专利名称：落叶松树脂醇及其衍生物、制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及落叶松树脂醇及其衍生物，特别涉及落叶松树脂醇及其与单糖、多糖 的衍生物。本发明还涉及所述落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法和用途。
背景技术：
板兰根为十字花科植物落蓝IsatLindlgotic。Fort的干燥根，具有清热解毒，凉 血利咽作用。临床上广泛应用于治疗流感，带状疤疹、腮腺炎等病毒性疾病。有关板兰根抗 病毒有效部位的研究已有许多报道，抗病毒有效物质种类较多，我们的研究工作进一步证 实板兰根抗病毒有效部位主要与含有氨基酸或小肽的化合物有关。柯萨奇病毒B3(CVB3) 是正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，肠道病毒属。柯萨奇病毒是病毒性心肌炎的主要病原 体，约50%病毒性心肌炎系CVB3所致，直接影响该病的预后。目前，常用的抗病毒药物病毒 唑属核苷类似物，毒性较大，且具有致畸作用。因此，寻找更加安全有效的抗CVB3药物势在 必行。南板蓝根是我国传统中药的重要组成，南板蓝根是产于我国热带地区的中药材。作 者以广东省产的南板蓝根为主，以HeLa细胞为体外筛选模型，对其有效部位抗CVB3活性进 行研究，为筛选新的抗病毒药物提供理论依据。板蓝根临床上广泛用于治疗病毒和细菌感染性疾病。一些体内和体外的实验研究 均证实了板蓝根的抗流感病毒活性。以鸡胚法考察15个种质的板蓝根对甲型流感病毒的 抑制作用，血凝滴度显示板蓝根的水提醇沉淀对病毒的直接作用、治疗作用、预防作用的有 效率分别为100%、60%、70给引本研究也显示了板蓝根抗流感病毒作用，在板蓝根的直接 作用、预防作用和治疗作用下，流感病毒感染力分别下降200倍、1000倍和100倍(TCID。分 别降低2. 51og、3. 01og、2. Olog)，明显降低流感病毒体外增殖能力。采用血凝抑制试验方 法，考察板蓝根凝集素效价与抑制流感病毒作用的关系，认为板蓝根凝集素的抗病毒功效 与其血凝活性呈正相关，板蓝根凝集素具有血凝活性。在对板蓝根凝集素粗提液抗流感病 毒的研究中发现，板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及良好的 治疗作用，而且抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低有关。经研究表明，从板蓝根中分离得到的木脂素总苷lignan-sides是抑制流感病毒 的有效成分，其中代表成分为落叶松树脂醇-二-吡喃葡萄糖苷clemastanin B，其分子结
构如下
权利要求
一种落叶松树脂醇(lariciresinol)及其衍生物，其特征在于，是具有苯环和四氢呋喃环的木脂素类化合物以及其与单糖或多糖的酯化物，其分子结构的通式如下其中，R1为羟基、羟基与单糖的酯化物、羟基与多糖的酯化物。F2009100565716C0000011.tif
2.如权利要求1所述的落叶松树脂醇衍生物，其特征在于，所述Rl为羟基与唾液酸 C11H19N09的酯化物，所述落叶松树脂醇衍生物的分子结构如下
3.如权利要求1所述的落叶松树脂醇衍生物，其特征在于，所述Rl为羟基与唾液酸 α -2,3-半乳糖C18H31N014的酯化物，所述落叶松树脂醇衍生物的分子结构如下
