专利名称：1,5-戊二胺的制造方法
技术领域：
本发明涉及利用发酵法制造1，5-戊ニ胺的方法。
背景技术：
聚酰胺(PA)是用作汽车行业、运动行业、生活时尚行业中所使用的一系列特殊塑料的原材料的重要聚合物组，ニ胺是所述聚酰胺的重要原材料単体成分。ニ胺和ニ羧酸缩合形成各种聚合物，此时，聚合物的特性由ニ胺和ニ羧酸的链长決定。通常，ニ胺以化学方式经过ニ羧酸的中间阶段而由衍生自石油的材料来制造；或 者通过氨基酸的化学脱羧反应来制造(非专利文献I)。考虑到石油价格的高涨，期望快速变化为下述方法通过发酵等生物技术方法从可再生资源来合成ニ胺。这里，利用发酵来制造作为碳数为5的ニ胺的1，5-戊ニ胺的方法受到广泛关注。1，5-戊ニ胺别名为尸胺，是可以用作聚酰胺的原材料単体的化合物。另外，1，5-戊ニ胺是生物体内普遍存在的多胺，其生物合成体系正逐步被阐明(參考非专利文献2)，作为其生物合成途径的一部分，已知对L-赖氨酸的脱羧反应进行催化的L-赖氨酸脱羧酶(下面简称为LDC )。在传统的利用发酵的1，5-戊ニ胺制造方法中，已知有以向微生物中导入LDC基因为基础，利用重组大肠杆菌的发酵的制造方法(參考专利文献I);在产赖氨酸的微生物的棒状杆菌中，进ー步提高赖氨酸生产能力的方法(參考专利文献2);切断1，5-戊ニ胺降解体系的方法(參考专利文献3);通过自主复制型载体提供赖氨酸脱羧酶的方法(參考非专利文献3)。但是，在利用发酵的1，5-戊ニ胺制造方法中需要解决的问题较多，例如有这样的问题在对向产L-赖氨酸的微生物的棒状杆菌中导入了 LDC基因的微生物进行培养时，会生成副产物赖氨酸(參考非专利文献4)。就是说，赖氨酸虽然是即将生物合成1，5_戊ニ胺时的前体，但是会出现未反应的赖氨酸在培养上清液中大量出现的问题。当如前所述生成副产物赖氨酸时，尽管可以制得前体，但1，5-戊ニ胺的发酵产率没有提高，从而造成经济上的问题。另外，在专利文献3和非专利文献3中，通过自主复制型载体提供LDC基因，但是由于在培养中需要添加昂贵的抗生物质等，因此为了在エ业规模中廉价地发酵生产1，5-戊ニ胺，期望使用染色体中带有LDC基因的微生物。现有技术文献专利文献专利文献I :日本特开2002-223770号公报专利文献2 :日本特开2004-222569号公报专利文献3 :日本特表2009-531042号公报非专利文献非专利文献I :須山、金尾、「薬学雑誌」，1965年，第85卷，p. 513-533非专利文献2 :セリアホワイ卜テ一バ一(Celia white tabor)、
另外I人，！"マイクロバイオロジカルレビユ一ズ(Microbiological Reviews) J,1985 年，第 49 卷，p. 81-99非专利文献3 :タテノ等，アブライナマイクロバイオロジーアンナバイオテクノロジ 一(2009)、81 (1),115-21 (Tateno Appl MicrobiolBiotechnol (2009), 81(I), 115-21)非专利文献4 :ミミツカ等，バイオサイエンスバイオテクノ ロジーバイオケミ力^(2007),71(9),2130-5(Mimitsuka Biosci Biotechnol Biochem(2007)，71(9)，2130-5)
发明内容
发明要解决的问题本发明的课题在于提供ー种1，5-戊ニ胺的制造方法，该制造方法利用了在染色体中具有LDC基因、并且副产物L-赖氨酸的生成得到抑制的微生物来进行发酵。解决问题的手段本发明人在利用发酵法的1，5-戊ニ胺的制造方法中，以抑制副产物L-赖氨酸的产生为目的，进行了专心的研究，结果发现，通过在1，5-戊ニ胺的发酵中使用棒状杆菌，副产物L-赖氨酸的生成可以得到抑制，从而完成了本发明，所述棒状杆菌在染色体中具有LDC基因，并且在培养中持续保持有50mU/mg蛋白以上的赖氨酸脱羧酶比活性。S卩，本发明由以下(I)至(12)构成。(I) ー种1，5_戊ニ胺的制造方法，其为利用了棒状杆菌的1，5_戊ニ胺的制造方法，该棒状杆菌在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因，所述制造方法的特征在干，所述棒状杆菌在培养中持续保持有50mU/mg蛋白以上的赖氨酸脱羧酶活性。
