一种苦玄参苷I_A的制备方法

专利名称：一种苦玄参苷I_A的制备方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种苦玄参苷I A的制备方法，特别是涉及一种利用高速逆流色谱法纯化苦玄参苷IA的方法。
背景技术：
苦玄参苷I A (Picfeltarraenin IA),为三職类化合物，分子式C41H62O13,分子量762. 92318，分子结构式为
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5 '苦玄参为玄参科植物苦玄参(Picria fel-terrae Lour.)的干燥全草,又名苦草，蛇总管，产于我国广东、广西、云南和贵州南部，在广西作药用历史已久。苦玄参性寒味苦，用于治疗高热、蛇伤及痈疖等，具有清热解毒，凉血消肿之功效。该药已收载于《中国药典》2010年版。现代研究表明，苦玄参的化学成分主要为葫芦苦素三萜成分和黄酮类化合物，药理实验证明，苦玄参干浸膏具有明显的抗炎及镇痛作用。苦玄参苷I A是苦玄参三萜部分中含量最高的成分，在干燥植物中的含量约为O. 25%，有中枢抑制作用和抗补体作用，是苦玄参的主要活性成分。目前学者对苦玄参定量分析方面报道最多的是苦玄参苷IA的含量测定，各地苦玄参药材中苦玄参苷I A的含量差异较大，含量差异与产地、药用部位、采收季节等均有关系。目前分离制备苦玄参苷IA的方法主要是采用大孔树脂和硅胶柱分离，邹节明采用HPD50树脂精制苦玄参提取物；王力生等以TLC为检测手段，利用DlOl大孔树脂对苦玄参总皂苷进行吸附洗脱，把苦玄参总皂苷含量由浸膏中的8. 7%提高至27. 3%，这些方法仅提取得到总皂苷，未涉及单体化合物的分离纯化。潘小娇等发表的文献“从苦玄参中制备苦玄参苷Ia的实验研究”，该文献采用水煮，醇溶，正丁醇萃取，硅胶柱分离得到苦玄参苷IAo在生产实践中，硅胶柱层析成本高、重现性较差且生产周期长。

发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种苦玄参苷I A的制备方法，应用高速逆流色谱分离纯化苦玄参苷I A，操作简单、生产周期短。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下一种苦玄参苷I A的制备方法，具体包括提取、总皂苷制备、脱色以及分离纯化四道工序，其特征在于提取工序(I)中，以苦玄参为原料，用甲醇或乙醇微波提取，减压浓缩后获得提取浸膏；总皂苷制备工序(2)中，提取浸膏用热水分散，通过大孔吸附树脂柱，用水和60-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；脱色工序(3)中，乙醇洗脱液加活性炭，加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得粗品；分离纯化工序(4)中，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到苦玄参苷I A。所述总皂苷制备工序(2)中，采用的大孔吸附树脂为AB-8、HPD100、D3520、ADS-7、DA201、SA-I等树脂中的一种或几种混合。
所述分离纯化工序(4)中，采用高速逆流色谱法分离纯化苦玄参苷I A，溶剂系统选用乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-O. 05% TFA，体积比为(5-10) (8-15) (2-5) (15-30)，溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在l_4ml/min，主机转速控制在850-1000r/min。本发明的有益效果是采用大孔吸附树脂和高速逆流色谱法分离纯化，工艺简单、生产周期短、成本低、产品含量高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :苦玄参叶粉碎，取3kg，加8倍量60 %乙醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过AB-8大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色，再用3BV75 %乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入I %活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比5:8:3: 15在分液漏斗中混合充分,分层后取下相作为流动相，上相为固定相,将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至900r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I a7. 34g，含量98. 2%。实施例2:苦玄参叶粉碎，取3kg，加10倍量65%甲醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过HPD100大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色,再用4BV60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入2 %活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比8 : 13 : 5 : 28在分液漏斗中混合充分,分层后取下相作为流动相，上相为固定相,将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至950r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至3ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I a5. 18g，含量98. 5%。实施例3:苦玄参叶粉碎，取3kg，加8倍量75 %乙醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过SA-I大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色，再用3BV80%甲醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入1%活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比
6 10 2 20在分液漏斗中混合充分,分层后取下相作为流动相,上相为固定相,将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至850r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至4ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I a5. 21g，含量98. 0%。实施例4:苦玄参叶粉碎，取5kg，加6倍量65 %乙醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过DA201大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色，再用3BV90%甲醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入3%活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比10 10 3 25在分液漏斗中混合充分，分层后取下相作为流动相，上相为固定相，将固 定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至900r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至4ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I A10. 56g，含量98. 6%。实施例5:苦玄参叶粉碎，取5kg，加7倍量60 %甲醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过ADS-7大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色，再用4BV70%甲醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入O. 5%活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比
7: 15 : 4 : 30在分液漏斗中混合充分，分层后取下相作为流动相，上相为固定相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至950r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至2. 5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I a9. 24g，含量97. 8%。实施例6 苦玄参叶粉碎，取5kg，加10倍量70%甲醇微波提取2次，提取液合并后减压浓缩得到提取浸膏，将提取浸膏用水分散后通过D3520大孔树脂柱，饱和吸附后，先用水洗脱至无色，再用4BV65 %乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，加入I. 5 %活性炭加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按体积比
6: 12 : 4 : 23在分液漏斗中混合充分,分层后取下相作为流动相，上相为固定相,将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至1000r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速调至2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，根据图谱收集目标成分，减压浓缩干燥流分，制得苦玄参苷I a9. 19g，含量98.0%。
权利要求
1.一种苦玄参苷I A的制备方法，具体包括提取、总皂苷制备、脱色以及分离纯化四道工序，其特征在于提取工序(I)中，以苦玄参为原料，用甲醇或乙醇微波提取，减压浓缩后获得提取浸膏；总皂苷制备工序(2)中，提取浸膏用热水分散，通过大孔吸附树脂柱，用水和60-90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；脱色工序(3)中，乙醇洗脱液加活性炭，加热搅拌脱色，过滤，脱色液减压回收乙醇，干燥得粗品；分离纯化工序(4)中，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到苦玄参苷I A。
2.根据权利要求I所述的苦玄参苷IA的制备方法，其特征在于所述总皂苷制备工序(2)中，采用的大孔吸附树脂为AB-8、HPD100, D3520、ADS-7、DA201、SA-I等树脂中的一种或几种混合。
3.根据权利要求I所述的苦玄参苷IA的制备方法，其特征在于所述分离纯化工序(4)中，采用高速逆流色谱法分离纯化苦玄参苷I A，溶剂系统选用乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-O. 05 % TFA，体积比为(5-10) (8-15) (2-5) (15-30)，溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在l_4ml/min，主机转速控制在850-1000r/min。
全文摘要
本发明提供了一种苦玄参苷IA的制备方法，以苦玄参为原料，经甲醇或乙醇为溶媒提取、浓缩、大孔树脂吸附、脱色、高速逆流色谱法纯化制备苦玄参苷IA。本方法制备的苦玄参苷IA纯度高于95％，且具有简便、快速、制备量大、样品损失少等优点，易于推广使用。
文档编号C07J53/00GK102911239SQ20111021874
公开日2013年2月6日 申请日期2011年8月2日 优先权日2011年8月2日
发明者李法庆, 刘东锋 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司