血脑屏障穿梭体的制作方法

血脑屏障穿梭体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及结合血脑屏障上的受体(R/BBB)的血脑屏障穿梭体及其使用方法。
【专利说明】血脑屏障穿梭体

【技术领域】
[0001] 本发明涉及结合血脑屏障上的受体（R/BBB)的血脑屏障穿梭体及其使用方法。

【背景技术】
[0002] 神经疾病药物（例如具有低脑穿透的大生物治疗药物或小分子药物）的脑穿透， 受广泛的且不可渗透的血脑屏障（BBB)以及神经血管单元（NVU)中的其它细胞组分严格限 制。已经试验了许多克服该阻碍的策略，并且一种策略是利用在脑毛细血管内皮上表达的 内源性受体所介导的胞吞转运途径。已经针对这些受体设计了重组蛋白诸如单克隆抗体或 肽，以实现受体介导的生物治疗剂向脑的递送。但是，使脑摄取最大化、同时使脑内皮细胞 (BEC)内的错误分选（miss-sorting)以及在BEC中的某些细胞器（特别是导致生物治疗剂 的降解的细胞器）内的积累程度最小化的策略仍未得到探究。
[0003] 单克隆抗体和其它生物治疗剂在治疗中枢神经系统（CNS)的病理学中具有巨大 治疗潜力。但是，它们进入脑中的途径被BBB阻止。以前的研究已经阐明，非常小百分比（大 约0? 1% )的在血流中注射的IgG能够穿透进CNS隔室中（Felgenhauer，Klin. Wschr. 52 : 1158-1164(1974))。由于抗体在CNS内的低浓度，这必然会限制任何药理学作用。
[0004] 因此，需要使神经疾病药物穿过BBB的递送系统，以将药物有效地穿梭进脑中。


【发明内容】

[0005] 在第一方面，本发明提供了一种血脑屏障穿梭体，其包含脑效应物实体、接头和一 个结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中所述接头将所述效应物实体与所述结合血脑屏 障受体的单价结合实体偶联。
[0006] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体选自蛋白、多肽和肽。
[0007] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含选自以下的分子：血脑屏障受体配体、scFv、Fv、sFab、VHH，优选sFab。
[0008] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑受体选自转铁蛋白受 体、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、低密度脂蛋白受体相关的蛋白8、低密度脂蛋白受 体相关的蛋白1和结合肝素的表皮生长因子样生长因子，优选转铁蛋白受体。
[0009] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含一个针对转铁蛋白受体的scFab，更具体地是识别被包含在Seq. Id. No. 14、15 或16的氨基酸序列中的转铁蛋白受体内的表位的scFab。
[0010] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体选自神经疾病 药物、神经营养因子、生长因子、酶、细胞毒性剂、针对脑靶标的抗体、针对脑靶标的单克隆 抗体、针对脑祀标的肽。
[0011] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑靶标选自0 -分泌酶1、 A3、表皮生长因子、表皮生长因子受体2、Tau、磷酸化的Tau、载脂蛋白E4、a突触核蛋白、 a突触核蛋白的寡聚片段、CD20、亨廷顿蛋白、朊病毒蛋白、富含亮氨酸的重复序列激酶2、 帕金蛋白、早老蛋白2、Y分泌酶、死亡受体6、淀粉样蛋白前体蛋白、p75神经营养因子受体 和胱天蛋白酶6。
[0012] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体选自蛋白、多 肽和肽。