(2)—种1，5_戊ニ胺的制造方法，其为利用了棒状杆菌的1，5_戊ニ胺的制造方法，该棒状杆菌在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因，所述制造方法的特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因被连接至在对数増殖期中起作用的启动子的下游。(3)上述(2)所述的方法，其特征在于，所述启动子为divIVA基因启动子。(4)上述(2)或(3)所述的方法，其特征在于，所述启动子为选自下列(A)至(D)中任ー项的启动子(A)由序列号2中所记载的碱基序列形成的启动子；(B)由在序列号2所记载的碱基序列中，发生I个或多个碱基的置換、缺失、插入和/或添加后的碱基序列所形成的启动子；(C)与由序列号2中所记载的碱基序列形成的启动子或者其互补链的全体或一部分在严格条件下杂交的启动子；(D)由与序列号2中所记载的碱基序列的序列一致性为至少80%以上的碱基序列所形成的启动子。(5)上述(I)至(4)中任意一项所述的方法，其特征在干，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因是来源于大肠杆菌的基因。(6)上述(I)至(5)中任意一项所述的方法，其特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因为选自下列(A)至(D)中任ー项的基因，并且为编码具有赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质的基因
(A)由序列号I中所记载的喊基序列形成的基因；(B)由在序列号I所记载的碱基序列中，发生I个或多个碱基的置換、缺失、插入和/或添加后的喊基序列形成的基因；(C)与由序列号I中所记载的碱基序列形成的基因或者其互补链的全体或一部分在严格条件下杂交的基因；(D)由与序列号I中所记载的碱基序列的序列一致性为至少80%以上的碱基序列所形成的基因。(7)上述(I)至(6)中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌为提高了L-赖氨酸的生产性的棒状杆菌。(8)上述(I)至(7)中任意一项所述的方法，其特征在干，所述棒状杆菌具有突变型天冬氨酸激酶，该突变型天冬氨酸激酶是序列号3所记载的氨基酸序列中的第311位的氨基酸残基被苏氨酸以外的氨基酸置换而得到的。(9)上述(I)至(8)中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌的高丝氨酸脱氢酶活性降低或者缺失。(10)上述(9)所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌通过基因插入突变而缺失高丝氨酸脱氢酶活性。( 11)上述(I)至(10)中任意一项所述的方法，其特征在干，所述棒状杆菌为属于棒状杆菌属(Genus Corynebacterium)的细菌。(12)上述(11)所述的方法，其特征在干，所述属于棒状杆菌属(GenusCorynebacterium)的细菌为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)。
附图
简要说明[图I]为示出了在对本发明实施例中所制作的棒状杆菌CG4541菌株进行培养时，培养上清液中的葡萄糖浓度、赖氨酸浓度以及1，5_戊ニ胺(I, 5-PD)浓度随时间变化的图。[图2]为示出了在对本发明的比较例中所制作的棒状杆菌TM4552菌株进行培养时，培养上清液中的葡萄糖浓度、赖氨酸浓度以及1，5-戊ニ胺(1，5-PD)浓度随时间变化的图。[图3]为示出了在本发明的实施例中所制作的棒状杆菌CG4541菌株的培养中，赖氨酸脱羧酶比活性随时间变化的图。
具体实施例方式下面对本发明的实施方案进行详细说明。本发明中的赖氨酸脱羧酶(LDC)是指以L-赖氨酸为底物，通过脱羧反应能够将其转换为1，5-戊ニ胺的酶，也可以同时具有其它的酶作用。对本发明中使用的LDC没有特别限定，但是优选使用来源于(例如)耐盐芽抱杆菌(Bacillus halodurans)、枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli ;大肠杆菌)、反会月形单胞菌(Selenomonas ruminamtium)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、毛链霉菌(Streptomyces pilosus)、侵蚀艾肯菌(Eikenellacorrodens)、卩遼氨基酸真杆菌(Eubacterium acidaminophilum)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia Alvei)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitidis)、嗜酸热原体(Thermoplasma acidophilum)、或者深海热球菌(Pyrococcusabyssi)的LDC。更优选为来源于大肠杆菌的LDC。关于本发明所使用的编码赖氨酸脱羧酶的基因，作为具体例子可以举出编码来源于上述生物的赖氨酸脱羧酶的基因，此时，根据所用微生物的密码子使用频率，可以对碱基序列进行再设计。需要说明的是，编码来源于上述生物的赖氨酸脱羧酶的碱基序列登记在数据库(GenBank)中。在它们之中，优选的是来源于大肠杆菌的基因，其是由序列号I中所记载的喊基序列形成的基因。
