专利名称：黄芩素-8-磺酸钠及其制备方法和药物用途的制作方法
技术领域：
本发明属于杂环化合物技术领域，具体涉及到杂环不氢化的含六节环，有一个氧原子作 为仅有环杂原子，与其它环稠合的杂环化合物。
活性氧自由基的强氧化性能使不饱和脂肪酸发生过氧化，生成过氧化脂质，伤害生物膜， 促进衰老,诱发多种疾病。黄芩素是黄芩的主要承分，属黄酮类化合物，具有抗菌、抗病毒、 抗炎、抗变态反应、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗肿瘤、抗凝血栓形成和保护肝脏、心 脑血管、神经元等多种药理作用。研究认为黄酮的部分药理活性与其清除活性氧自由基有关。 但因黄芩素化合物水溶性较差，导致人体吸收缓慢且生物利用度低，限制了其在临床中的应 用。为此，本发明将黄芩素磺化，给分子结构中引入磺酸基增加水溶性，以改善黄芩素在临 床使用时的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服上述黄芩素的缺点，提供水溶性高的具有药用价值的新化合物 黄苳素-8-磺酸钠。
本发明的另一个目的在于提供一种制备上述化合物的方法。 本发明的进一步目的在于提供一种治疗抗衰老的药物和组合物。
本发明的第四个目的在于提供一种上述化合物和组合物在制备治疗抗衰老药物中的应用。
本发明黄芩素-8-磺酸钠的化学名称为5，6，7-三羟基异黄酮-8-磺酸钠，它的化学结构如 下述式(1)。
背景技术：
<formula>formula see original document page 3</formula>
式(1)
采用化学反应制备本发明的黄芩素-8-磺酸钠的方法如下:(1)在反应釜中加入溶剂和下式(2)黄芩素，搅拌下加入磺化剂，黄芩素与磺化剂进行
式(2)
化学反应，所用黄芩素与磺化剂的摩尔比为1 : 1 1 : IO，用调温装置使反应液的温度为20 110 °C，反应0.5小时 14小时，得黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物。
S03Na
(2)将(1)反应的混合物冷却至室温，倒入总体积为反应混合物1 5倍量10 20%的 氯化钠溶液，充分搅拌，静置生成沉淀，用常规分离方法，将权利要求l中式(1)化合物分 离出来，得到粗品，再加入粗品量的1 5倍量量重量比为10 20%氯化钠溶液使其纯化，得 到权利要求l中式(1)化合物纯品。
本发明黄芩素-8-磺酸钠的制备方法中，化学反应所用的溶剂是70-98%的硫酸，所用的 磺化剂可以是浓硫酸或氯磺酸或发烟硫酸或三氧化硫。
本发明黄芩素-8-磺酸钠制备方法中，磺化反应的优选温度为20-110 'C，反应的优选时 间为0. 5-14小时。
本发明黄芩素-8-磺酸钠的制备方法中，化学反应的最佳温度为100 °C，化学反应的最 佳时间为12小时。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述式(1)为活性成分，以及含有一种或多种药 学上可接受的载体。
本发明的化合物和药物组合可用于制备治疗抗衰老药物中的应用。 本发明有效成分黄芩素-8-磺酸钠制备治疗抗衰老药物用常规药用制剂的形式来使用所 述的常规药用制剂含作为活性成分的黄芩素-8-磺酸钠，该活性成分在制剂中与药学上可接受 的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。该药用制剂可 以是固体形式如片剂、颗粒集、粉剂、胶囊剂；也可以是液体形式如注射剂、悬浮剂、糖浆 剂和乳剂等。
<formula>formula see original document page 4</formula>式(2)<formula>formula see original document page 4</formula>
式(1)上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、湿润剂和其它常用的添加剂，如乳糖、拧檬酸、 酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生 油、橄榄油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因和抗坏血酸等。 上述制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。 ' 本发明的药用组合物优选含有重量比为0.1-99. 5%的活性成分，最优选含有重量比为 0. 5-95%的活性成分。
