荧光pH敏感性染料和其使用方法
【专利摘要】本文揭示用于使用pH敏感性荧光染料来检测样品pH的化合物、组合物、方法和试剂盒。本文所揭示的化合物为包含具有一或多个给电子基团的苯胺部分的新颖氧杂蒽衍生染料，所述染料是用于活体外或活体内检测样品pH。本文还描述用于制备所述染料以供在所揭示的组合物、方法和试剂盒中使用的方法。
【专利说明】荧光pH敏感性染料和其使用方法
[0001] 相关申请案的夺叉参考
[0002] 本申请案要求2012年5月30日提交的美国临时申请案第61/653, 333号和2012 年5月31日提交的美国临时申请案第61/653,616号的优先权权益，所述临时申请案以引 用的方式全文结合到本文中。
【技术领域】
[0003] 揭示新颖的pH敏感性荧光染料，和用于包括监测细胞内过程在内的多种应用的 分析。
【背景技术】
[0004] 用于生物研究和医学诊断学的pH敏感性荧光染料分成两组，各组的区别在于对 PH改变的荧光反应的起源。第一组包括具有由荧光团中的酚系羟基电离控制的荧光的化合 物。实例包括荧光素、羧基荧光素、Oregon Green?、SNARF?、SNAFL?和HPTS指 示剂。
[0005] 美国专利公开案第2006/0051874号描述结合到用于监测血库中的血液pH的荧光 检测器中的荧光素样结构。因为这些类型的分子的电离程度会在环境酸度降低后增加，所 以它们随着pH的增加变得更具荧光性。
[0006] 第二组的荧光pH传感器包括氨基（脂肪族或芳香族）作为指示剂部分，连同荧光 染料报告部分一起。当此类分子吸收光子，产生电子激发态时，氨基的孤对电子转移到由于 激发而空出的轨道。此类电子转移称为光诱导电子转移（PET)，防止受激分子发生辐射跃 迁，从而使染料的荧光淬灭。氨基质子化会改变所述对的轨道的性质和能量且阻止PET。因 而，荧光报告部分对PH改变作出反应。因为氨基质子化会消除淬灭，所以基于PET的传感 器随着PH的降低变得更具荧光性。
[0007] 基于PET的pH传感器的实例包括LysoSensor?染料，其含有二甲基氨基作为指示 剂部分；和CyPHer li 5E染料，其具有假吲哚指示剂基团。这些传感器的一个缺点是工作范 围由于指示剂氨基的低PKa而移到酸性侧。
[0008] -系列基于若丹明的pH传感器描述于PCT公开案第W02005/098437号（史密斯 (Smith)等人）中。所述染料具有在氧杂蒽部分的邻位被-OH或-SH(或其去质子化形式） 取代的苯环，使得去质子化为带负电荷状态会淬灭荧光且仅在带负电荷的_〇_或-S^质子化 为中性状态后，荧光才得以恢复。典型地，这种情况发生时的pH小于pH 6。冊2005/098437 声称，-OH或-SH基团的电离状态引起染料的pH反应且染料中四甲基若丹明的强吸电子特 性显著地降低指示剂基团的pKa，因此使传感器的工作范围移向高酸性pH值。然而，这会限 制TO2005/098437中所述的染料在生理学pH(例如pH 6-7)下，尤其在生物系统中的适用 性。这些染料的额外缺点是其PKa不可调。此外，我们已经发现这些化合物在溶液中不稳 定。
[0009] 因此，需要具有改进的特性（包括在至少一些化合物中，检测生物系统中的pH改 变的能力）的额外PH敏感性荧光染料。本发明的目标是开发一类新颖的相对稳定的荧光 pH传感器，其在UV/VIS光谱的绿色部分中发荧光，优选地具有朝向中性和其它生物相关pH 值的工作范围，由此减轻或去除所属领域中已知的化合物的缺点。
【发明内容】
[0010] 本文描述用于使用pH敏感性荧光染料来检测样品中的pH的化合物、组合物、方法 和试剂盒，一方面，其特征在于省去了如W02005/098437所需的羟基或硫醇基团。另一方 面，如本文所揭示的pH敏感性荧光染料允许检测UV/VIS光谱的绿色部分中对pH改变的荧 光反应。本发明提供一系列新的PH敏感性绿色荧光染料，其具有优于现有的荧光pH传感 器的显著且意外优点，即在烷氧基取代基的对位存在二烷基氨基会产生生理学PKa值且本 文提供的染料的PKa也可调。因此，本文提供的pH敏感性荧光染料可经改质以适合待分析 的特定应用或条件。
【权利要求】
L一种pH敏感性恭光垫Mik合物·Μ·有结抝式⑴， 其中
R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为Η、卤素、-ORa、-SRa、-NRaRb或给电子基团； R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基或经取代的烷基； R4是选自由烷基和经取代的烷基组成的群组； R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxJP-L-S。，其中L为键联基团，Rx为反应性基 团，且S。为结合的物质； RaSΗ、烷基或经取代的烷基；且Rb为烷基或经取代的烷基。
