新型抗肿瘤化合物的制作方法

专利名称：：新型抗肿瘤化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新型kahalalide抗肿瘤化合物，特别是kahalalideF的类似物，含有它们的药物组合物以及它们作为抗肿瘤、抗病毒、抗真菌剂和在银屑病治疗中的应用。
背景技术：
：Kahalalide化合物是从-一种夏威夷海洋中草食性软体动物ra/escera及其食物，绿藻羽藻属物种(greenalga^yo/wz;y.中分离出来的肽。关于KahalalidesF的描述见于Hamman，M等，J.Am.Chem.Soc.,1993,115，5825-5826。关于KahalalideA-G的描述见于Hamann,M.等，J.Org.Chem,1996,61，6594-6600:"Kahalalides:bioactivepeptidesfromamarinemollusk五/yw.arw/^scmsanditsalgaldiet^yo戸、s/."。关于KahalalideH和J的描述见于ScheuerP.J.等，丄Nat.Prod.1997,60,562-567:"Twoacyclickahalalidesfromthesacoglossanmollusk五/戸'a关于KahalalideO的描述见于ScheuerP.J.等，J.NatProd.2000,63(1)152-4:AnewdepsipeptidefromthesacoglossanmolluskElysiaornataandthegreenalga5^yo/w^species"。关于kahalalideK，参见Kan,Y.等,J.Nat.Prod.199962(8)1169-72:"KahalalideK:Anewcyclicdepsipeptidefromthehawaiiangreenalga5^yo戸'5species"。相关报道还参见Goetz等，Tetrahedron,1999,55;7739-7746:"TheabsolutestereochemistryofKahalalideF";Albericio,F.等TetrahedronLetters,2000,41,9765-9769:"KahalalideB.Synthesisofanaturalcyclodepsipeptide";Becerro等J.Chem.Ecol.2001,27(11),2287-99"Chemicaldefensesofthesarcoglossanmollusk五/，'<3ra加ceraanditshostAlga^yo戸's5p."。在kahalalide化合物中，kahalalideF因其抗肿瘤活性而最具前景。其结构复杂，包含六个氨基酸作为环状部分和七个氨基酸的末端具有脂肪酸基团的环外链。据报道原始的kahalalideF具有结构(I)。D-allo-Ile7D-allo-He5在WO04035613中描述了下式(II)的4(S)-甲基乙基化合物。WO04035613中所有内容结合于此作为参考。D-allo-IIe7D-allo-"e5(II)KahalalideF抗人肺癌A-549和人结肠癌HT-29的体外细胞培养物的活性报道于EP610078。还证明KahalalideF具有抗病毒和抗真菌性能，以及在银屑病的治疗中的用途。WO0236145描述了含KahalalideF的药物组合物和这种化合物在癌症治疗中新的应用，其完整地结合于此作为参考。WO0333012描述了Kahalalide化合物在肿瘤学中的临床应用，其完整地结合于此作为参考。关于天然及合成kahalalide化合物的合成及细胞毒活性的描述参见WO0158934，其完整地结合于此作为参考。WO0158934描述了KahalalideF的合成及末端脂肪酸链被其它脂肪酸替代的具有相似结构的化合物的合成。仍需提供更多的抗肿瘤化合物，特别是更多具有改良了的性能的Kahalalide化合物。我们发现了具有改善的生物学活性的Kahalalide类似物化合物。本发明涉及式1的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中环状或环外部分中的一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，被有机基团掩蔽或被除去。本发明还涉及式1的化合物，其中脂发明概述肪族末端酸基被其它酰基替代或被除去。本发明还涉及包含前述化合物及药用载体，赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明进一步提供了治疗患癌症、病毒感染、真菌感染或银屑病的任何哺乳动物，尤其是人的方法，包括对被感染的个体施用治疗有效量的上述化合物。本发明可特别用于治疗对其它治疗无有利应答的难治癌症的患者。特别是，本发明的组合物可在其它化疗尝试和无效后使用。本发明特别涉及对前列腺癌，乳腺癌，肝细胞癌，黑素瘤，结直肠癌，肾癌，卵巢癌，NSCL癌，上皮癌，胰腺癌及过表达Her2/neu癌基因的肿瘤患者的治疗。另一方面本发明涉及上述定义的化合物在制备药物中的应用。在优选实施方案中，药物用于癌症，银屑病，病毒感染或真菌感染的治疗。本发明另外提供包含独立容器的试剂盒，容器含有药物组合物和重构试剂，该组合物含有以上定义的化合物。还提供了重构方法。发明详述我们鉴定了KahalalideF的类似物，其表现出相对于KahalalideF的显著活性改进。本发明涉及式1的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中环外或环上的一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，被有机基团掩蔽或被除去。本发明还涉及式1的化合物，其中脂肪族甲基己酸酰基被其它酰基替代或被除去。环外氨基酸本发明优选的化合物包括式1的化合物，其中环外链的一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，被有机基团掩蔽或被除去。特别地，优选的化合物包括那些环外链中有1、2或3个替代氨基酸的化合物；以及那些环外链上有l、2、3、4、5或6个氨基酸被除去的化合物。特别优选的是式1的那些化合物，其中一个环外链氨基酸被另一个天然或非天然氨基酸替代，和/或被一个或多个替代有机基团掩蔽。此项优选特别适用于8位上的L-Om氨基酸。因此，本发明的另一方面，提供了式1的化合物，其中8位上不是L-Orn。该L-Om可被D-Orn替代，或被其它天然或非天然氨基酸替代。例如，L-Orn可被天然氨基酸替代，如赖氨酸；或是被掩蔽了的天然氨基酸，如具有一个或多个垸基、苯基或寡亚甲基取代基的精氨酸或赖氨酸，例如N(Me)2，N'(Me)rArg，N(Me,Ph)，N'(Me)2-Arg，N(CH2)4，N'(Me)2-Arg，N(CH2)4，N'(CH2)4-Arg，NE(Me)3-Lys。该L-Orn可被掩蔽。例如，L-Om的氨基可含有取代基，尤其是垸基取代基，其可被进一步取代，尤其是被杂环基团取代，例如N5(CHN(CH2)4，N'(CH2)4)-Om;或更复杂的取代基如生物素鸟氨酸或Orn(N5Tfa)。环上氨基酸本发明其它优选的化合物包括式1的那些化合物，其中环链上的一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，被有机基团掩蔽或被除去。特别地，优选的化合物包括环链上有1、2或3个替代氨基酸的化合物。