[0013] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑受体的单价结合 实体选自蛋白、多肽和肽，且所述单价结合实体通过所述接头偶联至所述脑效应物实体的 c-末端。
[0014] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体包含针对脑靶 标的全长抗体，优选全长IgG。
[0015] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑屏障穿梭体包含作为脑 效应物实体的全长IgG抗体、接头和一个作为结合血脑受体的单价结合实体的scFab，其中 所述scFab通过所述接头偶联至所述IgG抗体的重链之一的Fc部分的C-末端。
[0016] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对AP的全 长抗体。
[0017] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对A0的抗体包含：(a) H-CDR1，其包含Seq. Id. No. 5的氨基酸序列，（b)H_CDR2,其包含Seq. Id. No. 6的氨基酸序 列，（c)H_CDR3,其包含 Seq.Id.No.7 的氨基酸序列，（d)L-CDRl，其包含 Seq.Id.No.8 的 氨基酸序列，（6)1^-〇?2，其包含5叫.1(0〇.9的氨基酸序列，和江)1-〇)1?3，其包含5叫. Id. No. 10的氨基酸序列。
[0018] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对AP的抗体包含：包含 Seq. Id. No. 11的氨基酸序列的VH结构域和包含Seq. Id. No. 12的氨基酸序列的结构域。 [0019] 在血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对AP的全长 抗体，且所述单价结合实体是针对转铁蛋白受体的scFab，更具体地是识别被包含在Seq. Id. No. 14、15或16的氨基酸序列中的转铁蛋白受体内的表位的scFab。
[0020] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭 体的抗体的第一重链包含第一二聚化模块，且所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的 第二重链包含第二二聚化模块，从而允许所述两个重链的异源二聚化。
[0021] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，根据突出物进入孔洞（knobs into holes)策略，所述针对脑祀标的血脑屏障穿梭体的抗体的第一重链的第一二聚化模 块包含突出物，且所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第二重链的二聚化模块包含 孔洞。
[0022] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对磷酸化的 Tau的全长抗体，且所述单价结合实体是一个针对转铁蛋白受体的scFab。
[0023] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对a突触 核蛋白的全长抗体，且所述单价结合实体是一个针对转铁蛋白受体的scFab。
[0024] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述接头是肽接头，优选地是具 有至少25个氨基酸长度的氨基酸序列的肽，更优选地具有30-50个氨基酸的长度，特别地 所述接头是（G 4S)6G2或（G4S)4。
[0025] 本发明的下述3个实施方案涉及血脑屏障穿梭体，其中所述脑效应物实体是蛋 白、多肽或肽，前提条件是，所述脑效应物实体不是全长抗体，尤其全长IgG。