2. 根据权利要求1所述的化合物，其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为H或卤素； R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
3. 根据权利要求1所述的化合物，其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为H、Cl或F; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
4. 根据权利要求1所述的化合物,其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6各自为H; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
5. 根据权利要求1所述的化合物,其中 R1为甲氧基； R2和R6各自为H; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为甲基或乙基； R4为甲基或乙基； R5为甲基；乙基；羧基烷基；（CH2)nC0 (0)R; (CH2)nC(0)R; (CH2)nC(0)NHR; (CH2)nC(0)NRR%其中n为I到6的整数，且R和IT可相同或不同，各自独立地为H、烷基、经取代的烷 基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、烷基氨基羰基、氨基葡聚 糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中η为1到6的整数，且Rx 为选自羧基、羧基酯、酰胺、顺丁烯二酰亚胺、丁二酰亚胺酯（SE)、磺基二氯苯酚（SDP)酯、 磺基四氟苯酚（STP)酯、四氟苯酚（TFP)酯、乙酰氧基甲氧基（AM)酯、氮基三乙酸（NTA)、氨 基葡聚糖、DIBO-胺的反应性基团；-L-Rx;* -L-Sc。
6. -种pH敏感性荧光染料化合物，其具有结构式（II): LziN丄 I 丄r\ I，、 I ·* ▼·?， * * ?J/丄VJ J/< 其中
R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为Η、卤素、-ORa、-SRa、-NRaRb或给电子基团； R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基或经取代的烷基； R4是选自由烷基和经取代的烷基组成的群组； R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxJP-L-S。，其中L为键联基团，Rx为反应性基 团，且S。为结合的物质； RaSΗ、烷基或经取代的烷基；且Rb为烷基或经取代的烷基。
7. 根据权利要求6所述的化合物，其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为H或卤素； R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
8. 根据权利要求6所述的化合物，其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6可相同或不同，各自独立地为H、Cl或F; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
9. 根据权利要求6所述的化合物，其中 R1为烧氧基或硫烧基； R2和R6各自为H; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为烷基； R4为烧基；且 R5是选自由以下组成的群组：烧基；经取代的烧基；稀基；经取代的稀基；醜基；芳基； 经取代的芳基；羧基烷基；杂芳基；经取代的杂芳基；杂环基；经取代的杂环基；烷基羧基； 烷基烷氧羰基；烷基氨基羰基；烷基芳氧基羰基；烷基杂芳基；(CH2)nCO(O)R; (CH2)nC(O)R; (CH2)nC(O)NHRJagnC(O)NRr;其中η为1到6的整数，且R和R。可相同或不同，各自独立 地为Η、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、 烷基氨基羰基、氨基葡聚糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中 η为1到6的整数，且&为反应性基团；-L-RxjP-L-Sc。
