Gdf8抗体及其用途的制作方法

专利名称：Gdf8抗体及其用途的制作方法
技术领域：
本发明的技术领域涉及对生长与分化因子-8 (growth and differentiationfactor-8)(⑶F8)特异性的表位及其拮抗剂(例如肽模拟物、抗-GDF8抗 体(例如小鼠、人和人源化抗体、其片段等)、重组多核苷酸、抑制性多核苷酸等)，所述拮抗 剂可用于体外和/或体内抑制GDF8活性。所述领域还涉及在生物样品中检测GDF8的免疫 检验方法，以及治疗、改善、预防、诊断、预测和/或监测GDF8-相关病症(例如肌肉病症、神 经肌肉病症、骨-退行性病症、代谢或诱导的骨病症、肥胖病症、葡萄糖代谢病症或胰岛素 相关病症)的方法，尤其是在具有生育能力的妇女中。
背景技术：
生长及分化因子_8(⑶F8)(也称作肌抑制素(myostatin))是一种分泌型蛋白 质，并且是结构相关的转化生长因子-β (TGF-β)超家族的成员。这一超家族的成员具 有生长-调节和形态发生的特性(Kingsley等(1994) Genes Dev. 8 :133_46 ;Hoodless等 (1998) Curr. Topics Microbiol. Immunol. 228 :235_72)。人 GDF8 作为 375 个氨基酸的前 体蛋白质被合成，所述前体蛋白质形成同二聚体复合物。在加工期间，已知为“潜伏-相 关肽(latency-associated peptide, LAP) ”的氨基端前肽被切割，并且保持与同二聚体 非共价结合，形成被命名为“小潜伏复合物(latent complex) ”的活性复合物(Miyazono 等(1988)J. Biol. Chem. 263 6407-15 ；Wakefield 等(1988)J. Biol. Chem. 263 7646-54 ； Brown 等(1999)Growth Factors 3 :35_43 ;Thies 等(2001)Growth Factors 18:251-59; Gentry 等(I99O)Biochemistry 29 :6851-δ7 ;Derynck 等(I995)Nature 316 701-05 ； Massague (1990) Ann. Rev. Cell Biol. 12 :597_641)。蛋白质例如卵泡抑素(follistatin) 和卵泡抑素-相关蛋白质包括GASP-I (Gamer等(1999)Dev Biol. 208 :222_232，美国专利 公开No. 2003-0180306-A1 ；美国专利公开No. 2003-0162714-A1)，其结合成熟的GDF8同二 聚体并抑制GDF8生物活性。来自多种物种的推知的⑶F8氨基酸序列的比对证明⑶F8是保守的(McPherron 等(1997)Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 94 12457-61)。人、小鼠、大鼠、猪和鸡 GDF8 的序列 在C-端区中100%相同，而狒狒、牛和羊⑶F8在C-端差异仅为3个氨基酸。⑶F8跨物种 的高保守性提示⑶F8具有重要的生理功能。已显示⑶F8通过抑制成肌细胞和卫星细胞的增殖以及分化而在肌肉发育和内稳 态中起主要作用(Lee 和 McPherron (1999) Curr. Opin. Genet. Dev. 9 604-7 ；McCroskery 等 (2003) J. Cell Biol. 162 :1135_47)。其在发育中的骨骼肌中早期表达，并且在成年骨骼肌 中继续表达，优选地在快速颤搐(fast twitch)类型的骨骼肌中表达。⑶F8也涉及肌肉-特 异性酶(例如肌酸激酶)的生产和成肌细胞增殖(W0 00/43781)。成年小鼠中⑶F8的过表达导致显著的肌肉减少(Zimmers等(2002) Science 296:1486-88)。类似地，多种研究指出提高的⑶F8表达与HIV-诱导的肌肉消耗相关 (Gonzalez-Cadavid 等(1998) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 95 14938-43)。相反，GDF8 敲除转基因小鼠的特征是显著的骨骼肌肥大和增生，以及改变的皮质骨结构(corticalbone structure) (McPherron 等(1997) Nature 387 :83_90 ;Hamrick 等(2000) Bone 27: 343-49)。另外，使GDF8基因无活性的天然突变显示在动物和人中均引起肥大以及增生 (Lee和McPherron (1997)，上文)。例如，在牛中的天然⑶F8突变中，骨骼肌量的提高是明 显的(Ashmore 等(1974) Growth 38 :501_07 ；Swatland 等(1994) J. Anim. Sci. 38 :752_57 ； McPherron 等，上文；Kambadur 等(1997) Genome Res. 7 910-15)。大量人和动物的肌肉和谷歌病症与功能受损的肌肉组织相关，因此可与⑶F8 相关。例如，⑶F8可以涉及以下的发病机制肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)、肌营养不良(“MD” ；包括Ducherme，s肌营养不良、筋膜肩胛 (fascioscapular)肌营养不良和筋膜肩胛肱(facioscapulohumeral)肌营养不良)、肌萎 缩、腕管综合征(carpal turmelsyndrome)、器官萎缩、虚弱、充血性阻塞性肺病(COPD)、老 年性肌肉萎缩、恶病质和其它疾病和病症引起的肌肉消耗综合征。还相信⑶F8参与大量其它生理学过程和相关病症，包括2型糖尿病发生期间的葡 萄糖内稳态、糖耐量减低(impaired glucose tolerance)、代谢综合征(即涉及一组健康状 况(其可包括胰岛素抗性、腹部肥胖症、异常脂肪血症、高血压、慢性炎症、前血栓形成状态 (prothrombotic state)等)的同时发生的综合征(例如综合征X)，其将人置于2型糖尿 病和/或心脏病的高度风险下)、胰岛素抗性(例如创伤如烧伤或氮失衡诱导的抗性)和脂 肪组织病症(例如肥胖症、异常脂肪血症、非酒精性脂肪肝疾病等)(Kim等(2000)Biochem. Biophys. Res. Comm. 281 :902_06)。目前几乎不存在用于治疗这些病症的可靠或有效的疗 法。这些过程的病理学表明⑶F8是这些相关病症的治疗中潜在的靶标。除了人中的神经肌肉病症以外，还存在与骨损耗相关的生长因子-相关病症，例 如骨质疏松和骨关节炎，它们主要影响老年和/或绝经后的女性。这类代谢性骨疾病和病 症包括由于慢性糖皮质激素疗法、过早的性腺衰竭、雄性激素阻抑、维生素D缺乏、继发性 甲状旁腺功能亢进、营养缺乏和神经性厌食症(anorexia nervosa)导致的低骨量。