特别优选的是式1的那些化合物，其中一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，和/或被有机基团掩蔽。此项优选特别适用于3位上的L-Phe氨基酸。因此，从本发明的一方面，提供了式1的化合物，其中3位上的L-Phe被替代或掩蔽。该L-Phe可被D-PHe替代，或被另外的天然或非天然氨基酸替代。例如，L-Phe可被天然氨基酸替代，如酪氨酸；或是烷基取代的氨基酸，如N-甲基酪氨酸；芳基取代的氨基酸，如2-氨基-3-联苯-4-基-丙酸，2-氨基-3-萘-2-基-丙酸或氨苯乙酸；杂环基取代的氨基酸，如2-氨基-3-噻吩-2-基-丙酸；或环状氨基酸其中氨基是杂环的一部份，如1,2，3，4-四异喹啉-3-羧酸或八氢异吲哚-l-羧酸。该L-Phe可被掩蔽。例如，苯环可被部分或完全饱和，以及被一个或多个取代基取代。苯环的取代基可被指定，优选卤素或硝基。氨基可有1个或2个取代基，尤其是烷基如甲基，特别是l甲基取代基。末端酰基除了环外链和/或环上部分氨基酸的修饰以外，还有环外链上末端酰基修饰的化合物。例如，该酰基可包含一个或多个取代基，特别是芳香族、杂环或碳环基团，这些基团又可含有一个或多个取代基，例如可以是含有一个或多个取代基的苯甲酰基，含有一个或多个取代基的苯烷酰基或是含有一个或多个取代基的肉桂酰基。另外，此末端酰基可以是另外的脂肪酸，典型的是含有3到26个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸，更特别是12到20个碳原子。用于替代式1中末端酰基的典型基团包括-多至26个碳原子并含有一个或多个取代基的直链垸酰基，特别是选自任选取代的环烷基如4-甲基环已基的取代基；垸基，特别是短链烷基如甲基；任选取代的芳基，特别是苯基如二氟苯基；卤素如氟基到全氟基；氧基；氨基；或亚氨基。-任选取代的苯甲酰基如苯甲酰基自身，p-甲基苯甲酸，p-三氟甲基苯甲酸，胡椒基酰(piperonyloyl)。-在链烯酰基(alkenoyl)中优选含有两个碳原子的芳链烯酰基，特别是肉桂酰基如p-三氟甲基肉桂酰基。而且，此酰基可被其它酰基替代，优选式R'CO-。R，如所定义的并适于是烷基，链烯基，芳基，杂环基，或碳环基，而且其自身可被替代。最后，还有环外链脂肪酸上有独特修饰的化合物，提供5-甲基已基末端基团。组合的变化在环外氨基酸，环上氨基酸和末端酰基上的可能变化可以组合进行。因此，本发明的其它优选的化合物是式1的那些化合物，其中环外链上一个或多个氨基酸和/或环状部分一个或多个氨基酸被修饰，如上所述，和/或末端酰基被修饰。8位上L-Om被替代或掩蔽的化合物可接受其它优选的修饰，包括侧链末端基团上的4(S)-甲基己基或其它基团。3位上L-Phe被替代或掩蔽的化合物可接受其它优选的修饰，包括侧链末端基团上的4(S)-甲基己基或其它基团。取代基的实例包括Crds垸基，C2-C,8链烯基，CVd8炔基，芳基，杂环基团，OR'，SR'，SOR'，S02R，，N02，NHR'，N(R')2，NHCOR'，N(COR')2，NHS02R'，CN，卣素，C(=0)R'，C02R'，OC(=0)R'，其中每个R'基团都独立选自H,OH'N02，丽2，SH，CN，卣素，C(=0)H，C(=0)烷基，C02H，取代的或未取代的C,-C,8垸基，取代的或未取代的C,-C,8链烯基，取代的或未取代的d-C,8炔基，和取代的或未取代的芳基。本发明的化合物中合适的卤素取代基包括F，Cl，Br和I。垸基基团含有饱和的线性或支化的烃基，包括，例如，甲基，乙基，异丙基，异丁基，t-丁基，庚基，十二垸基，十八烷基，戊基，2-乙基已基，2-甲基丁基，5-甲基已基，9-甲基-3-癸基等，特别是含有单分支甲基的烷基。合适的垸基是长链的并含有1至20个碳原子，更典型地1至15或1至10个碳原子，或者是短链的含有1至6个或1至3个碳原子。长碳链是用于末端脂肪酸基团的候选者。本发明的化合物中优选的链烯基和炔基含有一个或多个不饱和键并含2至12个碳原子，更优选地是2至8个碳原子，还更优选的是2至6个碳原子，甚至更优选的是2、3或4个碳原子。此处所用术语链烯基和炔基指环状和非环状基团，尽管直链的或支化的非环状基团通常更为优选。在通常意义上，我们在链烯基中包括了亚垸基，它们都是含双键的取代基。本发明的化合物中合适的芳基包括单环和多环化合物，包括含有分离的和/或稠合的芳基的多环化合物。典型的芳基含有1至3个分离的或稠合的环和6至大约18个碳环原子。特别优选的芳基包括取代的或未取代的苯基，萘基，联苯，菲基和蒽基。合适的酰基包括含有2至约12个碳原子，更优选地2至约8个碳原子，还更优选2至约6个碳原子，甚至更优选2个碳原子的烷酰基。其它的酰基包括链烯酰基，炔酰基，芳酰基，杂环酰基。合适的杂环基包括杂环芳基和杂脂环基。本发明的化合物中合适的杂环芳基含有一个、两个或三个选自N、O或S原子的杂原子并包括，例如，包括8-香豆素基的香豆素基(coumarinyl)，包括8-喹啉基的喹啉基，卩比啶基，吡嗪基，嘧啶基，呋喃基，吡咯基，噻吩基，噻唑基，噁唑基，咪唑基，吲哚基，苯并呋喃基和苯并噻唑基。本发明的化合物中合适的杂脂环基含有一个、两个或三个选自N、O或S原子的杂原子并包括，例如，四氢呋喃基，四氢吡喃基，哌啶基，吗啉代，pyrrolindinyl。上述基团可在一个或多个可用位置上被一个或多个取代基取代。天然氨基酸包括丙氨酸，甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，谷氨酸，谷氨酰胺，赖氨酸，精氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，组氨酸和羟脯氨酸。我们还涉及WO0158934，其所有内容已合并于此作为参考。那篇早期的文章给出了可适用于本发明的化合物的指导，我们引入其定义用于本发明的化合物。在下面对氨基酸的描述和对肽的表示中用到的縮写遵循IUPAC-IUB生化命名委员会(CommissionofBiochemicalNomenclature)发布于丄Biol.Chem.，1972，247,977-983的原则。使用下述另外的縮写:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>除非特别声明，氨基酸符号指L-构型。本发明的化合物的例子包括式1的化合物其中有-Glu或Lys代替了8位的L-0m;-Gly，Phe，Ala，Leu，D-Val，Pro，Gln，Om，Thr或Glu代替了11位的L-Val;-Val或D-Thr代替了12位的L-Thr;-Gly，D-Ala，D-Leu，D-Phe，D-Pro，Val，D-Glu，D-Gln或D-Thr代替了13位的D-Val;-hCh代替了11位的L-Val和/或D-Cha代替了13位的D-Val;-Ala，Gly，Leu，Pro，Glu，Orn或Gln代替了12位的L-Thr以及13位的氨基酸缺失。-D-Ile或D-Val代替了7位的D-allo-Ile;-D-Om代替了8位的L-Orn和L-Pro代替了9位的D-Pro;-D-Cys代替了7位的D-allo-Ile和L-Cys代替了11位的L-Val;或-D-Cys或D-homo-Cys代替了7位的D-allo-Ile禾卩D-Cys或D-homo-Cys代替了IO位的D-Val。