专利名称：同时制备niga-ichigoside F1和suavissimoside R1化学对照品的方法
技术领域：
本发明本发明属于医药技术领域，具体涉及一种应用树脂柱分离和高速逆流色谱技术同时制备niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品的方法。
背景技术：
茅莓(JMms parvifolius L.)是蔷薇科悬钩子属植物茅莓的干燥全草，是民间常用草药，具有清热解毒、散瘀止血、祛风利湿、活血凉血、杀虫疗疮等功效，用于妇科止血，疗效显著。现代研究表明，茅莓提取物对脑缺血有保护作用，具有止血和活血化瘀的作用，并且与丹参的药理作用相同。茅莓主要含有活性成分为皂苷类，其主要为三萜皂苷类化合物。制备 niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品对于茅莓药材的开发利用具有重要
眉、ο目前，尚未见分离制备niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品的相关报道。
发明内容
本发明提供一种工艺简单、易于规模化的制备方法，可以以茅莓提取物为原料，同时制备 niga-ichigoside Fl 和 suavissimoside Rl 两种化学对照品。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下
同时制备niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品的方法，其特征在于包括以下步骤
1)树脂柱粗分离茅莓药材用水或乙醇水溶液提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物为原料，用低浓度乙醇溶液溶解，上大孔树脂柱分离，先用水洗去杂质，再用50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品；
2)高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，体积比为 4-7:5-8:2-5，上相为固定相，下相为流动相，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，进行高速逆流色谱分离得到niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品。所述的大孔树脂可选HPD-100或AB-8型。所述高速逆流色谱仪转速为700-1000r/min，流动相的流速为1. 5_;3ml/min。本发明具有如下优点
1)本发明采用两步法制备对照品，工艺简单。采用树脂柱粗分离，相较文献中应用较多的萃取方法，对目标成分更有针对性，可实现最大程度的去粗存精，有利于下步精制纯化。2)本发明采用的技术手段非常适合放大进行规模化生产。3)本发明同时制备得到两种对照品，纯度高(大于98%)，收率高(大于80%)，色泽好(白色)。
具体实施例方式现结合实施例做进一步详细说明，实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。实施例1
1、树脂柱粗分离以茅莓提取物为原料，取log，用15%乙醇溶液溶解，过滤，滤液上 HPD-100型大孔树脂柱分离，先用5BV的水洗去杂质，再用4-7BV50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品408mg ；
2、高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(体积比为4:5:2)，置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在lOOOr/min，同时将流动相以3ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg， 紫外检测，收集流出液，减压蒸干得到niga-ichigoside Fl对照品32mg和suavissimoside Rl对照品35mg。实施例2
1、树脂柱粗分离以茅莓提取物为原料，取50g，用15%乙醇溶液溶解，过滤，滤液上 AB-8型大孔树脂柱分离，先用4BV的水洗去杂质，再用5BV50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品2. 2g；
2、高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(体积比为7: 8:2)，置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在750r/min，同时将流动相以1. 5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，收集流出液，减压蒸干得到niga-ichigoside Fl对照品130mg和 suavissimoside Rl 对照品 155mg。实施例3
1、树脂柱粗分离以茅莓提取物为原料，取50g，用15%乙醇溶液溶解，过滤，滤液上 HPD-100型大孔树脂柱分离，先用5BV的水洗去杂质，再用4BV50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品2. 3g ；
2、高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(体积比为7:5: 5)，置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在700r/min，同时将流动相以2ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，收集流出液，减压蒸干得到niga-ichigoside Fl对照品145mg和suavissimoside Rl对照品162mgo实施例41、树脂柱粗分离以茅莓提取物为原料，取100g，用15%乙醇溶液溶解，过滤，滤液上 AB-8型大孔树脂柱分离，先用3BV的水洗去杂质，再用5BV50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品4. Ig;
2、高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(体积比为7:6:3)，置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在900r/min，同时将流动相以3ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，收集流出液，减压蒸干得到niga-ichigoside Fl对照品315mg和suavissimoside Rl对照品348mg。 实施例5
1、树脂柱粗分离以茅莓提取物为原料，取100g，用15%乙醇溶液溶解，过滤，滤液上 AB-8型大孔树脂柱分离，先用5BV的水洗去杂质，再用7BV50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品3. 9g；
2、高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(体积比为6:5:2)，置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在950r/min，同时将流动相以2. 5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，收集流出液，减压蒸干得到niga-ichigoside Fl对照品342mg和 suavissimoside Rl 对照品 357mg。
权利要求
1.同时制备niga-ichigosideFl和suavissimoside Rl化学对照品的方法，其特征在于包括以下步骤1)树脂柱粗分离茅莓药材用水或乙醇水溶液提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物为原料，用低浓度乙醇溶液溶解，上大孔树脂柱分离，先用水洗去杂质，再用50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品；2)高速逆流色谱精制以二氯甲烷-甲醇-水体系为两相溶剂系统，体积比为 4-7:5-8:2-5，上相为固定相，下相为流动相，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，进行高速逆流色谱分离得到niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化学对照品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中所述的大孔树脂可选HPD-100或 AB-8 型。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)中所述高速逆流色谱仪转速为 700-1000r/min，流动相的流速为 1. 5_3ml/min。
全文摘要
本发明涉及一种同时制备niga-ichigosideF1和suavissimosideR1化学对照品的方法。茅莓药材经提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物为原料，经树脂柱分离及高速逆流色谱两步高效纯化，即可获得纯度大于98%的niga-ichigosideF1和suavissimosideR1化学对照品。本发明工艺步骤简单、纯度高，并且易于规模化生产。
文档编号C07J63/00GK102311480SQ20111018730
公开日2012年1月11日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司