本发明的活性成分黄芩素-8-磺酸钠制成各种剂型的口服药物，成人口服，药物中黄苳素 -8-磺酸钠的含量应为每天150 mg， 一日三次，每次药物中黄芩素-8-磺酸钠的含量应为50mg, 14天为一个疗程，治疗2-3个疗程。成人肌肉注射，药物中黄芩素-8-磺酸钠含量应为每天 80 mg， 一日两次，14天为一个疗程，治疗2个疗程；静脉点滴，成人用量，药物中黄芩素 -8-磺酸钠的含量应为每天80mg， 一日一次，14天为一个疗程，治疗2个疗程。口服药物或 注射药物，儿童用药酌情减量。
发明人将本发明的活性成分黄芩素-8-磺酸钠采用的是DPPH (1,1-二苯基-2-苦肼基自由 基)法做了清除自由基实验。该方法简单易操作，可信度高。试验结果表明本发明的活性成 分黄芩素-8-磺酸钠有很好的清除自由基的作用，若将其用于临床试验，预期将会有较好的清 除自由基作用，从而起到抗衰老的治疗效果。本发明的制备方法采用亲电取代反应法，具有 工艺简便，所用的设备简单、产品的收率高和生产成本低等优点。
图1是本发明的黄芩素-8-磺酸钠溶液对DPPH的抑制率曲线。 在图1中，横坐标为浓度的对数，纵坐标为抑制率。
具体实验方式
下面实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。 一、黄芩素-8-磺酸钠制备实施例 实施例1
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂80%硫酸直到 使黄芩素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，黄苳素与浓硫酸的摩尔比为1 : 5，用搅拌机搅拌 后，用调温装置使反应液的温度为100 'C，反应12小时，得到黄芩素-8-磺酸和未反应原料 的混合物，冷却至室温，加入反应物总体积5倍的量重量比为10%氯化钠水溶液，充分搅拌， 静置析出白色沉淀，过滤，得到黄芩素-8-磺酸钠粗品；用重结晶法在黄芩素-8-磺酸钠粗品中加入5倍量的量重量比为10%氯化钠水溶液进行纯化，得到黄芩素-8-磺酸钠纯品(产率85 %)。
采用本实例制备的黄芩素-8-磺酸钠，经测试，其理化性能如下
白色针状晶体，熔点为290 'C (分解)；在水中的溶解度为8%，易溶于水。
本实施例的黄芩素-8-磺酸钠分子结构经红外光谱仪测试结果如下
IRv (cm-1, KBr): 3541.6， 3443.1， 1672.3， 1618.6， 1580.4， 1450.1， 1366.0， 1315.3，
1268.8， 1213.5， 1158.5， 1109.0， 1044.4， 1029.2， 849.2， 778.7， 767.8， 684.6， 654.8， 627.3，
586.3， 535.1 cm"。
本实施例的黄芩素-8-磺酸钠的H用核磁共振仪测试结果如下
'HNMR(DMS0-d6， 300 MHz)S (ppm): 7.04 (1H， s,H-C3) ，8.30 (2H， d， J = 6.72, PICS', H-C6'), 7.58(2H, d, J = 6.72, H-C3', H-C5')， 7.57 (1H， s， H-C4')。 本实施例的黄芩素-8-磺酸钠的C、 H元素分析结果如下 Anal, calcd for C15H9Na08S: C48.39, H2.44; found C 48.16， H2.19。
实施例2
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂70%硫酸直到 使黄芩素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，黄芩素与浓硫酸的摩尔比为1 :8，用调温装置使 反应液的温度为IIO'C，反应0.5小时，得到黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温， 加1倍体积20%氯化钠水溶液，放置，得到白色黄芩素-8-磺酸钠沉淀，随后分离黄芩素-S-磺酸钠，并使其纯化，分离和纯化所用原料为反应物总体积1倍的20%氯化钠水溶液，其它 工艺过程与实施例l相同。
实施例3
