一种合成四甘氨肽的方法

文档序号:3591760阅读:569来源:国知局
专利名称:一种合成四甘氨肽的方法
技术领域
本发明涉及一种四甘氨肽的合成方法,属于化学合成技术领域。
背景技术
双甘氨肽用作生化试剂,在生物研究及医药上用作血液保存和蛋白质药物细胞色素C水针剂的稳定剂。三甘氨肽是合成肾功能显像药物的主要原料。四甘氨肽为四个甘氨酸分子通过肽键有序链接而成,它和三甘氨肽、双甘氨肽都在多肽及药物合成方面得到重要应用,四甘肽是合成抗凝血酶药物比伐卢定的一个重要短肽,见专利CN201110170669.1,CN200910028793.7,CN 200980152943.3。目前,双甘氨肽的合成采用甘氨酸在甘油中高温脱水,经碱水解,酸中和,酒精结晶得产品,此方法中,作为综合用的甘油中加了水不可套用,后序处理产生氯化钠,对于作为成品使用对杂质要求较严,很难合格。三甘氨肽采用氯乙酰氯与双甘氨肽在碱性条件下反应再氨解获得,但此工艺控制单杂很难达到0.2%。四甘氨肽主要采用Z-GLY-GLY-0SU与GLY-GLY的酯在有机溶剂中缩合反应,再氢解得产品,此反应中因Z-GLY-GLY-0SU的溶解性不好,收率较低,且双甘氨肽要酯化又需在有机溶剂中反应,成本相应较高。

发明内容
本发明的目的,是克服上述技术的缺点,提供一种合成四甘氨肽的方法,该方法采用多种保护组合的循序合成方式,在合成双甘氨肽时,乙二醇可套用,后序处理不产生氯化钠,产品合格率高;在合成三甘氨肽时,可确保产品单杂0.2%以下,纯度99.0%以上(HPLC);在合成四甘 氨肽时,反应物溶解性好,收率高,且酯化无需在有机溶剂中进行,成本低。技术方案是:
一种四甘氨酞的合成方法,采用循序合成法,其步骤为:
1、甘氨酸缩合开环后生产双甘氨肽;
2、双甘氨肽与经N-保护的甘氨酸活化酯缩合,脱保护后生产三甘氨肽;
3、三甘氨肽与N-保护的甘氨酸活化酯缩合,脱保护后生产四甘氨肽。所述合成双甘氨肽的具体步骤是,取乙二醇、甘氨酸,混合搅拌,升温至170-175 反应,反应完全后,加水冷却至室温,离心得粗品,再加入盐酸水解,冷却离心得固体,加入氢氧化锂溶液调节PH5.5-6,加入活性碳脱色,加入酒精过滤得双甘氨肽粗品,再用水重结晶,加入酒精,过滤洗涤至氯合格,干燥得双甘氨肽。或
取乙二醇母液、甘氨酸,混合搅拌,升温至170-175°C反应,反应完全后,冷却至室温,离心得粗品,粗品加入2N氢氧化锂水溶液于30-40°C保温30-60分钟,用盐酸中和PH5.5-6.0,加入活性碳精制脱色,加入酒精过滤得双甘氨肽粗品,再用水重结晶,加入酒精,过滤洗涤,干燥得双甘氨肽。所述合成三甘氨肽的具体步骤是,将水、甘氨酸混合,用4N氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;再加入乙酸乙酯、HOSU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸本反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液,滴入双甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98%以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和PH=2.2-2.5,搅拌离心得Z-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烷重结晶,烘干得Z-三甘氨肽纯品;再将Z-三甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.Mpa,于30-40°C氢解,待氢解完全,过滤得三甘氨肽与Pa/C混合物,此混合物加入水,升温溶解,过滤回收Pa/C,滤液浓缩,加入酒精,过滤得三甘氨肽。或
所述合成四甘氨肽的具体步骤是:将水、甘氨酸混合,用4N的氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入,乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;力口入乙酸乙酯、HOSU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸本反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液;滴入三甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98%以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和PH=2.2-2.5,搅拌离心得Z-gly-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烧重结晶,烘干得Z-四甘氨肽纯品,将Z-四甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.Mpa,于30-40°C氢解,氢解完全,过滤得三甘氨肽与Pa/C混合物,此混合物加入水,升温溶解,过滤回收Pa/C,滤液浓缩,加入酒精,过滤得四甘氨肽。所述合成四甘氨肽的具体步骤是,将水、甘氨酸混合,用4N的氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;加入乙酸乙酯、H0SU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液;将该Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液滴入三甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98%以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和P H=2.2-2.5,搅拌离心得Z-gly-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烷重结晶,烘干得Z-四甘氨肽纯品,将Z-四甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.1^&,于30-401:氢解,氢解完全后,过滤得四甘氨肽与?&/^混合物,此混合物加入水,升温溶解过滤回收Pa/C,滤液浓缩,加入酒精,过滤得四甘氨肽.该方法采用多种保护组合的循序合成方式,在合成双甘氨肽时,乙二醇可套用,后序处理不产生氯化钠,产品合格率高;在合成三甘氨肽时,可确保产品单杂0.2%以下,纯度99.0%以上(HPLC);在合成四甘氨肽时,反应物溶解性好,收率高,且不需要酯化,也无需在有机溶剂中进行,成本低。