尽管 目前针对这些病症的许多疗法通过抑制骨再吸收来发挥作用，但是促进骨形成的疗法会是 有用的替代性治疗。因为GDF8在骨发育以及肌肉发育中起作用，所以GDF8也是用于治疗 骨_退行性病症的极佳的药理学靶标。与转化生长因子-β (TGF-β)家族的其它成员类似，⑶F8被合成为376个氨基 酸的前体蛋白质，其含有信号序列、N-端前肽结构域和被认为是活性分子的C-端结构域。 ⑶F8通过与其前肽结合而以潜伏形式(潜伏_相关肽，LAP)被分泌；前肽结构域和C-端 结构域之间的蛋白水解加工产生N-端前肽和成熟形式的⑶F8。未经加工的和成熟的⑶F8 均形成二硫键_连接的二聚体，并且经加工的⑶F8代表了所述蛋白质的唯一活性形式。在 血清以及骨骼肌中，可发现GDF8与能够调控其活化、分泌或受体结合的若干蛋白质结合。GDF8通过跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶异四聚体受体家族发挥其作用，其活化增强受 体转磷酸化，导致丝氨酸/苏氨酸激酶活性的刺激。已经显示⑶F8通路涉及活性⑶F8 二 聚体与高亲和力受体ActIIRB的结合，所述ActIIRB随后募集并活化低亲和力受体ALK4/ ALK5的转磷酸化。还显示蛋白质Smad 2和Smad 3随后被活化并与Smad 4形成复合物， 然后易位至核，随后活化靶基因转录。Lee和McPherron (Proc Natl Acad Sci USA2001, 98 =9306-9311)证实ActRIIB受体能够体内介导GDF8的影响，因为小鼠中显性负相形式 ActRIIB的表达模拟⑶F8基因敲除。
已显示在⑶F8的影响下，C2C12成肌细胞在细胞周期的G0/G1和G2期累积，因此 降低S-期细胞的数量。GDF8还诱导成肌细胞分化的失败，这与分化标记物表达的强降低 相关。⑶F8表达还降低了细胞在增殖和分化条件下的凋亡速率(Thomas等，J.Biol Chem 2000，275 40235-40243)。肌抑制素(⑶F8)表达的抑制导致肌肉肥大以及增生(Lee和McPherron，上文； McPherron等，上文)。肌抑制素负调节损伤后的肌肉再生，并且⑶F8无效小鼠中肌抑制 素的缺乏导致加速的肌肉再生(McCroskery等，(2005) J. Cell. Sci. 118 :3531_41)。人 抗-GDF8抗体(美国公开的申请No. 2004/0142382)已显示在体外和体内结合⑶F8并且 抑制GDF8活性，包括与骨骼肌量和骨密度负调节相关的GDF8活性。例如，在野生型小鼠 (Whittemore 等(2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 300 :965_71)和肌营养不良模型的 mdx 小鼠(Bogdanovich 等(2002) Nature420 :418_21 ；Wagner 等(2002) Ann. Neurol. 52 832-36)的骨骼肌中，肌抑制素-中和抗体提高体重、骨骼肌量和的肌肉尺寸和强度。另外， 这些小鼠中的肌抑制素抗体降低了对膈的损害，所述膈是也在ALS发病机制期间被靶向的 肌肉。已推测生长因子例如HGF对肌肉的作用可归因于肌抑制素表达的抑制(McCroskery 等(2005)，上文)，从而帮助将再生和退化之间的平衡正向移动。然而，这些现有技术的抗 体对GDF8而言是非特异性的，即这些抗体对TGF-β超家族的其它成员例如BMPll具有高 亲和力。迄今为止，所有已知的⑶F8活性抑制剂(例如前肽、可溶的ActRIIB受体、 抗-GDF8抗体等等)还中和具有重要生物功能的其它因子(例如BMP11、激活蛋白等)的 生物活性。例如激活蛋白和BMPll在胚胎发生期间起重要作用。激活蛋白βΑ被鉴定为 关键的生殖腺生长因子，BMPll负责中轴骨骼(axial skeleton)的同种转化(homeotic transformation)。纯合的BMPll敲除小鼠是围产期(perinatal)致死的；具有一个野生型 拷贝的BMPll基因的小鼠是可存活的，但是具有骨骼缺陷。因为激活蛋白和BMPll在胚胎 发生期间起重要作用，所以抑制GDF8和其它因子(例如BMP11)的拮抗剂提出了理论上的 安全性风险，所述安全性风险可以表现为被治疗的患者中的毒性或者例如具有生育能力的 女性的生殖毒性。因此存在对下述化合物和治疗方法的需要，所述化合物和治疗方法有助 于肌肉量和/或强度和/或骨密度的总体提高(尤其是在人中)，但是不干扰例如BMP11。 也就是说，在期望提高肌肉量、尺寸、强度等等的GDF8-相关病症的治疗中，尤其是在具有 生育能力的女性中，需要特异性抑制GDF8活性。因为已开发了使用⑶F-8调节剂的方法，所以需要开发监测和优化对个体施用这 类药剂的方法。具体地，测量生物流体中GDF-8蛋白质水平的能力对于目前的临床试验而 言具有重要意义。例如，循环⑶F-8水平可能诊断可受益于抗-GDF-8疗法的病理状况，或 者可能预测哪个个体更可能对抗-GDF-8疗法作出应答。另外，抗-GDF-8治疗期间外周血 中GDF-8水平的改变可以是肌肉量和/或功能的晚期可测量应答的早期指示器。为了完成这样的优化目标，需要检测或监测生物流体(例如血清和血浆)中的 ⑶F-4蛋白质水平。期望在用⑶F-8调节剂治疗之前、期间和之后监测⑶F-8水平，从而例 如鉴定适合这类治疗的个体、监测对治疗的应答，和跟踪治疗后进展。具体地，需要允许检 测和/或定量应答GDF-8调节剂(包括GDF-8抑制剂和抗-GDF-8抗体)施用的内源GDF-8 水平的方法。
因此，提供特异性抑制GDF8活性的化合物和方法以及检测和定量生物样品(例如 血清和血浆)中GDF-8水平的免疫检验是本发明的一个主要目的。

发明内容
本发明基于特异性结合生长与分化因子8 (GDF8)的抗体或抗原结合蛋白的发现， 所述抗体或抗原加合蛋白特异性地拮抗至少一种GDF8活性(例如GDF8与其受体的结合或 其它⑶F8-介导的信号转导事件)。本发明还基于⑶F8上被这些特异性抗-GDF8抗体或抗 原结合蛋白识别的表位的鉴定，因为本发明的抗体对GDF8是特异性的，并且不特异性结合 例如BMPl 1。除了提供对GDF8特异性的表位以外，本发明还提供了对GDF8特异性的拮抗剂 (在本文中也称作“特异性GDF8拮抗剂”、“GDF8拮抗剂”等等)，例如特异性拮抗(例如抑 制、降低和/或中和)至少一种GDF8活性(例如GDF8-介导的信号转导事件(例如GDF8与 其受体(例如其ALK4/ALK5受体)的结合))并且不显著拮抗BMPll活性的拮抗剂。本发 明还提供了用于检测和定量生物样品中GDF-8的方法。在某些实施方式中，所述方法包括 免疫检验，所述样品是血清和/或血浆。本发明还提供了本发明方法中使用的试剂盒。本 发明还提供了在治疗(包括改善、预防、诊断、预测)或监测GDF8-相关病症(例如肌肉病 症、神经肌肉病症、骨-退行性病症、代谢或诱导的骨病症、肥胖病症、葡萄糖代谢病症、胰 岛素_相关病症等等)的方法中使用所公开的特异性GDF8拮抗剂的方法。