先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂85%硫酸直到使黄苳素充分溶 解，再加入磺化剂氯磺酸，黄芩素与氯磺酸的摩尔比为1 : 10，用搅拌机搅拌后，用调温装 置使反应液的温度为20 °C，反应10小时，得到黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物，加5倍 体积10%氯化钠水溶液，放置，得到白色黄芩素-8-磺酸钠沉淀，随后分离黄苳素-8-磺酸钠， 并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例1相同。
实施例4
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂85%硫酸直到 使黄芩素充分溶解，再通入磺化剂三氧化硫，黄芩素与三氧化硫的摩尔比为1 : 3，用搅拌机 搅拌后，用调温装置使反应液的温度为40 °C，反应7小时，得到黄芩素-8-磺酸与未反应物 的混合物，冷却至室温，加2倍体积10%氯化钠水溶液，放置，得到白色黄吝素-8-磺酸钠沉淀，随后分离黄芩素-8-磺酸钠并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例l相同。实施例5
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂80%硫酸直到使黄芩素充分溶解，再通入磺化剂发烟硫酸，黄芩素和发烟硫酸分摩尔比为l :4。用搅拌机搅拌后，升温至60'C，反应1小时，得到黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加3倍体积10%氯化钠水溶液，得到黄芩素-8-磺酸钠粗品，并使其纯化。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例1相同。
实施例6
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂90°/。硫酸直到使黄苳素充分溶解，再加入磺化剂氯磺酸，黄芩素与氯磺酸的摩尔比为1 : 1。滴加完后，用搅拌机搅拌后，升温至50'C，反应6小时，将反应物的混合物冷却至室温，加4倍体积10%氯化钠水溶液并加热，得到黄芩素-8-磺酸钠粗品。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例1相同。
实施例7
在本实施例中，先将黄芩素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂98%硫酸直到使黄芩素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，黄芩素与浓硫酸的摩尔比为1 : 2。滴加完后，升温至55。C，反应14小时，得到黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10%氯化钠水溶液并加热，得到黄芩素-8-磺酸钠粗品。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例1相同。
二、黄芩素-8-磺酸钠制剂实施例实施例8
以制备本发明黄芩素-8-磺酸钠片剂1000片为例所用的原料和辅料配比如下黄芩素-8-磺酸钠 50 g
淀 粉 250 g
淀粉浆(10%) 85 g
硬脂酸 镁 15 g
采用常规片剂的制备工艺制成，每片重0.4g，每片黄苳素-8-磺酸钠的含量为50mg。用法成人一日三次，每次1片口服，儿童酌情减量。实施例9
以制备本发明黄芩素-8-磺酸钠散剂1000袋为 所用的原料和辅料配比如下黄荟素-8-磺酸钠 40 g
乳 糖 2900 g
淀粉浆(10%) 60 g
采用常规散剂的制备工艺制成，每袋重3 g，每片黄芩素-8-磺酸钠的含量为40 mg。用法:成人一日三次，每次1袋口服，儿童酌情减量。实施例10
以制备本发明黄芩素-8-磺酸钠1000mL注射剂为例，所用的原料和辅料配比如下
黄苳素-8-磺酸钠 50 g
注 射用水 加至1000mL
采用常规法注射剂的制备工艺制成，每瓶2mL,含黄芩素-8-磺酸钠100mg。用法肌肉注射， 一日两次，每次1支，静脉点滴， 一日一次，每次2支。
三、发明人将本发明的有效成分黄芩素-8-磺酸钠进行了清除自由基实验，例举下列实验内容及其试验结果，证明用本发明制备的药物治疗抗衰老的有效性。1溶液的配制
DPPH(l,l-二苯基-2-苦肼基自由基)溶液以无水乙醇为溶剂配制浓度为2.0X10—4 raoL/L的DPPH溶液。