具体实施例方式以下用实施例详细说明本发明;
一、合成双甘氨肽
实施例1:
在100L油浴锅中加入50L乙二醇,IOKG甘氨酸,搅拌升温至170_175°C反应45-60分钟,冷却至60°C,加入IOL水,冷却至室温离心得8KG粗品,粗品加入15L盐酸水解1_2分钟,冷却离心得固体7KG,加入氢氧化锂溶液调节PH5.5-6,加入约0.2KG活性碳,精制脱色,加入2-3倍酒精过滤得双5KG甘氨肽粗品,再用水重结晶,加入2-3倍酒精,过滤洗涤至氯合格,干燥得双甘氨肽3.5KG (含量99.2%)。本例反应式如下:
权利要求
1.一种四甘氨肽的合成方法,采用循序合成法,其步骤为: (1)、甘氨酸缩合开环后生产双甘氨肽; (2)、双甘氨肽与经N-保护的甘氨酸活化酯缩合,脱保护后生产三甘氨肽; (3 )、三甘氨肽与N-保护的甘氨酸活化酯缩合,脱保护后生产四甘氨肽。
2.如权利要求1所述的四甘氨酞的合成方法,其特征在于,所述合成双甘氨肽的具体步骤是,取乙二醇、甘氨酸,混合搅拌,升温至170-175 反应,反应完全后,冷却至室温,离心得粗品,再加入盐酸水解,冷却离心得固体,加入氢氧化锂溶液调节PH5.5-6,加入活性碳脱色,加入酒精过滤得双甘氨肽粗品,再用水重结晶,加入酒精,过滤洗涤杂质合格,干燥得双甘氨肽;或 取乙二醇母液、甘氨酸,混合搅拌,升温至170-175 °C反应,反应完全后,冷却至室温,离心得粗品,粗品加入2N氢氧化锂水溶液于30-40°C保温30-60分钟,用盐酸中和PH5.5-6.0,加入活性碳精制脱色,加入酒精过滤得双甘氨肽粗品,再用水重结晶,加入酒精,过滤洗涤,干燥得双甘氨肽。
3.如权利要求1所述的四甘氨肽的合成方法,其特征在于,所述合成三甘氨肽的具体步骤是,将水、甘氨酸混合,用4N氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;再加入乙酸乙酯、HOSU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液,滴入双甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98 %以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和PH=2.2-2.5,搅拌离心得Z_gly_gly_gly_0H,用 乙酸乙酯/正已烧重结晶,烘干得Z-二甘氨妝纯品;再将Z-二甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.1^&,于30-401:氢解,待氢解完全,过滤得三甘氨肽与Pa/C混合物,此混合物加入水,升温溶解,过滤回收Pa/C,滤液浓缩,加入酒精,过滤得三甘氨肽;或 将水、甘氨酸混合,用4N的氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入,乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;加入乙酸乙酯、HOSU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸本反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液;滴入三甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98%以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和PH=2.2-2.5,搅拌离心得Z_gly_gly_gly_0H,用乙酸乙酯/正已烧重结晶,烘干得Z- 二甘氨妝纯品,将Z- 二甘氨妝、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.1^&,于30-401:氢解,氢解完全,过滤得三甘氨肽与Pa/C混合物,此混合物加入水,升温溶解,过滤回收Pa/C,滤液浓缩,力口入酒精,过滤得三甘氨肽。
4.如权利要求1所述的四甘氨酞的合成方法,其特征在于,所述合成四甘氨肽的具体步骤是,将水、甘氨酸混合,用4N的氢氧化钠水溶液维持PH=9-10,保持温度5-10°C,滴加入氯甲酯苄酯,滴加完后自然升温反应,至氯甲酸苄酯反应完全,加入乙酸乙酯,用盐酸中和PH2.2-2.5,搅拌结晶,离心洗涤,烘干得Z-甘氨酸;加入乙酸乙酯、HOSU、DCC,于25-30°C反应,至苄氧羰基甘氨酸反应完全,过滤掉固体得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液;将该Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液滴入三甘氨肽、水、碳酸氢钠混合液中,于室温反应,至Z-GLY-OSU反应98%以上,在反应终点分出乙酸乙酯层,再用乙酸乙酯提取上层杂层,用盐酸中和PH=2.2-2.5,搅拌离心得Z-gly-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烷重结晶,烘干得Z-三甘氨肽纯品,将Z-三甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C混合,搅拌下通入氢气,保持压力0.1-0.Mpa,于30-40°C氢解,氢解完全后,过滤得三甘氨肽与Pa/C混合物,此混合物加入水,升温溶解过滤回收Pa/C,滤液浓 ,加入酒精,过滤得四甘氨肽。
全文摘要
本发明提供一种四甘氨酞的循序合成方法,其步骤为1、甘氨酸缩合开环后生产双甘氨肽;2、双甘氨肽与经N-保护的甘氨酸活化酯缩合,脱保护后生产三甘氨肽;3、三甘氨肽再与N-保护的甘氨酸活化酯缩合后脱保护后生产四甘氨肽。
文档编号C07K5/103GK103204905SQ20131008335
公开日2013年7月17日 申请日期2013年3月15日 优先权日2013年3月15日
发明者李德勇, 伍万兵, 陈纹锐, 蒲国波, 曾凯 申请人:四川同晟生物科技有限公司
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