因此，在一个方面中，本发明提供了对GDF8的拮抗剂，其中所述拮抗剂包括GDF8 结合结构域的肽模拟物至少之一；经分离的核酸，其编码GDF8结合结构域的肽模拟物的 氨基酸；对GDF8特异性的抑制多核苷酸；和特异性结合GDF8但是不特异性结合BMPll的 抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白。在一个实施方式中，本发明提供了本文所述的拮抗剂，其中所述拮抗剂是GDF8结 合结构域的肽模拟物，并且选自基本上由选自以下的氨基酸序列组成的组SEQ ID N0:4的 氨基酸序列、SEQ ID NO 6的氨基酸序列、SEQ ID NO 8的氨基酸序列、SEQ ID NO 10的氨 基酸序列和SEQ IDNO 12的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明提供了下述拮抗剂， 所述拮抗剂是本文所述的肽模拟物并且被环化。在一些实施方式中，本发明提供了下书拮 抗剂，所述拮抗剂是本文所述的肽模拟物，并且通过二硫键被环化。在任意一个或多个实施 方式中，本发明提供了下述拮抗剂，所述拮抗剂是本文所述的肽模拟物并且具有至少一个 D-氨基酸。在一些实施方式中，本发明提供了下述拮抗剂，所述拮抗剂是可用作免疫原的肽 模拟物。在另一个实施方式中，本发明提供了本文所述的拮抗剂，其中所述拮抗剂是 特异性结合GDF8并且不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段， 其中所述抗体或抗原结合蛋白选自多克隆抗体；单克隆抗体；单特异性抗体；多特异 性抗体(polyspecific antibody)；人源化抗体；四聚体抗体；四价抗体；多样特异性 抗体(multispecific antibody)；单链抗体(single chain antibody)；结构域—特 异性抗体；单结构域抗体；结构域-缺失的抗体；融合蛋白；ScFc融合蛋白；单-链抗 体(single-chainantibody)；嵌合抗体；合成抗体；重组抗体；杂合抗体；经突变的抗 体；⑶R-移植的抗体；抗体片段，其可包括Fab、F(ab' )2、Fab'片段、Fv片段、单-链Fv(ScFv)片段、Fd片段、dAb片段；抗原结合蛋白，包括双抗体(diabody)、CDR3肽、受约束 的(constrained)FR3-CDR3-FR4肽、微体(nanobody)、二价微体、小模块免疫药物(SMIPs)、 鲨鱼(shark)可变IgNAR结构域和小体(minibody)。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂 是单克隆抗体。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是人源化的抗体。在一些实施方式中，本发明提供了 一种拮抗剂，所述拮抗剂是对GDF8特异性的抗 体、抗原结合蛋白质或其片段，其由至少一个互补性决定区(CDR)组成，所述互补性决定区 包含选自以下的氨基酸序列SEQ IDNO 19的氨基酸序列、SEQ ID NO 20的氨基酸序列、 SEQ ID NO 21的氨基酸序列、SEQ ID NO 22的氨基酸序列、SEQ ID NO 23的氨基酸序列、 SEQ ID NO 24的氨基酸序列、SEQ ID NO 25的氨基酸序列、SEQ IDNO 26的氨基酸序列、 SEQ ID NO 27的氨基酸序列、SEQ ID NO 28的氨基酸序列、SEQ ID NO 29的氨基酸序列、 SEQ ID NO 30的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是包含下述重链的抗-GDF8抗体、抗原结合 蛋白或其片段，所述重链包含第一、第二和第三⑶R，其中所述第一⑶R包含选自SEQ ID NO 19的氨基酸序列和SEQ ID NO 15的氨基酸序列的氨基酸；所述第二⑶R包含选自SEQ ID NO :20的氨基酸序列和SEQ ID NO :26的氨基酸序列的氨基酸；所述第三⑶R包含选自 SEQID NO 21的氨基酸序列和SEQ ID NO 27的氨基酸序列的氨基酸。在一些实施方式中， 本发明的抗体或抗原结合蛋白包含下述重链，所述重链包含选自SEQ ID N0:14的氨基酸序 列和SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是包含下述轻链的抗-GDF8抗体或抗原结合 蛋白，所述轻链包含第一、第二和第三⑶R，其中所述第一⑶R包含选自SEQ ID N0:22的氨 基酸序列和SEQ ID NO 28的氨基酸序列的氨基酸；所述第二⑶R包含选自SEQ ID NO 23 的氨基酸序列和SEQID NO 29的氨基酸序列的氨基酸；所述第三⑶R包含选自SEQ ID NO 24的氨基酸序列和SEQ ID NO :30的氨基酸序列的氨基酸。在一些实施方式中，本发明的 拮抗剂是包含下述轻链的抗体或抗原结合蛋白，所述轻链包含选自SEQ ID N0:16的氨基酸 序列和SEQ ID NO 17的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是下述抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其包 含含有SEQ ID N0:16的氨基酸序列的轻链，还包含含有SEQID NO 14的氨基酸序列的重 链。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是下述抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其包含含有 SEQ ID N0:17的氨基酸序列的轻链，还包含含有SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链。在 一些实施方式中，本发明提供了编码包含本发明GDF8拮抗剂的任意一种或多种氨基酸的 多核苷酸，如本文所述。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是下述抑制性多核苷酸，其特异性结合GDF8 并且选自SiRNA分子和反义分子。在一些实施方式中，本发明提供了任意一种或多种编码 本发明拮抗剂的本文所述多核苷酸。在一些实施方式中，本发明提供了编码下述氨基酸序 列的多核苷酸，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO :4的氨基酸序列、SEQ ID NO :6的氨基酸序 列、SEQID NO 8的氨基酸序列、SEQ ID NO 10的氨基酸序列和SEQ ID NO 12的氨基酸序 列。在另一实施方式中，本发明提供了下述多核苷酸，其中所述经分离的多核苷酸主要由选 自以下的核酸序列组成SEQ ID NO 3的核酸序列、SEQ ID NO 5的核酸序列、SEQ ID NO 7的核酸序列、SEQ IDNO 9的核酸序列、SEQ ID NO 11的核酸序列，及其片段的核酸序列。
