专利名称：乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法
技术领域：
本发明涉及抗生素提取技术。是一种用盐析法提取乙酰异戊酰泰乐菌素的新方法，该方 法是向含乙酰异戊酰泰乐菌素的生物转化滤液中或含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中加入 氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾或硫酸铵，使乙酰异戊酰泰乐菌素从生物转化滤液中或从 含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中析出，通过固液分离，获得乙酰异戊酰泰乐菌素。
背景技术：
乙酰异戊酰泰乐菌素为畜禽专用抗生素，它是由S加ptomyt^ f/ie/vnotoferartce变异菌株， 以泰乐菌素为底物经生物转化所产生的一种比泰乐菌素活性更高的抗菌药物。公开的乙酰异 戊酰泰乐菌素的提取方法是将菌体从转化培养液中分离出去，得滤液，然后用碱调滤液 pH5.5~9.8，使乙酰异戊酰泰乐菌素从滤液中析出，用离心或过滤的方法分离析出的乙酰异戊 酰泰乐菌素；然后将酒石酸与乙酰异戊酰泰乐菌素混合，并用水溶解，经喷雾干燥脱水得酒 石酸乙酰异戊酰泰乐菌素。用该工艺制备乙酰异戊酰泰乐菌素或酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素 收率为82~86%。
本发明是在滤液中加入足够量的氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾或硫酸铵，并用碱液 调pH5.5 9.8，使乙酰异戊酰泰乐菌素从滤液中析出，水相中残留效价仅为3 22yg/ml，其析 出率可达到99.5% (如在滤液中不加入上述5种盐的任意一种，乙酰异戊酰泰乐菌素析出率 仅有93%左右，A组份在水中残留效价为400~600 u g/ml);之后用离心或过滤的方法分离析 出的乙酰异戊酰泰乐菌素；然后将酒石酸与乙酰异戊酰泰乐菌素用甲醇或乙醇溶解，用喷雾 干燥的方法或蒸馏的方法脱溶媒，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素。乙酰异戊酰泰乐菌素在甲 醇或乙醇中成盐和干燥，其收率比在水中成盐干燥收率高5~8%。因此，用本工艺生产酒石酸 乙酰异戊酰泰乐菌素收率可达91~96%。
发明内容
本发明技术是关于乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于向含乙酰异戊酰泰乐菌素 生物转化滤液或含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中加入重量/体积比为8~40%的氯化钠、氯 化钾、硫酸钠、硫酸钾或硫酸铵，使乙酰异戊酰泰乐菌素从生物转化滤液中或从含乙酰异戊 酰泰乐菌素的含水液体中析出；然后固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。在以上 5种盐中，以硫酸钠为最好，适宜使用范围为15~26% (W/V);盐析的适宜温度为27~33匸，适宜pH为7.2~8.2。在向生物转化滤液中或在含乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液中加入以上5 种盐时，可以是一次加入，也可以分次分步加入，即采用分步盐析法，来提取乙酰异戊酰泰 乐菌素，这样得到的乙酰异戊酰泰乐菌素纯度高。
以上所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物可用酸水溶解，然后过滤，除去不溶物，得 含乙酰异戊酰泰乐菌素盐的水溶液。酸水的适宜用量为相当于生物转化滤液量的十分之一 左右，酸水可以是磷酸水溶液或酒石酸水溶液或乙酸水溶液或盐酸水溶液，优选磷酸水溶液； 酸水的适宜pH值范围为2.5~4.5。
将如上所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素盐的水溶液用活性碳脱色，或不用活性碳脱色，然 后在搅拌条件下，用碱液调pH7.2 8.2，使乙酰异戊酰泰乐菌素从水溶液中析出；进一步固液 分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素和母液。
向母液中加入Na2S04到饱和状态，使母液中残留的乙酰异戊酰泰乐菌素析出，然后固液 分离，得从母液中回收的乙酰异戊酰泰乐菌素。
母液也可以采用如下方法处理向母液中加入相当于生物转化滤液体积0.4~5%的疏水性 有机溶剂，如乙酸丁酯、4-甲基-2-戊酮或甲苯，然后向母液中加入硫酸钠或氯化钠到饱和状 态，充分混合后，静置分相或离心分相，回收有机相；向有机相中加入酸水反萃取，得含乙 酰异戊酰泰乐菌素盐的水溶液。该水溶液用碱液调pH值为7.2~8.2，并加入硫酸钠到饱和状 态，使乙酰异戊酰泰乐菌素析出，进一步固液分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素。
将如上所述的乙酰异戊酰泰乐菌素干燥(也可以不干燥)，用甲醇或乙醇溶解，并加入相 当于乙酰异戊酰泰乐菌素1/2摩尔量的酒石酸或加入磷酸，充分混合成盐后，采用蒸馏或喷 雾干燥的方法脱溶剂，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素或磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素。