--Icos，(c/t)隱4-Me-cHexa，Und，(4R)-MeHex，(4RS)-MeHex，(4S)-MeHex，Oct，p-MeBza，Bza，p-CF3Bza，3,5匿dFPhAc，Pipe,p-CF3Cinn，p-CF3PhAc，Pfh，6-OHep，6,6-dFHep，4-GuBut，AM，AO或C(=N(CH3)2)代替了14位的5-MeHex,而且，任选地，Lys代替了8位的L-Om;-Pro,D-Pip，D-Tic或(5R)-Ph-Pro代替了9位的D-Pro和(4S)-MeHex代替了14位的5-MeHex;-N(Me)2,N，(Me)2-Arg，N(Me,Ph),N，(Me)2-Arg，N(CH2)4,N，(Me)2-Arg，N(CH2)4,N，(CH2)4-Arg，Ns(CHN(CH2)4,N，(CH2)4-Orn，Ne(Me)rLys，Om(NSTfa)或Om(Biot)代替了8位的L-Om，和，任选地(4S)-MeHex代替了14位的5-MeHex和，任选地，Thr(OTfa)代替了12位的L-Thr;-Thr(OTfa)代替了12位的L-Thr禾口(4S)-MeHex或Lit(OTfa)代替了14位的5-MeHex;-N-(Hep)2-D-Val代替了13位的D-Val和14位上有5-MeHex缺失；或-11、12禾tl13位上氨基酸缺失，和，任选地，Mst代替了14位的5-MeHex;-Dha或E-Dhb代替了2位的Z-Dhb;-D,L-Ser，Gly或Aib代替了2位的Thr，成为氢化类似物；-D-Val代替了1位的L-Val;-D-Trp代替了3位的L-Phe;或-D-Thr或D-Ser代替了6位的D-alo-Thr;-hCh，Phe(3,4-Cl2)，Phe(F5)，Phe(4-I)，Phe(4-N02)，Phe(4-F)，Tyr(Me)，Thi，Tic，Tyr，Oic，NMePhe，Phe(2-Cl)，Phe(3-Cl)，Phe(4-Cl)，Phe(3,4-F2)，Nal，Bip或Phg代替了3位的L-Phe，和，任选地，(4S)-MeHex或p-CF3Cinn代替了14位的5-MeHex;-D-Val或D-Cha代替了5位和7位的D-alo-Ile和，任选地，D-Cha代替了4位的D-Val;或-D-Val代替了1位的L-Val，D-Phe代替了3位的L-Phe，Val代替了4位的D-Val，L-alo-Ile代替了5位的D-alo-Ile，L-alo-Thr代替了6位的D陽alo-Thr，L画alo-Ile代替了7位的D-alo-Ile，D-Orn代替了8位的L-Orn，L-Pro代替了9位的D-Pro，L-Val代替了10位的D-Val，D-Val代替了11位的L-Val，D-Thr代替了12位的L-Thr和L-Val代替了13位的D-Val。适当地，这些建议的变化可组合进行。本发明还包括其药用盐、前药、互变异构体及溶剂化物。本发明的化合物具有不对称中心并因此存在不同的对映异构体和非对映异构体形式。本发明涉及本发明化合物的所有旋光异构体和立体异构体及其混合物的应用，和涉及可以使用或含有它们的所有药物组合物和治疗方法。本发明的化合物可以是作为自由化合物或作为溶剂化物(例如水合物)的晶体形式，认为两种形式均在本发明的范围以内。溶剂化的方法是本领域众所周知的。本发明还包括本发明化合物，以及其药用盐，其中一个或多个氢原子，碳原子或其它原子被其同位素所替代。这样的化合物可用作药代动力学研究及结合测定中的研究和诊断工具。如本文所用，本发明的化合物，包括式l的化合物，定义为包括其药用衍生物或其前药。"药用衍生物或前药"指任何药用盐，酯，酯盐或本发明化合物的其它衍生物，其经施用于受体后能提供(直接或间接)本发明的化合物或其代谢物或残余物。尤其适宜的衍生物和前药是那些当将这些化合物施用于患者后有下列效应的物质增加本发明化合物的生物利用度(如，通过口服施用化合物以便更容易吸收入血)，增强母体化合物向给定生物隔室的传递，增加了溶解度以能够通过注射给药，改变代谢或改变分泌速率。本发明化合物的盐可以包含式1或2化合物中衍生自氮的酸式加成盐。治疗活性在于衍生于本文定义的本发明化合物的部分，其它组分的特性较不重要，尽管出于治疗和预防目的其优选对于患者来说是药学可接受的。药用酸式加成盐的例子包括衍生于无机酸和有机酸的那些，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，磷酸，偏磷酸，硝酸和硫酸，所述有机酸如酒石酸，乙酸，三氟乙酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸，苯甲酸，乙醇酸，葡萄糖酸，琥珀酸和甲磺酸及芳基磺酸，如对甲苯磺酸。优选的盐包括三氟乙酸盐和irti-rrti-o本发明化合物可依据WO0158934所述的合成方法制备，或依据本文所述的改善了的方法制备。因此本发明还包括依照式1的化合物的制备方法。KahalalideF及其类似物更经济和安全地合成的优化了的方法中的关键步骤是(i)在0.5mmol/g初始载量下部分结合Fmoc-D-Val-OH于氯三苯甲基氯(chlorotritylchl歸)-聚苯乙烯树脂；(ii)在接下来结合保护氨基酸和脂肪族羧酸中用DIPCDI-HOBt偶联法代替了HATU-DIPEA;(iii)DIPCDI/HOBt/DIPEA在CH2C12中的环化步骤；这些条件避免了两个副反应缬氨酸残基的差向异构化，这包含于激活中，和Phe或其替代者的三氟乙酸化；(iv)在除去Alloc后使用二乙基-二硫代氨基甲酸钠以避免终产物中Pd(O)的存在。此合成优选为固相合成方法。本发明的合成方法的优选实施方案详述于方案1，该方案涉及目标化合物的形成。oFmoc-Dalle~DaThr-DaNe~DVal~0~~OHJTFmoc-Dalle~DaThr"D^le~DVal^O~^,O-Val-AUoc"IWleHex~DVal~Tljir-Val-DVal~OPro~Om~Dalle~DaThN3aH&~DVaK)-SuBocI0~V&l-AHocC卜CIMeHe3c-DVaMTjr-Vaf-DVal-DPro-Om-Dalle"Da"pr"Dalle-DVal-0—ffiuBocJ0~Val"2Dhb~Phe-A,locYMeHex^DVaJ-T^ir-VaMDVa!-DPro-0m-DaHe"DaThr-DaHe-DVal"O—參但uBocOVaI~2Dhb~Phe~HNleHex-DVat~T"-Val~DVal~DPro~OpH3aHe"Da|hr-Da，le~DVal-OHBoc0~Val~2Dhb~Phe~HWJeHex~DVal~Thr-VaMDVal~DPn>~Om~DaHe~DaThr-DaHe~DVal\(Bu,i~Val~ZDhb^PheMeHex-DVaWhr-Val-DVal-DPro~Om~Da"e~DaTju-DaHe-DVal\方案1如方案1所示，kahalalideF类似物的合成形式优选的方法是基于固相方法，例子参见Lloyd-Williams,P.等，C77em/ca/y4/7/roac/zestoAe^y"^z&s^0/尸e/^fea"d尸rae/ra;CRCPress,BocaRaton(FL),1997及其后已有描述的为制备kahalalideF而对该方法的修饰(WOOl58934)。方案1的方法包括下列连续的步骤(a)将Fmoc-DVal-OH结合到氯三苯甲基氯树脂上，形成酯键。(b)采取Fmoc/tBu策略将用3个氨基酸[Dalle，DaThr(自由OH)，Dalle]延长肽链；(c)采取AIloc/tBu策略结合[Val(l)];(d)采取Fmoc/tBu策略用余下的氨基酸和脂肪族羧酸延长肽链；(el)结合二肽Alloc-Phe-ZDhb-OH，其已在溶液中被合并(combined)并脱水。(e2a)用两个氨基酸优选Thr和Phe延长肽链。