在一些实施方式中，本发明提供了包含任意一种或多种本发明多核苷酸的宿主细 胞，其中所述多核苷酸与调控序列可操作地连接。在另一实施方式中，本发明提供了包含本 发明任意多核苷酸的载体。在另一实施方式中，本发明提供了包含含有任意一种或多种本 发明多核苷酸的载体的宿主细胞。在一些实施方式中，本发明提供了从本文所述经培养的包含任意一种或多种本发 明多核苷酸的宿主细胞中生产GDF8拮抗剂并分离宿主细胞所表达的GDF8拮抗剂的方法。 还在另一实施方式中，本发明提供了通过本文所述用于生产GDF8拮抗剂的方法生产的经 分离的⑶F8拮抗剂。在本发明的另一方面中，本发明提供了检测来自受试者的样品中GDF8存在的测 定法，其包含以下步骤将(i)样品和(ii)特异性结合GDF8的捕获试剂和(iii)特异性结 合GDF8的检测试剂合并，并检测捕获试剂与GDF8之间是否发生特异性结合，其中特异性结 合的检测表明样品中存在GDF8。 在本发明的一个实施方式中，样品中的GDF8与样品中存在的GDF8结合蛋白和 抗-GDF8解离。在一个实施方式中，本发明的检验还包括在将样品与捕获试剂合并之前将 样品与酸性缓冲液合并，如本文所述。在另一实施方式中，本发明检验的酸性缓冲液具有约 PH 1.0和pH 6.0之间的pH。在另一实施方式中，酸性缓冲液的pH约为pH 2.5。在一个实施方式中，本发明提供了任意一种或多种本文所述的检验，其中样品 选自血清、全血、血浆、活组织检查样品、组织样品、细胞悬浮液、唾液、口腔流体(oral fluid)、脑脊液、羊水、乳、初乳、乳腺分泌物、淋巴、尿、汗、泪液、胃液、滑液和粘液。在另一 实施方式中，本发明提供的样品选自全血、血清或血浆。在一个实施方式中，本发明提供了任意一种或多种本文所述检验，其中所述检 测步骤包含至少一种夹层检验(sandwich assay)和竞争性结合检验。在一些实施方式 中，所述检测步骤包含夹层检验。在一些实施方式中，检测步骤包含至少以下之一检测 与样品接触的固体光学表面处折射指数的改变；检测发光的改变；测量颜色的改变；检 测放射性的改变；使用biolayer干涉测定法(interferometry)测量；使用悬臂-检测 (cantilever-detection)测量；使用无标记的内在成像测量；和使用听觉检测测量。在一 些实施方式中，本发明的检测步骤测量颜色的改变。在一些实施方式中，检测步骤包括选自 以下的检验酶联免疫吸附检验(ELISA)；电-化学发光检验(ECL)；放射免疫检验(RIA)； 固-相放射免疫检验(SPRIA)；免疫印迹；免疫沉淀；荧光活化的细胞分选(FACS)。在另一 实施方式中，检测步骤包括ELISA。在一个实施方式中，通过化合物与特异性结合GDF8的检测试剂的特异性结合检 测GDF8的存在，其中所述化合物还包含可检测的标记。在另一实施方式中，可检测的标记 包括至少一种选自以下的标记酶标记；发光标记；蛋白质标记；维生素标记；发色标记； 放射性同位素标记和电子致密分子(electron dense molecule)标记。在另一实施方式中， 可检测的标记是蛋白质，并且还包括生物素。在一个实施方式中，本发明的检验提供了选自以下的捕获试剂抗-GDF8抗体、抗 原结合蛋白或其片段；GDF8结合蛋白；和GDF8结合结构域。在另一实施方式中，本发明的检 验提供的捕获剂是抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段，并且选自RK35、RK22、MY0-028、 MY0-029和JA16。在一些实施方式中，捕获试剂是RK35。在一些实施方式中，捕获试剂是RK22。在本发明检验的一个实施方式中，提供的检测试剂选自抗-GDF8抗体、抗原结合 蛋白或其片段；GDF8结合蛋白和GDF8结合结构域。在一个实施方式中，检测试剂是抗-GDF8 抗体、抗原结合蛋白或其片段，并且选自RK22和RK35。在另一实施方式中，本发明的检验提 供的检测试剂是RK35。在另一实施方式中，本发明的检验提供的检测试剂是RK22。在一个实施方式中，本发明提供了下述检验，其中捕获试剂是RK22，并且检测试剂 是RK35。在另一实施方式中，本发明提供了下述检验，其中捕获试剂是RK35并且检测试剂 是 RK22。在本发明的另一方面中，本发明提供了定量来自受试者的样品中GDF8存在的检 验，所述检验包括以下步骤将⑴样品和(ii)特异性结合GDF8的捕获试剂和(iii)特异 性结合GDF8的检测试剂合并，检测捕获试剂与GDF8之间是否发生特异性结合并定量样品 中的GDF8水平，其中特异性结合的检测表明样品中存在GDF8，并且可以被定量。在本发明 的一个实施方式中，样品中的GDF8与样品中存在的GDF8结合蛋白和抗-GDF8解离。在一 个实施方式中，本发明的检验还包括在将样品与捕获试剂合并之前将样品与酸性缓冲液合 并，如本文所述。在另一实施方式中，本发明检验的酸性缓冲液具有约PH 1.0和pH 6.0之 间的pH。在另一实施方式中，酸性缓冲液的pH约为pH 2.5。在本发明的另一方面中，本发明提供了用于在受试者中治疗(包括改善和/或预 防)⑶F8-相关病症的药物组合物，其包含可药用载剂和至少一种⑶F8拮抗剂，所述⑶F8 拮抗剂选自GDF8结合结构域的肽模拟物；经分离的核酸，其编码GDF8结合结构域肽模拟 物的氨基酸；GDF8特异性的抑制性多核苷酸；和特异性结合GDF8但是不特异性结合BMPll 的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含对GDF8特异性的结合结构域的肽 模拟物，其基本上由选自以下的氨基酸序列组成SEQ IDNO :4的氨基酸序列、SEQ ID NO 6 的氨基酸序列、SEQ ID NO 8的氨基酸序列、SEQ ID NO 10的氨基酸序列和SEQ ID NO 12 的氨基酸序列。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含经分离的核酸，其编码对⑶F8特异 性的氨基酸，所述核酸基本上由选自以下的核酸序列组成SEQ ID NO :3的核酸序列、SEQ ID NO 5的核酸序列、SEQ ID NO 7的核酸序列、SEQ ID NO 9的核酸序列、SEQ ID NO 11 的核酸序列及其片段的核酸序列。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含特异性结合GDF8但是不特异性结 合BMPll的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段，其包含含有SEQ ID NO 16的氨基酸序 列的轻链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ ID NO :14的氨基酸序列的重链。