接下来对LDC的比活性进行说明。在将I分钟内生成1μ摩尔1，5_戊ニ胺的LDC量定义为I単位(U)吋，LDC活性可以由下式I表示。[数学式I]
I,5-戊ニ胺生成量[Jig]括性[U]=--(式 I)
MW C102. 18)[#g/|im0l]x 反应时间 Uin]由此，LDC的每单位蛋白质质量的活性，即比活性，可以由下式2算出。[数学式2]
活性CU]比活性[U/mg]= ——-_____ (式 2)
蛋白质.质量[mg]另外，本发明中的LDC比活性是指相对于棒状杆菌所具有的总蛋白质的比活性，可以使用从棒状杆菌中提取的总蛋白质通过比活性測定来算出。而且測定操作具体记载在下述实施例中。对从棒状杆菌中提取蛋白质的方法没有限定，可以使用利用超声波破碎菌的方法、使用玻璃珠通过进行漩涡式等搅拌破碎菌的方法、施加高压カ来破碎菌的方法、以及将这些方法组合进行的方法，但优选使用玻璃珠的方法。本发明中，在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因的棒状杆菌的特征在于，具有50mU/mg蛋白以上的LDC比活性，优选具有80mU/mg蛋白以上的LDC比活性，更优选具有180mU/mg蛋白以上的LDC比活性。另外，如后面的实施例中所述，即使在培养过程中的某一时刻具有50mU/mg蛋白以上的LDC比活性，如果之后比活性下降，也会引起前体L-赖氨酸的蓄积，因此本发明所使用的棒状杆菌在培养期间持续具有上述LDC比活性。培养期间是指棒状杆菌接种在发酵培养基中之后消耗基质糖的期间，可以通过測定该期间中的任意点的比活性来进行确认。优选的是，維持上述LDC比活性的培养时间为培养开始之后5小时以上，更优选10小时以上，进ー步优选20小时以上。能够维持上述比活性的培养时间并没有特别的上限。对给棒状杆菌赋予上述这样的LDC比活性的方法没有限制，有使对导入到棒状杆菌的染色体中的赖氨酸脱羧酶进行编码的基因的拷贝数増加的方法，或者使用强启动子作为对导入到染色体中的赖氨酸脱羧酶进行编码的基因的启动子的方法；另外，还有使用对使酶活性提高的赖氨酸脱羧酶进行编码的基因的方法等，可以优选使用任意ー种方法，但是优选的是，使用强启动子作为对导入到染色体中的赖氨酸脱羧酶进行编码的基因的启动子的方法。对本发明所使用的启动子没有特别限定，只要是能够在棒状杆菌中起作用的启动子，一般都能使用，还可以是来源于异种的启动子，但是作为优选启动子的例子，可以举出各种氨基酸生物合成体系，例如谷氨酸生物合成体系的谷氨酸脱氢酶基因，谷氨酸合成体系的谷氨酸合成酶基因，赖氨酸生物合成体系的天冬氨酸激酶基因，苏氨酸生物合成体系的高丝氨酸脱氢酶基因，异亮氨酸和缬氨酸生物合成体系的こ酰羟基酸合成酶基因，亮氨酸生物合成体系的2-异丙基苹果酸合成酶基因，脯氨酸和精氨酸生物合成体系的谷氨酸激酶基因，组氨酸生物合成体系的磷酸核糖-ATP焦磷酸化酶基因，色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸生物合成体系的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸(DAHP)合成酶基因；肌苷酸和鸟苷酸这样的核酸生物合成体系，例如磷酸核糖焦磷酸(PRPP)氨基转移酶基因，肌苷酸脱氢酶基因和鸟苷酸合成酶基因的各个启动子；还有与细胞分裂有关的divIVA基因等的启动子，以及tac启动子、trc启动子或HCE启动子等强启动子，或者作用于对数增埴期(exponential phase)的启动子；更优选的是作用于对数增埴期的启动子。作为作用于对数增埴期的启动子的具体例子，可以举出divIVA、gap、ldhA、fda、glyA、cysK、aroF、 gpmA、eno、fumC、pfk、sdhA、mdh、argF、proA、proC、aceE、serA、metE、nifS I、tpi、aceD、cysD、sdhB或pck基因的启动子，其中优选divIA基因的启动子，具体来说，特别优选具有序列号2中所记载的碱基序列的启动子。作为上述启动子序列和编码赖氨酸脱羧酶的基因的碱基序列，在具有其功能的范围内，还包括在各碱基序列中，发生I个或多个碱基的置換、缺失、插入或添加的核酸序列。