低分子水产胶原蛋白肽的制备方法

文档序号:3583863阅读:365来源:国知局
专利名称:低分子水产胶原蛋白肽的制备方法
技术领域
本发明涉及蛋白肽提取技术领域,具体涉及一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法。
背景技术
胶原蛋白是人体内含量最多、分布最广的蛋白质,是结缔组织的主要蛋白质成分, 约占机体总蛋白的25%,它主要分布在动物的皮肤,骨,软骨,角膜,血管内壁等组织内。动物的结缔组织中提取的胶原蛋白,因具有特殊的蛋白质结构和身体亲和性,广泛应用于食品,化妆品和医疗等与人体健康相关的行业。目前工业生产中使用的胶原蛋白主要是I型胶原蛋白,它是由3条1000个氨基酸肽链组成的高分子硬蛋白,人们直接食用高分子胶原蛋白很难消化吸收,将胶原水解为小分子肽,消化吸收率就会大大提高。另外,近年来人们发现,经蛋白质水解反应获得的小分子胶原蛋白肽具有美容护肤、抗高血压、胃粘膜保护、 预防和抑制关节炎、骨质疏松症等诸多生理功能。低分子胶原蛋白的制备可采用物理、化学或生物学方法,由于采用单一方法水解胶原蛋白效果并不理想,所以常采用两种或两种以上并用的方法。但,采用强酸、强碱等化学方法水解胶原蛋白时,水解反应难以调控,难以获得分子量较均一的胶原蛋白肽。另外大量使用化学物质,影响食品安全性的同时造成严重的环境污染;物理方法由于水解效果不如化学法和生物法,所以一般作为生物水解法的辅助方法来使用;利用工业酶水解胶原蛋白的生物学水解方法,由于效率高、容易控制反应、 具有酶解特异性等特点广泛应用于工业化生产中。但使用一种酶水解胶原蛋白,很难获得低分子胶原蛋白,所以使用复合酶酶解胶原蛋白是制备低分子胶原蛋白的有效途径。虽然目前有利用复合酶酶解胶原蛋白获得低分子胶原肽的报导,但常用的复合酶法酶解胶原蛋白获得的低分子胶原蛋白肽,出现分子量分布不集中或低分子胶原蛋白肽中氨基酸含量过高的现象。结果为了获得均一的低分子组分,增加低孔径超滤膜或色谱分离等分离设备,导致生产成本提高,得率下降的现象。

发明内容
本发明的目的是提供一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,不仅可从鱼鳞中获得高含量低分子组分胶原蛋白肽,而且去除影响胶原蛋白产品外观的色素类物质,减轻胶原蛋白特有的鱼腥鱼臭味,提高了鱼类胶原蛋白产品的产品价值。本发明所采用的技术方案是,一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,按以下步骤进行步骤1,鱼鳞脱灰选取干鱼鳞,清洗,在常温条件下,用浓度为4% -35%的盐酸浸泡搅拌10 50min,进行脱灰,然后用蒸馏水反复清洗,除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙,得到脱灰的鱼鳞;步骤2,利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白
取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞,当清洗液的pH值为6. 2 7. 0时停止清洗;将鱼鳞浙干水分,用当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液对鱼鳞脱脂8 24h,然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞,当清洗液的PH值为7. 0 8. 0停止清洗;将清洗后的鱼鳞放入蒸馏水中,控制脱灰、脱脂后的鱼鳞与蒸馏水的重量比为1 5 8,然后在90°C 125°C温度下热水浸提 1 3h,过滤,回收滤液,滤液为水溶性胶原蛋白;步骤3,制备碱性酶酶解蛋白肽溶液分别取氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶,将氢氧化钠溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白溶液中,调节该水溶性胶原蛋白溶液的PH值为9 11,再往水溶性胶原蛋白溶液中加入碱性蛋白酶,控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在30 60°C的温度下,搅拌酶解8 48小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使碱性蛋白酶失去活性,制得碱性酶酶解蛋白肽溶液;步骤4,制备中性酶酶解蛋白肽溶 液分别取盐酸溶液和中性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤3得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为6. 5 8,再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在40 55°C的温度下,搅拌酶解 8 48小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使中性蛋白酶失去活性, 制得中性酶酶解蛋白肽溶液;步骤5,制备酸性酶酶解蛋白肽溶液分别取盐酸溶液和酸性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为2. 5 5. 