在另一实施 方式中，本发明的药物组合物提供了特异性结合GDF8但是不特异性结合BMPll的抗-GDF8 抗体、抗原结合蛋白或其片段，其包含含有SEQ ID NO :18的氨基酸序列的轻链，并且其中所 述抗体、抗原结合蛋白或其片段还包含含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列的重链。在一个实施方式中，本发明的药物组合物包含下述抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白 或其片段，其特异性结合⑶F8但是不结合BMPll并且包含至少一个下述互补性决定区 (⑶R)，所述⑶R包含选自以下的氨基酸序列SEQ ID NO 19的氨基酸序列、SEQ ID NO 20 的氨基酸序列、SEQID NO 21的氨基酸序列、SEQ ID NO 22的氨基酸序列、SEQ ID NO 23的氨基酸序列、SEQ ID NO 24的氨基酸序列、SEQ ID NO :25的氨基酸序列、SEQ ID NO 26 的氨基酸序列、SEQ ID NO 27的氨基酸序列、SEQ IDNO 28的氨基酸序列、SEQ ID NO 29 的氨基酸序列、SEQ ID NO 30的氨基酸序列。在一个实施方式中，本发明的药物组合物被用于在哺乳动物患者中治疗选自以下 的GDF8相关病症肌肉病症、神经肌肉病症、骨_退行性病症、代谢或诱导的骨病症、肥胖 病症、葡萄糖代谢病症和胰岛素相关病症。在本发明的药物组合物的另一实施方式中，其 中GDF8相关病症选自肌营养不良、ALS、肌肉萎缩、器官萎缩、腕管综合征、虚弱、充血性阻 塞性肺病、老年性肌肉萎缩、恶病质、肌肉消耗综合征、肥胖症、2型糖尿病、糖耐量减低、代 谢综合征、胰岛素抗性、营养病症、过早的性腺衰竭、雄性激素阻抑、继发性甲状旁腺功能亢 进、骨质疏松、骨质减少、骨关节炎、骨量过低(low bone mass)、维生素D缺乏和神经性厌食 症。本发明的另一方面提供了在哺乳动物患者中治疗(包括改善和/或预防) GDF8-相关病症的方法，所述方法包括对患者施用治疗有效量的几乎无毒到无毒的GDF8特 异性拮抗剂。在另一实施方式中，本发明的方法提供的本发明的拮抗剂选自GDF8结合结 构域的肽模拟物；经分离的核酸，其编码GDF8结合结构域的肽模拟物的氨基酸；GDF8特异 性的抑制性多肽；和特异性结合GDF8但不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋 白或其片段。在一个实施方式中，本发明提供的本发明的拮抗剂是GDF8结合结构域的肽模拟 物，并且所述⑶F8结合结构域基本上由选自以下的氨基酸序列组成SEQ ID N0:4的氨基 酸序列、SEQ ID NO 6的氨基酸序列、SEQID NO 8的氨基酸序列、SEQ ID NO 10的氨基酸 序列，和SEQ ID NO 12的氨基酸序列。在一个实施方式中，本发明的治疗方法提供了下述治疗方法，其中本发明的拮抗 剂是编码GDF8特异性氨基酸的经分离的核酸，其基本上由选自以下的核酸序列组成SEQ ID NO :3的核酸序列、SEQ ID NO :5的核酸序列、SEQ ID NO :7的核酸序列、SEQ ID NO :9的 核酸序列、SEQ IDNO=Il的核酸序列，及其片段的核酸序列。在一个实施方式中，本发明提供了下述治疗方法，其中本发明的拮抗剂是抗-GDF8 抗体、抗原结合蛋白或其片段，其特异性结合GDF8但不特异性结合BMP11，并且包含含有 SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链，还包含含有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的重链。在 一些实施方式中，本发明的治疗方法提供的本发明的拮抗剂是抗-GDF8抗体、抗原结合蛋 白或其片段，其特异性结合⑶F8但不特异性结合BMP11，并且包含含有SEQID NO :18的氨基 酸序列的轻链，其中所述抗体、抗原结合蛋白或其片段还包含含有SEQ ID N0:17的氨基酸 序列的重链。在一些实施方式中，本发明的治疗方法提供的本发明的拮抗剂是抗-GDF8抗 体、抗原结合蛋白或其片段，其特异性结合GDF8但是不结合BMPll并且包含至少一个下述 互补性决定区(⑶R)，所述⑶R包含选自以下的氨基酸序列SEQ ID NO :19的氨基酸序列、 SEQ ID NO 20的氨基酸序列、SEQ ID NO 21的氨基酸序列、SEQ ID NO 22的氨基酸序列、 SEQ ID NO 23的氨基酸序列、SEQ IDNO 24的氨基酸序列、SEQ ID NO 25的氨基酸序列、 SEQ ID NO 26的氨基酸序列、SEQ ID NO 27的氨基酸序列、SEQ ID NO 28的氨基酸序列、 SEQ ID NO 29的氨基酸序列、SEQ ID NO 30的氨基酸序列。在本发明的一个实施方式中，本发明的治疗方法提供的GDF8-相关病症选自受试者中的肌肉病症、神经肌肉病症、骨-退行性病症、代谢或诱导的骨病症、肥胖病症、葡萄 糖代谢病症和胰岛素相关病症。在本发明的一些实施方式中，本发明的治疗方法提供的 GDF8-相关病症选自肌营养不良、ALS、肌肉萎缩、器官萎缩、腕管综合征、虚弱、充血性阻 塞性肺病、老年性肌肉萎缩、恶病质、肌肉消耗综合征、肥胖症、2型糖尿病、糖耐量减低、代 谢综合征、胰岛素抗性、营养病症、过早的性腺衰竭、雄性激素阻抑、继发性甲状旁腺功能亢 进、骨质疏松、骨质减少、骨关节炎、骨量过低、维生素D缺乏和神经性厌食症。本发明的另一方面提供了诊断、预测或检测受试者是否遭受GDF8-相关病症的方 法，所述方法包括步骤从受试者获得第一样品；将第一样品与本发明的拮抗剂合并；检测 第一样品中GDF8的存在；定量第一样品中的GDF8水平；从未遭受GDF8-相关病症的受试 者获得第二样品；将第二样品与拮抗剂合并；检测第二样品中的GDF8水平；定量第二样品 中的⑶F8水平并且比较第一和第二样品中的⑶F8水平；其中与第一样品相比，第二样品中 GDF8水平的提高、降低或类似表明GDF8-相关病症的严重性是否改变。本发明的另一方面提供了监测GDF8-相关病症严重性的方法，所述方法包括步 骤(i)从受试者获得第一样品；(ii)将第一样品与权利要求1-16中任一项的拮抗剂合 并；(iii)检测第一样品中GDF8的存在；(iv)定量第一样品中的GDF8水平；(ν)从未遭 受GDF8-相关病症的受试者中获得第二样品；(vi)将第二样品与拮抗剂合并；(vii)检测 第二样品中的⑶F8水平；(viii)定量第二样品中的⑶F9水平；和(ix)比较第一和第二 样品中的GDF8水平；其中与第二样品相比，第一样品中GDF8水平的提高、降低或类似表明 ⑶F8-相关病症的严重性是否改变。