[0026] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含CH2-CH3 Ig实体和一个结合血脑屏障受体的sFab，其中所述sFab通过第二接 头偶联至CH2-CH3 Ig实体的C-末端。
[0027] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑屏障穿梭体包含脑效应 物实体、接头、CH2-CH3 Ig结构域、第二接头和一个结合血脑屏障受体的sFab,其中所述脑 效应物实体通过第一接头偶联至CH2-CH3Ig结构域的N-末端，且所述sFab通过第二接头 偶联至CH2-CH3 Ig结构域的C-末端。
[0028] 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述CH2-CH3 Ig实体是CH2-CH3 IgG实体。
[0029] 此外，本发明涉及编码本发明的血脑屏障穿梭体的分离的核酸、包含编码所述血 脑屏障穿梭体的分离的核酸的宿主细胞、和包含所述血脑屏障穿梭体的药物制剂。
[0030] 本发明的血脑屏障穿梭体可以用作药物，特别地，它可以用于治疗神经疾病例如 阿尔茨海默病。
[0031] 本发明的血脑屏障穿梭体可以用于运输所述脑效应物实体穿过血脑屏障。
[0032] 在一个特定实施方案中，本发明的血脑屏障穿梭体的IgG抗体的重链（其在Fc部 分的C-末端处偶联至scFab，所述scFab作为结合血脑屏障受体的单价结合实体）具有下 述结构：
[0033] ? IgG 重链，
[0034] ?接头，其将IgG重链的Fc部分的C-末端偶联至scFab的VL结构域的N-末端，
[0035] ? scFab的可变轻链结构域（VL)和C-k轻链结构域，
[0036] ?接头，其将scFab的C-k轻链结构域的C-末端偶联至scFab的VH结构域的 N-末端，
[0037] ? scFab抗体的可变重链结构域（VH)和IgG CH3重链结构域。
[0038] 在第二方面，本发明提供了一种运输脑效应物实体穿过血脑屏障的融合蛋白，所 述融合蛋白包含CH2-CH3 Ig实体、接头和一个针对血脑屏障受体的sFab，其中所述sFab通 过所述接头偶联至CH2-CH3 Ig实体的C-末端。
[0039] 在本发明的融合蛋白的一个特定实施方案中，本发明的融合蛋白进一步包含在 CH2-CH3 Ig实体的N-末端处的接头，以将所述脑效应物实体偶联至CH2-CH3 Ig实体的 N-末端。
[0040] 在本发明的融合蛋白的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体选自神经疾病药 物、神经营养因子、生长因子、酶、细胞毒性剂、选自scFv、Fv、scFab、Fab、VHH、F(ab'） 2的针 对脑靶标的抗体片段或肽。
[0041] 在本发明的融合蛋白的一个特定实施方案中，所述针对血脑屏障受体的sFab是 针对转铁蛋白受体的sFab，优选地是识别被包含在Seq. Id. No. 14、15或16的氨基酸序列中 的转铁蛋白受体内的表位的scFab。
[0042] 在本发明的融合蛋白的一个特定实施方案中，所述接头是肽接头，尤其是具有至 少15个氨基酸长度的氨基酸序列的肽，更优选地具有20-50个氨基酸的长度，最特别地所 述接头具有氨基酸序列（G4S)6G2(Seq. Id. No. 13)或（G4S)4(Seq. Id. No. 17)。
[0043] 在本发明的融合蛋白的一个特定实施方案中，所述CH2-CH3Ig实体是CH2-CH3 IgG实体。
[0044] 此外，本发明提供了一种编码本发明的融合蛋白的分离的核酸和包含编码本发明 的融合蛋白的核酸的宿主细胞。
[0045] 在第三方面，本发明提供了一种缀合物，其包含本发明的融合蛋白和脑效应物实 体，所述脑效应物实体通过接头偶联至本发明的融合蛋白的CH2-CH3Ig实体的N-末端。