10. 根据权利要求6所述的化合物，其中 R1为甲氧基； R2和R6各自为H; R3为-NR'R"，其中R'和R"可相同或不同，各自独立地为甲基或乙基； R4为甲基或乙基；且 R5为甲基；乙基；羧基烷基；（CH2)nC0 (0)R; (CH2)nC(0)R; (CH2)nC(0)NHR; (CH2)nC(0)NRR%其中n为I到6的整数，且R和IT可相同或不同，各自独立地为H、烷基、经取代的烷 基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、经取代的氨基、烷基氨基羰基、氨基葡聚 糖、酰胺、蛋白质、亲脂性基团或Rd，其中#为（CH2)nC(0)NHRx，其中η为1到6的整数，且Rx 为选自羧基、羧基酯、酰胺、顺丁烯二酰亚胺、丁二酰亚胺酯（SE)、磺基二氯苯酚（SDP)酯、 磺基四氟苯酚（STP)酯、四氟苯酚（TFP)酯、乙酰氧基甲氧基（AM)酯、氮基三乙酸（NTA)、氨 基葡聚糖、DIBO-胺的反应性基团；-L-Rx;* -L-Sc。
11. 一种pH敏感性染料化合物，其选自由以下组成的群组：
12. -种用于测定样品pH的组合物，所述组合物包含： a) -或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性荧光染料化合物； 和 b) 载体， 其中所述一或多种pH敏感性荧光染料化合物以有效检测所述样品的pH的量存在。
13. -种用于测定样品pH的组合物，所述组合物包含： (a) -或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性荧光染料化合物； 和 (b)分析物， 其中所述一或多种pH敏感性荧光染料化合物以有效检测所述样品的pH的量存在。
14. 一种用于测定样品pH的方法，所述方法包含： (a) 使所述样品与一或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性荧 光染料化合物接触以形成接触的样品； (b) 使所述接触的样品培育适当长的时间以形成培育的样品； (c) 用适当波长照射所述培育的样品以形成照射的样品；和 (d) 检测来自所述照射的样品的荧光发射； 其中所述荧光发射用于测定所述样品的pH。
15. -种用于测定样品pH的方法，所述方法包含： (a) 使所述样品与一或多种根据权利要求12或13所述的组合物接触以形成接触的样 品； (b) 使所述接触的样品培育适当长的时间以形成培育的样品； (c) 用适当波长照射所述培育的样品以形成照射的样品；和 (d) 检测来自所述照射的样品的荧光发射； 其中所述荧光发射用于测定所述样品的pH。
16. -种用于监测活细胞内部的pH的方法，所述方法包含： (a) 使所述细胞与一或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性荧 光染料化合物接触以形成接触的细胞； (b) 使所述接触的细胞培育足以使所述一或多种所述染料化合物或组合物进入所述细 胞的时间长度以形成标记的细胞； (c) 用适当波长照射所述标记的细胞以形成照射的细胞；和 (d) 检测来自所述照射的细胞的荧光发射； 其中所述荧光发射用于监测所述细胞内部的pH。
17. -种用于监测活细胞内部的pH的方法，所述方法包含： (a) 使所述细胞与一或多种根据权利要求12或13所述的组合物接触以形成接触的细 胞； (b) 使所述接触的细胞培育足以使所述染料化合物或组合物进入所述细胞的时间长度 以形成标记的细胞； (c) 用适当波长照射所述标记的细胞以形成照射的细胞；和 (d) 检测来自所述照射的细胞的荧光发射； 其中所述荧光发射用于监测所述细胞内部的pH。
18. -种用于检测溶液中载体分子的吞噬作用的方法，所述方法包含： (a) 使所述载体分子与一或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感 性荧光染料化合物结合以形成载体结合物； (b) 使所述载体结合物与细胞接触以形成接触的细胞； (c) 培育所述接触的细胞以形成培育的溶液； (d) 照射所述培育的溶液以形成照射的溶液；和 (e) 检测来自所述照射的溶液的荧光发射； 其中荧光发射指示所述载体分子的吞噬作用。
19. 一种用于检测溶液中载体分子的吞噬作用的方法，所述方法包含： (a) 使所述载体分子与一或多种根据权利要求12或13所述的组合物结合以形成载体 结合物； (b) 使所述载体结合物与细胞接触以形成接触的细胞； (c) 培育所述接触的细胞以形成培育的溶液； (d) 照射所述培育的溶液以形成照射的溶液；和 (e) 检测来自所述照射的溶液的荧光发射； 其中荧光发射指示所述载体分子的吞噬作用。