本发明的另一方面提供了预测受试者会发生GDF8-相关病症的可能性的方法，所 述方法包括步骤(i)从受试者获得第一样品；(ii)将第一样品与权利要求1-16中任一项 的拮抗剂合并；(iii)检测第一样品中GDF8的存在；(iv)定量第一样品中的GDF8水平；(ν) 从未遭受GDF8-相关病症的受试者中获得第二样品；(vi)将第二样品与拮抗剂合并；(vii) 检测第二样品中的GDF8水平；(viii)定量第二样品中的GDF9水平；和(ix)比较第一和第 二样品中的GDF8水平；其中与第一样品相比，第二样品中GDF8水平的提高、降低或类似表 明受试者会发生GDF8-相关病症的可能性。本发明的另一方面提供了预测受试者会发生GDF8-相关病症的可能性的方法，所 述方法包括步骤(i)从受试者获得第一样品；(ii)将第一样品与权利要求1-16中任一项 的拮抗剂合并；(iii)检测第一样品中GDF8的存在；(iv)定量第一样品中的GDF8水平；(ν) 从未遭受GDF8-相关病症的受试者中获得第二样品；(vi)将第二样品与拮抗剂合并；(vii) 检测第二样品中的GDF8水平；(viii)定量第二样品中的GDF9水平；和(ix)比较第一和第 二样品中的GDF8水平；其中与第二样品相比，第一样品中GDF8水平的提高、降低或类似表 明受试者会发生GDF8-相关病症的可能性。本发明的另一方面提供了药物组合物在制备用于在哺乳动物患者中治疗(包括 改善和/或预防)⑶F8-相关病症的药物中的用途，其中所述药物组合物包含可药用载剂 和至少一种选自以下的GDF8拮抗剂GDF8结合结构域的肽模拟物；经分离的核酸，其编码 GDF8结合结构域肽模拟物的氨基酸；GDF8特异性的抑制性多核苷酸；和特异性结合GDF8 但是不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段。本发明的另一方面提供了用于在来自受试者的样品中检测GDF8存在的试剂盒，所述试剂盒包含特异性结合GDF8的捕获试剂和特异性结合GDF8的检测试剂，其中GDF8对 捕获和检测试剂的特异性结合的检测表明样品中存在GDF8。在一些实施方式中，本发明的 试剂盒还包含酸性缓冲液。本发明的另一方面提供了用于定量来自受试者的样品中GDF8的试剂盒，所述试 剂盒包含特异性结合GDF8的捕获试剂和特异性结合GDF8的检测试剂，其中GDF8对捕获和 检测试剂的特异性结合的检测允许定量样品中的GDF8。在一些实施方式中，本发明的试剂 盒还包含酸性缓冲液。在另一方面中，本发明提供了本文所述的抗体，其中所述抗体是特异性结合GDF8 但是不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体、抗原结合蛋白或其片段，其中所述抗体或抗原 结合蛋白选自多克隆抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、人源化抗体、四聚 体抗体、四价抗体、多样特异性抗体、单链抗体、结构域-特异性抗体、单结构域抗体、结构 域-缺失的抗体、融合蛋白、ScFc融合蛋白、单-链抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂 合抗体、经突变的抗体、CDR-移植的抗体，抗体片段，所述抗体片段可包括Fab、F(ab' )2、 Fab'片段、Fv片段、单-链Fv (ScFv)片段、Fd片段和dAb片段，抗原结合蛋白，所述抗原 结合蛋白可包括双抗体、⑶R3肽、受约束的FR3-⑶R3-FR4肽、微体、二价微体、小模块免疫 药物(SMIPs)、鲨鱼可变IgNAR结构域和小体。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是单克 隆抗体。在一些实施方式中，本发明的拮抗剂是人源化抗体。在一些实施方式中，抗体是 抗-GDF8抗体。在一些实施方式中，本发明的抗体是下述抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其 包含含有SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链，还包含含有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的 重链。在一些实施方式中，本发明的抗体是下述抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其包含含有 SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的轻链，还包含含有SEQ ID NO 18的氨基酸序列的重链。序列简述DNA和氨基酸序列公开于序列表中，并列举在表1中。表 1
SEQ ID NO说明1氨基酸序列成熟人GDF82氨基酸序列人GDF8前体3DNA序列肽模拟物(GEl)4氨基酸序列肽模拟物(GEl)5DNA序列肽模拟物(GE2)6氨基酸序列肽模拟物(GE2)
权利要求
生长与分化因子8(GDF8)的特异性拮抗剂，其中所述拮抗剂是特异性结合GDF8并且不特异性结合BMP11的抗 GDF8抗体或抗原结合蛋白，其中所述抗体或抗原结合蛋白选自下述构成的组多克隆抗体；单克隆抗体；单特异性抗体；多特异性抗体；人源化抗体；四聚体抗体；四价抗体；多样特异性抗体；单链抗体；结构域 特异性抗体；单结构域抗体；结构域 缺失的抗体；融合蛋白；ScFc融合蛋白；单 链抗体；嵌合抗体；合成抗体；重组抗体；杂合抗体；经突变的抗体；CDR 移植的抗体；抗体片段，包括Fab、F(ab′)2、Fab′片段、Fv片段、单 链Fv(ScFv)片段、Fd片段、dAb片段；抗原结合蛋白，包括双抗体、CDR3肽、受约束的FR3 CDR3 FR4肽、微体、二价微体、小模块免疫药物(SMIPs)、鲨鱼可变IgNAR结构域和小体。
2.权利要求1的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含至少一个下述互补性决定 区(⑶R)，所述互补性决定区包含选自SEQ ID NO 19的氨基酸序列、SEQ ID NO 20的氨基 酸序列、SEQ ID NO 21的氨基酸序列、SEQ ID NO 22的氨基酸序列、SEQ ID NO 23的氨基 酸序列、SEQ IDNO 24的氨基酸序列、SEQ ID NO 25的氨基酸序列、SEQ ID NO 26的氨基 酸序列、SEQ ID NO 27的氨基酸序列、SEQ ID NO 28的氨基酸序列、SEQ ID NO 29的氨基 酸序列、SEQ ID NO :30的氨基酸序列构成的组的氨基酸序列。