选择的从生物转化滤液中提取乙酰异戊酰泰乐菌素或乙酰异戊酰泰乐菌素盐的方法如
下
a、 将生物转化滤液在5 25'C条件下调pH2.5~4.5，然后分别用孔径为10 u m、 1~5 ix m、 0.2 y m的过滤器过滤，得精滤液。
b、 将精滤液升温到28~35'C，加入硫酸钠到饱和状态，然后用碱液调pH7.5~8.9，充 分混合后，在保温状态下压滤或离心分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物；
c、 将固体物用相当于精滤液体积1/10量的磷酸水溶液溶解，得含磷酸乙酰异戊酰泰 乐菌素的水溶液。
d、 在充分搅拌下，向磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液中加入重量/体积比为8~15% 的碳酸钠水溶液，调pH7.2 8.6，固液分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素A和母液A。乙酰异戊酰泰乐菌素A用去离子水洗涤1~3次，洗涤液合并到母液A中。
e、 在搅拌条件下，向母液A中加入硫酸钠到饱和状态，固液分离，得乙酰异戊酰泰 乐菌素B和母液B。
f、 将用去离子水洗涤过的乙酰异戊酰泰乐菌素干燥到含水量小于25%，得干燥的乙酰 异戊酰泰乐菌素。
g、 用相当于乙酰异戊酰泰乐菌素重量/体积比为1.5~4倍量的甲醇或乙醇溶解干燥的乙
酰异戊酰泰乐菌素，并加入酒石酸或磷酸，成盐后，喷雾干燥或用蒸馏的方法脱溶 媒，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素或磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素。 还可用如下方法从生物转化滤液中提取乙酰异戊酰泰乐菌素或乙酰异戊酰泰乐菌素盐
a、 将生物转化滤液在5 25'C条件下调pH3.5，然后分别用孔径为10 u m、 l~5um、 0.2um的过滤器过滤，得精滤液。
b、 将精滤液升温到28 35'C，加入硫酸钠到饱和状态，然后用碱液调pH7.5~8.9，充分 混合后，在保温状态下压滤或离心分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。
c、 将固体物用相当于精滤液体积约1/10量的磷酸水溶液溶解，得含磷酸乙酰异戊酰 泰乐菌素的水溶液。
d、 在充分搅拌下，向磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液中加入8~15%的碳酸钠，调 pH7.6~8.6，固液分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素A和母液A;乙酰异戊酰泰乐菌素 A用去离子水洗涤l 3次，洗涤液合并到母液A中。
e、 向母液A中加入相当于精滤液体积的1 3免的乙酸乙酯或乙酸丁酯，并加入硫酸钠 到饱和状态，充分混合后，静置分相或离心分相，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的乙酸 乙酯或乙酸丁酯相；向乙酸乙酯或乙酸丁酯相中加入2倍体积的酸水，反萃取，得 反萃取液；用碱液调pH8.0~8.5，并加入硫酸钠到饱和状态，固液分离，得含乙酰 异戊酰泰乐菌素的固体物。
f、 将以上用去离子水洗涤的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物，干燥到含水量小于25免， 得干燥的乙酰异戊酰泰乐菌素。
具体实施方式
实例l
(1)将1升生物转化滤液在18'C条件下调PH3.1~3.3，然后分别用孔径为10 u m、 5 " m、 0.2 " m的过滤器过滤，得精滤液。(2) 、将精滤液升温到28t:，加入240g的硫酸钠(折百计)，然后用碳酸钠饱和溶液调
pH8.2，充分混合后，在保温状态下抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的粗提物。
(3) 、将粗提物用约90ml磷酸水溶液溶解，过滤，得含磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的精滤液。
(4) 、在充分搅拌下，向含磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的精滤液中加入饱和的碳酸钠水溶
液，调pH7.9 8.1，固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物A和母液A;将 含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物A用去离子水洗涤3次；洗涤液合到母液A中。
(5) 、在搅拌条件下，向母液A中加入26g硫酸钠，固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌
素的固体物B和母液B。
(6) 、将用去离子水洗涤过的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物干燥到含水量小于25%，
得干燥的乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物B和母液B。
