专利名称：一种葫芦巴碱的提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物提取领域，涉及一种胡芦巴碱的提取工艺。
背景技术：
胡芦巴碱(trigonelline，TRG)，分子式=C7H7NO2；分子量137. 14 ；分子结构式
iafe胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟种子。具 有温肾，祛寒，止痛的功用，性味苦，温，归肾经。用于肾脏虚冷，小腹冷痛，小肠疝气，寒湿脚 气。现代药理研究表明，胡芦巴具有抗糖尿病、降胆固醇及对急性化学性肝损伤的保 护作用。胡芦巴碱为胡芦巴中的主要成分，具有抗肿瘤作用，在12.5mg/kg水平上能使白 血病P-388小鼠声明延长31%。对动植物的细胞和组织有促使停止生长的作用。同时可 治疗某些皮肤病，例如牛皮癣等。目前对胡芦巴的研究仅限于其胡芦巴碱含量测定方法及 初步药理研究，胡芦巴药材的提取方法研究较少，刘广学等发表的“胡芦巴药材中胡芦巴碱 的提取方法及其含量测定”文献中，考察以水、甲醇、无水乙醇及三种比例的甲醇-水为溶 齐U，用超声等方法的提取率，但考虑到大量甲醇对操作工人神经系统和血液系统的毒性影 响，本发明人认为该方法不宜工业化。徐雅琴等发表的“超声波法提取南瓜果肉中胡芦巴碱 最佳工艺的研究”，用50%乙醇在600W条件下超声提取15min，液料比为20ml/g，提取率较 低，仅359.6yg/g。且从南瓜中提取胡芦巴碱成本较高，因南瓜粉中胡芦巴碱含量较低，为 0. 1219 0. 4836mg/g(张英春，杨鑫，张华，等.高效液相色谱法测定南瓜粉中胡芦巴碱的 含量·食品科学.2008，29(1) :280-282)，约为胡芦巴种子中胡芦巴碱含量的1/10。
发明内容
本发明的目的是提供一种胡芦巴碱的提取工艺，本发明在浸泡过程同时采用超声 波处理，利用氧化铝柱对胡芦巴碱吸附，使胡芦巴碱的提取率大大增加。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于包括以下步骤(1)将胡芦巴种子粉碎，放在氨醇溶液或含水乙醇中混合浸泡并同时进行超声波 处理，浸泡后的混合溶液加热回流提取；(2)将提取液浓缩至小体积后加入等体积的石油醚萃取，分2-6次萃取，弃去萃取液；(3)将萃余液与2-5倍氧化铝拌样，烘干，通过氧化铝柱层析，用异丙醇或乙醇溶 液洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，干燥；(4)将干燥后的提取物用乙醇复溶，抽滤或离心，滤液或上清液减压回收乙醇，干 燥即得胡芦巴碱。步骤(1)所述粉碎设备是FWS350型风选式微粉碎机、BFM-6超低温超细高频振动 式超微粉碎机或GZM型高频共振研磨机。步骤(1)所述粉碎为原料粉碎粒度< 350目。步骤(1)使用的氨醇溶液浓度为5-25%，含水醇溶液浓度为35-95%，加入量为原 料按重量比计为1 3-1 16。步骤(1)所述浸泡时间为0. 5-5小时，使用的超声波频率为20_35kHz。步骤(1)中回流提取时提取时间为1-3小时，提取次数2-4次。步骤(2)中所述氧化铝为100-200目的中性氧化铝，所述氧化铝柱为常压短粗氧 化铝柱，拌样、搅拌均勻于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱。本发明的提取方法先将原料微粉碎或超微粉碎，可将原料的大多数细胞壁打破， 使细胞内的有效成分充分暴露，提高了得率；在浸泡过程中用超声波处理，直接影响药材的 浸润速度和程度，进而影响成分的提取效果，并缩短提取时间，溶出杂质少，提高生产效率; 氧化铝柱层析可以很好的分离纯化；乙醇复溶可进一步除杂，从而使胡芦巴碱的含量大幅 度增加。高效液相色谱法定量分析(参照赵怀清等发表的文献“高效液相色谱法测定 胡芦巴中胡芦巴碱的含量”中的方法)采用L-7110型高效液相色谱仪(日本日立公 司)，L-7400型紫外检测器(日本日立公司)，江申色谱工作站。色谱柱为Asahipak NH-P-50 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流动相为乙腈-水(75 25)；流速 0. 8mL/min ；检测波长 265nm ；柱温室温。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 取胡芦巴药材去杂，用BFM-6超低温超细高频振动式超微粉碎机粉碎，称取10kg， 投入提取罐中，加入6倍量氨醇溶液浸泡同时进行25kHz超声波处理，浸泡时间为45分钟， 浸泡后的胡芦巴药材用回流提取法提取3次(6倍，3倍，3倍)，每次2小时，合并提取液， 滤除药渣，滤液回收乙醇至15kg，用等体积的石油醚分4次萃取，弃去萃取液，将萃余液与3 倍量160-200目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，异 丙醇洗脱，TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，抽滤，回 收乙醇，将滤出物于60°C真空干燥即得胡芦巴碱56g，含量为87%。实施例2 取胡芦巴药材去杂，用FWS350型风选式微粉碎机粉碎，称取10kg，投入提取罐中， 加入5倍量氨醇溶液浸泡同时进行30kHz超声波处理，浸泡时间为60分钟，浸泡后的胡芦 巴药材用回流提取法提取3次(5倍，4倍，3倍)，每次3小时，合并提取液，滤除药渣，滤液回收乙醇至15kg，用等体积的石油醚分5次萃取，弃去萃取液，将萃余液与4倍量160-200 目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，95%乙醇洗脱， TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，离心，上清液回收 乙醇，于60°C真空干燥即得胡芦巴碱59g，含量为84%。