4.如权利要求1所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤步骤1 提取将板蓝根药材粗粉采用95%乙醇加热回流提取1 3次，得到乙醇提取液和残留物，合 并所得各乙醇提取液，将其加热减压回收溶剂至残留物为浸膏状，得到总提取物浸膏； 步骤2 溶剂处理将所得浸膏与水混合，并加热搅拌，采用等体积氯仿萃取所得混合液1 4次得到水 层，随后采用等体积乙酸乙酯萃取所得水层1 4次，合并乙酸乙酯萃取液，将所得溶液减 压回收溶剂至干，随后将所得残留物溶于95%乙醇，并将所得溶液加热减压浓缩至其中乙 醇含量不高于50%，得到残留物的乙醇溶液； 步骤3 大孔树脂处理将所得的残留物的乙醇溶液加入大孔树脂柱中，采用10%乙醇溶液和30%乙醇溶液 冲洗到无色，随后采用95%乙醇冲洗，收集流出液，并将其加热回流减压回收溶剂至干，得 到固体残留物；步骤4:重结晶将所得固体残留物溶于甲醇和丙酮的混合溶液，随后将所得溶液加热减压浓缩，将所 得浓缩物静置析晶，得到黄色针状晶体，将所得晶体采用甲醇、水反复重结晶2 4次，得到 中间产物落叶松树脂醇-二-吡喃葡萄糖苷； 步骤5 水解将所得中间产物溶于HCL溶液，并加热回流搅拌反应，随后趁热抽滤，并将所得滤 液静置冷却，随后采用乙醚萃取1 3次，合并乙醚层并将其加热至减压浓缩至干，得到落 叶松树脂醇的粗产品； 步骤6:重结晶将所得粗产品溶于乙酸乙酯，随后将所得溶液静置析晶，重复上述溶解析晶过程处理 2 3次，析出白色针状晶体，得到落叶松树脂醇。
5.如权利要求4所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤 1、步骤2分别进一步包括以下步骤步骤1. 1 按料液体积比1 3 1 9，将20目 50目的板蓝根药材粗粉与95%乙 醇混合，将所得混合液在加热至80°C 90°C回流2小时，过滤得到乙醇提取液和残留物， 向所得残留物中加入与之前所加95%乙醇体积相等的95%乙醇，将所得混合液在80°C 90°C下加热回流2小时，过滤再次得到乙醇提取液和残留物；步骤1. 2 合并所得乙醇提取液，并将其加热至55°C 65°C减压回收溶剂至残留物为 浸膏状，得到总提取物浸膏；步骤2.1:按照体积比1 8 1 10，将所得浸膏与水混合，并将所得混合液加热至 60°C 80°C搅拌15 25分钟，采用等体积氯仿萃取所得混合液1 4次，得到氯仿萃取过 的水层，随后采用等体积乙酸乙酯萃取所得水层1 4次，合并乙酸乙酯萃取液并采用无水 硫酸钠脱水，得到溶液；步骤2. 2:将所得溶液在30°C 40°C下减压回收溶剂至干，并按照料液体积比1 4 1 6将所得残留物溶于30°C 40°C的95%乙醇中，将所得溶液加热至40°C 50°C减压 浓缩至所得溶液中乙醇含量不高于50%，得到残留物的乙醇溶液。
6.如权利要求4所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤 3、步骤4分别进一步包括以下步骤步骤3. 1 将所得的残留物的乙醇溶液加入大孔树脂柱中，采用10%乙醇溶液和30% 乙醇溶液冲洗到无色，随后采用95%乙醇冲洗，收集流出液；步骤3. 2 将所得流出液加热回流至40°C 50°C减压回收溶剂至干，得到固体残留物；步骤4. 1 将所得固体残留物溶于温度为30°C 40°C的甲醇和丙酮的混合溶液； 所述固体残留物与甲醇和丙酮的混合溶液的料液体积比为14 16; 所述甲醇和丙酮的混合溶液中，甲醇和丙酮的体积比为1 1 1 2; 步骤4. 2 将所得溶液加热至30°C 40°C减压浓缩至原先体积的1/5，将所得浓缩物 在-23°C _13°C条件下静置12 24小时，析出黄色针状晶体，滤出晶体；步骤4. 3 将所得晶体在室温条件下采用甲醇、水反复重结晶2 4次，得到中间产物 落叶松树脂醇-二-吡喃葡萄糖苷；所述甲醇、水反复重结晶过程是在3V 7°C条件下自然析晶。
