙烯吡咯烷酮5% 适量 将甘草酸二铵水合物、甘露醇、乳糖、食用香精过IOO目筛,用5%的聚乙烯吡咯 垸酮适量制软材,过18—24目筛制粒,6(TC以下干燥,过14一20目筛整粒后,分包 装。
实施例19甘草酸二铵2水合物的凝胶(25mg/支)
处方甘草酸二铵2水合物 25g
聚乙二醇6000 200g
聚乙二醇400 50g
甘油 5ml
卡波姆934 30g
卡波姆1342 2g
水 2800ml
将分别将卡波姆1342和卡波姆934用水分散,加入甘油、聚乙二醇6000、聚乙二 醇400、搅拌混合,加甘草酸二铵2水合物,加热、搅拌至匀、用磷酸氢二钠和磷酸二 氢钠溶液调节pl^5.0 7.0左右,分装即得。
实施例20 药理学试验如下
对D-GAIN致肝损伤小鼠的ALT和AST影响
取体重18-22g的昆明小鼠70只,雌雄各半,随机分为7组,生理盐水组(生理盐 水,20ml/kg)、中毒对照组(生理盐水,20ml/kg)、实施例l组(20mg/kg)、实施例2 组(20mg/kg)、实施例3组(40mg/kg)、实施例5组(20mg/kg)、实施例6组(20mg/kg)、 每组10只,均腹腔注射给药,每天一次,连续给药七天。本发明药物均按干品折纯计算, 于末次给药lh后,除正常对照组外,其余各组腹腔注射10%0-氨基半乳糖盐酸盐
(800mg/kg),禁食不禁水。注射10WD-氨基半乳糖盐酸盐(D-GAIN)后20h眼球后静脉 丛采血,分离血清,按试剂盒检测方法测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST), 给药组与对照组相比给药后经t检验差异均有显著性,P〈0.05或P〈0.01。结果见表4。 表4本发明药物对D-GAIN致肝损伤小鼠的ALT和AST影啊
组别动物数剂量(mg/kg)ALT(IU/L)AST加/L)
正常对照组10—29. 3±8. 657.8±21. 7
中毒对照组10—229. 2 ±52. 1202. 5±35. 4
实施例11020112. 4±24.6136. 1±21. 5
实施例21020124. 4± 15. 2142. 6± 13. 5
实施例3104081.7±16. 293. 7±16. 3
实施例51020103. 5±17. 9115. 3±16. 7
实施例61020107. 4± 14. 8126. 6± 18. 3
血清中的ALT和AST活性被广泛用作临床诊断肝脏炎症的程度和判断临床疗效的 敏感指标,本发明的实施例能够显著降低小鼠血清中ALT和AST活性,说明对肝细胞 具有保护作用,减轻或防止肝脏损伤,并减轻其坏死程度。按照本发明的精神得到isci-甘草酸二铵结晶水合物或ise-甘草酸二铵结晶水
合物的混合物是很容易实现的。譬如,按照方法B,若将18a-甘草酸或18e-甘草酸 或18 a -甘草酸单铵或18 e -甘草酸单铵混合物投入反应容器中,与碳酸氢铵进行反应, 最后的结果是,产物将为18 a -甘草酸二铵结晶水合物或18 e -甘草酸二铵结晶水合物 的混合物,这并与本发明的精神是一致的。
可以理解,从本专业角度,很多细节的变化是可能的,这并不因此限制本发明范 围和精神,本发明并不限于上述实施例。
权利要求
1、抗肝炎药物——甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18α-甘草酸二铵水合物或18β-甘草酸二铵水合物,其分子式为C42H68N2O16·nH2O,n=0.5~4.0之间的数字。
2、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵4水合物或is e -甘草酸二铵4水合物。
3、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵3水合物或18 0 -甘草酸二铵3水合物。
4、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵2.5水合物或18 P -甘草酸二铵2.5水合物。
5、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵2水合物或18 e -甘草酸二铵2水合物。
6、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵1.5水合物或18 e -甘草酸二铵1.5水合物
7、 根据权利要求1所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸衍生物为18a -甘草酸二铵1水合物或18 e -甘草酸二铵1水合物。
