专利名称：一种红霉素b纯品的纯化方法
技术领域：
本发明涉及生物制药技术领域，特别是一种红霉素B纯品的纯化方法。
背景技术：
在《中国药典》2010版红霉素质量标准中，规定用高效液相色谱法对相关物质红霉素B进行测定，在红霉素B定性时，以相对保留时间进行。该法的弊端是，当采用不同型号的色谱柱时，红霉素B相对保留时间会有所不同。欧洲药典委员会有红霉素B对照品出售，但其到货价格比较贵，约1700 2000元/支(每支50mg)，不利于普及使用
发明内容
本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种红霉素B纯品的纯化方法。本发明的目的按照下述方案实现一种红霉素B对照品的纯化方法，将红霉素配制成溶液，利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离，将洗脱液pH调为酸性，加入醋酸丁酯振摇，静置分层，再将水相pH调节为碱性，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，蒸干，即得红霉素B纯品。本方法采用制备液相色谱仪，将红霉素B与红霉素及其他组分分离，溶液用三氯甲烷进行萃取，低温挥干，得到红霉素B纯品，再用欧洲红霉素B对照品标定，得到含量。从我们现在掌握的文献资料，未搜索到关于制备红霉素B纯品的文献。采用该方法可以制备红霉素B纯品，具有如下优势①可以解决欧洲标准品价格昂贵，使用后成本高的缺点解决中国药品生物制品鉴定研究院未向市场供应红霉素B标准品的不足；③解决《中国药典》2010版红霉素质量标准中，因使用不同色谱柱，红霉素B相对保留时间变化给定性带来的困难。
具体实施例方式实施例II红霉素B的分离I. I色谱条件色谱柱Sinochrom300A ODS-APlOum ;流动相以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8. 7g，加水1000ml，用20 %磷酸调节pH值至8. 2)-乙腈(40 60)为流动相；流速22ml/min ;检测波长210nm。I. 2仪器型号大连依利特P230制备液相色谱仪I. 3溶液制备样品溶液制备抽取一批红霉素B含量较高的样品，准确称取l.Og，加乙腈IOml使溶解，加流动相稀释至100ml，摇匀，即可。对照溶液制备精密称取红霉素B对照品10mg，置50ml容量瓶中，加IOml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。I. 4溶液分离取对照溶液IOml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素B对照品出峰起始时间，开始收集红霉素B溶液，至红霉素B峰尾部结束，置4°C左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。I. 5红霉素B纯化将洗脱液pH调为5. 0，加入醋酸丁酯适量，振摇，静置分层，弃去有机相。再将水相PH调节为10. 2，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，于60°C蒸干，即得红霉素B纯品。I. 6红霉素B含量测定取自制红霉素B纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考，对自制红霉素B纯品含量进7TT测定，结果为92. 8 %。实施例2 I、红霉素B的分离I. I色谱条件色谱柱Sinochrom300A ODS-APlOum ;流动相以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8. 7g，加水1000ml，用20%磷酸调节pH值至8. 2)-乙腈(45 55)为流动相；流速24ml/min ;检测波长210nm。I. 2仪器型号大连依利特P230制备液相色谱仪I. 3溶液制备样品溶液制备抽取一批红霉素B含量较高的样品，准确称取l.Og，加乙腈IOml使溶解，加流动相稀释至100ml，摇匀，即可。对照溶液制备精密称取红霉素B对照品10mg，置50ml容量瓶中，加IOml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。I. 4溶液分离取对照溶液IOml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素B对照品出峰起始时间，开始收集红霉素B溶液，至红霉素B峰尾部结束，置4°C左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。I. 5红霉素B纯化将洗脱液pH调为5. 3，加入醋酸丁酯适量，振摇，静置分层，弃去有机相。再将水相PH调节为10.0，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，于60°C蒸干，即得红霉素B纯品。I. 6红霉素B含量测定取自制红霉素B纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考，对自制红霉素B纯品含量进7TT测定，结果为93. 4%。
权利要求
1.一种红霉素B纯品的纯化方法，将红霉素配制成溶液，利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离，将洗脱液pH调为酸性，加入醋酸丁酯振摇，静置分层，再将水相PH调节为碱性，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次， 收集三氯甲烷层，蒸干，即得红霉素B纯品。
全文摘要
本发明涉及一种红霉素B对照品的纯化方法，将红霉素配制成溶液，利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离，将洗脱液pH调为酸性，加入醋酸丁酯振摇，静置分层，再将水相pH调节为碱性，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，蒸干，即得红霉素B纯品。本发明可以解决欧洲标准品价格昂贵，使用后成本高的缺点。
文档编号C07H17/08GK102924547SQ20121049297
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月28日 优先权日2012年11月28日
发明者李学兵, 孙瑞君, 邹学锋, 张志 申请人:宁夏启元药业有限公司