专利名称：一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺。
背景技术：
胆固醇是细胞膜的成分，是体内固醇类激素、维生素D及胆酸的前体。是药物制剂良好的表面活性剂。也是天然牛黄和人工牛黄的重要成分，具有重要药用价值。胆固醇因为是激素类合成的原料，价格昂贵，每公斤600元以上。并可大量出口创汇。胆固醇加入牙膏，有润滑、增白、止血的作用，胆固醇也常用于化妆品中。胆固醇因不溶于水，在血液中沉下粘附血管壁，堵塞血管造成心脏病、脑血管等各种疾病。胆固醇在人体内处于较高水平对人体是不利的。南极磷虾资源丰富，目前，世界各国对南极磷虾的利用较少，主要是加工成南极磷 虾虾油，有的则作为饵料或饲料，日本则将其作为料理添加。现有的提取南极磷虾虾油的方法一般是用疏水性溶剂如正己烷、石油醚等或丙酮提取，其提取得到的虾油中含有较多的胆固醇，怎样降低虾油中胆固醇的含量、将胆固醇从虾油中分离出来，使其得到更为充分的利用，是当前急需解决的问题。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺。本发明是通过以下技术方案实现的一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，步骤如下(I)向南极磷虾虾油中加入8 12倍(指质量体积倍数，即Ig物料加入8 12ml液体，下同)的85 95%乙醇(体积分数)，加热(83 90°C)回流O. 5 lh，趁热过滤，滤液在_20°C -26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀；(2)向步骤(I)得到的沉淀中加入6 10倍的90 95%乙醇(体积分数)，该乙醇液中含H2S044 6% (体积分数)，加热(83 87°C)回流6 8h，加水调乙醇浓度至75 85% (体积分数)，然后置_20°C _26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀；(3)向步骤(2)得到的沉淀中加入8 12倍的75 85%乙醇(体积分数)，置-20°C _26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8 12倍的75 85%乙醇(体积分数)，置-20°C -26°C下冻放8 14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；(4)向步骤(3)得到的白色絮状物沉淀中加入4 8倍的75 85%乙醇(体积分数)，水浴加热至40 50°C后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶，胆固醇纯度为 98. 2 99%。所述南极磷虾虾油是通过疏水性溶剂(正己烷、石油醚)或丙酮提取得到的取IOOg干南极磷虾(含水量約为8% 10%)，加入到500 600ml疏水性溶剂或丙酮中，20 35°C下提取干南极磷虾3次，每次提取lh，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在45 55°C，-O. 07 O. 09Mpa下旋转蒸发除去疏水性溶剂或丙酮，即得虾油。
本发明的工艺成功地从南极磷虾虾油中提取得到了胆固醇，所得到的胆固醇纯度高，达98. 2 99%，为开发相关的南极磷虾虾油及胆固醇产品做出了贡献。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例I从南极磷虾虾油中提取胆固醇步骤为(I)向南极磷虫下虫下油(5g)中加入60ml 95%乙醇(体积分数),加热(83°C )回流Ih,趁热过滤，滤液在_26°C下冻放过夜(12h)，倒出上清得沉淀4g (因操作的原因，并不能将上清液全部倒出，故沉淀中含部分液体，下同)。所述南极磷虾虾油是通过正己烷提取得到的取IOOg干南极磷虾，加入到550ml·正己烷中，25°C下提取干南极磷虾3次，每次提取lh，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在50°C，-O. OSMpa下旋转蒸发除去正己烷，即得虾油。(2)向步骤(I)所得沉淀中加入40ml 95%乙醇，该乙醇溶液中含2. 4mlH2S04，加热(温度85°C )回流8h，加水调乙醇浓度至85%，置-26°C下冻存过夜(12h)，倒出上清得白色沉淀3g (含部分液体)。(3)向步骤(2)所得沉淀中加入36ml 85%乙醇洗2次，每次加入乙醇后均置_26°C下过夜(12h)，倒出上清得白色絮状沉淀1.5g (含部分液体)。(4)向步骤(3)所得白色絮状物沉淀中加入12ml的85%乙醇溶液，加热使样品液体温度达50°C，缓慢冷却，挥发，得白色胆固醇结晶O. 3g，经检测，胆固醇纯度为98.6%。胆固醇含量检测采用如下方法A硫酸铁铵显色剂溶解4. 463g硫酸铁铵[FeNH4 (SO4) 2 · 12H20]于IOOml 85%磷酸中，从中取80ml用浓H2SO4稀释至100ml。B标准曲线绘制准确称取IOOmg胆固醇标准品，溶于冰醋酸中，稀释至100ml，即胆固醇lmg/ml (作为忙备液)；从中取IOml,用冰醋酸稀释至100ml,即IOOyg胆固醇/ml标准使用液；吸取胆固醇标准使用液0.0、0.4、0.8、1.0、1.2ml，置于25ml带塞比色管中；在各管中加入冰醋酸，使总体积达4ml,再加入2ml硫酸铁铵显色剂,立即摇勻，在30 60min内，于分光光度计560nm波长处测定光密度，绘制标准曲线。