0 ;再往该蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶, 控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在30 55°C的温度下搅拌酶解 8 48小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使酸性蛋白酶失去活性, 制得酸性酶酶解蛋白肽溶液;步骤6,活性炭过滤进行脱色、脱腥取酸性酶酶解蛋白肽溶液质量1 5%的食品用粉末状活性碳,加入步骤5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中,搅拌均勻,加热至40 80°C的条件下,保温30 60min,然后真空过滤,获得澄清的胶原蛋白滤液;步骤7,大孔树脂处理进一步脱色取大孔树脂用乙醇溶液浸泡24h,然后用蒸馏水反复清洗,再用蒸馏水浸泡,确认无残留乙醇后,将大孔树脂添加到分离柱中,接着将步骤6得到的胶原蛋白滤液按IOOml/ h · 60dm3树脂 250ml/h · 60dm3树脂的流速通过大孔树脂分离柱,除去活性碳难以吸附的残留色素,回收分离液,将分离液经0. 45 μ m膜过滤后,再用截流分子量5000Da的超滤膜过滤,回收滤液,滤液为澄清透明的酶解蛋白肽脱色溶液;步骤8,制得胶原蛋白肽将步骤7制得的酶解蛋白肽脱色溶液,进行喷雾干燥,制得高白度的胶原蛋白肽。上述碱性蛋白酶为 Bacillus subtirus、Aspergillus melleus 或 Bacillus Iicheniformis微生物来源的碱性蛋白酶。± Φ S S Bl % Bacillus subtilis> Bacilluse Stearothermophi> Aspergillus oryzae、Bacillus amyloliquefaciens、木瓜酶或胰腺酶的微生物禾口动、植物来源酶。上述酸性蛋白酶为Aspergillus niger或Iihizopus niveus的微生物来源酶或动物胃蛋白酶。上述步骤1中,利用氢氧化钠溶液对鱼鳞进行脱脂的具体方法为将脱灰湿鱼鳞放入当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中,用搅拌器以60转/分的转速搅拌8-Mh,除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白;其中,1.5ml当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中加入0. 258g脱灰湿鱼麟。本发明的有益效果是,本发明方法制备出的胶原蛋白分子量集中、低分子量胶原蛋白含量高、成品颜色白度高,而且减轻鱼腥鱼臭味,显著提高了胶原蛋白粉末的商品价值,并且制备成本低、得率高。


图1为本发明实施例1中获得的胶原蛋白肽的MALDI-T0F分子量分布分析图。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式
对本发明进行详细说明。本发明提供一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,采用盐酸进行鱼鳞脱灰,用碱脱脂并去除杂蛋白,再进行热水浸提提取水溶性胶原蛋白,再依次用碱性酶、中性酶、酸性酶进行酶解,用活性碳脱色、脱腥后,再用大孔树脂进一步脱色,制得分子量集中、颜色白、得率高的低分子胶原蛋白肽。实施例1本发明提供一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,按以下步骤进行步骤1,鱼鳞脱灰选取干鱼鳞300g经清洗,在常温条件下,用浓度为30%的盐酸浸泡搅拌15min, 进行脱灰,然后用蒸馏水反复清洗,除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙,得到脱灰的湿鱼鳞 258g;步骤2,利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞,当清洗液的pH值达到6. 5时停止清洗;将鱼鳞浙干水分,放入1500ml当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中,用搅拌器以60转/分的转速搅拌12h,除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白,此时脱灰和脱脂后的鱼鳞为232g ;然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞,当清洗液的PH值为7. 5时停止清洗;将清洗后的鱼鳞放入1600ml蒸馏水中,然后置于95°C的水浴中热水浸提提取胶原蛋白3h,再用纱布过滤,回收滤液,滤液为水溶性胶原蛋白;步骤3,制备碱性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶,将氢氧化钠溶液加入步骤2 得到的水溶性胶原蛋白溶液中,调节该水溶性胶原蛋白溶液的PH值为9,再往水溶性胶原蛋白溶液中加入碱性蛋白酶,控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为1%,然后置于摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使碱性蛋白酶失去活性,制得碱性酶酶解蛋白肽溶液;
