纯化免疫球蛋白溶液的方法

文档序号:3586556阅读:485来源:国知局
专利名称:纯化免疫球蛋白溶液的方法
纯化免疫球蛋白溶液的方法本文报导了从溶液,例如细胞培养上清液或者蛋白质A层析洗脱液中除去宿主细胞DNA和宿主细胞蛋白质的方法,所述方法不需要告知多肽含量。通过将溶液的pH值降低到低于PH 6和在该pH值下温育所述溶液实现此目的。
背景技术
在多种诊断和治疗领域中使用生物学大分子如重组单克隆抗体和其他的蛋白质。特别是单克隆抗体现在被广泛使用在多种严重疾病如癌或者类风湿关节炎中。通常,通过使用细菌、酵母或者哺乳动物细胞的发酵过程产生这些复杂生物学大分子。传统地,通过离心或者过滤从发酵培养液中除去微生物或者哺乳动物细胞,并且之后通过多种方法如过滤、沉淀和层析进一步纯化不含细胞的上清液,以除去与发酵相关的杂质。除了培养基组分之外,来自发酵过程的主要杂质是来自产生生物学大分子的细胞 的残余量的核酸(宿主细胞DNA(HCDNA)和RNA)和宿主细胞蛋白质(HCP)。为治疗目的,在最终的药品中宿主细胞DNA(HCDNA)或者宿主细胞蛋白质的可接受浓度非常低,以减少副作用并且保证患者的安全。在发酵工程中的近来的改进已经导致在生产的生物反应器中较高的细胞密度并且对纯化方法提出了更高的要求,所述较高的细胞密度增加了 HCP和HCDNA在无细胞的上清液中的水平。因此非常希望得到从细胞培养上清液中除去大量的HCDNA和HCP的有效的和廉价的方法。O,Brien, W. D.,等人(J. Acoust. Soc. Am. 52 (1972) 1251-1255)报导了脱氧核糖核酸水溶液的超声研究。Vorlickova, M.,等人(NucI. Acids Res. 27 (1999) 581-586)报导了 DNA的鸟嘌呤-腺嘌呤重复链的二聚化。Lydersen等人(Lydersen, B. K.,等人,Ann.N. Y. Acad. Sci. 745 (1994) 222-231)报导了哺乳动物细胞发酵培养液的酸沉淀。在WO2008/127305中报导了使用低pH和二价阳离子分离生物大分子的方法。在EPl 561 756和EPl 380 589中报导了纯化蛋白质的方法。发明概沭本文报导了从细胞培养上清液中纯化多肽的方法。已经发现通过调整pH值到酸性范围内并且随后在特定的时间内温育酸化的溶液,宿主细胞核酸和宿主细胞蛋白质沉淀,但是目的多肽保留在溶液中。之后通过简单的物理分离步骤可以除去沉淀物和污染的宿主细胞组分。在处理溶液的过程中,目的多肽保留在溶液中而宿主细胞污染物被沉淀。一方面,本文报导了产生或者获得免疫球蛋白的方法,其包括以下步骤i)将由酸和水组成的溶液加入到已经被除去细胞和细胞碎片的细胞培养上清液中,用于调整PH值到pH4. 5-pH5. 5的值,其中溶液基本不含二价阳离子,ii)将pH被调整的细胞培养上清液温育,并且iii)从温育的细胞培养上清液中除去沉淀物从而产生或者获得免疫球蛋白,其中所述细胞培养上清液包含不超过10mg/ml的浓度的免疫球蛋白,其中加入的酸的浓度是5. 5mol/l或者更低。在一个实施方案中,在温育步骤中至少90%的免疫球蛋白保留在溶液中。在另一个实施方案中,在温育步骤中至少95%的免疫球蛋白保留在溶液中。在另一个实施方案中,在温育步骤中超过98%的免疫球蛋白保留在溶液中。在一个实施方案中,产生多肽的方法包括以下步骤a)培养包含编码多肽的核酸的细胞,b)从细胞培养上清液中除去细胞和细胞碎片,c)调整细胞培养上清液的pH值到低于pH 5. 5的值,d)温育pH被调整的细胞培养上清液,并且e)从经温育的细胞培养上清液中除去沉淀物,从而产生所述多肽。
另一个方面,本文报导了纯化细胞培养上清液的方法,其包括以下步骤a)将细胞培养上清液的pH值调整到低于pH 5. 5的值,b)温育pH被调整的细胞培养上清液,并且c)从经温育的细胞培养上清液中除去沉淀物,从而纯化细胞培养上清液。另一个方面是产生多肽的方法,其包括以下步骤i)提供包含编码多肽的核酸的哺乳动物细胞,ii)在无血清的条件下培养所述细胞,iii)回收细胞培养上清液,从细胞培养上清液任选地除去细胞或细胞碎片,和iv)通过以下的步骤纯化细胞培养上清液,从而产生所述多肽a)将由酸和水组成的溶液加入到细胞培养上清液中,用于调整pH值到低于pH
