专利名称：一种检测杂色曲霉素的elisa试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物化学领域。具体而言，本发明涉及检测杂色曲霉素的ELISA试剂盒。
背景技术：
杂色曲霉素(Sterigmatocys简称ST)是一种杂环化合物(图)具有很强的肝及肾脏毒素，能诱发多种肿瘤。南非某些地区的肝癌高发可能与ST有关。杂色曲霉素是，可导致胆管癌和肝癌，有致突变性，但对食品的污染频率较低。ST还可转化成更强烈的致癌物黄曲霉毒素。ST还能引起一些动物疾病。ST可有10多种真菌代谢产生，在人工培养基的产量高达10g/kg。已知可被ST污染的食品包括:大米、小麦、玉米、花生、大豆、火腿、奶酪、咖啡等。杂色曲霉素经三氯化铝喷雾后加热，可在365nm波长紫外光下呈黄色荧光。卫生研究所建立的检测杂色曲霉素的薄层色谱法已于1984年列为国家标准(GB/T5009.25-1996)。该法对大米、玉米、小麦的最低检出量为25 μ g/kg,黄豆、花生为50yg/kg。杂色曲霉素的
结构如下:
权利要求
1.一种抗杂色曲霉素的抗体，其特征在于，所述的抗体包括轻链和重链，其中所述轻链的氨基酸的序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述重链的氨基酸的序列如序列表中SEQ IDNO:2所示。
2.编码权利要求1所述抗体的核苷酸序列。
3.权利要求1所述的抗体在制备检测杂色曲霉素试剂、药剂或试剂盒中的应用。
4.一种检测杂色曲霉素的ELISA试剂盒，包括权利要求1所述的抗体。
5.权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的抗体带有生物标记或化学标记，所述生物标记或化学标记为突光标记、放射性标记或酶标记。
6.权利要求5所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述的酶标记为辣根过氧化酶标记。
7.权利要求5所述的ELISA试剂盒，还包括:辣根过氧化物酶底物缓冲液、杂色曲霉素标准品、偶联BSA的杂色曲霉素、阴性对照样品BSA。
8.—种检测杂色曲霉素的方法，包括以下步骤: a)用包被液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液)稀释BSA-ST至浓度为2 μ g/ml，取稀释后的BSA-ST加入酶标板中，每孔100μ 1，4°C过夜； b)洗涤液(PH7.4PBS)清洗酶标板3次，每次在摇床上摇5_8min ； c)将待测样品和100μ I 按 I: 3000-1: 5000 稀释的 HRP-Sulfo-SMCC-ASPl 稀释液，同时加入到包被的酶标板中，37°C孵育2h，每个样品包被2个孔，同时将标准品进行梯度稀释依次为 5ng/ml、10 ng/ml、40ng/ml、160ng/ml、640ng/ml、2560ng/ml,每孔 100 μ I ； d)再用洗涤液清洗3次，加辣根过氧化物酶底物缓冲液100μ 1，显色5min后，加入终止液100 μ I,终止显色； e)用酶标仪检测0D450的值，依据标准品的吸光值制备标准曲线，从而根据吸光值判断所测样品中ST的浓度。
全文摘要
本发明公开了一种检测杂色曲霉素的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括抗杂色曲霉素抗体，所述抗体包括轻链和重链，其中轻链的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，重链的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示，本发明公开了制备上述抗体的方法。本发明所述的ELISA检测试剂盒，还包括辣根过氧化物酶底物缓冲液、蛋白标准品ST(100ug/ml，0.1ml)、包被原BSA-ST、阴性对照样品BSA，本发明同时还公开了上述试剂盒的使用方法。
文档编号C07K16/14GK103193884SQ20131013697
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月19日 优先权日2013年4月19日
发明者江飞剑, 王海彬, 杨承刚, 韦国栋 申请人:中华人民共和国台州出入境检验检疫局