专利名称：一种黑麦草内酯的提取纯化方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，涉及一种黑麦草内酯的提取纯化方法。
背景技术：
黑麦草内酯(Loliolide)，分子式为C11H16O3，分子量196. 25，为针状结晶，是从忍冬科(Caprifoliaceae)英蓮Viburnum dilatatum Thunb.的叶中分离得到的单職化合物。药理研究表明，黑麦草内酯具有中等免疫抑制活性，在本品IOii g/ml浓度时，对小鼠T-淋巴细胞增生抑制率为27. 2%，对B-淋巴细胞增生抑制率为8. 1% ;黑麦草内酯具有强的细胞毒活性，对艾氏腹水瘤的ED50为0. 5 ii g/ml。目前，国内尚未见黑麦草内酯的萃取纯化方法方面的专利报道。
发明内容
本发明旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的黑麦草内酯的提取纯化方法。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征是以荚莲叶为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为6-9MPa，萃取温度为38-55°C，通入丙烷，静态萃取25min后动态萃取30-80min,所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含黑麦草内酯的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，二氯甲烷-甲醇重结晶即得黑麦草内酯。所述丙烧的流量为5_8g/min。所述高压硅胶柱的柱压为2. 2-3. 2MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为100-300目，石油醚-丙酮体积比为100 :7-25。所述甲醇水溶液的体积百分比浓度为65-70%。本发明的有益效果是
1、本发明方法通过亚临界流体萃取、柱层析及制备型液相色谱分离、重结晶等步骤制备黑麦草内酯，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产；
2、使用特制高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高；
3、本发明为黑麦草内酯的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。
具体实施例方式 本发明内容通过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本发明的范围。实施例I :
取干燥荚莲叶粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为8g/min，萃取压力为8MPa，萃取温度为48°C，静态萃取25min后动态萃取80min，溶于丙烷的黑麦草内酯在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 2MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:10、100:15、100:20、100:25洗脱，分段收集各流分，将含黑麦草内酯流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为15ml/min，紫外检测器在线监测，检测波长214nm，收集高纯度黑麦草内酯流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重结晶即得黑麦草内酯，HPLC检测，含量为98. 7%。实施例2:
取干燥荚莲叶粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为8g/min，萃取压力为7MPa，萃取温度为55°C，静态萃取25min后动态萃取30min，溶于丙烷的黑麦草内酯在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3. 2MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:12，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:7、100:15、100:20、100:24洗脱，分段收集各流分，将含黑麦草内酯流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以65%的甲醇水溶液为流动相，流速为25ml/min，紫外检测器在线监测，检测波长214nm，收集高纯度黑麦草内酯流 分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重结晶即得黑麦草内酯，HPLC检测，含量为98. 4%。实施例3:
取干燥荚莲叶粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为5g/min，萃取压力为6MPa，萃取温度为38°C，静态萃取25min后动态萃取50min，溶于丙烷的黑麦草内酯在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为100目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 8MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1:20，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:8、100:12、100:18、100:25洗脱，分段收集各流分，将含黑麦草内酯流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以65%的甲醇水溶液为流动相，流速为20ml/min，紫外检测器在线监测，检测波长214nm，收集高纯度黑麦草内酯流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重结晶即得黑麦草内酯，HPLC检测，含量为98. 2%。实施例4:
取干燥荚莲叶粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为6g/min，萃取压力为9MPa，萃取温度为45°C，静态萃取25min后动态萃取60min，溶于丙烷的黑麦草内酯在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2. 5MPa，柱内径为180mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:7、100:12、100:20、100:25洗脱，分段收集各流分，将含黑麦草内酯流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以68%的甲醇水溶液为流动相，流速为25ml/min，紫外检测器在线监测，检测波长214nm，收集高纯度黑麦草内酯流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重结晶即得黑麦草内酯，HPLC检测，含量为98. 1%。
权利要求
1.一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征是以荚莲叶为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为6-9MPa，萃取温度为38-55 °C，通入丙烷，静态萃取25min后动态萃取30-80min,所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含黑麦草内酯的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，二氯甲烷-甲醇重结晶即得黑麦草内酯。
2.根据权利要求I所述的一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征在于所述丙烷的流量为 5-8g/min。
3.根据权利要求I所述的一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征在于所述高压硅胶柱的柱压为2. 2-3. 2MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为100-300目，石油醚-丙酮体积比为100 :7-25。
4.根据权利要求I所述的一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征在于所述甲醇水溶 液的体积百分比浓度为65-70%。
全文摘要
本发明涉及一种黑麦草内酯的提取纯化方法，其特征是以荚蒾叶为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为6-9MPa，萃取温度为38-55℃，通入丙烷，静态萃取25min后动态萃取30-80min，所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含黑麦草内酯的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，二氯甲烷-甲醇重结晶即得黑麦草内酯。本发明生产周期短，制备量大、收率高、产品纯度好，适合工业化生产。
文档编号C07D307/83GK102827119SQ20121037123
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司