5.5的值,所述溶液基本不含二价阳离子,b)温育pH被调整的细胞培养上清液,并且c)从经温育的细胞培养上清液中除去沉淀物,其中所述细胞培养上清液包含不超过10mg/ml的浓度的多肽,其中加入的酸的浓度是5. 5mol/l或者更低。在一个实施方案中,调整pH值到从pH 5. 5至pH 3. 5的值。在另一个实施方案中,调整pH值到从pH 5. 5至pH 4. 5的值。在一个实施方案中,将pH被调整的细胞培养上清液在1° C至30° C的温度下温育。在另一个实施方案中,将pH被调整的细胞培养上清液在2° C至10° C的温度下温育。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液在约4° C的温度下温育。在一个实施方案中,将pH被调整的细胞培养上清液温育约O. 5小时或者更长。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液温育约O. 5小时至约72小时。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液温育约2小时至约48小时。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液温育约20小时至约32小时。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液温育约24小时。在一个实施方案中,通过过滤、沉降或者离心除去细胞和细胞碎片和/或除去沉淀物。在另一个实施方案中,细胞培养上清液是哺乳动物细胞培养上清液。在一个实施方案中,多肽是免疫球蛋白。在另一个实施方案中,免疫球蛋白是G类免疫球蛋白。在另一个实施方案中,免疫球蛋白是G类的亚类IgGl或者亚类IgG4的免疫球蛋白或者它们的变体。
在一个实施方案中,免疫球蛋白是亚类IgGl,并且在pH 4. 5至pH 3. 5的pH值下温育约2小时至约48小时。在一个实施方案中,免疫球蛋白是亚类IgG4,并且在pH 5. 5至pH 4. 5的pH值下温育约2小时至约30小时。发明详沭
本文报导了纯化多肽的方法,其包括以下步骤a)调整含多肽的细胞培养上清液的pH值到pH3. 5至pH5. 5的值,b)将pH被调整的细胞培养上清液温育,和c)从温育的细胞培养上清液中除去沉淀物,从而纯化所述多肽。可以用其中细胞和细胞碎片已经被除去的粗制的细胞发酵上清液直接进行本文报导的方法,也可以在一个或者多个初步纯化步骤如蛋白质A亲和层析之后进行本文报导的方法。术语“细胞培养上清液”表示通过培养分泌目的多肽的细胞获得的溶液。除分泌的多肽以外,上清液也包含使用的细胞培养基组分和在培养中细胞分泌的除了目的多肽以外的代谢组分以及在培养中从死细胞释放的培养细胞的其他组分或者在从细胞回收多肽的过程中来自解体细胞的培养细胞的其他组分。细胞培养上清液不含细胞碎片和/或完整细胞。该术语也包括已通过单一层析纯化步骤如蛋白质A亲和层析处理的细胞培养上清液。术语“多肽”表示多聚体,其由通过天然或者合成产生的肽键连接的氨基酸组成。少于约20个氨基酸残基的多肽可以被称作“肽”,而由两个或者以上多肽组成的分子或者包含超过100个氨基酸残基的一条多肽的分子可以被称作“蛋白质”。多肽也可以包含非-氨基酸组分,如糖基、金属离子或者羧酸酯类。通过细胞可以加入非氨基酸组分,在所述细胞内表达多肽,并且随着细胞类型的不同表达可以不同。本文通过多肽的氨基酸主链结构或者编码相同多肽的核酸方面定义多肽。附加物如糖基通常没有被具体描述,但是仍然可以存在。在一个本文报导的方法的实施方案中是选自免疫球蛋白、免疫球蛋白片段和免疫球蛋白缀合物的多肽。术语“免疫球蛋白”表示由两个或者以上多肽组成的蛋白质,所述多肽基本上由免疫球蛋白基因编码。