步骤4,制备中性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的盐酸溶液和中性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤3得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为7,再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为1%,然后置于55°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使中性蛋白酶失去活性,制得中性酶酶解蛋白肽溶液;步骤5,制备酸性酶酶解蛋白肽溶液分别取 当量浓度为3N的盐酸溶液和酸性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为3.5 ;然后向该蛋白肽溶液中再加入酸性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基质比为1%,然后置于50°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C的温度下加热15分钟,使酸性蛋白酶失去活性,制得酸性酶酶解蛋白肽溶液;步骤6,活性炭过滤进行脱色、脱腥取酸性酶酶解蛋白肽溶液质量5%的食品用粉末状活性碳,加入步骤5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中,搅拌均勻,加热至80°C的条件下,保温30min,然后用布氏漏斗真空过滤,获得澄清的胶原蛋白滤液;步骤7,大孔树脂处理进一步脱色取大孔树脂X-5用浓度为95%的乙醇溶液浸泡24h,然后用蒸馏水反复清洗6次后,再用蒸馏水浸泡20h,确认无残留乙醇后,将大孔树脂添加到分离柱中,接着将步骤6得到的胶原蛋白滤液按200ml/h · 60dm3树脂的流速通过大孔树脂分离柱,除去活性碳难以吸附的残留色素,回收分离液,将分离液经0. 45 4!11膜过滤后,再用截流分子量500003的超滤膜过滤,回收滤液,滤液为澄清透明的酶解蛋白肽脱色溶液;步骤8,制得胶原蛋白肽将步骤7制得的酶解蛋白肽脱色溶液,进行喷雾干燥,制得高白度的低分子胶原蛋白肽A。上述方法中所采用的碱性蛋白酶为美国西格玛奥德里奇公司的Bacillus Iicheniformis源碱性蛋白酶,中性蛋白酶为阿拉丁试剂公司的木瓜蛋白酶(Cas号 9001-73-4),酸性蛋白酶为和氏璧生物技术有限公司生产的Aspergillus niger源酸性蛋白酶。对比例1一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,按以下步骤进行步骤1,鱼鳞脱灰选取干鱼鳞300g经清洗,在常温条件下,用浓度为30%的盐酸浸泡搅拌15min, 进行脱灰,然后用蒸馏水反复清洗,除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙,得到脱灰的湿鱼鳞 258g;步骤2,利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞,当清洗液的pH值达到6. 5时停止清洗;将鱼鳞浙干水分,放入1500ml当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中,用搅拌器以60转/分的转速搅拌12h,除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白,此时脱灰和脱脂后的鱼鳞为232g ;然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞,当清洗液的PH值为7. 5时停止清洗;将清洗后的鱼鳞放入1600ml蒸馏水中,然后置于95°C的水浴中热水浸提提取胶原蛋白3h,再用纱布过滤,回收滤液,滤液为水溶性胶原蛋白;步骤3,制备中性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的盐酸溶液和中性蛋白酶,将盐 酸溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白中,调节该水溶性胶原蛋白的PH值为7,再往该水溶性胶原蛋白溶液中加入中性蛋白酶,控制溶液中的中性蛋白酶的基质比为1%,然后置于55°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使中性蛋白酶失去活性,制得中性酶酶解蛋白肽溶液;步骤4,制备碱性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶,将氢氧化钠溶液加入步骤3 得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为9,再往该蛋白肽溶液中加入碱性蛋白酶,控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为1%,然后置于55°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使碱性蛋白酶失去活性,制得碱性酶酶解蛋白肽溶液;步骤5,制备酸性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为3N的盐酸溶液和酸性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤4得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为3.5 ;然后向该蛋白肽溶液中再加入酸性蛋白酶,控制溶液中酸性蛋白酶的基质比为1%,然后置于50°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C的温度下加热15分钟,使酸性蛋白酶失去活性,制得酸性酶酶解蛋白肽溶液;步骤6,活性炭过滤进行脱色、脱腥取酸性酶酶解蛋白肽溶液质量5%的食品用粉末状活性碳,加入步骤5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中,搅拌均勻,加热至80°C的条件下,保温30min,然后用布氏漏斗真空过滤,获得澄清的胶原蛋白滤液;步骤7,膜过滤将胶原蛋白滤液经0. 