20. -种用于检测pH相关的细胞内过程的方法，所述方法包含： (a) 使一或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性荧光染料化合 物与细胞接触以形成接触的细胞； (b) 培育所述接触的细胞以形成培育的溶液； (c) 照射所述培育的溶液以形成照射的溶液；和 (d) 检测来自所述照射的溶液的荧光发射； 其中增加的荧光发射指示所述细胞内过程的活化。
21. -种用于检测pH相关的细胞内过程的方法，所述方法包含： (a) 使一或多种根据权利要求12或13所述的组合物与细胞接触以形成接触的细胞； (b) 培育所述接触的细胞以形成培育的溶液； (c) 照射所述培育的溶液以形成照射的溶液；和 (d) 检测来自所述照射的溶液的荧光发射； 其中增加的荧光发射指示所述细胞内过程的活化。
22. -种用于鉴别细胞群体中的目标细胞的方法，其中所述目标细胞相对于所述群体 内的相邻细胞经差异性标记，所述方法包含： (a) 使一或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性染料化合物与 所述细胞群体接触以形成接触的细胞群体； (b) 使所述接触的细胞群体培育足以使所述一或多种所述pH敏感性染料化合物进入 所述目标细胞的一段时间，由此形成培育的细胞群体；和 (c) 照射所述培育的细胞群体，其中所述目标细胞通过相对于所述群体内的相邻细胞 的差异标记来鉴别。
23. -种用于鉴别细胞群体中的目标细胞的方法，其中所述目标细胞相对于所述群体 内的相邻细胞经差异性标记，所述方法包含： (a) 使一或多种根据权利要求12或13所述的组合物与所述细胞群体接触以形成接触 的细胞群体； (b) 使所述接触的细胞群体培育足以使所述一或多种所述组合物进入所述目标细胞的 一段时间，由此形成培育的细胞群体；和 (c) 照射所述培育的细胞群体，其中所述目标细胞通过相对于所述群体内的相邻细胞 的差异标记来鉴别。
24. -种用于诊断或检测受检者疾病的方法，所述方法包含： (a) 使从怀疑患有所述疾病的受检者获得的样品与一或多种根据权利要求1到11中任 一权利要求所述的pH敏感性染料化合物接触以形成接触的样品； (b) 使所述接触的样品培育适当长的时间以形成培育的样品； (c) 用适当波长照射所述培育的样品以形成照射的样品；和 (d) 检测来自所述照射的样品的荧光发射； 其中所述荧光发射用于诊断或检测所述疾病。
25. -种用于诊断或检测受检者疾病的方法，所述方法包含： (a) 使从怀疑患有所述疾病的受检者获得的样品与一或多种根据权利要求12或13所 述的组合物接触以形成接触的样品； (b) 使所述接触的样品培育适当长的时间以形成培育的样品； (c) 用适当波长照射所述培育的样品以形成照射的样品；和 (d) 检测来自所述照射的样品的荧光发射； 其中所述荧光发射用于诊断或检测所述疾病。
26. 根据权利要求24或25所述的方法，其中所述疾病是选自癌症、免疫相关疾病、氧化 应激相关疾病和与中枢神经系统相关的疾病。
27. -种用于测定样品pH的试剂盒，其包含： (a) -或多种根据权利要求1到11中任一权利要求所述的pH敏感性染料化合物； (b) -或多个容器；和任选地， (c) 用于测定所述样品的pH的说明书。
28. -种用于测定样品pH的试剂盒，其包含： (a) -或多种根据权利要求12或13所述的组合物； (b) -或多个容器；和任选地， (c) 用于测定所述样品的pH的说明书。
29. -种合成结构式（I)的化合物的方法，
所述方法包含： a)使结构式（VI)的化合物： 与结构式（IV)的化百女肥i:
以形成结构式（VII)的化合物：
b)去烯丙基化所述结构式（VII)的化合物，其中R7、R8、R9和R1(1各自为烯丙基，以形成 结构式⑴的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6如权利要求1中所定义且R7、R8、R9和R1(1各 自为H。
30. -种合成结构式（II)的化合物的方法， 所述方法包含：
a)使结构式（III)的化合物：
与结构式（IV)的化合物接触：
以形成结构式（V)的化合物：
b)去烯丙基化所述结构式（V)的化合物，其中R7和R8各自为烯丙基，以形成结构式 (II)的化合物，其中R1、!?2、R3、R4、R5和R6如权利要求6中所定义。
【文档编号】C07K1/13GK104470991SQ201380028643
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年3月14日 优先权日:2012年5月30日
【发明者】吉 K., 辛赫 U., 鲁卡维什尼科夫 A., 比查姆 D., 黄 S-J., 简斯 M., 周 W., 贝利埃 J. 申请人:生命科技公司