Thr的OH是未被保护的并且Phe或其替代者的氨基被Fmoc保护或优选被Alloc保护；在某些情况下如果其被Fmoc保护，这个Fmoc被去除并在固相上引入Alloc;(e2b)在固相脱水以生成二脱氢肽(didehydropeptide);(f)当肽仍然锚定于固相载体上时，去除Phe或其替代者的Alloc/Fmoc基团。(g)从固相载体上切下侧链被保护的肽；(h)在溶液中环化肽；(i)去除TFA不稳定的侧链保护基团；(j)在液相中对官能团的进一步修饰；所以此方法可如下进行Fmoc-DVal-OH优选地被结合于氯三苯甲基聚苯乙烯树脂，参见Barlos,K.;Gatos,D.;ScMfer,W.Angew.Chem,Int.Ed,Engl.1991,30,590-593，在DIPEA存在下保持约0.5mmol/g的取代水平。使用更高的载量会给终产物中带来末端化(terminated)的肽，参见Chiva,C,;Vilaseca,M.;Giralt，E.;Albericio,F.J.Pept.Sci.1999，5,131-140。除非特别声明，所有的溶剂比例为体积/体积。Fmoc基团的去除可采用哌啶-DMF进行(2:8，v/v)(1x2min,2x10min)。Fmoc-aa-OH(4-5当量)和14位上酸的偶联可采用DIPCDI-HOBt(相对于羧酸成分每个等摩尔量)或PyBOP-DIPEA(等摩尔量的PyBOP和双倍量的DIPEA)在DMF或DMF-甲苯(1:1)中进行90分钟。偶联之后进行茚三酮或氯醌检测且如果检测呈阳性则在相同条件下重复偶联，否则方法继续进行。在去保护、偶联和再次去保护步骤之间的冲洗可采用DMF(5x0.5min)和CH2C12(5x0.5min)进行，使用例如每次10mL溶剂/g树脂。Alloc-Val-OH(5当量)的结合可釆用等摩尔量的DIPCDI禾卩10%的DMAP进行。本次偶联至少重复两次。Alloc基团的去除可用Pd(PPh3)4(0.1当量)在PhSiH3(10当量)存在下进行，参见G6mez-Martinez,P.;Thieriet，N.;Albericio，F.;Guib6,F.J.Chem.Soc.PerkinI1999,2871-2874，用二乙基二硫代氨基甲酸钠在DMF0.02M中洗涤树脂(3xl5min).二肽AUoc-Phe-ZDhb-OH(4当量)，其在溶液中从Alloc-Phe-OH和H-Thr-OfBu用EDOHC1制备，并接着脱水和用TFA处理，该二肽可用DIPCDI-HOAt(各4当量)偶联5小时至过夜。使用基于HOBt的其它偶联剂，如HBTU或DIPCDI-HOBt，导致二肽的不完全结合。脱水可在固相中进行，用EDOHCl(水溶性碳二亚胺，20当量)在CH2C12-DMF(9:1)中CuCl(12当量)存在下处理7天。EDOHCl/CuCl己被应用于在溶液中乳酸菌肽(Nisin)片段中Thr残基的脱水(Fukase,K.;Kitazawa，M.;Sano,A.;Shimbo,K.;Horimoto,S.;Fujita,H.;Kubo，A.;Wakamiya,T.;Shibe,A.Bull.Chem.Soc.Jpn.1992,65,2227画2240)和在固相中从Thr、Ser和苯基丝氨酸中制备二脱氢肽(Royo,M.;Jim6nez，J.C.;L6pez-Macid,A.;Giralt，E.;Albericio，REur.J.Org.Chem.2001,45-48)。从树脂上切下被保护的肽可通过TFA-CH2Cl2(l:99)完成(5x30秒)。环化步骤可用DIPCDI/HOBt/DIPEA在CH2C12中进行。这些条件避免了两个副反应缬氨酸残基的差向异构化，这包含于激活中，和Phe或其替代者的三氟乙酸化；最后的去保护可采用TFA-H20(95:5)处理1小时进行。请认识到保护基团的具体选择并不苛刻，其它选择广泛可用。例如，Bzl类基团可替代tBu/Boc;Boc代替Fmoc;Fmoc代替Alloc;Wang树脂代替氯三苯甲基。合成的进一步细节在实施例中给出。本发明的制备方法可由初始原料以立体对映的或立体控制的且快速的方式进行，利用固相合成方法学的优点，其中构建中的分子在整个合成操作中都与不溶性载体相结合。本发明化合物的药物制剂可适合任何适当的途径给药，例如通过口服(包括颊或舌下)，直肠，鼻腔，局部(包括颊，舌下或经皮)，阴道或非肠道(包括皮下，肌内，静脉内或皮内)途径。这些制剂可通过药学领域内任何己知的方法制备，如将载体或赋形剂与活性成分相联。本发明化合物的优选药物组合物包括具有适用于静脉给药的适当组成的液体(溶液，混悬剂或乳剂)，它们可含有纯的化合物或结合有任何载体或其它药物活性的化合物。关于药剂组合物的进一步指导可见于WO0236145,其所有内容结合在此作为参考。因此，非离子型表面活性剂和有机酸的组合与填充剂一起适用于提供本发明化合物的冻干形式，其适合重构(reconstitution)。重构优选通过乳化加溶剂，链垸醇和水来实现。冻干组合物优选主要含有填充剂，如至少90%或至少95%的填充剂。填充剂的实例众所周知且包括蔗糖和甘露醇。也可使用其它填充剂。冻干组合物中的非离子型表面活性剂优选脱水山梨糖醇酯，更优选聚乙烯脱水山梨糖醇酯，如聚氧乙烯山梨糖醇酐烷酸酯，特别是聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯，例如polysorbate80。非离子型表面活性剂典型地构成(comprise)组合物的一定百分比，如组合物的0到5%，例如组合物的2到3或4%。冻干组合物中的有机酸典型地是脂族酸，优选羟基羧酸，更优选羟基多羧酸，特别是柠檬酸。有机酸典型地构成组合物的一定百分比，如组合物的0到5%，例如组合物的2到3或4%。本发明化合物在冻干组合物中的量典型地小于混合物的1%，或经常小于0.1%。合适的量在50到200pg，比如每100mg组合物中有大约100险重构剂的乳化加溶剂适当地含有聚乙烯乙二醇酯，特别是脂肪酸酯，更优选的是PEG油酸酯如PEG-35油酸酯。乳化加溶剂适当地为重构剂的0到10%，典型地约3到7%，比如约5%。链烷醇通常是乙醇，适当地为重构剂的0到10%，典型地约3到7%，比如约5%。重构剂的其余部分是水，提供适于静脉注射的重构溶液。用0.9%盐水进一步稀释重构的溶液将适于kahalaide化合物的输注。适宜的输注设备优选包括玻璃容器而不是聚乙烯容器。导管宜用硅氧烷导管。然后优选的重构剂含有2到7%，比如约5%的乳化加溶剂，2到7%，比如约5%的醇，以及剩余的水。制剂可以单剂量或多剂量容器给出，例如密封的安瓿或小瓶，并存放于(冰冻-干燥)冻干条件下，使用前只需立即加入消毒过的液体载体，例如注射用水。本发明另外提供包含独立容器的试剂盒，所述容器含有冻干组合物和重构剂。还提供重构方法。本发明的化合物或组合物的给药可以通过静脉输注进行。输注时间可达72小时，更优选的是1到24小时，最优选约1或约3小时。输注时间短到在医院不过夜而能进行治疗就十分理想。然而，如果需要的话输注时间将会在24小时左右或甚至更长。给药按周期进行，在优选应用方法中，在每个周期的第一周将本发明化合物静脉输注提供给患者，允许患者在周期剩余部分中恢复。每个周期优选的持续时间是l，3或4周；如果需要可以提供多个周期。在备选的剂量给药方案中，本发明的化合物每3周连续施用5天，每天约1小时。其它方案可根据变化设计。根据患者个体对治疗的耐受性需要时可延迟剂量和/或减少剂量并调整用药计划，特别是对肝转氨酶或碱性磷酸酶高于正常血清水平的患者建议减少剂量。