(7) 、用相当于乙酰异戊酰泰乐菌素重量/体积比为1.5 4倍量的甲醇或乙醇溶解干燥的
乙酰异戊酰泰乐菌素，并加入酒石酸，成盐后，减压蒸馏除去溶媒，得酒石酸乙 酰异戊酰泰乐菌素3.8g，产品经HPLC分析其质量符合商品要求，收率为91.2%。
实例2
(1) 、将l升生物转化滤液在18'C条件下调pH3.1 3.3，然后分别用孔径为lOixm、
5um、 0.2"m的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、将精滤液升温到28X:，加入240g的硫酸钠(折百计)，然后用碳酸钠饱和溶液调
pH8.2，充分混合后，在保温状态下抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的粗提物。
(3) 、将粗提物用90ml的磷酸水溶液溶解，过滤，得含磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的精滤
液；
(4) 、在充分搅拌下，向含磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的精滤液中加入等量的饱和碳酸钠
水溶液，调pH7.9 8.1，固液分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素A和母液A;乙酰异戊 酰泰乐菌素A用去离子水洗涤3次；将洗涤液合到母液A中。
(5) 、在搅拌条件下，向母液A中加入10ml的乙酸乙酯或乙酸丁酯，并加入硫酸钠到
饱和状态，充分混合后，静置分相或离心分相，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的乙酸 乙酯或乙酸丁酯相；向乙酸乙酯或乙酸丁酯相中加入2倍体积的酸水，反萃取， 得反萃取液；用碱液调pH8.0 8.5，并加入硫酸钠到饱和状态，固液分离，得乙酰 异戊酰泰乐菌素。
(6) 、将以上用去离子水洗涤乙酰异戊酰泰乐菌素，干燥到含水量小于25%，得干燥的乙酰异戊酰泰乐菌素3.73g，产品经HPLC分析其质量符合商品要求，收率为89.8%。 实例3
(1) 、将l升生物转化滤液在18r条件下调pH3.1 3.3，然后分别用孔径为lOym、
5um、 0.2^m的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，加入360g氯化钠，然后用碳酸钠饱和溶液调pH7.5，
充分混合后，抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的粗提物。HPLC分析，A组份总 收率为99.7%。
实例4
(1) 、将l升生物转化滤液在18'C条件下调pH3.1 3.3，然后分别用孔径为10um、
5um、 0.2um的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，加入180g氯化钠，然后用碳酸钠饱和溶液调pH7.5，
充分混合后，抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的粗提物。HPLC分析，A组份总 收率为95.5%。
实例5
(1) 、将l升生物转化滤液在18'C条件下调pH3.1 3.3，然后分别用孔径为10um、
5 u m、 0.2u m的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，然后用碳酸钠饱和溶液调pH7.5，充分混合后，抽滤，
得含乙酰异戊酰泰乐菌素的粗提物。HPLC分析，八组份总收率为92.3%。
实例6
(1) 、将含10%的磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液，分别用孔径为10iim、 5ixm、
0.2um的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，加入180g氯化钠，然后用碳酸钠饱和溶液调pH8.0，
充分混合后，抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。HPLC分析，A组份总 收率为96.5%。
实例7
(1) 、将含10%的磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液，分别用孔径为10ixm、 5ym、
0.2 U m的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，加入360g氯化钠，然后用碳酸钠饱和溶液调pH8.0，
充分混合后，抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。HPLC分析，A组份总 收率为99.84%，母液中残留效价为(A组份)16iig/ml。实例8
(1) 、将含10%的磷酸乙酰异戊酰泰乐菌素的水溶液，分别用孔径为10wm、 5ym、
0.2um的过滤器过滤，得精滤液。
(2) 、维持精滤液温度为18~25°C，加入260g硫酸钠，然后用碳酸钠饱和溶液调pH8.0，
充分混合后，抽滤，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。HPLC分析，A组份总 收率为99.97%，母液中残留效价为(A组份)3iig/ml。
权利要求