公认的免疫球蛋白基因包括不同的恒定区基因以及无数的免疫球蛋白可变区基因。免疫球蛋白通常包含两个被称作轻链的多肽(轻链)和两个被称作重链的多肽(重链)。每种重链和轻链多肽含有可变结构域(可变区)(通常是多肽链的氨基末端部分),其包含能与抗原相互作用的结合区域。每种重链和轻链多肽包含恒定区(通常是羧基末端部分)。免疫球蛋白的轻链或者重链的可变结构域包含不同的区段,即四个框架区(FR)和三个高变区(CDR)。免疫球蛋白的恒定区不直接涉及与免疫球蛋白的抗原的结合,但是显示出多种效应子功能。根据重链恒定区的氨基酸序列,将免疫球蛋白分成类IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。将这些类中的一些进一步分成亚类(亚型),即将IgG分成IgGl、IgG2、IgG3和IgG4,或者将IgA分成IgAl和IgA2。根据免疫球蛋白所属的类将免疫球蛋白的重链恒定区分别称作a (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE), Y (IgG)和μ (IgM)。术语“免疫球蛋白缀合物”表示一种多肽,其包含的免疫球蛋白重链或者轻链的至少一种结构域通过肽键结合到另一种多肽。所述另一种多肽是非免疫球蛋白肽,如激素或者生长受体或者细胞毒性肽或者补体因子等。
在一个实施方案中,免疫球蛋白是G类免疫球蛋白。在另一个实施方案中,免疫球蛋白是G类的亚类IgGl或者亚类IgG4或者其变体。术语“变体”表示由于在亲本多肽氨基酸序列中添加、缺失和/或取代一个或者多个氨基酸残基产生的与亲本多肽的氨基酸序列不同的多肽。在一个实施方案中变体具有氨基酸序列,其具有与亲本多肽的氨基酸序列至少90%的氨基酸序列同一'I"生,在另一个实施方案中具有至少95%的氨基酸序列同一'丨生,并且在另一个实施方案中具有至少99%的氨基酸序列同一'丨生。本文使用的术语“调整pH值”表示将酸加入到溶液尤其是细胞培养上清液中,以便将溶液的PH值降低到低于pH7. O的值。通过加入酸性溶液,即酸,可以实现所述调整。在一个实施方案中,调整是通过加入选自盐酸、磷酸、乙酸和柠檬酸的酸性溶液。本文使用的术语“温育”表示在设定的pH值下维持各溶液。温育可以保持特定的时间。在一个实验方案中温育是约O. 5小时或者以上。在另一个实施方案中,温育是约O. 5小时至约72小时。在另一个实施方案中,温育是约2小时至约48小时。在另一个实施方案中,温育是约20小时至约32小时。在另一个实施方案中,温育是约24小时。在一个实 验方案中,在从PH3. 5至pH5. 5的pH值,尤其在pH4. 5至pH5. 5的pH值下温育上述实施方案中限定的特定时间。本文使用的术语“约”表示直接连续值不是准确的值而是表示一个范围。在一个实施方案中,所述范围是所述值加或减20%,在另一个实施方案中,所述范围是所述值加或减10%,在另一个实施方案中,所述范围是所述值加或减5%。例如,术语“约24小时”表示从19. 2小时至28. 8小时。术语“基本不含”表示这种化合物没有被加入到溶液中。但是该特定的化合物可以以少量存在,因为它在溶液中包含的其他化合物中存在。当这种化合物在溶液中以ImM或者更低的浓度,尤其是以I PM或者更低的浓度存在时,通常认为所述溶液基本不含该化合物。本领域已知产生多肽的方法并且其包括蛋白质在原核和真核细胞中的表达以及随后的分离多肽和通常纯化至可药用的纯度。例如,为在细胞中表达免疫球蛋白,通过标准方法将编码各个轻链和重链的核酸插入到表达载体中。在合适的原核或真核宿主细胞如CHO细胞、NSO细胞、SP2/0细胞、ΗΕΚ293细胞、COS细胞、PER. C6 (R)细胞、酵母或大肠杆菌细胞中进行表达,并且从细胞(上清液或裂解后的细胞)回收免疫球蛋白。在本申请中使用的术语“细胞”表示任何类型的能被改造以生产多肽的细胞系统。在一种实施方案中,细胞是哺乳动物细胞。在另一种实施方案中,细胞选自HEK细胞和CHO细胞。