专利名称：盐析法提取红霉素的制作方法
技术领域：
一种抗生素提取方法，具体的讲是关于用盐析法从发酵滤液中提取红霉素，或从含
红霉素的水溶液中提取红霉素，或从含红霉素/水和甲醇的溶液中提取红霉素。
背景技术：
红霉素是一种大环内酯类抗生素，已广泛应用于临床。红霉素的生产分为两大步， 一是由红色链霉菌发酵合成红霉素；二是从发酵液中将红霉素提炼出来。
红霉素的提炼方法有溶媒萃取法，离子交换法及大孔树脂吸附法三种(顾觉奋主编， 抗生素，上海科学技术出版社，2001年.9月第1版，第217-218页)。
本发明是用盐析法从发酵滤液中提取红霉素，发明要点如下-
1、 向发酵滤液中加入足量的氯化钠或硫酸钠或其他盐类，然后调发酵滤液pH到 7.5 11.5(也可以先调pH，后加入盐)，红霉素便从发酵滤液中析出，其析出率可达到95% 以上；然后采用过滤或离心的方法来收集析出的红霉素。
2、 也可以在上述"1"的体系中加入适量(相当于发酵滤液体积的5~50%)疏水性溶 剂(如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异戊酯、乙酸戊酯、4-甲基-2-戊酮、4~8个碳的醇 类)，由于盐的存在，从而降低了红霉素在水中的溶解度，提高了红霉素在有机相中的分 配系数(分配比率)。例如用相当于发酵滤液体积8%的乙酸丁酯/丁醇或辛醇共溶剂， 在有足量的盐存在的情况下，经一次萃取，红霉素的萃取率即可达到97%以上；如果在 不加盐的情况下，用15%的溶媒(乙酸丁酯/丁醇或辛醇)萃取，经两次萃取红霉素的萃 取率才可达到95%左右。
由此可见，盐析法提取红霉素的突出优点是可减少溶剂使用量达1/2~2/3。
发明内容
本发明是关于红霉素的提取方法，确切的讲是采用盐析法来提取红霉素。该方法特 征在于向红霉素发酵滤液中加入重量比为3~85%的无机酸盐或有机酸盐，使红霉素从 发酵滤液中析出，或者在采用疏水性有机溶剂从发酵滤液中萃取红霉素时，向体系中加 入重量比为3~85%的无机酸盐或有机酸盐，从而可以显著提高红霉素在疏水性有机相中 的分配比率即分配系数。向红霉素发酵滤液中加入无机酸盐或有机酸盐的适宜量为 8~36% (W/V)。
本发明中所用的无机酸盐和有机酸盐是钾盐、钠盐、铵盐、盐酸盐、硫酸盐、2~8个碳的有机酸盐。所述的钾盐包括氯化钾、硫酸钾、酒石酸钾；所述的钠盐包括氯
化钠、硫酸钠、乙酸钠、丙酸钠、丁酸钠、酒石酸钠、酒石酸钾钠、草酸钠、延胡索酸 钠、柠檬酸钠。
本发明选择的红霉素提取方法如下向发酵滤液中或含红霉素的含水液体中加入重 量百分比为8~36%的氯化钠或硫酸钠，在搅拌条件下，调发酵滤液PH7.2 11，待红霉素 析出率达到95%以上时，即可固液分离，获得含红霉素的粗品；也可以先调发酵滤液PH 值为7.2~11，然后，加入重量百分比为8~36%的氯化钠或硫酸钠。
也可以向发酵滤液中或含红霉素的含水液体中加入疏水性有机溶剂，并同时加入重 量百分比为8~36%的氯化钠或硫酸钠，在搅拌条件下，调发酵滤液PH 7.2-11，充分混合 后，静置或离心，弃水相，得含红霉素的有机相。
在本发明中，当盐析法与萃取法结合应用时，所用的疏水性有机溶剂为乙酸乙酯、 乙酸丁酯、乙酸异戊酯、乙酸戊酯、4-甲基-2-戊,酮、4 8个碳的醇类，他们可单独使用， 也可以一种以上组成共溶剂使用，使用量为发酵滤液量的2~50%，体积/体积百分比。
具体实施例方式
提供下列实施例以使人们可以充分理解本发明，但这不能解释为对本发明权利要求 范围与核心内容的限制。
实例l、取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1L，在搅拌条件下，加入300g氯 化钠，用饱和碳酸钠水溶液调液体PH 8.2，搅拌5分钟后，抽滤，得含红霉素的湿固体物。
将含红霉素的湿固体物全部用甲醇溶解、过滤，进行HPLC分析，其中含红霉素为 3198mg，收率为96.3% (重量比)
实例2、取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1L，在搅拌条件下，加入200g氯化 钠，用饱和碳酸钠水溶液调液体PH8.2，搅拌5分钟后，抽滤，得含红霉素的湿固体物。 将含红霉素的湿固体物全部用甲醇溶解、过滤，进行HPLC分析，其中含红霉素为 3039mg，收率为91.5% (重量比)。
实例3、取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1L，加热到35。C，在搅拌条件下， 加入200g硫酸钠，用饱和碳酸钠水溶液调液体PH8.2，搅拌5分钟后，抽滤，得含红霉 素的湿固体物。
将含红霉素的湿固体物全部用甲醇溶解、过滤，进行HPLC分析，其中含红霉素为 3231mg，收率为97.3% (重量比)。实例4、