实施例3 取胡芦巴药材去杂，用GZM型高频共振研磨机粉碎，称取10kg，投入提取罐中，加 入4倍量90%乙醇溶液浸泡同时进行25kHz超声波处理，浸泡时间为45分钟，浸泡后的胡 芦巴药材用回流提取法提取3次(4倍，4倍，4倍)，每次4小时，合并提取液，滤除药渣，滤液 回收乙醇至15kg，用等体积的石油醚分4次萃取，弃去萃取液，将萃余液与3倍量160-200 目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，异丙醇洗脱， TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，离心，上清液回收 乙醇，于60°C真空干燥即得胡芦巴碱54g，含量为86%。实施例4 取胡芦巴药材去杂，用FWS350型风选式微粉碎机粉碎，称取20kg，投入提取罐中， 加入10倍量氨醇溶液浸泡同时进行20kHz超声波处理，浸泡时间为90分钟，浸泡后的胡芦 巴药材用回流提取法提取3次(10倍，3倍，2倍)，每次2小时，合并提取液，滤除药渣，滤液 回收乙醇至27kg，用等体积的石油醚分6次萃取，弃去萃取液，将萃余液与5倍量160-200 目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，异丙醇洗脱， TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，抽滤，回收乙醇，将 滤出物于60°C真空干燥即得胡芦巴碱121g，含量为82%。实施例5 取胡芦巴药材去杂，用BFM-6超低温超细高频振动式超微粉碎机粉碎，称取20kg， 投入提取罐中，加入4倍量氨醇溶液浸泡同时进行35kHz超声波处理，浸泡时间为45分钟， 浸泡后的胡芦巴药材用回流提取法提取3次(4倍，3倍，3倍)，每次2小时，合并提取液， 滤除药渣，滤液回收乙醇至25kg，用等体积的石油醚分4次萃取，弃去萃取液，将萃余液与3 倍量160-200目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，异 丙醇洗脱，TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，离心，上 清液回收乙醇，于60°C真空干燥即得胡芦巴碱112g，含量为83%。实施例6 取胡芦巴药材去杂，用GZM型高频共振研磨机粉碎，称取50kg，投入提取罐中，加 入6倍量氨醇溶液浸泡同时进行30kHz超声波处理，浸泡时间为120分钟，浸泡后的胡芦 巴药材用回流提取法提取3次(6倍，3倍，3倍)，每次4小时，合并提取液，滤除药渣，滤液 回收乙醇至原体积的1/15，用等体积的石油醚分4次萃取，弃去萃取液，将萃余液与4倍量 160-200目的氧化铝混合拌样，于40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱，异丙醇 洗脱，TLC检测，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩干燥，用乙醇复溶干燥提取物，抽滤，回收乙 醇，将滤出物于60°C真空干燥即得胡芦巴碱302g，含量为86%。
权利要求
一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于包括以下步骤(1)将胡芦巴种子粉碎，放在氨醇溶液或含水乙醇中混合浸泡并同时进行超声波处理，浸泡后的混合溶液加热回流提取；(2)将提取液浓缩至小体积后加入等体积的石油醚萃取，分2 6次萃取，弃去萃取液；(3)将萃余液与2 5倍氧化铝拌样，烘干，通过氧化铝柱层析，用异丙醇或乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，干燥；(4)将干燥后的提取物用乙醇复溶，抽滤或离心，滤液或上清液减压回收乙醇，干燥即得胡芦巴碱。
2.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(1)所述粉碎 设备是FWS350型风选式微粉碎机、BFM-6超低温超细高频振动式超微粉碎机或GZM型高频 共振研磨机。
3.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(1)所述粉碎 为原料粉碎粒度< 350目。
4.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(1)使用 的氨醇溶液浓度为5-25%，含水醇溶液浓度为35-95 %，加入量为原料按重量比计为 1:3-1: 16。
5.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(1)所述浸泡 时间为0. 5-5小时，使用的超声波频率为20-35kHz。
6.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(1)中回流提 取时提取时间为1-3小时，提取次数2-4次。
7.根据权利要求1所述的一种胡芦巴碱的提取工艺，其特征在于步骤(2)中所述氧 化铝为100-200目的中性氧化铝，所述氧化铝柱为常压短粗氧化铝柱，拌样、搅拌均勻于 40-60°C烘干粉碎，过150-200目筛后装入层析柱。
全文摘要
本发明涉及一种葫芦巴碱的提取工艺，工艺包括将原料粉碎，用氨醇溶液或含水乙醇经浸渍、加热回流提取，将提取液浓缩至小体积，石油醚萃取，弃去萃取液，萃余液上氧化铝柱层析，以异丙醇或乙醇为洗脱剂洗脱，洗脱液浓缩干燥。该方法生产产品的杂质含量少，有效成分得率高，且操作简单便于掌握。
文档编号C07D213/80GK101967121SQ201010210259
公开日2011年2月9日 申请日期2010年6月28日 优先权日2010年6月28日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司