已经发现,如果将细胞培养上清液的pH值调整到低于pH 5. 5的值并且随后将溶液在该PH值下温育特定的时间,那么培养细胞的核酸和细胞蛋白质沉淀,而分泌的多肽保留在溶液中。之后通过简单的物理分离步骤即可以除去污染的宿主细胞组分。本文报导的方法可以用于细胞培养上清液的任何类型,S卩,用于真核细胞培养上清液和原核细胞培养上清液。在一个实施方案中,细胞培养上清液是真核细胞培养上清液。在另一个实施方案中,细胞培养上清液是哺乳动物细胞培养上清液。在另一个实施方案中,细胞培养上清液是CHO、HEK或Sp2/0细胞培养上清液。如今,几乎所有细胞培养方法都在没有添加的动物血清的情况下进行。因此,在一个实施方案中,在没有血清的条件下从细胞培养物获得细胞培养上清液。额外地,由于没有被添加的动物血清排除了来自动物血清中存在的未知化合物的潜在干扰,并且也降低了在细胞培养上清液中的多肽浓度。这是有利的,因为通常在利用沉淀纯化的方法中可能发生目的多肽的共沉淀,由此降低了纯化方法的产率。在培养细胞或者细胞碎片的存在下可以观察到相同的效应。因此,在一个实施方案中,在调整PH值之前从细胞培养上清液除去细胞和细胞碎片。在本文报导的方法中待纯化的多肽浓度不超过10mg/ml。在一个实施方案中,细胞培养上清液中的多肽浓度是从O. lmg/ml至约10mg/ml。在另一个实施方案中,细胞培养上清液中的多肽浓度是从lmg/ml至约8mg/ml。在另一个实施方案中,细胞培养上清液中的多肽浓度是从lmg/ml至约5mg/ml。为调整细胞培养上清液的pH值,必须将酸加入到细胞培养上清液中。这种酸可以是任何酸,只要这种酸不与多肽不可逆地相互作用。在一种实施方案中,所述酸选自盐酸、磷酸、硫酸、甲酸、乙酸、丙酸、丙二酸、丁二酸、肥酸、乳酸和柠檬酸。必须指出,当被加入到 细胞培养上清液时,酸是水溶液。该溶液由作为游离酸的各种酸和水组成并且基本不含其他的物质,尤其是二价阳离子。术语“游离酸”表示所述酸以一种形式存在,其中存在酸性的氢原子并且所述氢原子例如不与不同的阳离子交换。这包括了用于制备溶液的酸的形式也是游离酸;同样地排除了以盐形式使用的酸。在一个实施方案中,酸选自盐酸、磷酸、乙酸和柠檬酸。在一个实施方案中,在各自溶液中的酸浓度是5. 5mol/l或者更低。在另一个实施方案中酸浓度是从lmol/1至5. 5mol/l。在另一个实施方案中酸浓度是从I. 5mol/l至4mol/l。或者在一个实施方案中,在各自溶液中的酸浓度是以重量计30%或者更低。在一个实施方案中,酸浓度是从以重量计的1%至以重量计的30%。在另一个实施方案中,浓度是从以重量计的5%至以重量计的25%。在另一个实施方案中,酸浓度是从以重量计的10%至以重量计的20%。通常,如果本文给出了值的范围,那么该范围明确包括列出的边界点。在调整了 pH值之后,将被调整了 pH值的细胞培养上清液温育特定的时间。在一个实施方案中,特定的时间至少是O. 5小时或者以上。在另一个实施方案中,特定的时间是从约O. 5小时至约72小时。在另一个实施方案中,特定的时间是从约2小时至约48小时。在另一个实施方案中,特定的时间是从约20小时至约32小时。在另一个实施方案中,特定的时间是约24小时。在一个实施方案中,将pH被调整的细胞培养上清液在1° C至30° C的温度下温育。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液在2° C至10° C的温度下温育。在另一个实施方案中,将PH被调整的细胞培养上清液在约4° C的温度下温育。用本文报导的方法可以从细胞培养上清液沉淀(即,除去)宿主细胞核酸和宿主细胞蛋白质而不降低产生的多肽的浓度。约两小时的温育时间可以足够除去大量的宿主细胞核酸。因此,在一个实施方案中,温育是保持约2小时。为沉淀宿主细胞蛋白质,根据调整的PH值和多肽,约2小时至约48小时的温育时间可以是足够的。因此,在一个实施方案中,在约pH 5的pH值下在约4° C的温度下温育约2小时。在另一个实施方案中,在约5的PH值下在约4° C的温度下温育约2小时至约48小时。在一个实施方案中,所述多肽是免疫球蛋白。
