一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素a的方法

文档序号:3511765阅读:306来源:国知局
专利名称:一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素a的方法
技术领域
本发明属于天然产物分离领域,尤其是涉及一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A 的方法。
背景技术
钩状胡椒素A,属于查尔酮类化合物,淡黄色无定形粉末。分子式=C29H3tlO7;分子量490. 55。现代药理研究表明,钩状胡椒素A具有细胞毒活性,对KB细胞有中等细胞毒活性 ED50为2. 3微克/毫升。此外,钩状胡椒素还具有抗菌活性,对枯草杆菌、藤黄微球菌显示抗菌活性。在TLC上的MIC均为1. 6微克。钩状胡椒/ ^ aduncum L.遍布于亚洲和南美。巴布新几内亚沿海地区的居民用作防腐药治疗创伤。文献报道,经体外筛选发现该植物叶的提取物有强的灭螺(Biom phalaria glabrata)和显著的抗菌(枯草杆菌、藤黄细球菌和大肠杆菌)活性。国内对钩状胡椒的研究较少,未见有钩状胡椒素A的相关研究报道。

发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种钩状胡椒素A的制备方法。该方法操作简单,产品含量高,重现性好。一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于将钩状胡椒原料粉碎, 用6-10倍重量的石油醚进行脱脂处理2-3次,将脱脂后的原料用相当于5-10倍药材重量的20%-90%乙醇加热回流提取2-3次,提取液合并,经超滤膜过滤,滤出液回收乙醇,浓缩液与ODS硅胶拌勻,烘干,干法上柱,密封,加压用乙醇-水-醋酸混合溶液洗脱,洗脱液浓缩后二次上ODS硅胶柱分离,用甲醇-水-醋酸混合溶剂加压洗脱,薄层监测,收集钩状胡椒素A流分,真空干燥得产品。所述超滤膜截留分子量为1000-10000。所述流动相是乙醇-水-醋酸(3(Γ45 65 :1)。所述第一次上柱ODS硅胶为100 200目,加压控制流速在80-120ml/min,第二次上柱ODS硅胶为20(Γ300目,硅胶柱加压控制流速在30-60ml/min。综上所述,本发明存在以下优点石油醚脱除脂溶性杂质,操作简单;膜分离除去鞣质,果胶,蛋白质,粘液质等大分子杂质,能耗小,无污染;采用ODS中压硅胶柱保证了洗脱剂的流速,加强了分离效果,重复上柱,所得产品纯度高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式下述实施实例中钩状胡椒素A的监测采用薄层色谱法,具体方法如下薄层色谱条件
薄层板硅胶G薄层板;
展开剂乙酸乙酯-丙酮-水(10 4 1);
显色剂2%的FeCl3乙醇液;
展开后,取出,晾干,喷以2%FeCl3乙醇液,在日光下检视,供试品在与对照品色谱相应的位置上,有一相同颜色的单一斑点。实施例1
取钩状胡椒原料1kg,用6L石油醚进行脱脂处理3次,将脱脂后的原料用10kg20%乙醇加热回流提取2次,提取液合并,经截留分子量为1000的超滤膜过滤,滤出液回收乙醇,浓缩液与100目的ODS硅胶拌勻,烘干,干法上ODS硅胶柱,密封,加压用乙醇-水-醋酸混合溶液(30 65 :1)洗脱,控制流速在120ml/min,洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶(200目)柱分离,用甲醇-水-醋酸混合溶剂(35 65 1)加压洗脱,控制流速在30ml/min,薄层监测,收集钩状胡椒素A流分,真空干燥得产品38mg。实施例2:
取钩状胡椒原料1kg,用IOL石油醚进行脱脂处理2次,将脱脂后的原料用^g90%乙醇加热回流提取3次,提取液合并,经截留分子量为10000的超滤膜过滤,滤出液回收乙醇,浓缩液与200目的ODS硅胶拌勻,烘干,干法上ODS硅胶柱,密封,加压用乙醇-水-醋酸混合溶液(35 :65:1)洗脱,控制流速在SOml/min,洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶(300目)柱分离,用甲醇-水-醋酸混合溶剂(45 651)加压洗脱,控制流速在60ml/min,薄层监测,收集钩状胡椒素A流分,真空干燥得产品31mg。实施例3:
取钩状胡椒原料1kg,用8L石油醚进行脱脂处理3次,将脱脂后的原料用mcg40%乙醇加热回流提取3次,提取液合并,经截留分子量为8000的超滤膜过滤,滤出液回收乙醇,浓缩液与100目的ODS硅胶拌勻,烘干,干法上ODS硅胶柱,密封,加压用乙醇-水-醋酸混合溶液(30 65 :1)洗脱,控制流速在lOOml/min,洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶(200目)柱分离,用甲醇-水-醋酸混合溶剂(38 651)加压洗脱,控制流速在40ml/min,薄层监测,收集钩状胡椒素A流分,真空干燥得产品42mg。
权利要求
1.一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于将钩状胡椒原料粉碎,用 6-10倍重量的石油醚进行脱脂处理2-3次,将脱脂后的原料用相当于5-10倍药材重量的 20%-90%乙醇加热回流提取2-3次,提取液合并,经超滤膜过滤,滤出液回收乙醇,浓缩液与 ODS硅胶拌勻,烘干,干法上柱,密封,加压用乙醇-水-醋酸混合溶液洗脱,洗脱液浓缩后二次上ODS硅胶柱分离,用甲醇-水-醋酸混合溶剂加压洗脱,薄层监测,收集钩状胡椒素 A流分,真空干燥得产品。
2.如权利要求1所述的提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于所述超滤膜截留分子量为 1000-10000。
3.如权利要求1所述的提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于所述流动相是乙醇-水-醋酸(30 45 65 :1)。
4.如权利要求1所述的提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于第一次上柱ODS硅胶为 100^200目,加压控制流速在80-120ml/min,第二次上柱ODS硅胶为200 300目,硅胶柱加压控制流速在30-60ml/min。
全文摘要
本发明提供一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法,其特征在于,将钩状胡椒原料粉碎,脱脂、提取、膜滤后再重复ODS硅胶柱分离,用乙醇-水-醋酸混合溶剂加压洗脱,薄层监测,收集钩状胡椒素A流分,真空干燥得产品。本方法操作简单,产品含量高,重现性好。
文档编号C07C69/94GK102503832SQ20111030360
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司
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