从一个方面说，本发明提供了一种对患有癌症的人患者的治疗方法，包含对所述患者施用本发明的化合物，剂量低于1200mcg/m2/天，优选低于930mcg/m2/天且更优选低于800mcg/m2/天。适宜的剂量最少为320mcg/m2/天。优选的剂量在400-900mcg/m2/天范围内，优选在500-800mcg/m2/天，更优选在600-750mcg/m2/天。特别优选的是约650-700mcg/m2/天的剂量。另一方面本发明提供了一种对患有癌症的人患者的治疗方法，包含对所述患者施用本发明的化合物，在5天内每天施用，剂量低于930mcg/m2/天，随后休息1到4周，其间不施用kahalalide化合物。剂量优选在650-750mcg/m2/天，更优选在约700mcg/m2/天。输注时间优选在1到24小时之间，更优选在1到3小时之间。特别优选的输注时间为大约1或约3小时。休息时间优选为2-3周，更优选大约2周。本发明还提供了一种对患有癌症的人患者的治疗方法，包含对所述患者施用本发明的化合物，每周一次，剂量低于800mcg/m2/天。该剂量优选为600-700mcg/m2/天，更优选650mcg/m2/天。输注时间优选在1到24小时之间，更优选在1到3小时之间。尽管上文给出了关于剂量的指导，正确的化合物剂量将依具体的制剂，施用方式及具体的部位、宿主和治疗的肿瘤而变化。其它因素如年龄，体重，性别，饮食，给药时间，分泌速率，宿主状况，药物组合，反应灵敏性和病情严重性都要考虑。在最大耐受剂量内可连续用药或周期性用药。本发明特别涉及对前列腺癌，乳腺癌，肝细胞癌，黑素瘤，结直肠癌，肾癌，卵巢癌，NSCL癌，上皮癌，胰腺癌及过表达Her2/neu癌基因的肿瘤患者的治疗。更优选地本发明涉及对肝细胞癌，黑素瘤，乳腺癌，胰腺癌和前列腺癌的治疗方法。本发明还涉及一种治疗哺乳动物中与真皮细胞过度增殖有关的疾病的方法，包含对该哺乳动物施用有效的、无毒性量的本发明的化合物。所述皮肤病优选银屑病。本发明优选涉及对患有银屑病，特别是严重银屑病的人患者的治疗。本发明化合物和组合物可与其它药物共用以提供联合治疗。其它药物可形成同一组合物的一部分，或作为独立的组合物提供在同一时间或不同时间施用。对其它药物的特性没有特别的限制，尽管与其它化疗、激素或抗体药剂的结合要予以关注。本发明化合物和其它药物活性试剂或药剂的量以及相对用药时间要进行选择以获得期望的联合治疗效果。实施例一般方法Cl-TrtCl-树脂、被保护的Fmoc-氨基酸衍生物、HOBt、HOAt来自ABI(Framingham，MA)，Bachem(Bubendorf，瑞士)，NovaBiochem(Uufelfingen，瑞士)，4-MeHex衍生物来自Narchem，HATU和其它胍基化(guanidylation)衍生物来自ABI(Framingham，MA)或其制备依据delFresno,M.;El-Faham，A.;Carpino,L.A.;Royo,M.;Albericio,F,OrganicLett.,2000,2,3539-3542。Alloc-氨基酸基本依据Dangles等的描述制备，参见Dangles,O.;Guib6,R;Balavoine,G.;Lavielle,S.;Marquet.A.J.Org.Chem.1987,52，4984-4993，和Alloc-Z-Dhb-Phe-OH和KahalalideF依据WO0158934中的描述制备，DIPEA、DIPCDI、EDC'HC1、哌啶、TFA来自Aldrich(Milwaukee,WI)。DMF禾BCH2Cl2来自SDS(Peypin，法国)。乙腈(HPLC级)来自Scharlau(Barcelona,西班牙)。除012(:12外所有商品试剂和溶剂均在收到后直接使用，CH2Cb则被通过氧化铝柱以去除酸性污染物。固相合成在装有聚乙烯多孔盘(disc)的聚丙烯注射器(10-50mL)内进行。溶剂和可溶性试剂通过抽吸去除。Fmoc基团的去除用哌啶-DMF(2:8，v/v)(lx2min，2x10min)完成。去保护、偶联和再一次去保护步骤之间的洗涤用DMF(5x0.5min)和CH2C12(5x0.5min)完成，每次使用10mL溶剂/g树脂。肽合成转化和洗涤在25。C进行。固相上进行的合成通过中间产物的HPLC分析进行控制，中间产物通过用TFA-H20(1:99)切一份(约2mg)肽基树脂1分钟而得到。HPLC反相柱[Nucleosil-C,s4，6x250mm，10,(柱A);Nucleosil-C44,6x250mm，10(am(柱B)来自Sharlau(西班牙)；SymmetryC184，6x150mm，5,(柱C);Symmetry300C184，6x50mm，5pm(柱D)来自Waters(爱尔兰)；ZorbaxSBC'84,6x150mm,3.5|am(柱E)来自Agilent(美国)]。分析性HPLC用Water仪器和Agilent1100仪器完成，Water仪器配有两个溶剂传输泵(Waters1525)、自动注射器(Waters717自动进样器)、双波长检测器(Waters2487)和系统控制器(BreezeV3.20),Agilent1100仪器配有两个溶剂传输泵(G1311A)、自动注射器(G1329A)、DAD(G1315B)。UV检测在215或220nm处进行，在H20(+0.045%TFA)中线性梯度的CH3CN(+0.036%TFA)运行于下列条件:表I<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>肽样品的MALDI-TOF禾卩ES-MS的分析使用PerSeptiveBiosystemsVoyagerDERP，(其用DHB基质)，WatersMicromassZQ分光计和AgilentIonTrap1100系列LC/MSDTrap。肽-树脂样品在12N的HCl-丙酸(l:l)水溶液中155t:水解1-3小时，无肽样品在6N的HC1水溶液中155。C水解1小时。随后的氨基酸分析在BeckmanSystem6300自动分析仪上进行。'H-NMR光谱分析['H，NOESY,TOCSY在(278K)]在VarianUnityPlus(500MHz)上进行。化学位移(S)表示为来自TMS每百万低磁场的部分数(partspermilliondownfieldfromTMS)。偶联常数表示为赫兹。类似物名称的命名相对于式(I)的KahalalideF的5-甲基已基异构体，在方括号内表明修饰的残基；下标"no"表示从序列上去除天然残基。实施例1(4S)-MeHex-D-Val-ThrVal-D-Val-D-Pro-Ofn-D隱a〃o-Ile-cydo[D陽allo-Thr-D-a〃o-Ile-D-Val-Phe-(Z)Dhb-Val]，[(4S)-MeHexl4]-KahalalideF(化合物1)步骤1H-D-Val-O-TrtCl-树脂。Cl-TrtCl-树脂(lg，1.64mmol/g)置于装有聚乙烯滤器盘(filterdisk)的20mL聚丙烯注射器内。然后用CH2Cl2洗涤树脂(5x0.5min)，加入Fmoc-D-Val-OH(238mg，0.7mmol,0.7当量)禾口DIPEA(0.41mL)的CH2C12(2.5mL)溶液，将混合物搅拌15分钟，当加入超量DIPEA(0.81mL，共7当量，7mmol)时将混合物搅拌45分钟。搅拌10分钟后，反应通过加入MeOH(800iLiL)而终止。用CH2CI2(3x0.5min)，DMF(3x0.5min)，哌啶(按一般方法中的说明)和DMF(5x0.5min)对Fmoc-D-Val-O-TrtCl-树脂进行随后的洗涤/处理。