1、一种乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于向含乙酰异戊酰泰乐菌素的生物转化滤液或含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中加入重量/体积比为5～40％的氯化钠或氯化钾或硫酸钠或硫酸钾或硫酸铵，使乙酰异戊酰泰乐菌素或乙酰异戊酰泰乐菌素盐从生物转化滤液中或从含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中析出；然后固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素或含乙酰异戊酰泰乐菌素盐的固体物。
2、 按权利要求1所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于将所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物用酸水溶解，然后过滤，除去不溶物，得含乙酰异戊酰泰乐菌素盐的 水溶液。
3、 按权利要求2所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于将所述的含乙酰异戊 酰泰乐菌素的水溶液用活性碳脱色或不用活性碳脱色，然后在搅拌条件下，用碱液调pH5~ll， 使乙酰异戊酰泰乐菌素从水溶液中析出，固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物和母 液。
4、 按权利要求3所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于向所述的母液中加入 氯化钠或硫酸钠到饱和状态，使母液中残留的乙酰异戊酰泰乐菌素析出，然后固液分离，得 含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。
5、 按权利要求3所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于向所述的母液中加入 可溶解乙酰异戊酰泰乐菌素的疏水性有机溶剂，然后向母液中加入硫酸钠或氯化钠到饱和状 态，充分混合后，静置分相或离心分相，回收有机相；向有机相中加入酸水反萃取，得含乙 酰异戊酰泰乐菌素盐的水溶液。
6、 按权利要求5所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法，其特征在于用碱液调所述的含乙 酰异戊酰泰乐菌素盐的水溶液pH值为5.5~10.5，并加入Na2S04或氯化钠到饱和状态，使乙 酰异戊酰泰乐菌素析出，进一步固液分离，得含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物。
7、 按权利要求l、 3、 4、 6项中任意一项所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取工艺，其特征 在于将所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物干燥或不干燥，用甲醇或乙醇溶解，加入相当 于乙酰异戊酰泰乐菌素1/2摩尔量或略多的酒石酸或加入磷酸，充分混合成盐后，采用蒸馏 或喷雾干燥的方法脱溶剂，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素或磷酸泰乐菌素。
8、 按权利要求l、 3、 4、 6项中任意一项所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取工艺，其特征 在于将所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物干燥或不干燥，用甲醇或乙醇溶解，加入相当 于乙酰异戊酰泰乐菌素1/2摩尔量或略多的酒石酸或加入磷酸，充分混合成盐，然后用活性 碳脱色，采用蒸馏或喷雾干燥的方法脱溶剂，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素或磷酸泰乐菌素。
9、 按权利要求l、 3、 4、 6项中任意一项所述的乙酰异戊酰泰乐菌素提取工艺，其特征 在于将所述的含乙酰异戊酰泰乐菌素的固体物干燥或不干燥，用甲醇或乙醇溶解，用活性碳 脱色，加入相当于乙酰异戊酰泰乐菌素1/2摩尔量或略多的酒石酸或加入磷酸，充分混合成 盐后，采用蒸馏或喷雾干燥的方法脱溶剂，得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素或磷酸泰乐菌素。
全文摘要
本发明技术是用盐析法提取乙酰异戊酰泰乐菌素，方法要点是向含乙酰异戊酰泰乐菌素生物转化滤液中或含乙酰异戊酰泰乐菌素的含水液体中加入足够量的氯化钠或氯化钾或硫酸钠或硫酸钾或硫酸铵，在滤液pH大于6的条件下，乙酰异戊酰泰乐菌素从滤液中析出，经固液分离，得乙酰异戊酰泰乐菌素，粗提取物收率大于98％；进一步纯化处理，并与酒石酸在甲醇中成盐，经脱溶媒后，可以得到酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素，收率大于91％。
文档编号C07H1/06GK101531693SQ20081008460
公开日2009年9月16日 申请日期2008年3月13日 优先权日2008年3月13日
发明者孙玉胜, 戴晓曦, 潘贞德, 王玉万, 兰 马 申请人:迈德金生物技术(北京)有限公司