这里，“多个”通常为I至40个的程度，优选I至30个，更优选I至20个，进ー步优选I至9个，更进ー步优选I至5个。另外，作为上述启动子序列和编码赖氨酸脱羧酶的碱基序列，在具有其功能的范围内，可以列举出与所述碱基序列或者其互补链的全体或一部分在严格条件下杂交的碱基序列。这里，“在严格条件下杂交的多核苷酸”是指(例如)将选自原来的碱基序列中任意至少20个、优选为25个、更优选为至少30个连续序列中的I个或多个碱基序列作为探针，使用公知的杂交技术(Current Protocols I Molecular Biology edit.Ausbel 等，(1987)Publish. John Wily & Sons Section 6. 3_6. 4)等进行杂交的喊基序列。此处作为严格条件，例如在50%甲酰胺的存在下，在杂交温度为37°C、作为更加严格的条件为42°C、作为进ー步更严格的条件为65°C时，通过用0. I至2倍浓度的SSC溶液(I倍浓度的SSC溶液的组成150mM氯化钠、15mM柠檬酸钠)洗涤，由此可实现杂交。另外，作为上述启动子和编码赖氨酸脱羧酶的碱基序列，在具有其功能的范围内，也可以为序列一致性通常在80%以上、优选为90%以上、更优选为95%以上、进ー步优选为99%以上的碱基序列。此处，序列一致性是指将2个碱基序列排列以使它们一致的碱基数最多(根据需要插入间隙)，用一致的碱基数除以序列全长的碱基数(当2个序列间总碱基数不同时，序列长的一方的碱基数)所求得的值。这样的同源性计算可以容易地通过BLAST这样的众所周知的软件来进行。这样的启动子和编码赖氨酸脱羧酶的碱基序列也可以从棒状杆菌以外取得，还可以通过对从棒状杆菌得到的碱基序列进行本领域技术人员众所周知的体外突变处理、或者部位特异性突变处理而取得。
对上述启动子和编码赖氨酸脱羧酶的碱基序列导入到棒状杆菌中的方法没有特别限定，可以通过电穿孔法(Bio/Technology，(1989)，7，1067-1070)导入。另外，棒状杆菌为好氧性革兰氏阳性杆菌，传统上分类为短杆菌属，但是现在也被包括在统ー为棒状杆菌属的细菌中(Int. J. Syst. Bacteriol.，(1981)41, p. 225)。另外，包括与棒状杆菌属非常接近的短杆菌属细菌。作为这样的棒状杆菌的例子，可以列举出嗜こ酸こ酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophylum)、醋谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium acetoglutamicum)、解烧棒状杆菌(Corynebacteriumalkanolyticum)、帚石南棒状杆菌(Corynebacterium callunae)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、 Ε 合花棒杆囷(Corynebacterium lilium)、栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium mellassecola)、热产氨棒状杆菌(Corynebacteriumthermoaminogenes)、有效揭？杆囷(Corynebacterium efficiensノ、力士棒杆菌(Corynebacterium herculis)、叉开組杆菌(Brevibacterium divaricatum)、黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)、ブレビバクテリウム·インマリオフイラム(Brevibacteriumimmariophilum)、乳糖发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)、玫瑰色短杆菌(Brevibacterium roseum)、解糖短杆菌(Brevibacterium saccharoIyticum)> 生硫短杆 M !,Brevibacterium thiogenitalis)、产氣棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenesノ、白短杆菌(Brevibacterium album)、ブレビバクテリウム セリヌム(Brevibacteriumcerinum)、!],^^不十菌(MicroDacterium ammoniaphiium)。