7.如权利要求4所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤 5、步骤6分别进一步包括以下步骤步骤5. 1 将0. 8 1. 2g所得中间产物溶于45 55mL 1 % HCL溶液，并将所得溶液加 热回流至60V 80°C搅拌反应6 10小时，趁热抽滤；步骤5. 2 将所得滤液在室温下静置冷却0. 5 1小时，采用45 55mL乙醚萃取1 3次，合并所得乙醚层并将其加热至40°C 50°C减压浓缩至干，得到落叶松树脂醇的粗产品；步骤6. 1 将所得粗产品与15 25mL乙酸乙酯混合，并将所得混合液加热至35°C 40°C溶解，随后将所得溶液在_23°C -13°C条件下静置析晶，得到析出物步骤6. 2 采用步骤6. 1的过程处理所得析出物2 3次，析出白色针状晶体，得到落 叶松树脂醇。
8.如权利要求4所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，进一步包 含步骤7衍生化，所述步骤7包括以下步骤步骤7. 1 将0. 15 0. 25g唾液酸C11H19N09溶于20 30ml 二氯甲烷，随后在室温 下依次加入0. 8 1. 2g所得落叶松树脂醇和40 60mg 二环己基碳二亚胺(DCC)；步骤7. 2 将所得溶液在室温条件下搅拌8 12小时，随后加入等体积的水稀释，并采 用等体积的二氯甲烷萃取3次，合并有机相并采用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥；步骤7. 3 将所得溶液加热回流至35°C 45°C减压蒸馏，除去溶剂，得到落叶松树脂醇 与唾液酸的酯化物。
9.如权利要求4所述的落叶松树脂醇及其衍生物的制备方法，其特征在于，进一步包 含步骤7衍生化，所述步骤7包括以下步骤步骤7. 1 将0. 15 0. 25g唾液酸0 2，3-半乳糖(18!131吣14溶于20-301111 二氯甲 烷，随后在室温下依次加入0. 8 1. 2g所得落叶松树脂醇和40 60mg 二环己基碳二亚胺 (DCC)；步骤7. 2 将所得溶液在室温条件下搅拌8 12小时，随后加入等体积的水稀释，并采用等体积的二氯甲烷萃取3次，合并有机相并采用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥；步骤7. 3 将所得溶液加热回流至35°C 45°C减压蒸馏，除去溶剂，得到落叶松树脂醇 与唾液酸α 2，3_半乳糖的酯化物。
10.如权利要求1所述的落叶松树脂醇及其衍生物在抗病毒中的应用，特别是在抗流 感病毒中的应用。
全文摘要
本发明公开了落叶松树脂醇及其衍生物、制备方法和在抗病毒中的应用。所述落叶松树脂醇及其衍生物，其是具有苯环和四氢呋喃环的木脂素类化合物以及其与单糖或多糖的酯化物，其分子结构的通式如下其中，R1为羟基、羟基与单糖或多糖的酯化物。本发明所公开的制备方法是采用多级萃取和树脂树立的方法，提取板蓝根中的落叶松树脂醇-二-吡喃葡萄糖苷，随后在酸性条件下，将经过重结晶处理后的落叶松树脂醇-二-吡喃葡萄糖苷进行水解，从而制备得到本发明所公开的落叶松树脂醇。随后在二氯甲烷和二环己基碳二亚胺存在的条件下，将经过重结晶提纯的落叶松树脂醇与单糖或多糖进行衍生化反应，从而制备得到本发明所公开的落叶松树脂醇及其衍生物。
文档编号C07D307/20GK101993424SQ20091005657
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月18日 优先权日2009年8月18日
发明者李云森, 程萍, 陈子珺, 雷启福 申请人:上海金昊药业开发有限公司