Hmg粗品的制备方法

专利名称：Hmg粗品的制备方法
技术领域：
本发明属于技术生物医药技术领域，具体涉及一种HMG粗品的制备方法。
背景技术：
人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin,HMG)是由绝经期妇女尿中提取的物质，含有FSH和LH，其促卵泡发育的作用主要是FSH。人绒毛膜促性腺激素(humanchorionic, gonadotropin, HGG)是妊娠妇女尿中提取的物质,可使成熟卵泡排卵，或用于HMG疗法后的黄体支持疗法。现有的HMG的制备方法是:取绝经期的妇女尿液，在尿液中加入高岭土，再采用压滤机压饼，同时加入氨水，脱出有效成分液体，液体再进入超滤机，超滤到原体积的15%，再加入丙酮溶液沉淀，有效成分沉淀下来，沉淀置于离心机离心，再真空干燥，得到成品HMG。以上的方法中所采用的高岭土其价格昂贵，因此导致HMG的生产成本较高，在以上的方法时，有时会采用珍珠盐作为助滤剂，其成本也较高；另外以上的方法其缺点于，压滤机的成本较高。因此需要针对以上的方法进行改进，降低HMG的生产成本。

发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种成本低、步骤简单、易于工业化生产的HMG粗品的制备的方法。HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤:
a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤,用乙酸调pH值到3.8-4.0,静置3_5小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的
0.6-1.5%，搅拌1.5-3小时，静置0.5-1.5小时；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用40-60%的丙酮和l/20-l/10mol的无水乙酸钠洗脱；
e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到65-80%之间，在4-10°C的温度区间静置6-10小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。优选的，步骤d中，洗脱的条件为:洗脱柱高I米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为1.5-2.5小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液9-11L。更优选的，步骤d中，洗脱的条件为:洗脱柱高I米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱 时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L。优选的，步骤e中，在洗脱液加入丙酮至丙酮的浓度达到70%，在4-10°C的温度区间静置8小时。步骤a中，绝经期妇女尿液中，不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab0
步骤a中，成品HMG粗品中不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。步骤b中采用的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是:将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值4_6，采用该方法处理过的硅胶，其吸附能力更强。优选的，HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤:
a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤，用乙酸调pH值到3.9，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入娃胶,娃胶的加入量为尿液重的1%,搅拌2小时，静置I小时，以上的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是:将硅胶用纯净水洗至PH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时,最后再用纯净水将娃胶洗至pH值4_6 ；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和l/15mol的无水乙酸钠洗脱； e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到70%之间，在4°C下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。本发明的有益效果在于，采用以上的方法制备HMG粗品，和传统的HMG粗品的制备方法相比，其成本低，不需要采用高岭土、珍珠盐，还不需要采用压滤机，节约了成本；步骤简单，不需要采用超滤的步骤，简化了步骤。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。实施例1
HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤:
a.收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，用浓度为50%的乙酸调pH值到3.8，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入娃胶,娃胶的加入量为尿液重的1%,搅拌2小时，静置I小时，以上的硅胶，将使用过的硅胶用纯净水洗至PH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值5的硅胶，将硅胶酸化，达到该pH值时，硅胶的吸附能力最强；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和l/15mol的无水乙酸钠洗脱，洗脱的条件为:洗脱柱高I米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液IOL ；
e.在洗脱液中加入丙酮至丙酮的浓度达到70%左右，在4°C下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得HMG的粗品，经检测成品HMG粗品中未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。采用以上的实施例中的方法制备HMG粗品，其实验结果如下:
权利要求
1.HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤,用乙酸调pH值到3.8-4.0,静置3_5小时后除去沉淀； b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的0.6-1.5%，搅拌1.5-3小时，静置0.5-1.5小时； c.取上清液，干燥沉淀； d.将沉淀置于洗脱柱中，用40-60%的丙酮和l/20-l/10mol的无水乙酸钠洗脱； e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到65-80%之间，在4-10°C的温度区间静置6-10小时； f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。
2.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤d中，洗脱的条件为:洗脱柱高I米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2,洗脱时间为1.5-2.5小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液9-11L。
3.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤d中，洗脱的条件为:洗脱柱高I米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L。
4.如权利要求1所述的HMG粗品 的制备方法，其特征在于，所述的步骤e中，在洗脱液加入丙酮至丙酮的浓度达到70%，在4-10°C的温度区间静置8小时。
5.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤a中，所述的绝经期妇女尿液中，不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab, Hbe_Ab。
6.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤a中，所述的成品HMG粗品中不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
7.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤b中采用的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是:将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将娃胶洗至pH值4-6。
8.如权利要求1所述的HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤: a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤，用乙酸调pH值到3.9，静置4小时后除去沉淀； b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置I小时，硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是:将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时,最后再用纯净水将娃胶洗至pH值4-6 ； c.取上清液，干燥沉淀； d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和l/15mol的无水乙酸钠洗脱； e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到70%之间，在4°C下静置8小时； f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。
全文摘要
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种HMG粗品的制备方法。HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤a.收集绝经期妇女尿液，过滤，乙酸调pH值，静置后除去沉淀；b.在尿液中加入硅胶搅拌，静置；c.取上清液，干燥沉淀；d.将沉淀置于洗脱柱中，用丙酮和无水乙酸钠洗脱；e.在洗脱液加入丙酮，静置8小时；f.取出上清液，回收复新，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得成品HMG粗品。采用以上的方法制备HMG粗品，和传统的HMG粗品的制备方法相比，其成本低，不需要采用高岭土、珍珠盐，还不需要采用压滤机，节约了成本；步骤简单，不需要采用超滤的步骤，简化了步骤。
文档编号C07K14/575GK103159846SQ20131012089
公开日2013年6月19日 申请日期2013年4月9日 优先权日2013年4月9日
发明者刘爱红, 陈方山 申请人:邹平县滨渤生物科技有限公司