[0046] 在本发明的缀合物的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体是神经营养因子， 且其中将所述神经营养因子偶联至CH2-CH3Ig实体的N-末端的接头是肽接头。
[0047] 此外，本发明提供了包含本发明的缀合物和药用载体的药物制剂，所述缀合物作 为药物的用途，尤其是所述缀合物用于治疗神经变性疾病、尤其是阿尔茨海默病的用途。

【专利附图】

【附图说明】
[0048] 图1:在实施例中使用的不同形式的血脑屏障穿梭体（融合蛋白）。1A:针对A3 的IgG(mAb31)。1B:针对TfR的单Fab(sFab)，其偶联至针对AP的IgG(mAb31)的Fc部分。 1C :针对TfR的双Fab (dFab)，其偶联至针对A 0的IgG (mAb31)的Fc部分。所述scFab结 构与IgG抗体的重链的C-末端融合。
[0049] 图2:融合蛋白对AP结构的结合性能。使用ELISA方案测量结合亲和力，所述 ELISA方案表明，所述Fab构建体已经保留A 0结合性能。mAb31-8D3构建体与A 0纤丝的 结合。尽管8D3(空心正方形）不会结合固定化的AP纤丝，但是mAb31-8D3-dFab(实心正 方形）、mAb31-8D3-sFab (空心三角形）和mAb31(实心三角形）以可比较的亲和力结合。
[0050] 图3:所述构建体对转铁蛋白受体（TfR)的结合性能。使用ELISA方案测量结合 亲和力，所述ELISA方案表明，仅Fab构建体结合转铁蛋白受体（TfR)，且双Fab构建体由 于二价结合模式而具有稍微更高的表观亲和力。mAb31-8D3构建体与mTfR的结合。尽管 mAb31(实心三角形）不会结合固定化的mTfR，但是mAb31-8D3-dFab (实心正方形）的结合 亲和力与8D3亲本抗体（空心正方形）的结合亲和力相当。单价构建体mAb31-8D3-sFab (空 心三角形）显示出中间结合亲和力。
[0051] 图4 :抗-A P单克隆抗体mAb31 (图4A)、单Fab mAb31 (与mAb31的C-末端融合 的单Fab)(图4B)和双Fab mAb31 (与mAb31的C-末端融合的双Fab)(图4C)的斑块染 色。将构建体注射进PS2APP小鼠（n = 3/构建体），单次静脉内给药10mg/kg，然后在给药 后8小时进行脑灌注。分析包括斑块结合的免疫组织化学和共焦显微术。数据表明，仅单 Fab-mAb31构建体能够穿过BBB并结合斑块。该图显示了得自所有动物的脑的一个代表性 区域。
[0052] 图5:显示了双Fab_mAb31构建体的定量。在所有3只治疗的动物的3个不同区域 (每种构建体共计9个区域）定量斑块和毛细血管染色。数据表明，仅双Fab-mAb31构建体 与mAb31相比存在毛细血管的增加。没有检测到在斑块处（在脑内）增加的双Fab-mAb31 水平。以l〇mg/kg给药后8h，mab31 (HEK对照）相对于双Fab_mab3的定量。
[0053] 图6:显示了单Fab_mAb31构建体的定量。在所有3只治疗的动物的3个不同区 域（每种构建体共计9个区域）定量斑块和毛细血管染色。数据表明，单Fab-mAb31构建 体与mAb31相比存在斑块的大量增加。荧光信号的定量指示，单Fab-mAb31与mAb31构建 体相比超过50倍的增加。单Fab-mAb31构建体与mAb31相比也存在毛细血管中的短暂染 色，从而指示穿过BBB。以10mg/kg给药后8h和以25mg/kg给药后24h，mab31 (HEK对照） 相对于单Fab_mab31的定量。
[0054] 图7 :2种不同剂量的抗-AP单克隆抗体mAb31和非常低剂量的单FabmAb31(与 mAb31的C-末端融合的单Fab)的斑块染色。将构建体注射进PS2APP小鼠（n = 3/构建体） 中，单次静脉内给药，然后在给药后的不同时间点进行脑灌注。分析包括斑块结合的免疫组 织化学和共焦显微术。数据表明，仅单Fab-mAb31构建体能够穿过BBB并结合斑块。对于 单Fab-mAb31构建体而言，脑暴露是非常快速的，并且斑块染色从单次施用持续超过至少1 周。