3.权利要求2的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含重链，并且其中所述重链 包含第一、第二和第三互补性决定区，其中所述第一互补性决定区包含选自SEQ ID NO: 19的氨基酸序列和SEQ ID N0:25的 氨基酸序列构成的组的氨基酸序列，其中所述第二互补性决定区包含选自SEQ ID NO 20的氨基酸序列、SEQ ID NO 26的 氨基酸序列构成的组的氨基酸序列，并且其中所述第三互补性决定区包含选自SEQ ID NO :21的氨基酸序列、SEQ ID NO 27的氨基酸序列构成的组的氨基酸序列。
4.权利要求1的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含下述重链，所述重链含有 选自SEQ ID NO 14的氨基酸序列和SEQ ID NO 18的氨基酸序列构成的组的氨基酸序列。
5.权利要求2的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含下述轻链，并且其中所述 轻链包含第一、第二和第三互补性决定区，其中所述第一互补性决定区包含选自SEQ ID NO :22的氨基酸序列和SEQ ID N0:28的 氨基酸序列构成的组的氨基酸序列，其中所述第二互补性决定区包含选自SEQ ID NO :23的氨基酸序列和SEQ ID N0:29的 氨基酸序列构成的组的氨基酸序列，并且其中所述第三互补性决定区包含选自SEQ ID NO :24的氨基酸序列和SEQ ID NO 30的氨基酸序列构成的组的氨基酸序列。
6.权利要求1的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含下述轻链，所述轻链包含 选自SEQ ID NO 16的氨基酸序列和SEQ ID NO 17的氨基酸序列构成的组的氨基酸序列。
7.权利要求1的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQIDNO 16的氨基 酸序列的轻链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ IDNO 14的氨基酸序列的重链。
8.权利要求1的拮抗剂，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQIDNO 17的氨基 酸序列的轻链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ IDNO 18的氨基酸序列的重链。
9.多核苷酸，其编码包含权利要求1-8中任一项的GDF8拮抗剂的氨基酸。
10.包含权利要求9的多核苷酸的宿主细胞，其中所述多核苷酸与调控序列可操作地 连接。
11.包含权利要求9的多核苷酸的载体。
12.包含权利要求11的载体的宿主细胞。
13.生产⑶F8拮抗剂的方法，所述方法包括培养权利要求12的包含多核苷酸的宿主细 胞，并分离所述宿主细胞表达的所述GDF8拮抗剂。
14.经分离的⑶F8拮抗剂，其是通过权利要求13的方法生产的。
15.检测来自受试者的样品中GDF8存在的检验，所述检验包括以下步骤(a)将⑴样品；( )特异性结合GDF8的捕获试剂； (iii)特异性结合GDF8的检测试剂； 合并，并(b)检测所述捕获试剂与GDF8之间是否发生特异性结合， 其中特异性结合的检测表明所述样品中存在GDF8。
16.权利要求15的检验，所述检验还包括在(a)中合并之前将所述样品与酸性缓冲液口井O
17.根据权利要求16的检验，其中所述酸性缓冲液的pH在约pH1. 0和pH 6. 0之间。
18.根据权利要求16的检验，其中所述酸性缓冲液的pH为约pH2.5。
19.权利要求15的检验，其中所述捕获试剂选自抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白；GDF8 结合蛋白和⑶F8结合结构域构成的组。
20.权利要求19的检验，其中所述捕获试剂是抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，并且选自 RK35 和 RK22。
21.权利要求20的检验，其中所述捕获试剂是RK35。
22.权利要求20的检验，其中所述捕获试剂是RK22。
23.权利要求15的检验，其中所述检测试剂选自抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白；GDF8 结合蛋白和⑶F8结合结构域构成的组。
24.权利要求23的检验，其中所述检测试剂是抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，并且选自 RK35 和 RK22。
25.权利要求24的检验，其中所述检测试剂是RK35。
26.权利要求24的检验，其中所述检测试剂是RK22。
27.定量来自受试者的样品中GDF8的检验，所述检验包括以下步骤(a)将⑴样品；( )特异性结合GDF8的捕获试剂； (iii)特异性结合GDF8的检测试剂； 合并，并(b)检测所述捕获试剂与GDF8之间是否发生特异性结合，并(c)定量GDF8水平；其中特异性结合的检测表明所述样品中GDF8的存在能够被定量。
28.根据权利要求27的检验，所述检验还包括在(a)中合并之前将所述样品与酸性缓 冲液合并。
29.根据权利要求28的检验，其中所述酸性缓冲液的pH在约pH1. 0和pH 6. 0之间。
30.根据权利要求28的检验，其中所述酸性缓冲液的pH为约pH2.5。
31.包含可药用载体和⑶F8拮抗剂的药物组合物，其中所述拮抗剂是特异性结合⑶F8 但不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白。
32.如权利要求31所述的药物组合物，其中所述特异性结合GDF8但不特异性结合 BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQ IDNO 16的氨基酸序列的轻链，并且 其中所述抗体还包含含有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的重链。
33.如权利要求31所述的药物组合物，其中所述特异性结合GDF8但不特异性结合 BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQ IDNO 18的氨基酸序列的轻链，并且 其中所述抗体还包含含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列的重链。