根据Fmoc测定计算的载量是0.50mmol/g。步骤2Fmoc-D-a〃o-Ile-D-a〃o-Thr(Val-Alloc)-D-a〃o-Ile隱D-Val-0-TrtCl-树脂.用DIPCDI(310pL，2mmol，4当量)和HOBt(307mg，2mmol，4当量)的DMF(2.5mL)溶液将Fmoc-D-a〃o-Ile-OH(707mg，2mmol，4当量)、Fmoc-D-a〃o-Thr-OH(游离羟基)(683mg，2mmol，4当量)和Fmoc-D-allo-Ile-OH(707mg，2mmol，4当量)依次加入到如上得到的H-D-Val-O-TrtCl-树脂中。在所有情况下，90分钟的偶联之后，茚三酮反应为阴性。按一般方法中的描述去除Fmoc基团并洗涤。在DMAP(30.6mg，0.25mmol，0.5当量)和DIPEA(88^L,0.5mmol,1当量)存在下将Alloc-Val-OH(502mg，2.5mmol，5当量)禾卩DIPCDI(387mg，2.5mmol，5当量)偶联45min。在相同条件下重复此偶联两次。用TFA处理一份肽基-树脂，对蒸发后所得粗产物的HPLC分析(tR7.8min，条件S，柱D)显示纯度>98%。ESMS，QsH^NsO"计算值，849.45。实验值m/z850.1[M+H]+。步骤3Fmoc隱D-Val-D陽Pro-Orn(Boc)-D陽a〃o-Ile-D-allo画Thr(Val-Alloc)画D-a/fo-Ile-D-Val-O-TrtCl-树脂。去除Fmoc基团，用DIPCDI(310pL，对于2.0讓ol和4当量；388[aL，对于.2,5mmol，5当量)和HOBt(307mg，对于2.0mmol和4当量;395mg，2.5mmo1，5当量)将Fmoc-Orn(Boc)-OH(912mg，2mmo1，4当量)、Fmoc-D陽Pro響OH(843mg，2.5mmol，5当量)和Fmoc-D-Val-OH(255mg，2.5mmo1，5当量)依次加入到上述肽基-树脂(步骤2)中90分钟。结合Orn和D-Pro后的茚三酮检测为阴性。结合D-Val后的氯醌检测呈弱阳性，因此用Fmoc-D-Val-OH(678mg，2.0mmol，4当量)、DIPCDI(310pL，2.0mmol，4当量)和HOBt(307mg，2.0mmol，4当量)对此残余物进行90分钟的再偶联。用TFA处理一份肽基-树脂，对蒸发后所得粗产物的HPLC分析(t/10.1min，条件S，柱D)显示纯度〉98%。MALDI-TOF-MS，(:65119^9016计算值，1,259.71。实验值m/z1，282.16[M+Na]+。步骤4(4S)-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-a〃o-Ile-D-a〃o-Thr(Val-Alloc)-D-a〃o-Ile-D-Val-0-TrtCl-树脂去除Fmoc基团，用DIPCDI(233(iL,对于1.5mmo1和3当量；310iiL，对于2mmol和4当量；以及388^L,对于2.5mmol,5当量)和HOBt(230mg，对于1.5mmol和3当量；307mg，对2mmol禾B4当量；及395mg,2.5mmol.5当量)将Fmoc-Val-OH(678mg,2mmol,4当量),Fmoc-Thr(tBu)-OH(992mg,2.5mmol，5当量)，Fmoc-D-Val-OH(678mg,2mmol,4当量)，禾口(4S)-MeHex-OH(195mg,1.5mmol，3当量)顺序加到上述肽基-树脂(步骤3)中90分钟。在所有情况下，经过90分钟的偶联，茚三酮测试为阴性。Fmoc基团的去除及洗涤如一般方法中所述进行。步骤5(4S)-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-a〃o-Ile-D-a〃o-Thr(Val-Z陽Dhb画Phe-Alloc)-D-a〃o-Ile-D-Val-0-TrtCl-树脂在PhSiH3(6175mmol，10当量)存在时在氩气气氛中用Pd(PPh3)4(58mg,0.05mmol，0.1当量)除去Alloc基团，用DMF(1.25mL)溶解Alloc-Phe-Z-Dhb-OH(666mg,2mmol,4当量)和HOAt(273mg，2mmol,4当量)并加到肽基-树脂中，然后加入DIPCDI(310|_iL，2mmo1，4当量)并搅拌混合物5小时，茚三酮测试呈阴性。用DMF和CH2d2洗涤后将等分部分的肽基-树脂用TFA-H20(l:99)处理1分钟，产物用MALDI-TOF-MS表征，C88H146N,4021计算值，1,735.08。实验值m/z1，758.67[M+Na]+,1,774.621,618.2[M+K]+。步骤6(4S)-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-a〃o-Ile-D-a//o-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-a〃o-Ile-D-Val-OH.DMF和CH2Cl2洗涤后，在PhSM3(617^L，5mmol,10当量)存在时在氩气气氛下用Pd(PPh3)4(58mg,0.05mmol，0.1当量)去除Alloc基团。用TFA-CH2C12(1:99)(5x30秒)从树脂上裂解被保护的肽。滤出液用水收集(4mL)并用旋转蒸发器除去部分水分。然后加入ACN溶解除去水分时出现的固体，然后将溶液冻干，生成639mg(387jdmo1,产率77%)标题化合物，用HPLC(条件R，C柱，kl0.5分钟)测得纯度为>95%。步骤7(4S)-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-a〃o-Ile-cyclo(D-a〃o-Thr-D-a〃o-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb國Val)被保护的肽(步骤6)(639mg，387pmol)溶于CH2Cl2(390mL，lmM)，HOBt(237mg,1.55mmol)溶于最小体积的DMF以溶解HOBt，加入DIPEA(203)iL，1.16mmol，3当量)，DIPCDI(240^L,1.55mmol,4当量)。搅拌混合物1小时，然后用HPLC检查环化步骤的进程。减压蒸发除去溶剂。用TFA-H20(19:1,85mL)溶解被保护的环肽并搅拌混合物1小时。减压蒸发除去溶剂，加入二噁烷(30mL)并减压蒸发除去溶剂(该过程重复了三次)，然后加入H20(40mL)并冻千。粗产物经HPLC(KromasilC85205x50mm)纯化，用含44%乙腈(+0.05%TFA)的水(+0.05V。TFA)等度洗脱，55mL/h，在220nm处检测，生成标题产物(192mg,0.13mmol,产率26%，92.3%)。MALDI匿TOF-MS，C^HmNwO,计算值，1，476.93。实验值m/z1,500.12[M+Na]+,1,515.97[M+K]+。该化合物的'H-NMR(2.5mM;500MHz,H20-D20(9:l))谱见表II。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>实施例2表m中描述的类似物依实施例i中所述实验步骤合成，除了(步骤)栏所示的步骤以外，该栏所示残基(A)被另外的残基(B)替代或被去除(无)。