另外，作为各棒状杆菌的具体菌株，可以举出嗜こ酰こ酸棒杆菌ATCC13870，醋谷氨酸棒状杆菌ATCC15806，解烷棒状杆菌ATCC21511，帚石南棒状杆菌ATCC15991，谷氨酸棒杆菌ATCC13020、ATCC13020、ATCC13060，百合花棒杆菌ATCC15990，栖糖蜜棒杆菌ATCC17965，有效棒杆菌AJ12340(保藏编号FERM BP-1539)，力士棒杆菌ATCC13868，叉开短杆菌 ATCC14020，黄色短杆菌 ATCC13826、ATCC14067、AJ12418 (保藏编号FERM BP-2205)，ブレビバクテリウム·インマリォフイラムATCC14068，乳糖发酵短杆菌ATCC13869，ブレビバクテリウム· ロゼウムATCC13825，解糖短杆菌ATCC14066，生硫短杆菌ATCC19240，产氨棒杆菌ATCC6871、ATCC6872,白短杆菌ATCC15111，ブレビバクテリウム セリヌムATCC15112,嗜氨微杆菌 ATCC15354。上述棒状杆菌可以从(例如)美国典型培养物保藏中心处购买获得。也就是说，每个菌株都附帯有对应的登记号，该登记号记载在美国典型培养物保藏中心的目录中，可以參考该登记号购买获得各菌株。在本发明的1，5-戊ニ胺制造方法中使用的、在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因的棒状杆菌，优选为提高了 1，5-戊ニ胺的前体即L-赖氨酸的生产性的棒状杆菌。对棒状杆菌提高L-赖氨酸生产性的方法没有限制，可以使用公知的方法。例如有如日本特开2004-222569号公报中所记载的获取对于S-氨こ基半胱氨酸(AEC)的抗性菌株的方法，或者如 Journal of industrial Microbiol Biotechnol (2006，33 (7) 610-5)或日本特表2009-531042号公报中所记载的通过基因组育种法来提高L-赖氨酸生产性的方法，可以适当采用任一者。根据本发明的提高了 L-赖氨酸生产性的棒状杆菌的优选实施方案，优选具有解除了因L-赖氨酸引起的反馈抑制的天冬氨酸激酶，更优选具有突变型天冬氨酸激酶，该突变型天冬氨酸激酶是序列号3中所记载的氨基酸序列中的第311位的氨基酸残基被苏氨酸以外的氨基酸置换而得到的。根据本发明的提高了 L-赖氨酸生产性的棒状杆菌的其它优选实施方案，优选高丝氨酸脱氢酶活性降低或者缺失，更优选通过基因插入突变来破坏或者切断高丝氨酸脱氢酶基因，从而使高丝氨酸脱氢酶活性缺失。作为培养方法，可以使用分批培养、流加培养或连续培养。在连续培养时，优选进行(例如)日本特开2008-104453号公报所记载的连续培养。作为培养用的培养基，可以使用含有碳源、氮源、无机盐类等的普通的营养培养基。作为碳源，可以使用例如葡糖糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉水解产物等糖类，こ醇等醇类，醋酸、乳酸、琥珀酸等有机酸类。作为氮源，可以使用氨水，氯化铵、硫酸铵、碳酸铵、醋酸铵等各种无机和有机铵盐类，尿素，其它含氮化合物，以及肉类提取物、酵母提取物、玉米浆、大豆水解产物等含氮有机物。作为无机盐，可以使用磷酸ー氢钾、磷酸ニ氢钾、硫酸铵、氯化钠、硫酸镁、碳酸钙等。此外，根据需要，可以添加生物素、硫胺素、维生素B6等微量营 养源。这些微量营养源也可以用肉类提取物、酵母提取物、玉米液、酪蛋白氨基酸等培养基添加物来替代。对培养条件没有特别的限制，在振荡培养、深部通气搅拌培养等好氧条件下进行培养。培养温度一般为25°C至42°C，优选为28°C至38°C。培养时间通常为I天至10天。培养pH的调节优选使用氨水、盐酸或ニ羧酸，更优选使用ニ羧酸。使用这些中和剂将培养PH调节到5至8，优选最好控制在pH6. 5至7. 5。此外，对中和剂的状态并没有限制，以气体、液体、固体或水溶液形式使用。特别优选水溶液。对优选用作中和剂的ニ羧酸没有特别限定，但是优选的是，除了上述2个羧基以夕卜，实质上不存在其它官能团的ニ羧酸。这里所说的官能团为在聚酰胺聚合反应(作为反应条件，例如，反应温度250至270°C，压カ10至20kg/cm2，反应时间I至5小吋)时，与氨基或羧基等反应，造成聚合物的分支、或使聚合物的结晶度下降(结晶度80%以下)的反应基团，例如，氨基或羧基就符合该官能团，另外，酸性基团(磺酸基、磷酸基、酚羟基等)、碱性基团(肼基等)、质子极性基(羟基等)、具有断裂性的基团(环氧基、过氧化基等)或者其它反应性高的基团(异氰酸根基)也符合该官能团。另ー方面，卤素取代基、芳香性取代基、醚基、酷基、酰胺基等反应性低，不符合这里所说的官能团。作为ニ羧酸，更优选的是由下列通式(I)、(2)或(3)所表示的ニ羧酸。HOOC- (CH2)m-COOH (I)(通式(I)中，m=0至 16)。[化学式I]