45 μ m膜过滤后,再用截流分子量5000Da的超滤膜过滤,回收滤液,滤液为淡黄色澄清透明的酶解蛋白肽溶液;步骤8,制得胶原蛋白肽将步骤7制得的酶解蛋白肽溶液,进行喷雾干燥,制得淡黄色的低分子胶原蛋白肽B。上述方法中所采用的碱性蛋白酶为美国西格玛奥德里奇公司的Bac i 11 us Iicheniformis源碱性蛋白酶,中性蛋白酶为阿拉丁试剂公司的木瓜蛋白酶(Cas号 9001-73-4),酸性蛋白酶为和氏璧生物技术有限公司生产的Aspergillus niger源酸性蛋白酶。对比例2一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,按以下步骤进行步骤1,鱼鳞脱灰选取干鱼鳞300g经清洗,在常温条件下,用浓度为30%的盐酸浸泡搅拌15min, 进行脱灰,然后用蒸馏水反复清洗,除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙,得到脱灰的湿鱼鳞 258g;步骤2,利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白
取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞,当清洗液的pH值达到6. 5时停止清洗;将鱼鳞浙干水分,放入1500ml当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中,用搅拌器以60转/分的转速搅拌12h,除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白,此时脱灰和脱脂后的鱼鳞为232g ;然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞,当清洗液的PH值为7. 5时停止清洗;将清洗后的鱼鳞放入1600ml蒸馏水中,然后置于95°C的水浴中热水浸提提取胶原蛋白3h,再用纱布过滤,回收滤液,滤液为水溶性胶原蛋白; 步骤3,制备酸性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为3N的盐酸溶液和酸性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白溶液中,调节该水溶性胶原蛋白溶液的PH值为3.5 ;然后向该水溶性胶原蛋白溶液中再加入酸性蛋白酶,控制溶液中酸性蛋白酶的基质比为1%,然后置于50°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C的温度下加热15分钟,使酸性蛋白酶失去活性,制得酸性酶酶解蛋白肽溶液;步骤4,制备碱性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶,将氢氧化钠溶液加入步骤3 得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该酸性酶酶解蛋白肽溶液的PH值为9,再往该蛋白肽溶液中加入碱性蛋白酶,控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为1%,然后置于55°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使碱性蛋白酶失去活性,制得碱性酶酶解蛋白肽溶液;步骤5,制备中性酶酶解蛋白肽溶液分别取当量浓度为IN的盐酸溶液和中性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤4得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为7,再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为1%,然后置于55°C摇床中搅拌酶解8小时,接着在98°C温度下加热15分钟,使中性蛋白酶失去活性,制得中性酶酶解蛋白肽溶液;步骤6,过滤用滤纸过滤中性酶酶解蛋白肽溶液,将滤液经0. 45 μ m膜过滤后,再用截流分子量5000Da的超滤膜过滤,回收滤液,滤液为黄色的酶解蛋白肽溶液;步骤7,制得胶原蛋白肽将步骤6制得的酶解蛋白肽脱色溶液,进行喷雾干燥,制得黄色的低分子胶原蛋白肽C。上述方法中所采用的碱性蛋白酶为美国西格玛奥德里奇公司的Bacillus Iicheniformis源碱性蛋白酶,中性蛋白酶为阿拉丁试剂公司的木瓜蛋白酶(Cas号 9001-73-4),酸性蛋白酶为和氏璧生物技术有限公司生产的Aspergillus niger源酸性蛋白酶。上述实施列1、对比例1和对比例2中制得的分子量小于5000Da胶原蛋白肽所占的比例结果如表1所示表1实施例1、对比例1和对比例2所获得的小分子胶原蛋白肽
权利要求
1. 一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于,按以下步骤进行 步骤1,鱼鳞脱灰选取干鱼鳞,清洗,在常温条件下,用浓度为4% -35%的盐酸浸泡搅拌10 50min,进行脱灰,然后用蒸馏水反复清洗,除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙,得到脱灰的鱼鳞; 步骤2,利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞,当清洗液的PH值为6. 2 7. 0时停止清洗;将鱼鳞浙干水分,用当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液对鱼鳞脱脂8 24h,然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞,当清洗液的PH值为7. 