[0055] 图8 :用单Fab-mab31或双Fab-mAb31处理的TfR的细胞表面表达的定量。双 Fab-mAb31构建体对转铁蛋白受体（TfR)的细胞表面减量调节。将表达TfR的脑内皮细胞 与单Fab-mAb31构建体（图8A)或双Fab-mAb31构建体（图8B) -起温育24小时。仅双 Fab-mAb31构建体降低了细胞表面表达的TfR的水平。
[0056] 图9:用单Fab_mab31或双Fab_mAb31处理的TfR的体内细胞运输。在体内研究 毛细血管和斑块染色的早期时间点。sFab-MAb31 (图9A)和dFab-MAb31 (图9B)在注射后 15分钟将脑脉管系统染色，它们的分布没有差异。注射后8小时，sFab-MAb31达到实质并 将淀粉样蛋白斑块染色（箭头，图9C)，而dFab-MAb31停留在脑脉管系统内，类似于15分钟 时间点（图9D)。对于dFab-MAb31而言，在实质中没有检测到淀粉样蛋白斑块。
[0057] 图10:用单Fab_mab31或双Fab_mAb31处理的TfR的体内细胞运输。为了控 制在研究中使用的所有构建体的完整性，使用MAb31(图10A)、sFab-MAb31(图10B)或 dFab-MAB31(图10C)，进行18个月小鼠APP转基因脑冷冻切片的染色。图10D显示了对照 的结果。结果表明，所有3种构建体检测到转基因小鼠的脑中的淀粉样蛋白斑块。
[0058] 图11:用单Fab_mab31处理的TfR的体内细胞运输。对体内处理过的样品的高分 辨率共焦显微术表明，sFab-MAb31没有将脑毛细血管的腔侧染色，但是被包含在囊泡样结 构（其穿过内皮细胞的腔膜）内和内皮细胞胞质溶胶内。在图11中的箭头指示在内皮细 胞细胞核的近腔侧上含有sFab-MAb31构建体的囊泡。这些数据提示，sFab-MAb31可以进 入脑内皮细胞并穿过脉管系统和到达脑的实质空间内的淀粉样蛋白斑块（与图9A和C对 比）。
[0059] 图12:用双Fab_mab31处理的TfR的体内细胞运输。对体内处理过的样品的高分 辨率共焦显微术表明，dFab-MAb31没有将脑毛细血管的腔侧染色，但是被包含在囊泡样结 构（其穿过内皮细胞的腔膜）内和内皮细胞胞质溶胶内。在图12中的箭头指示在内皮细 胞细胞核的近腔侧上含有dFab-MAb31构建体的囊泡。这些数据提示，dFab-MAb31可以进 入脑内皮细胞，但是被捕集，不能穿过脉管系统，且因此不能到达脑的实质空间内的淀粉样 蛋白斑块（与图图9B和D对比）。
[0060] 图13:静脉内施用以后的脑暴露和斑块染色。图13A:将mAb31、dFab和sFab构 建体以10mg/kg静脉内地注射进PS2APP转基因动物，在注射后8小时将动物灌注和处死。 dFab与mAb31相比，没有检测到斑块染色的显著增加。对于sFab构建体，基于来自检测抗体 的在555nm的荧光强度，检测到比亲本mAb31高55倍的斑块染色。注射后8小时，mAb31 (图 13B)、dFab (图13C)和sFab (图13D)在皮质中的代表性免疫组织化学染色。dFab仅显示 微血管染色，而sFab广泛地将淀粉样蛋白斑块染色。图13E :证实了与2mg/kg和10mg/ kg mAb31相比，低剂量的sFab构建体（2. 66mg/kg)会快速地且显著地到达脑中的斑块。 sFab构建体的靶标啮合在注射后持续超过至少1周。免疫组织化学染色显示了 2mg/kg的 mAb31 (图13F)和2. 66mg/kg的sFab (图13G)在注射后7天的斑块染色。
[0061] 图14 :在通过14次每周静脉内注射治疗的、带有斑块的PS2APP小鼠中的慢性 研究的体内效力。分别对于低剂量mAb31、中剂量mAb31、低剂量sFab和中剂量sFab (图 14A-D)，显示了在研究结束时，与残余斑块结合的施用构建体的靶斑块结合。在斑块的免疫 组织化学染色以后，显示了皮质和海马的定量形态测定分析（图14E)。在4. 5个月龄时处 死的未治疗的动物的斑块负载被显示为在研究开始时的淀粉样变性的基线水平。与在媒介 物治疗的动物中观察到的进行性斑块形成相比，在用中剂量sFab治疗以后，斑块数目的显 著减少是显而易见的；减少的斑块形成的趋势甚至出现在低剂量sFab。因而，sFab构建体 显著减少了皮质和海马中的斑块数目。斑块尺寸的分析揭示了斑块数目的减少，对于小斑 块尺寸而言是最显著的。*P < 〇? 05, < 0? 01，< 0? 001。