在一个实施方案中,所述免疫球蛋白是亚类IgGl的免疫球蛋白。在另一个实施方案中,在约PH4. 5至pH3. 5的pH值下温育2小时至48小时,并且免疫球蛋白是亚类IgGl的免疫球蛋白。在特定的实施方案中温育2小时至30小时。在一个实施方案中,所述免疫球蛋白是亚类IgG4的免疫球蛋白。在另一个实施方案中,在约PH5. 5至pH4. 5的pH值下温育2小时至48小时,并且免疫球蛋白是亚类IgG4的免疫球蛋白。在特定的实施方案中在约PH5的pH值下温育。温育之后必须除去沉淀。为除去沉淀,可以使用本领域技术人员已知的任何方法。示例性的方法是过滤、沉积和倾析、离心和沉降。在一个实施方案中通过选自沉积、过滤、沉降和离心的方法除去沉淀。除去沉淀之后,例如用本领域技术人员已知的层析方法可以进行多肽的进一步纯化。因此在一个实施方案中,本文报导的方法包括用一个或者多个层析步骤纯化多肽的步
骤。 为纯化免疫球蛋白,可以利用不同柱层析步骤的组合。在一个实施方案中,在蛋白质A亲和层析之后是一种或者两种额外的层析分离步骤,例如离子交换层析步骤。很好地建立并且广泛使用了用于蛋白质回收和纯化的不同的方法,如用微生物蛋白的亲和层析(例如蛋白质A或蛋白质G亲和层析)、离子交换层析(如阳离子交换(羧甲基树脂)、阴离子交换(氨基乙基树脂)和混合模式的交换)、亲硫吸附(例如用β_巯基乙醇和其他的SH配体)、疏水相互作用或芳香吸附层析(如苯基琼脂糖、Aza-arenophilic树脂、或间-氨基苯基硼酸)、金属螯合亲和层析(例如用镍(II)和铜(II)-亲和材料)、尺寸排阻层析和电泳方法(如凝胶电泳、毛细管电泳)。提供了下面的实施例和附图来帮助理解本发明,在所附权利要求中给出了本发明的真实范围。应当理解,可以对给出的方法进行修改,只要不背离本发明的精神。


图I用本文报导的方法获得的抗-EGFR抗体发酵培养上清液中的宿主细胞DNA含量。图2用本文报导的方法获得的抗-EGFR抗体发酵培养上清液中的宿主细胞蛋白质含量。图3用本文报导的方法获得的抗-EGFR抗体发酵培养上清液中的抗体含量。图4用本文报导的方法获得的抗-PLGF抗体发酵培养上清液中的宿主细胞DNA含量。图5用本文报导的方法获得的抗-PLGF抗体发酵培养上清液中的宿主细胞蛋白质含量。图6用本文报导的方法获得的抗-PLGF抗体发酵培养上清液中的抗体含量。图7用本文报导的方法获得的抗-P-选择素抗体发酵培养上清液中的宿主细胞DNA含量。图8用本文报导的方法获得的抗-P-选择素抗体发酵培养上清液中的宿主细胞蛋白质含量。图9用本文报导的方法获得的抗-P-选择素抗体发酵培养上清液中的抗体含量。
图10用本文报导的方法根据pH值和温育时间获得的抗-PLGF抗体发酵培养上清液中的抗体含量。图11用本文报导的方法根据pH值和温育时间获得的抗-P-选择素抗体发酵培养上清液中的抗体含量。图12用本文报导的方法根据pH值和温育时间获得的抗-HER3抗体发酵培养上清液中的抗体含量。实施例I材料和方法杭体 用WO 2008/017963中报导的抗-EGFR抗体例证本文报导的方法。另一种示例性的免疫球蛋白是WO 2006/099698中报道的抗-PLGF抗体。另一种示例性的免疫球蛋白是WO 2005/100402中报道的抗_P_选择素抗体。另一种示例性的免疫球蛋白是PCT/EP2010/070062中报道的抗-HER3抗体。DNA通过Q-PCR(定量聚合酶链反应)测量残余的DNA浓度。因此,在高温下温育样品使样品中的DNA变性。根据制造商说明书,通过硅基质从溶液中捕获DNA并且用缓冲液洗脱DNA。使用包括QIAamp病毒RNA试剂盒的QIAcube自动机械(二者都来自Qiagen,希尔登,德国)用于提取。因此,将样品、裂解缓冲液和载体RNA混合并且温育10分钟。将乙醇加入到每支管中并且用样品-乙醇溶液装载QIAamp病毒RNA试剂盒的柱并且离心。之后将不同的洗涤溶液施加到柱上,并且再次离心柱。将洗脱缓冲液施加到柱之后,离心两次。使用LightCycler 2. O (罗氏诊断公司,曼海姆,德国)用于DNA的定量。在表I中概述了 PCR参数。表1:PCR 参数