表HI<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表IV<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表V中所述的类似物依实施例1中所述实验步骤合成，除了步骤5依实施例3所述进行，并且(步骤)栏所示步骤中残基(A)被另外的残基(B)替代。此外，在固相脱水之前，依一般方法中所述去除Fmoc基团，然后在DIPEA(5当量)存在下以DMF作为溶剂与Allo-OSu(5当量)反应(2小时)而以Alloc的形式保护氨基基团。表V<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>实验步骤如实施例6所述，但用HAPyU(4.87mg;10.15pmol)代替了HATU:1.63mg,12%。实施例8-KahaIalideF(化合物91)实验步骤如实施例6所述，但用M2A(4.12mg;10.14nmol)代替了HATU:5.2mg,46%。实施例9-KahalalideF(化合物92a)和[N5(CHN(CH2)4,N'(CH2)4)-Om8]-KahalalideF(化合物92b)实验步骤如实施例6所述，但用BTFFH(含约50%的l,l，-(氟亚甲基)二吡咯烷)(3.16mg;10.16pmol)代替了HATU。得到两种产物，92a和92b，不可能分离它们(比例为1:1的4.0mg混合物，35.6%)。HPLC(条件A，柱A)，^:20,8分钟(92b)45。/。和tw:20.9分钟(43a)46%。EM(MALDI-TOF，m/z):(92a)计算值1,627,05;实验值l,630.8[M+H]+:1,652.6[M+Na]+。(43b)计算值1,629.06;实验值1,632.7[M+H]+:l,670.6[M+K〗+。实施例10-KF(化合物93)将DIPEA(10|aL，58.8,l)和Mel(6pL，0.100mmol)加入到溶于DMF/DCM(1:1，5ml)的[Lys8,(4S)-MeHex14]-KahalalideF(化合物30)(5.0mg;3.35pmol)中。反应后进行HPLC，12小时后减压去除溶剂并将残渣溶于CH3CN-H20-AcOH(4.5:4.5:1，20ml)、冻干并用半制备型HPLC纯化以生成标题所示类似物(2.2mg，44%)。实施例11-KahalalideF(化合物94)将[4(S)MeHex'4]-KahalalideF(化合物1;10.0mg;6.7)umol)溶于TFA-DCM(l:l，20mL)并允许在室温下搅拌3天。然后，减压去除溶剂并将残渣溶于H20-CH3CN(l:9)并立即纯化以使样品溶于H20中的时间最少。与标题所示类似物相对应的级分收集于浸于液氮中的圆底烧瓶并冻干(2.5mg;25%)实施例12-KahalalideF(化合物95)将[(4S)-MeHex'勺-KF(化合物1;10mg;6.7pmol)溶于DCM(8ml);力口入TFAA(18.9pL;134pmol)禾卩DIPEA(22.8|nL;134(imol)并允许反应12小时。然后，减压去除溶剂，重溶于H20-CH3CN(1:1)，并立即纯化(2.0mg，20%)。实施例13-KahalalideF(化合物96)如实施例12所述的实验步骤，但在纯化前将类似物溶于H20-CH3CN(1:1)，置于溶液中2小时，然后纯化(4,3mg，43。/。)。实施例14-KahalalideF(化合物97)如实施例1所述实验步骤，除了在步骤4中(4S)-MeHex被Lit-OH替代和步骤7中，将环状肽溶于TFA-DCM(1:1，20ml)并允许室温下搅拌3天。这之后，从一份(10%)减压去除溶剂并将固相残渣溶于H20-CH3CN(1:9)后立即纯化以使样品溶于H20的时间最少。与标题所示类似物相对应的级分收集于浸于液氮中的圆底烧瓶并冻干(5,6mg;从起始树脂算起6%的产率)实施例15-KahalalideF(化合物98)实验步骤如实施例l所述，除了步骤4中，将溶于DMF-AcOH(99:l;2mL)的heptanaldehyde(60.65pL;0.75mmol;5当量)力卩入至H-D-Val-Thr(tBu)匿Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-a〃o-ne-D-alo-Thr(Val-Alloc)-D-G//o-Ile-D-Val-0-2-Clorotrityl-Ps(300mg;初始载量=0.5mmol/g树脂)，5分钟后加入溶于DMF-AcOH(99:1;1mL)的NaBH3CN(28.28mg;0.45inmol;3当量)，允许混合物反应12小时。用HPLC监测反应将这种处理再重复2次。实施例16-KahaalideF(化合物99)将KahalalideF(150.0mg;94.3,1)，d-生物素(37.0mg，151.5|Limol)和HATU(114.0mg，299.8pmo1)在Ar气氛下溶于无水DCM(6.0ml)并加入NMM(58iil，524.0pmo1)。允许搅拌混合物20小时。然后，减压去除溶剂后将残渣溶于MeOH并纯化。与标题所示类似物相对应的级分被冻干(74.0mg;43%)。KahalalideF类似物的表征表征示于表VI和VII。表VI中的EM对应于MALDI-TOF，精确的质量用Chemwind6.0计算，表VII中的EM对应于阳性模式下的APCI。表VI<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>实施例17生物学活性本发明的化合物的生物活性由下列表中的结果证明，这些结果的获得依照如下所述方法。这些测定的最终目的是通过使细胞持续与待测样品接触以中断"体外"肿瘤细胞培养物的生长。细胞系<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>一种利用硫代罗丹明B(SRB)反应的比色型分析用于定量测量细胞生长及生存力[根据PhilipSkehan，等(1990),Newcolorimetriccytotoxicityassayforanticancerdrugscreening,/iVaf/.Ca"cer/wW.,82:1107-1112所述技术]。此形式的分析使用直径9mm的96孔细胞培养微孔板(Faircloth,1988;Mosmann,1983)。大多数细胞系来自美国典型培养物保藏中心(ATCC)，衍生自不同的人癌症类型。细胞维持于RPMI164010%FBS，其中添加0.1g/l青霉素和0.1g/l硫酸链霉素，在37°(:，5%(:02和98%湿度下培养。实验时，用胰蛋白酶消化分汇合的培养物以收获细胞并在平板接种前重悬于新鲜培养基中。细胞接种于96孔微量滴定板，每孔195^L培养基5xl()S细胞，在无药物培养基中生长18小时使细胞贴壁。然后加入浓度范围在10到l(T8Hg/ml的等分试样5pL样品，其溶于DMSO:EtOH:PBS(0.5:0.5:99)。作用48小时后，用srb方法检测抗肿瘤效果细胞用50mL冷的50%(wt/vo1)三氯乙酸(TCA)固定并在4。C下温育60分钟。平板用去离子水清洗并干燥。每个微量滴定孔中加入100SRB溶液(0.4%wt/vo1于1%乙酸中)并于室温温育10分钟。用1%乙酸洗涤除去未结合的SRB。平板在空气中干燥后，结合的染料溶于Tris缓冲液。用自动分光光度平板读数器在单波长490nm处读取光密度值。计算三个平行样品孔数据的平均+asd值。