34.如权利要求31所述的药物组合物，其中所述特异性结合GDF8但不结合BMPll的 抗-GDF8抗体包含至少一个下述互补性决定区(⑶R)，所述互补性决定区包含选自SEQ ID NO 19的氨基酸序列、SEQ ID NO 20的氨基酸序列、SEQ ID NO 21的氨基酸序列、SEQ ID NO :22的氨基酸序列、SEQ ID NO :23的氨基酸序列、SEQ ID NO :24的氨基酸序列、SEQ IDNO 25的氨基酸序列、SEQ ID NO 26的氨基酸序列、SEQ ID NO 27的氨基酸序列、SEQ ID NO 28的氨基酸序列、SEQ ID NO 29的氨基酸序列、SEQ ID NO 30的氨基酸序列构成的组 的氨基酸序列。
35.用于在哺乳动物患者中治疗GDF8-相关病症的方法，所述方法包括对所述患者施 用治疗有效量的几乎无毒到无毒的GDF8特异性拮抗剂。
36.权利要求35的方法，其中所述GDF8拮抗剂是特异性结合GDF8但不特异性结合 BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述GDF8拮抗剂是特异性结合GDF8但不特异性 结合BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其包含含有SEQ ID NO :16的氨基酸序列的轻 链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ ID NO :14的氨基酸序列的重链。
38.如权利要求36所述的方法，其中所述GDF8拮抗剂是特异性结合GDF8但不特异性 结合BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，其包含含有SEQ ID NO :18的氨基酸序列的轻 链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ ID NO :17的氨基酸序列的重链。
39.如权利要求36中所述的方法，其中所述特异性结合GDF8但不特异性结合BMPll的 抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白包含至少一个下述互补性决定区(⑶R)，所述互补性决定区 包含选自SEQ ID NO 19的氨基酸序列、SEQ ID NO 20的氨基酸序列、SEQ ID NO 21的氨 基酸序列、SEQ IDNO 22的氨基酸序列、SEQ ID NO 23的氨基酸序列、SEQ ID NO 24的氨 基酸序列、SEQ ID NO 25的氨基酸序列、SEQ ID NO 26的氨基酸序列、SEQ ID NO 27的氨 基酸序列、SEQ ID NO 28的氨基酸序列、SEQ IDNO 29的氨基酸序列、SEQ ID NO 30的氨 基酸序列构成的组的氨基酸序列。
40.用于诊断、测定或预测、或检测受试者是否遭受GDF8-相关病症的方法，所述方法 包括下述步骤(a)从所述受试者获得第一样品；(b)将第一样品与如权利要求9所述的拮抗剂合并；(c)检测所述第一样品中GDF8的存在；(d)定量所述第一样品中的GDF8水平；(e)从未遭受GDF8-相关病症的受试者获得第二样品；(f)将所述第二样品与所述拮抗剂合并；(g)检测所述第二样品中的GDF8水平；(h)定量所述第二样品中的GDF9水平并且(i)比较所述第一样品和所述第二样品中的GDF8水平；其中与所述第二样品相比，所述第一样品中GDF8水平的提高、降低或类似指示患者是 否遭受⑶F8-相关病症。
41.药物组合物在制备用于在哺乳动物患者中治疗GDF8-相关病症的药物中的用途， 其中所述药物组合物包含可药用载剂和GDF8拮抗剂，其中所述GDF8拮抗剂是特异性结合 GDF8但不特异性结合BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白。
42.用于在来自受试者的样品中检测GDF8的存在或对GDF8进行定量的试剂盒，所述 试剂盒包含特异性结合GDF8的捕获试剂，和特异性结合GDF8的检测试剂，其中检测到GDF8 对所述捕获和检测试剂的特异性结合指示所述样品中存在GDF8。
43.如权利要求78中所述的试剂盒，其还包含酸性缓冲液。
44.对生长与分化因子8(GDF8)特异性的抗体，其中特异性结合GDF8但不特异性结合 BMPll的抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白，并且其中所述抗体或抗原结合蛋白选自多克隆 抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、人源化抗体、四聚体抗体、四价抗体、多样 特异性抗体、单链抗体、结构域_特异性抗体、单结构域抗体、结构域_缺失的抗体、融合蛋 白、ScFc融合蛋白、单-链抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂合抗体、经突变的抗体、 ⑶R-移植的抗体，抗体片段，所述抗体片段包括Fab、F(ab' )2、Fab'片段、Fv片段、单-链 Fv (ScFv)片段、Fd片段和dAb片段，抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包括双抗体、CDR3肽、 受约束的FR3-⑶R3-FR4肽、微体、二价微体、小模块免疫药物(SMIPs)、鲨鱼可变IgNAR结构 域和小体构成的组。
45.权利要求44的抗体，其中所述抗体或抗原结合蛋白是单克隆抗体。
46.权利要求45的抗体，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQIDN0:16的氨基 酸序列的轻链。并且其中所述抗体还包含含有SEQ IDNO :14的氨基酸序列的重链。
47.权利要求44的抗体，其中所述抗体或抗原结合蛋白是人源化抗体。
48.权利要求47的抗体，其中所述抗体或抗原结合蛋白包含含有SEQIDN0:17的氨基 酸序列的轻链，并且其中所述抗体还包含含有SEQ IDNO 18的氨基酸序列的重链。
全文摘要
本公开文本提供了与生长与分化因子-8(GDF8)相关的、可能体外和/或体内抑制GDF8活性和信号的新颖分子，尤其是对GDF8特异性的表位和GDF8的其它特异性拮抗剂，尤其是抗-GDF8抗体或抗原结合蛋白质或其片段。本公开文本还提供了用于检测和定量GDF8的免疫测定法。本公开文本还提供了用于诊断、预防、改善和治疗与GDF8相关的病症(例如肌肉、骨和胰岛素代谢的退行性病症)的方法。最后，本公开文本提供了通过使用本发明的抗体、多肽、多核苷酸和载体治疗这类病症的药物。
文档编号C07K16/22GK101970487SQ200880123772
公开日2011年2月9日 申请日期2008年10月31日 优先权日2007年11月1日
发明者丽莎·安娜·柯林斯-莱西, 克里斯托弗·约翰·科克兰, 吉尔特路达·马什特尔德·维尔德曼, 向-阳·谭, 爱德华·罗兰德·拉瓦利, 约翰·亚当·诺瓦克, 里奥德米拉·詹纳迪弗那·特切斯迪阿可瓦, 里耶兹·卡里姆, 金伯利·安·马克特 申请人:惠氏有限责任公司