DPra是一种稳定的自由基，呈紫色，在517nm处有强吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸波长处的吸光度变小，因此，此处的吸光度可以用来检测自由基的清除情况，从而评价试验样品的抗氧化能力。DPPH法用于研究药物的抗氧化能力较多，氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。
黄芩素-8-磺酸钠储备溶液以无水乙醇为溶剂配制浓度为4.0X10-4moL/L的黄芩素-8-磺酸钠溶液。
2抗氧化作用的测定
取稀释后的黄芩素-8-磺酸钠溶液2 mL及2.0X10—4 moL/L DPPH溶液2 mL加入同一具塞试管中，摇匀。30rain后用无水乙醇做参比测定其吸光度A,，同时测定2 mL 2.0X 10—4moL/LDPffl溶液与2 mL无水乙醇混合液的吸光度A。，以及2 mL黄芩素-8-磺酸钠与2 mL无水乙醇混合液的吸光度Aj。
DPPH法中抗氧化能力用抑制率来表示，其公式为
抑制率=[1- (A「Aj)]从X画
其中A。为未加抗氧化剂时DPPH溶液的吸光度；A为加抗氧化剂后DPPH溶液的吸光度；Aj为黄芩素-8-磺酸钠在测定波长的吸光度。
分别测定不同浓度黄芩素-8-磺酸钠溶液对DPPH的抑制率，用抑制率对浓度的对数作图黄零素-8-磺酸钠抑制率曲线，参见图1。
在黄芩素-8-磺酸钠抑制率曲线图1中，当黄芩素-8-磺酸钠浓度为4.0x10—4mol/L时，抑制率高达95%，稀释10倍后，对DPPH仍有50W清除作用。由图1求得黄芩素-8-磺酸钠对DPPH的半抑制率IC50 (抑制率为50%时抗氧化剂的浓度)为4.0xl(T5 mol/L,与人工合成的强抗氧化剂THBQ (特丁基对苯二酚)相当，表明黄芩素-8-磺酸钠对DPPH有强抑制作用。
3结论
黄苳素在化学结构上属于黄酮类化合物。黄酮类物质广泛存在于自然界，并且具有多种多样生理活性，其中包括抗氧化、清除自由基、抗癌、抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖和免疫调节等功能。研究认为黄酮的部分药理活性与其清除活性氧自由基有关。黄芩素-8-磺酸钠对DPPH有强抑制作用，能很好的起到抗氧化和清除自由基的作用，有望开发为一类治疗抗衰老的新药。
权利要求
1.下述式(1)化合物黄芩素-8-磺酸钠式(1)。
2. —种权利要求l中式(1)黄芩素-8-磺酸钠化合物的制备方法，该方法包括以下步骤(1)反应釜中加入下式(2)黄芩素，溶解在溶剂中，再加入磺化剂，黄芩素与磺化剂<formula>formula see original document page 2</formula>进行化学反应，所用黄芩素与磺化剂的摩尔比为1 : 1 1 : 10，用调温装置使反应液的温度 为20 U0 。C，反应0.5小时 14小时，得黄芩素-8-磺酸与未反应物的混合物。(2)将(1)反应后的混合物冷却至室温，倒入总体积为反应混合物1 5倍量重量比为 10 20%的氯化钠溶液，充分搅拌，静置生成沉淀，用常规分离方法，将权利要求l中式(1) 化合物分离出来，得到粗品，再加入粗品量的1 5倍量量重量比为10 20%氯化钠溶液使其 纯化，得到权利要求l中式(1)化合物纯品。
3. 按照权利要求2所述的权利要求1中式(1)化合物的制备方法，其中式(2)化合物与磺 化剂的反应温度为20-110 °C，化学反应时间为0.5-14小时。
4. 按照权利要求2所述的权利要求1中式(1)化合物的制备方法，其特征在于所用溶剂 为70~98%硫酸；所用磺化剂为浓硫酸或氯磺酸或发烟硫酸或三氧化硫。
5. —种治疗抗衰老的药物组合物，其中有治疗有效量的权利要求1中式(1)化合物和药学 上可接受的载体。
6. 权利要求l中式(1)化合物在制备治疗抗衰老的药物中的应用。
全文摘要
本发明属于杂环化合物技术领域，具体涉及到杂环不氢化的含六节环，有一个氧原子作为仅有环杂原子，与苯环稠合有芳环仅连在位置2的杂环化合物。本发明了提供了一种黄芩素-8-磺酸钠及其制备方法，其工艺包括在溶剂中加入反应物黄芩素，再加入磺化剂，反应物与磺化剂进行化学反应，得到本发明化合物与未反应物的混合物，用常规分离方法并使其纯化，得到本发明的化合物纯品。还提供了一种治疗抗衰老的药物和组合物，其中有治疗有效量的黄芩素-8-磺酸钠和药学上可接受的载体，以及黄芩素-8-磺酸钠在制备治疗抗衰老药物中的应用。
文档编号C07D311/00GK101633652SQ20091002316
公开日2010年1月27日 申请日期2009年7月1日 优先权日2009年7月1日
发明者张尊听, 张小清, 瑾 潘, 王彦昌, 苗延青 申请人:西安医学院