IAlUrI
(Ofc)H
C
iam
(通式(2)中，η、o=0至 16)。[化学式2]
权利要求
1.一种1，5-戍二胺的制造方法,其为利用了棒状杆菌的1，5-戍二胺的制造方法,该棒状杆菌在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因，所述制造方法的特征在于，所述棒状杆菌在培养中持续保持有50mU/mg蛋白以上的赖氨酸脱羧酶活性。
2.—种1，5-戍二胺的制造方法,其为利用了棒状杆菌的1，5-戍二胺的制造方法,该棒状杆菌在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因，所述制造方法的特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因被连接至在对数增殖期中起作用的启动子的下游。
3.权利要求2所述的方法，其特征在于，所述启动子为divIVA基因启动子。
4.权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述启动子为选自下列(A)至(D)中任一项的启动子 (A)由序列号2中所记载的碱基序列形成的启动子； (B)由在序列号2所记载的碱基序列中，发生I个或多个碱基的置换、缺失、插入和/或添加后的碱基序列所形成的启动子； (C)与由序列号2中所记载的碱基序列形成的启动子或者其互补链的全体或一部分在严格条件下杂交的启动子； (D)由与序列号2中所记载的碱基序列的序列一致性为至少80%以上的碱基序列所形成的启动子。
5.权利要求I至4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因是来源于大肠杆菌的基因。
6.权利要求I至5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述编码赖氨酸脱羧酶的基因为选自下列(A)至(D)中任一项的基因，并且为编码具有赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质的基因 (A)由序列号I中所记载的喊基序列形成的基因； (B)由在序列号I所记载的碱基序列中，发生I个或多个碱基的置换、缺失、插入和/或添加后的喊基序列形成的基因； (C)与由序列号I中所记载的碱基序列形成的基因或者其互补链的全体或一部分在严格条件下杂交的基因； (D)由与序列号I中所记载的碱基序列的序列一致性为至少80%以上的碱基序列所形成的基因。
7.权利要求I至6中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌为提高了L-赖 氨酸的生产性的棒状杆菌。
8.权利要求I至7中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌具有突变型天冬氨酸激酶，该突变型天冬氨酸激酶是序列号3所记载的氨基酸序列中的第311位的氨基酸残基被苏氨酸以外的氨基酸置换而得到的。
9.权利要求I至8中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌的高丝氨酸脱氢酶活性降低或者缺失。
10.权利要求9所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌通过基因插入突变而缺失高丝氨酸脱氢酶活性。
11.权利要求I至10中任意一项所述的方法，其特征在于，所述棒状杆菌为属于棒状杆菌属(Genus Corynebacterium)的细菌。
12.权利要求11所述的方法，其特征在于，所述属于棒状杆菌属(GenusCorynebacterium)的细菌为谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)
全文摘要
本发明公开了一种利用微生物发酵的1,5-戊二胺制造方法，该微生物在染色体中具有LDC基因、并且抑制了副产物L-赖氨酸的产生。所述1,5-戊二胺的制造方法为利用了棒状杆菌的1,5-戊二胺制造方法，该棒状杆菌在染色体中具有编码赖氨酸脱羧酶的基因，所述棒状杆菌在培养中持续保持有50mU/mg蛋白以上的赖氨酸脱羧酶活性。
文档编号C07C211/09GK102844440SQ201180018748
公开日2012年12月26日 申请日期2011年4月11日 优先权日2010年4月12日
发明者泽井健司, 渡边志绪美, 耳塚孝, 泽井秀树 申请人:东丽株式会社