0 8. 0停止清洗;将清洗后的鱼鳞放入蒸馏水中,控制脱灰、脱脂后的鱼鳞与蒸馏水的重量比为1 5 8,然后在90°C 125°C温度下热水浸提1 3h, 过滤,回收滤液,滤液为水溶性胶原蛋白; 步骤3,制备碱性酶酶解蛋白肽溶液分别取氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶,将氢氧化钠溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白溶液中,调节该水溶性胶原蛋白溶液的PH值为9 11,再往水溶性胶原蛋白溶液中加入碱性蛋白酶,控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在30 60°C的温度下,搅拌酶解8 48小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使碱性蛋白酶失去活性,制得碱性酶酶解蛋白肽溶液; 步骤4,制备中性酶酶解蛋白肽溶液分别取盐酸溶液和中性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤3得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为6. 5 8,再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在40 55°C的温度下,搅拌酶解8 48小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使中性蛋白酶失去活性,制得中性酶酶解蛋白肽溶液;步骤5,制备酸性酶酶解蛋白肽溶液分别取盐酸溶液和酸性蛋白酶,将盐酸溶液加入步骤4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中,调节该蛋白肽溶液的PH值为2. 5 5. 0 ;再往该蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶,控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基质比为0. 5% 2%,并在30 55°C的温度下搅拌酶解8 48 小时,接着在98°C 115°C温度下加热10分钟 15分钟,使酸性蛋白酶失去活性,制得酸性酶酶解蛋白肽溶液;步骤6,活性炭过滤进行脱色、脱腥取酸性酶酶解蛋白肽溶液质量1 5%的食品用粉末状活性碳,加入步骤5得到的酸性酶酶解蛋白肽溶液中,搅拌均勻,加热至40 80°C的条件下,保温30 60min,然后真空过滤,获得澄清的胶原蛋白滤液;步骤7,大孔树脂处理进一步脱色取大孔树脂用乙醇溶液浸泡24h,然后用蒸馏水反复清洗,再用蒸馏水浸泡,确认无残留乙醇后,将大孔树脂添加到分离柱中,接着将步骤6得到的胶原蛋白滤液按IOOml/ h · 60dm3树脂 250ml/h · 60dm3树脂的流速通过大孔树脂分离柱,除去活性碳难以吸附的残留色素,回收分离液,将分离液经0. 45 μ m膜过滤后,再用截流分子量5000Da的超滤膜过滤,回收滤液,滤液为澄清透明的酶解蛋白肽脱色溶液; 步骤8,制得胶原蛋白肽将步骤7制得的酶解蛋白肽脱色溶液,进行喷雾干燥,制得高白度的胶原蛋白肽。
2.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于所述碱性蛋白酶为 Bacillus subtirus、Aspergillus melleus 或 Bacillus Iicheniformis 微生物来源的碱性蛋白酶。
3.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于所述中性蛋白酶为 Bacillus subtilis、Bacilluse Stearothermophi、Aspergillus oryzae、 Bacillus amyloliquefaciens、木瓜酶或胰腺酶的微生物和动、植物来源酶。
4.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于所述酸性蛋白酶为Aspergillus niger或Iihizopus niveus的微生物来源酶或动物胃蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于所述步骤1 中,利用氢氧化钠溶液对鱼鳞进行脱脂的具体方法为将脱灰湿鱼鳞放入当量浓度为0. IN 的氢氧化钠溶液中,用搅拌器以60转/分的转速搅拌814h,除去鱼鳞的脂肪和杂蛋白;其中,1. 5ml当量浓度为0. IN的氢氧化钠溶液中加入0. 258g脱灰湿鱼鳞。
全文摘要
本发明公开的一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法,将新鲜鱼鳞用盐酸脱灰,苛性钠除脂肪和杂蛋白,然后进行热水浸提获得胶原蛋白溶液,再利用3种酶分别酶解胶原蛋白,其次进行活性炭过滤和大孔树脂处理,收集脱色液,经超滤膜过滤,冷冻干燥,制备分子量集中、回收率高、脱色效果好的鱼鳞低分子胶原蛋白的有效方法,不仅可从鱼皮鱼鳞中获得高含量低分子组分胶原蛋白肽,而且去除影响胶原蛋白产品外观的色素类物质,减轻胶原蛋白特有的鱼腥鱼臭味,可提高鱼类胶原蛋白产品的产品价值。
文档编号C07K1/36GK102260727SQ201110174558
公开日2011年11月30日 申请日期2011年6月24日 优先权日2011年6月24日
发明者申铉日 申请人:申铉日
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