8、 甘草酸衍生物——甘草酸二铵水合物制备方法,其特征在于制备方法包括方法A:将18 a -甘草酸或18 e -甘草酸或18 a -甘草酸单铵或18 P -甘草酸单铵于反应容器中,加水,搅拌下通氨气或加氨水,使溶解,搅拌反应0.2-10小时,用酸控制反应液的pH值在5.0-6.2之间,加入低分子醇C1-C5如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种,进行结晶过滤,干燥,得18a-甘草酸二铵结晶水合物或18P-甘草酸二铵结晶水合物;用水、低分子醇Cl-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己垸,芳香烃,如苯,甲苯中的的一种或几种重结晶,过滤,干燥,得18a-甘草酸二铵结晶水合物或18P-甘草酸二铵结晶水合物;^"'或者方法B:将18a-甘草酸或18e-甘草酸或18a-甘草酸单铵或18e-甘草酸单铵与碳酸氢铵在水溶液中, 搅拌,反应0.2-10小时,加入低分子醇Cl-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯的的一种或几种进行结晶,或用水、低分子醇C1-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸T酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己垸,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种重结晶,过滤,干燥,得18a-甘草酸二铵结晶水合物或18P-甘草酸二铵结晶水合物;或者方法C:分别将甘草酸三铵盐与氢氧化钠或氢氧化钾碱溶液,升温回流7-8小时后,降至室温后,分别用酸调pH=l-2,加入正丁醇,搅拌,静置,分去水层,有机层用pH=l-2的酸水溶液洗涤,洗后的有机层通氨气,搅拌,使pH值在6.5-8.5之间,再用酸回调pH在5.0.-6.2之间,分离水层,减压蒸去正丁醇,得固体;将固体加到乙醇水溶液中,加热回流,活性炭脱色,过滤,加异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种,冷却,静置析晶,过滤,干燥,即得;或将其再用水、低分子醇Cl-C5,如甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,如丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯低取代卤代烃(Cl-C6),包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环垸烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种进行重结晶,得到高纯度的18a-甘草酸二铵结晶水合物;或者方法D:将方法A或者方法B或者方法C结晶后未干燥的湿品或其方法A或B或者方法C的最终产物,加水溶解,将其冷冻到一70 一3(TC,真空冷冻干燥,得甘草酸二铵水合物。
9、 根据权利要求1, 8所述的甘草酸衍生物,其特征在于甘草酸二铵水合物的结晶或重结晶溶剂选自水、低分子醇C1-C5,包括甲醇、乙醇、异丙醇,低级(C3-C6)酮,包括丙酮、丁酮,低级(C2-C6)酯,如醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯,低取代卤代烃(C1-C6),包括二氯甲垸、二氯乙烷、氯仿,低级醚(C1-C6),包括乙醚、甲乙醚,丁醚,直链或支链烷烃(C5-C8),环烷烃(C3-C6),如环己烷,芳香烃,如苯,甲苯中的一种或几种。
10、 根据权利要求9所述的甘草酸二铵水合物的结晶或重结晶溶剂,其特征在于选自水、乙醇、异丙醇,丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二氯甲垸、氯仿、乙醚、苯中的一种或几种。
11、 甘草酸衍生物用途,其特征在于甘草酸衍生物——甘草酸二铵水合物用于制备注射用冻干粉针制剂、或者无菌分装粉针制剂、或者大输液制剂、或者小水针注射剂,经肠道给药制剂,包括片剂、胶囊、颗粒剂、溶液剂、经皮肤给药的软膏和凝胶。
12、 甘草酸衍生物的用途,其特征在于甘草酸衍生物——甘草酸二铵水合物适用于制备用于治疗或预防肝炎的药物或健康食品中的应用。
全文摘要
本发明涉及甘草酸衍生物及其制备和用途,该衍生物具有较好的水溶性、较好的存储稳定性,适用于制备抗肝炎、肝硬化、肝损害和肝功能异常肾综合症出血热、过敏性紫癜、寻常性银屑病及湿疹皮炎等的治疗或预防的药物和保健食品中的应用。
文档编号C07J63/00GK101633683SQ200810048600
公开日2010年1月27日 申请日期2008年7月26日 优先权日2008年7月26日
发明者力 刘 申请人:力 刘
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