权利要求
1.产生免疫球蛋白的方法,其包括以下步骤 i)将由酸和水组成的溶液加入到已经被除去细胞和细胞碎片的细胞培养上清液中,用于将PH值调整到pH 4. 5-pH5. 5的值,其中溶液基本不含二价阳离子, )温育PH被调整的细胞培养上清液,和 iii)从被温育的细胞培养上清液中除去沉淀物从而产生免疫球蛋白, 其中所述细胞培养上清液包含不超过10mg/ml的浓度的免疫球蛋白, 其中加入的酸的浓度是5. 5mol/l或者更低。
2.根据权利要求I的方法,其特征在于在温育步骤中至少90%的免疫球蛋白保留在溶液中。
3.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于在2°C至10° C的温度下温育。
4.根据权利要求3的方法,其特征在于pH被调整的细胞培养上清液在约4°C的温度下温育。
5.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于将PH被调整的上清液温育约至少2小时。
6.根据权利要求5的方法,其特征在于温育是约2小时至约72小时。
7.根据权利要求6的方法,其特征在于温育是约2小时至约48小时。
8.根据权利要求7的方法,其特征在于温育是约24小时。
9.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于免疫球蛋白是亚类IgGl,并且在pH4. 5至pH3. 5的pH值下温育约2小时至约48小时。
10.根据权利要求I至8的任一项的方法,其特征在于免疫球蛋白是亚类IgG4,并且在pH5. 5至pH4. 5的pH值下温育约2小时至约30小时。
11.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于通过选自沉积、倾析、过滤、沉降和离心的方法除去沉淀物。
12.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于所述酸选自乙酸、柠檬酸、盐酸和磷酸。
13.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于所述酸的浓度是从I.5mol/l至5.5mol/l。
14.根据权利要求12至13的任一项的方法,其特征在于所述酸是具有I.5mol/l至4mol/l的浓度的乙酸。
15.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于免疫球蛋白的浓度是lmg/ml至5mg/ml ο
16.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于所述细胞是CHO细胞。
17.根据上述权利要求任一项的方法,其特征在于在约4°C的温度下在约pH5或约PH4的pH值下温育约2小时。
18.根据权利要求I至16的任一项的方法,其特征在于在约4°C的温度下在约pH5或约PH4的pH值下温育约2小时至约48小时。
全文摘要
本文报导了直接在发酵之后或者在一个或多个初步纯化步骤如蛋白质A亲和层析之后纯化细胞培养上清液的方法。通过将pH值调整到酸性范围内和随后温育酸化的溶液,宿主细胞核酸和宿主细胞蛋白质可以被沉淀,而目的多肽保留在溶液中。之后通过简单的物理分离步骤可以除去沉淀物和污染的宿主细胞组分。
文档编号C07K1/30GK102791726SQ201180013130
公开日2012年11月21日 申请日期2011年3月9日 优先权日2010年3月10日
发明者C·哈克迈尔, F·施瓦茨, V·宾德尔 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司
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