乌骨藤皂苷a及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种乌骨藤皂苷A及其制备方法，本制备方法是以中药乌骨藤为原料，经提取、分离、结晶、分离、结晶等一系列步骤，制备得到具有良好抗肿瘤活性、高含量的乌骨藤皂苷A，采用高效液相色谱法测定，其含量范围为60％～99.5％；本发明提供的乌骨藤皂苷A及其制备方法采用中药现代化分离纯化技术，工艺新颖，适合工业化生产，具有很强的实用性。
【专利说明】乌骨藤皂苷A及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的乌骨藤皂苷A的制备方法及其应用，属于医药 领域范畴。
【背景技术】
[0002] -直以来，癌症被认为是人类的"头号杀手"，被称为不治之症。2008年全球癌症新 发病例1300万，死亡760万，每8个死亡病例中就有1例癌症患者。WHO警告称，如不采取 有效措施，照此趋势发展，到2030年全球将有2600万新增癌症病例，死亡例数将跃至1700 万。
[0003] 乌骨藤，又名通关藤、通光藤、通关散、通光散，是萝蘑科（Ascl印iadaceae)植物 通关藤（Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.)的藤莖。主要产于云南、贵州等 西南地区，始载于《滇南本草》。乌骨藤含有皂苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色素等多种 化学成分，它的主要药理活性有抗肿瘤、免疫调节等作用。随着对乌骨藤化学成分研究的深 入，逐渐明确乌骨藤中起抗癌作用的是一类具有C 21-留体皂苷母核的皂苷成分，其机理为 作用于肿瘤细胞防止分裂，抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞分化。
[0004] 目前，国内市场上由乌骨藤单味中药开发出的中成药是消癌平，包括注射液、片 齐?、胶囊、口服液等多种剂型，这些制剂均具有一定的抗癌疗效，对胃癌、肝癌、肺癌、食道癌 等多种肿瘤具有确切的疗效，在临床上已得到较广泛的应用，说明乌骨藤具有一定的抗肿 瘤活性。由于消癌平开发于上世纪90年代，时间较早，当时的技术相对落后，再加上乌骨藤 药材中化学成分很复杂，所以诸多消癌平制剂中均未能明确其中真正的抗肿瘤活性成分。
[0005] 本发明的目的是提供一种结构明确、疗效确切的乌骨藤皂苷Α。乌骨藤皂苷Α是从 中药乌骨藤中通过分离纯化方法制备得到，具有结构明确，活性高，毒副作用小的特点。通 过对乌骨藤皂苷A含量的控制可大大提高乌骨藤制剂的安全性、稳定性和可控性。同时由 于其含量高，能大大降低原制剂的使用剂量，减少其他杂质药物对机体的刺激性。能更好的 保障乌骨藤皂苷制剂的临床疗效，使抗肿瘤中药乌骨藤发挥更大社会价值并得到更好的利 用。
[0006] 在专利申请号为CN200910184788. 5的名为《具一种乌骨藤皂苷组合物及其制备 方法》专利中，公开了一种由乌骨藤皂苷组合物及其制备方法，没有明确其中的某一活性成 分及其化学结构，与本发明提供的化学成分及结构明确的乌骨藤皂苷A具有明显的不同。 在专利申请号为CN200810059047. X的名为《具有抗肿瘤作用的乌骨藤碳-21甾体皂苷混合 物》专利中，虽然公开了乌骨藤苷八、8、(：、0、1(，但该专利工艺主要采用硅胶柱层析法、1^-18 柱层析法、色谱制备法，其使用材料昂贵，制备成本高，而且操作复杂，难以进行产业化生 产，只适用于少量样品的制备。
[0007] 本发明的优势在于克服了以往工艺的不足，提供了一种结构明确、高含量的乌骨 藤皂苷A ;本发明还提供了高含量的乌骨藤皂苷A及其药物组合物的制备方法，临床用于肿 瘤的治疗。本发明提供的乌骨藤皂苷及其药物组合物的制备方法重复性好，可适用于生产 放大，易于推广，具有很强的实用性。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于克服传统工艺的不足，提供一种具有良好抗肿瘤活性的高含量 的乌骨藤皂苷A，采用高效液相色谱法测定，含量60%?99. 8%，其结构式如下：
[0009]
【权利要求】
1. 一种具有抗肿瘤活性的乌骨藤皂苷A，其制备方法由以下几步组成： 步骤（1):取乌骨藤药材，加量6?10倍（m/V)水加热回流提取，合并提取液； 步骤（2):提取液过滤，滤液过一定型号的大孔树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大 极性杂质后，改用60?95%乙醇洗脱，根据洗脱溶剂的不同，洗脱溶剂用量为药材量的2? 6倍（m/V)，至洗脱液中无乌骨藤皂苷A，收集洗脱液； 步骤（3):洗脱液在50?65°C下减压浓缩成为药材量的5?15%稠膏，加入稠膏量 2?4倍有机溶剂溶解，过滤，残渣弃去，冷却，加入微量纯度大于98%的乌骨藤皂苷A结晶 作为晶种，静置12?36小时结晶，过滤，干燥，得类白色乌骨藤皂苷A粗品。 步骤（4):取上述乌骨藤皂苷A粗品，加一定量的有机溶剂加热回流溶解后，过滤，滤液 冷却，滤液上一定型号的葡聚糖凝胶柱，上柱完成后，用50?70%甲醇洗脱，至洗脱液中无 乌骨藤皂苷A，收集洗脱液； 步骤（5):洗脱液合并，洗脱液在50?65°C下减压浓缩为药材量0. 5?2%的稠膏，力口 入稠膏量2?4倍有机溶剂加热回流溶解，过滤，残渣弃去，冷却，加入微量纯度大于98%的 乌骨藤皂苷A结晶作为晶种，静置12?36小时结晶，过滤，干燥，得含量60?99. 8%的乌 骨藤皂苷。 步骤（2)中所述的一定型号的树脂柱是型号为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600， 或D101、D1300的大孔树脂柱； 步骤（3)中所述的有机溶剂是丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、正丁醇或异丙醚，或是以上溶 剂中两种或几种的组合的有机溶剂； 步骤⑷中所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、水或是以上溶剂中两种或几种的组合溶剂； 用量为乌骨藤皂苷A粗品的2?4倍； 步骤（4)中所述的一定型号的葡聚糖凝胶柱是型号为Sephadex G_10，Sephadex G-15， Sephadex G-25, Sephadex G-50 的葡聚糖凝胶柱； 步骤（4)中所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、水或是以上溶剂中两种或几种的组合溶剂。
【文档编号】C07J71/00GK104250281SQ201310274412
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2013年6月28日 优先权日:2013年6月28日
【发明者】金显友, 杨永安, 朱海亮, 季浩 申请人:江苏天晟药业有限公司