专利名称：一种大托菊苷a的提取纯化方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，涉及一种大托菊苷A的提取纯化方法。
背景技术：
大托菊苷A (Macrocliniside A),分子式为C21H28O9,分子量424. 45,是从菊科(Compositae)臭莴苣Zaciwca virosa L.须根中分离得到的倍半職化合物。药理研究表明，大托菊苷A具有细胞毒作用，对L-5178Y细胞株的ID5tl为21. Aug/ml。
目前，国内尚未见大托菊苷A的提取制备方法的相关报道，因此提供一种大托菊苷A的提取纯化方法，为臭莴苣资源开发利用及药理研究提供了丰富的物质基础。
发明内容
本发明旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的大托菊苷A的提取纯化方法。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征在于将臭莴苣须根采用超临界CO2萃取，丙酮为夹带剂，收集萃取物，分散于水，进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析，收集含大托菊苷A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩目标组分，干燥即得大托菊苷A。所述超临界CO2萃取条件为萃取釜压力为18_35MPa，萃取釜温度为33_55°C，萃取时间为2-5h。所述高压硅胶柱的柱压为2.2-3. IMPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为100-400目。所述甲醇水溶液浓度为25-29%。本发明的有益效果是
I、本发明方法通过超临界萃取、柱层析及制备液相分离等步骤制备大托菊苷A，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产。2、使用高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。3、本发明为大托菊苷A的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。本发明内容通过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本发明的范围。
具体实施例方式实施例I :
取臭莴苣须根5kg粉碎处理，加入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为38°C，萃取压力为25MPa，CO2流量为4ml/g生药/min，保持釜压、温度不变，通入500ml丙酮作为夹带剂， 萃取时间为4h，分离釜温度为25°C，压力为6MPa，收集解析萃取物，分散于水，上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 9MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比1:1、1:6、1:12洗脱，分段收集各流分，将含大托菊苷A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离，制备液相色谱条件是流动相25%甲醇水溶液，流速15ml/min，检测波长231nm，浓缩目标组分，干燥即得纯度为98. 9%的大托菊苷A7. 5g。
实施例2
取臭莴苣须根5kg粉碎处理，加入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为35°C，萃取压力为18MPa，CO2流量为5ml/g生药/min，保持釜压、温度不变，通入600ml丙酮作为夹带剂，萃取时间为4h，分离釜温度为25°C，压力为7MPa，收集解析萃取物，分散于水，上样至填料100-200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3. IMPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1:20,以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比I: I、1: 4、1: 11洗脱，分段收集各流分，将含大托菊苷A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离，制备液相色谱条件是流动相29%甲醇水溶液，流速20ml/min，检测波长231nm，浓缩目标组分，干燥即 得纯度为98. 7%的大托菊苷A6. 8g。
实施例3
取臭莴苣须根IOkg粉碎处理，加入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为55°C，萃取压力为35MPa，CO2流量为4ml/g生药/min，保持釜压、温度不变，通入1200ml丙酮作为夹带剂，萃取时间为4h，分离釜温度为40°C，压力为6. 5MPa，收集解析萃取物，分散于水，上样至填料300-400目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 2MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:15，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比1:2、1:6、1:12洗脱，分段收集各流分，将含大托菊苷A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离，制备液相色谱条件是流动相26%甲醇水溶液，流速35ml/min，检测波长231nm，浓缩目标组分，干燥即得纯度为98. 8%的大托菊苷A14. 6g。
实施例4
取臭莴苣须根IOkg粉碎处理，加入超临界CO2萃取釜中，萃取温度为40°C，萃取压力为25MPa，CO2流量为3. 5ml/g生药/min，保持釜压、温度不变，通入900ml丙酮作为夹带齐IJ，萃取时间为4h，分离釜温度为30°C，压力为7MPa，收集解析萃取物，分散于水，上样至填料200-300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2.6MPa，柱内径为220mm，层析柱径高比为1:15，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比1:1、1:5、1:11洗脱，分段收集各流分，将含大托菊苷A流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，经高效制备液相分离，制备液相色谱条件是流动相27%甲醇水溶液，流速50ml/min，检测波长231nm，浓缩目标组分，干燥即得纯度为98. 6%的大托菊苷A10. 2g。
权利要求
1.ー种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征是将臭莴苣须根采用超临界CO2萃取，丙酮为夹带剂，收集萃取物，分散于水，进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层祈，收集含大托菊苷A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩目标组分，干燥即得。
2.根据权利要求I所述的ー种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征在于所述超临界CO2萃取条件为萃取釜压カ为18-35MPa，萃取釜温度为33_55°C，萃取时间为2_5h。
3.根据权利要求I所述的ー种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征在于所述高压硅胶柱的柱压为2. 2-3. IMPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为100-400 目。
4.根据权利要求I所述的ー种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征在于所述甲醇水溶液浓度为25-29%。
全文摘要
本发明涉及一种大托菊苷A的提取纯化方法，其特征是臭莴苣须根采用超临界CO2萃取，丙酮为夹带剂，收集萃取物，分散于水，进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析，收集含大托菊苷A的组分，浓缩成浸膏后用甲醇分散，经制备液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩目标组分，干燥即得。本发明方法条件温和，避免了传统方法局部高温对产品活性的不利影响，工艺合理，可实现快速提取、分离纯化，易于工业化。
文档编号C07H1/08GK102659868SQ20121012281
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司