可计算细胞反应的一些参数GI^生长抑制，TG^总生长抑制(抑制细胞效应)和LC-细胞杀死(细胞毒性效应)表viii和ix举例说明了关于本发明化合物的生物活性的数据。表VIII:活性数据(摩尔)<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage53</image><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>表VIII(续)活性数据(摩尔)<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>表vm(续)活性数据(摩尔)<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>权利要求1.一种化合物，其基于kahalalideF结构，该化合物至少在一个方面与kahalalideF不同。2.依照权利要求1的化合物，其具有式h其中一个或多个氨基酸被其它天然或非天然氨基酸替代，被有机基团掩蔽或被去除。3.依照权利要求1或权利要求2的化合物，其中甲基已酰基基团被另外的carboxoyl替代或被去除。4.依照权利要求1的化合物，其中环状部分中的氨基酸与kahalalideF的不同。5.依照权利要求4的化合物，其中3位上的L-Phe被改变。6.依照权利要求5的化合物，其中3位上的氨基酸是被掩蔽了的7.依照权利要求5的化合物，其中3位上的氨基酸是不同的天然氨基酸或是非天然氨基酸。8.依照前述权利要求任一项的化合物，其中8位上的L-Om被改变。9.依照权利要求8的化合物，其中8位上的氨基酸是被掩蔽了的L-Phe。10.依照权利要求5的化合物，其中8位上的氨基酸是不同的天然氨基酸或是非天然氨基酸。11.依照前述权利要求任一项的化合物，其中侧链被改变。12.依照权利要求11的化合物，其中末端酰基发生了变化。13.依照权利要求12的化合物，其中末端酰基是4(S)-甲基已基。14.一种化合物，其基于表示为KF的式1的kahalalideF的结构，其选自[D-Thr6]-KF，[D-Se外KF,[G阔-KF,[Lyss]-KF,[Vali2〗-Kp,[D-Thr!2]-KF,〖D-Chai3-KF，[hChu-KF，[hCh",D-Cha13I-KF，D-Cha4,D-Cha5，D-Cha7l_KF,[D-Vais，D-Val7]-KF，[Icos14]-KF,[(c/t)-4-Me-cHexa"]-KF，[Undw]-KF，[(4R)-MeHex"-KF,[(4RS)-MeHex14]-KF,[Oct"-KF，[p-MeBza14-KF,[Bza!卞KF,[p画CF3Bza14]-KF,[3,5-dFPhAc14〗-KF,[Pipei4]-KF,[p-CF3Cinn14-KF,[p-CF3PhAci4]-KF，[Pfh"]-KF，[6-OHep"-KF，[6，6-dFHep"]-KF,[4-G"oBut"]-KF,[LysS,(4S)-MeHe:si4]-KF,noVaPi，noThri2，noD-Valis]-KF,[noVaP1，noThr12，noD-Val13，Msti4]-KF,Gly13〗-KF，[D-Ala13]-KF,[D-Leu13]-KF，[D-Phe"]陽KF'[D-Pro13-KF，fvali"-KF，[D-Glu13I-KF，[D-Glni3-KF，[D-Thr13]-KF，[Gtyu]-KF,[PheH-KF，[Alan]-KF，[Leui!]-KF,1D-VaPi-KF,[Proii-KF，[Gln"]-KF,[Orn"]-KF,[Thr"〗-KF,[Glu"〗-KF，[Ala",n。D-VaP3]-KF,[Gly",noD_V￡ji3-KF,[Leu12，noD-Vali3-KF，[Pro",n0D-Val13]-KF，[Glu12，noD-Vali3]-KF,[Oni12，noD画Valis]-KF,Glni2'noD-VaJi3-KF，[Pro9,(4S)-MeHexM-KF，[D-Pip9，(4S)-MeHex"卜KF，[D-Tk9，(4S)-MeHex"〗-KF,[(5R)-Ph-Pro9,(4S)-MeHex"]-KF，[hCh+KF,[D,L-Ser2I_KF,fGly2]-KF，[Aib2]-KF，[Dha2]-KF,[Trp3]-KF,[D-Vali，D-Phe3'Val4,allo-Ile5,allo-Thr5,allo-Ile,D-Om8，Pro9,Valio,D-Val",D-Thr12，Val13]KF,[Phe(3，4-Cl2)3，(4S)-MeHex!4]-KF，[Phe(F5)3,(4S)-MeHex14-KF，[Phe(4-I}3，(4S)-MeHexi4-KF，[Phe(4-N02)3，(4s)-MeHex"〗-KF,[Phe(4-F)s,(4S)-MeHexi4〗-KF,〖T^r(Me)3,(4S)-MeHex!4-KF，fThi3,(4S)-MeHexi4]-KF，[Tie,(4S)-MeHex14]-KF，[lyr3，(4S)-MeHex"I-KF,[Oic3,(4S)-MeHexi4j-KF，[醒ePhe3，(4S)-MeHex"卜KF,[Phe(2-Cl)3]-KF,[Phe(3-Cip-KF，[Phe(4-C1)3]-KF，[Phe(3，4-F朴KF,,3]哉[Bip3一KF,[PhgS]-KF，[Phe(3,4-Cl2)3,p-CF3Cinn14]-KF,[N(Me)2,N，(Me)2-ArgS卜KF,[N(Me,Ph),N，(Me)2-Arg8j-KF，[N(CH2)4,N,(Me)2-Arg8]-KF,[N(CH2)4,N，(CH2)4-Arg8〗-KF,[N5(CHN(CH2)4-N，(CH粉Orng〗-KF，[N&(Me)3-Lys8，(4S)-MeHexi4〗-KF，Thr(OTFAP，(4S)德Hexi4]-KF，[Om(N5TFA)8,Thr(OTFAP，(斗S)-MeHex14]-KF，[Om(N5TFA)8,(4S)-MeHex14〗-KF，[Tiir(OTFAp，Lit(OTFAP卜KF,[no5-MeHex"，N(Hep)2-VaP3]-KF,[Orn(Biot)8-KF，[L-Val—ds"-KF,[AMi4j-KF,[AO"-KF,[C(=N(CH3)2)14]-KF，[D—Ile7]-KF，[D-VaF]-KF，[D-Om8,L-Pro9]-KF，[D-Cys7，L-Cys"]-KF，[D-Cys7,D-Cyslo〗-KF，[D陽homoCys7，D-homoCysio]-KF，[Gly12-KF,[Alai2]-KF,[Leui2〗-KF,[Phe12]-KF，[Glu12]-KF,[Orn12]-KF，[Pro12]-KF,[D-Om^-KF,[GIn12]-KFand[D-Val+KF，其中括号内所示氨基酸或基团是引入kahalalideF结构的修饰。全文摘要本发明涉及新型抗肿瘤化合物。提供了新的kahalalideF的类似物。文档编号C07K7/08GK101531707SQ20091000189公开日2009年9月16日申请日期2004年9月9日优先权日2003年9月9日发明者A·弗兰切斯凯·索洛索,A·洛佩斯·马西亚,A·费尔南德斯·多尼斯,C·奎瓦斯·马昌特,C·格拉西亚·坎塔多,E·希拉尔特·列多,F·阿尔伯里克奥·帕洛海拉,J-C·希门尼斯·加西亚,M·罗约·埃克斯波西托,P·洛佩斯·罗德里格斯,S·巴龙·科洛梅尔申请人:马尔药品公司