C样品测定称取制备样品lOOmg，加入石油醚5ml溶解，然后将石油醚溶液移入另一干燥试管内，在65°C水浴中通氮气吹干；加入4ml冰醋酸溶解残渣，加入2ml硫酸铁铵显色剂，混匀，30min后在分光光度计560nm波长处比色测定，按测得光密度，从标准曲线查得相应的胆固醇含量，进而计算出单位样品中胆固醇的含量。实施例2从南极磷虾虾油中提取胆固醇步骤为(I)向石油醚提取的南极磷虾虾油(提取方法除所用提取液为石油醚外，其它同实施例I) (5g)中加入40ml的85%乙醇，加热(90°C)回流O. 5h，趁热过滤，滤液在-20°C下冻放过夜(I2h)，倒出上清液得沉淀4g (含部分液体)。(2)向步骤(I)所得沉淀中加入24ml的95 %乙醇(体积分数)，该乙醇中含有0.96mlH2S04,加热(87°C )回流6h，加水调乙醇浓度至75%, g _20°C下过夜(12h)，倒出上清液得白色沉淀3g (含部分液体)。(3)向步骤(2)所得沉淀中加入24ml的75%乙醇(体积分数)洗2次，每次加入乙醇后均置_20°C下过夜(12h)，倒出上清得白色絮状沉淀I. 2g (含部分液体)。(4)向步骤(3)所得白色絮状沉淀中加入6ml的75%乙醇(体积分数)，加热使样品液体温度达40°C，缓慢冷却，挥发，得胆固醇结晶O. 35g，经检测，胆固醇纯度为98.2%。实施例3从南极磷虾虾油中提取胆固醇步骤为(I)向丙酮提取的南极磷虾虾油(提取方法除所用提取液为丙酮外，其它同实施例O (5g)中加入50ml的90%乙醇，加热(87°C)回流45分钟，趁热过滤，滤液在_23°C下冻放过夜(12h)，倒出上清得沉淀4g (含部分液体)。
·
(2)向步骤(I)所得沉淀中加入32ml的95%乙醇(体积分数)，该乙醇溶液中含有
1.6mlH2S04,加热(83°C )回流7h，加水调乙醇浓度至80%，置_23°C下过夜(12h)，倒出上清液得白色沉淀3g (含部分液体)。(3)向步骤(2)所得沉淀中加入30ml的80%乙醇洗2次，每次加入乙醇后均置-23°C下过夜(12h)，倒出上清得白色絮状物1.3g (含部分液体)。(4)向步骤(3)所得白色絮状物中加入7. 8ml的80%乙醇(体积分数)，加热使样品液体温度为45°C，缓慢冷却，挥发，得白色胆固醇结晶O. 32g，经检测，胆固醇纯度为99%。
权利要求
1.一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于步骤如下 (1)向南极磷奸虫下油中加入8 12倍的85 95%乙醇,加热回流O.5 Ih,趁热过滤，滤液在-20°C _26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀； (2)向步骤(I)得到的沉淀中加入6 10倍的90 95%乙醇，该乙醇液中含H2S044 6%，加热回流6 8h，加水调乙醇浓度至75 85%，然后置_20°C _26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀； (3)向步骤(2)得到的沉淀中加入8 12倍的75 85%乙醇，置-20°C -26°C下冻放8 14h，倒出上清液得沉淀，向沉淀中再次加入8 12倍的75 85%乙醇，置-20°C -26°C下冻放8 14h，倒出上清得白色絮状物沉淀； (4)向步骤(3)得到的白色絮状物沉淀中加入4 8倍的75 85%乙醇，水浴加热至40 50°C后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶。
2.根据权利要求I所述的一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于所述南极磷奸奸油是通过疏水性溶剂或丙酮提取得到的取IOOg干南极磷奸,加入到500 600ml疏水性溶剂或丙酮中，20 35°C下提取干南极磷虾3次，每次提取lh，每提取一次，过滤将干南极磷虾滤出；合并提取液，在45 55°C，-O. 07 O. 09Mpa下旋转蒸发除去疏水性溶剂或丙酮，即得虾油。
3.根据权利要求2所述的一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于所述疏水性溶剂为正己烷或石油醚。
全文摘要
本发明公开了一种从南极磷虾中提取胆固醇的工艺，其特征在于步骤如下(1)向南极磷虾虾油中加入乙醇，加热回流，趁热过滤，滤液冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；(2)向沉淀中加入乙醇，加热回流，冻放8～14h，倒出上清液得沉淀；(3)向沉淀中加入乙醇洗涤两次，冻放8～14h，倒出上清得白色絮状物沉淀；(4)向白色絮状物沉淀中加入乙醇，水浴加热至40～50℃后，停止加热，缓慢冷却、挥发，得白色胆固醇结晶。所述南极磷虾虾油是通过疏水性溶剂或丙酮提取得到的。本发明的工艺成功地从南极磷虾虾油中提取得到了胆固醇，所得到的胆固醇纯度高，达98.2～99％，为开发相关的南极磷虾虾油及胆固醇产品做出了贡献。
文档编号C07J9/00GK102898492SQ20121041287
公开日2013年1月30日 申请日期2012年10月25日 优先权日2012年10月25日
发明者刘代成 申请人:山东师范大学