专利名称：一种高纯度棘白霉素类化合物的制备方法
技术领域：
本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种高纯度棘白霉素类化合物FR179642的制备方法。
背景技术：
近年来，随着广谱抗菌药物和免疫抑制剂的大量应用、肿瘤化疗、器官移植以及艾滋病的蔓延等，导致免疫系统受到抑制的人群不断增多，深部真菌感染的发病率开始呈现明显的上升趋势，且随着抗真菌药物的运用，真菌的耐药性也越来越强，使得抗真菌药物的应用有迅猛增加的趋势。因此，抗深部真菌感染的药物已成为抗感染药的研究热点之一，日益引起人们的关注。棘白菌素是一类新型的抗真菌药，与目前临床常用抗真菌药物的作用机制明显不同，是β-1，3-葡聚糖合成酶的抑制剂，作用于真菌的细胞壁。细胞壁是真菌与哺乳动物细胞之间最大的差别，所以干扰细胞壁的合成，影响细胞壁的完整性将导致真菌细胞死亡而对人无伤害，因此副作用较小，安全性较高。目前棘白菌素类药物已经有3个品种上市，即卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。其中米卡芬净日本藤泽公司研制开发，2005年通过美国FDA认证，是继卡泊芬净之后FDA批准的第2种棘白菌素类抗真菌药物。对念珠菌属、曲霉菌属引起的深部真菌感染有广泛抗菌作用；对耐唑类药物的白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌均有良好的抗菌活性。同时，米卡芬净无肾毒性，并且与其他药物几乎无相互作用，因此有很好的临床应用前景。米卡芬净是一种水溶性半合成棘白菌素类抗真菌药物，是经天然产物棘白霉素类化合物FR179642修饰而得。棘白霉素类化合物FR179642是鞘茎点霉属(Coleophoma sp.) 的发酵代谢产物，是合成米卡芬净的主要原料。其结构式如下
权利要求
1.一种高纯度棘白霉素类化合物FR179642的制备方法，包括下述步骤 1)在棘白霉素类化合物FR179642的发酵液中加入助滤剂，搅拌均匀； 2)对发酵液进行固液分离，得到棘白霉素类化合物FR179642的滤液； 3)将棘白霉素类化合物FR179642的滤液导入大孔吸附树脂进行吸附； 4)吸附完毕，进行树脂净化，然后用极性溶剂与水混合而成的解吸液进行解吸，得到棘白霉素类化合物FRl79642的解吸液； 5)解吸液中加入酸性物质调节PH值为4-5后浓缩，然后用极性溶剂结晶，得棘白霉素类化合物FRl79642粗提物； 6)将棘白霉素类化合物FR179642粗提物进行反相填料层析分离，用极性溶剂与水的混合液梯度浓度解吸； 7)层析分离得到的解吸液中加入酸性物质调节PH值为4-5后浓缩，然后用极性溶剂结晶，得到高纯度的棘白霉素类化合物FR179642产品。
2.根据权利要求I所述的方法，其中步骤I)中的助滤剂为珍珠岩或硅藻土，其用量为每升发酵液50-100克。
3.根据权利要求I所述的方法，其中步骤2)中的固液分离过程为离心、板框压滤方式。
4.根据权利要求I所述的方法，其中步骤3)中的大孔吸附树脂为弱极性吸附树脂，优选为AB-8或LX-18弱极性吸附树脂，其用量为棘白霉素类化合物FR179642滤液体积的1/20-1/5。
5.根据权利要求I所述的方法，其中步骤4)、5)、6)、7)中的极性溶剂为甲醇、乙醇或丙酮中的一种。
6.根据权利要求I所述的方法，其中步骤4)中所述的树脂净化为用去离子水洗涤3倍柱体积，解吸液中极性溶剂的浓度为10-40%。
7.根据权利要求I所述的方法，其中步骤5)、7)所述的酸性物质为有机酸或无机酸中的一种，优选为盐酸、草酸或冰乙酸。
8.根据权利要求I所述的方法，其中步骤5)、7)中解吸液浓缩至浓度为50-100mg/mL，结晶溶剂加入量为浓缩液体积的6-10倍。
9.根据权利要求I所述的方法，其中步骤6)中所述的反相填料为采用聚苯乙烯或聚丙烯酸酯及其衍生物制备的聚合物微球、ODS C18或Fraclite800。
10.根据权利要求I所述的方法，其中步骤6)中所述的极性溶剂与水的混合液梯度浓度解吸，解吸过程为极性溶剂浓度为5%的混合液洗涤1-3倍柱体积后，用15%浓度的混合液解吸至棘白霉素类化合物FRl79642全部解吸完毕。
全文摘要
本发明公开了一种利用鞘茎点霉属(Coleophoma sp.)发酵培养物制备棘白霉素类化合物的方法。该方法包括经过对鞘茎点霉属发酵培养物过滤、大孔树脂吸附、解吸、浓缩、结晶等步骤，得到棘白霉素类化合物FR179642的粗提物，再借助反相填料对棘白霉素类化合物FR179642的粗提物进行层析分离，得到高纯度的棘白霉素类化合物FR179642产品。本发明的优点在于采用大孔吸附树脂提取分离棘白霉素类化合物FR179642，工艺简单易行，适宜于工业化生产；将反相填料用于棘白霉素类化合物FR179642的层析分离，可以制备高纯度的FR179642的产品。
文档编号C07K7/56GK102952178SQ20111024430
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月24日 优先权日2011年8月24日
发明者王海燕, 张雪霞, 李宁, 李晓露, 任风芝, 林毅, 张丽, 林旸, 张金娟, 陈书红, 成晓迅, 李丽红, 高月麒, 张艳立, 蒋沁, 段宝玲 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司