实验组取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1L，加热到35。C，在搅拌条件下， 加入80ml乙酸丁酯/丁醇共溶剂，然后加入300g氯化钠，用饱和碳酸钠水溶液调液体PH 8.2，搅拌5分钟后，静置，待完全分层后，取水相测定红霉素含量。
对照组另取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1L，加热到35。C，在搅拌条件 下，加入80ml乙酸丁酯/丁醇共溶剂，然后用饱和碳酸钠水溶液调液体PH 8.2，搅拌5 分钟后，静置，待完全分层后，取水相测定红霉素含量。
实验结果
实验组水相液中残留效价为142ug/ml，萃取率为96%; 对照组水相液中残留效价为587ug/ml，萃取率为82.3%。 实例5、取效价为3321ug红霉素/ml的发酵滤液1 M3，用CAD-40树脂吸附，然后
用水和氨水洗涤已饱和的树脂，再用甲醇氨水混合液解吸，得含红霉素的甲醇水溶液， 加入硫酸钠至饱和状态，调pH至中性，减压蒸馏，除去甲醇，抽滤或离心，得含红霉素 的湿固体物。
将含红霉素的湿固体物全部用甲醇溶解、过滤，进行HPLC分析，其中含红霉素为 3.28 kg，收率为98.76% (重量比)。
权利要求
1、一种红霉素提取方法，其特征在于向红霉素发酵滤液中或含红霉素的含水液体中加入重量比为3～85％的无机酸盐或有机酸盐，使红霉素从发酵滤液中析出；或用疏水性有机溶剂萃取红霉素时，在萃取体系中加入重量比为3～85％的无机酸盐或有机酸盐，来提高红霉素在疏水性有机相中的分配比率。
2、 按权利要求1所述的提取方法，其特征在于向红霉素发酵滤液中或含红霉素的含 水液体中加入重量比为8~36%的无机酸盐或有机酸盐，使红霉素从发酵滤液中析出；或 用疏水性有机溶剂萃取红霉素时，在萃取体系中加入重量比为8~36%的无机酸盐或有机 酸盐，可提高红霉素在疏水性有机相中的分配比率。
3、 按权利要求1或2项中任意一项所述的红霉素提取方法，其特征在于所述的无机 酸盐和有机酸盐是钾盐、钠盐、铵盐、盐酸盐、硫酸盐、2 8个碳的有机酸盐。
4、 按权利要求3中所述的提取方法，其特征在于所述的钾盐包括氯化钾、硫酸 钾、酒石酸钾；所述的钠盐包括氯化钠、硫酸钠、乙酸钠、丙酸钠、丁酸钠、酒石酸 钠、酒石酸钾钠、草酸钠、延胡索酸钠、拧檬酸钠。
5、 按权利要求1 4项中任意一项所述的红霉素提取方法，其特征在于提取方法如下向发酵滤液中加入重量百分比为10~35%的氯化钠或硫酸钠，在搅拌条件下，调发酵滤液 pH7.2 U，待红霉素析出率达到95%以上时，进行固液分离，即可获得含红霉素的粗品； 也可以先调发酵滤液pH值为7.2 11，然后加入重量百分比为10~35%的氯化钠或硫酸钠。
6、 按权利要求1 4项中任意一项所述的红霉素提取方法，其特征在于提取方法如下 向发酵滤液中加入疏水性有机溶剂，并加入重量百分比为5~35%的氯化钠或硫酸钠，在 搅拌条件下，调发酵滤液pH7.2 11，充分混合后，静置分相或离心分相，弃水相，得含 红霉素的有机相。
7、 按权利要求6所述的红霉素提取方法，其特征在于所述的疏水性有机溶剂为乙 酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异戊酯、乙酸戊酯、4-甲基-2-戊酮、4~8个碳的醇类，他们可 单独使用，也可以一种以上组成共溶剂使用，使用量为发酵滤液量的2~50%，体积/体积 百分比。
8、 按权利要求1~4项中任意一项所述的红霉素提取方法，其特征在于提取方法如 下向含红霉素的水溶液中或含红霉素的甲醇/水溶液中加入重量百分比为8~36%的氯化钠或硫酸钠，在搅拌条件下，调pH7.2 11，待红霉素析出率达到95%以上时，进行固液 分离，即可获得含红霉素的粗品；也可以先调发酵滤液pH值为7.2~11，然后加入重量百 分比为10~35%的氯化钠或硫酸钠。
全文摘要
一种用盐析法从发酵滤液中提取红霉素或从含红霉素的水溶液中提取红霉素的方法。即向发酵滤液中或从含红霉素的水溶液中加入足够量的氯化钠或硫酸钠或其他盐类，从而降低红霉素的溶解度，使之从水相液中析出；或在用疏水性有机溶剂萃取红霉素时，同时加入足够量的氯化钠或硫酸钠或其他盐类，从而提高红霉素在有机相中的分配系数。采用本发明方法从发酵滤液中提取红霉素，可减少溶媒使用量，并提高红霉素收率。
文档编号C07H17/08GK101531694SQ200810084609
公开日2009年9月16日 申请日期2008年3月13日 优先权日2008年3月13日
发明者孙玉胜, 戴晓曦, 潘贞德, 王玉万, 兰 马 申请人:迈德金生物技术(北京)有限公司