[0062] 图15:具有与Fc C-端融合的TfR scFab片段的抗体多聚体没有诱导ADCC。通过 定量LDH释放，测量NK92介导的BA/F3小鼠红白血病细胞的杀死。仅多聚体构建体（其具 有结合TfR的Fab部分，呈"常规" "N-端至Fc"取向）诱导显著的ADCC，而呈相反取向的 脑穿梭构建体是沉默的。
[0063] 图16:针对转铁蛋白受体的scFab 8D3结合小鼠转铁蛋白受体的细胞外结构域中 的3个不同肽。通过抗体的化学发光检测，揭示了有3个氨基酸重叠的抗体8D3-15聚体肽 的结合，所述抗体在携带固定化的mTfR肽的CelluSpot载玻片上温育。框：被8D3结合的 肽 #373、374 和 376 (Seq. Id. No. 15、16 和 17)。

【具体实施方式】
[0064] 定义
[0065] "血脑屏障"或"BBB"是指外周循环与脑和脊髓之间的生理屏障，其由脑毛细血 管内皮质膜内的紧密连接部形成，从而建立限制分子（甚至非常小的分子如尿素（60道尔 顿））运输进脑中的紧密屏障。脑内的BBB、脊髓内的血液-脊髓屏障和视网膜内的血液-视 网膜屏障，是CNS内的相连毛细血管屏障，并且在本文中被统称为血脑屏障或BBB。BBB还 包括血液-CSF屏障（脉络丛），其中屏障由室管膜细胞而不是毛细血管内皮细胞构成。
[0066] 突出物进入孔洞二聚化模块和它们在抗体工程中的应用描述在：Carter P.; Ridgway J. B. B. ；Presta L. G. ：Immunotechnology, Volume 2, Numberl, 1996 年 2 月，第 73-73 页（1))。
[0067] "中枢神经系统"或"CNS"是指控制身体功能的神经组织的复合体，并且包括脑和 脊髓。
[0068] "血脑屏障受体"（本文中简写为"R/BBB"）是在脑内皮细胞上表达的细胞外膜连 接的受体蛋白，其能够将分子运输穿过BBB或者用于运输外源施用的分子。本文中R/BBB 的例子包括：转铁蛋白受体（TfR)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体（IGF-R)、低密度脂 蛋白受体（包括但不限于低密度脂蛋白受体相关的蛋白1(LRP1)和低密度脂蛋白受体相关 的蛋白8(LRP8))、和结合肝素的表皮生长因子样生长因子（HB-EGF)。本文中的一种示例性 的R/BBB是转铁蛋白受体（TfR)。
[0069] "脑效应物实体"是指要穿过BBB运输至脑的分子。效应物实体通常具有希望递送 至脑的特征性治疗活性。效应物实体包括神经疾病药物和细胞毒性剂例如肽、蛋白和抗体， 尤其是针对脑靶标的单克隆抗体或其片段。
[0070] "单价结合实体"是指能够特异性地且以单价结合模式与R/BBB结合的分子。本发 明的血脑穿梭和/或缀合物的特征在于存在单价结合实体的单个单元，即本发明的血脑穿 梭和/或缀合物包含单价结合实体的一个单元。所述单价结合实体包括但不限于蛋白、多 肽、肽和抗体片段，包括Fab、Fab'、Fv片段、单链抗体分子例如单链Fab、scFv。所述单价 结合实体可以是例如使用现有技术（如噬菌体展示或免疫接种）工程改造的支架蛋白。所 述单价结合实体还可以是肽。在某些实施方案中，所述单价结合实体包含CH2-CH3Ig结构 域和针对血脑屏障受体的单Fab (sFab)。所述sFab通过接头偶联至CH2-CH3 Ig结构域的 C-末端。在某些实施方案中，所述sFab是指转铁蛋白受体。
[0071] "单价结合模式"是指与R/BBB的特异性结合，其中单价结合实体和R/BBB之间的 相互作用通过一个单独表位而发生。由于单个表位相互作用点，单价结合模式会阻止R/BBB 的任何二聚化/多聚化。单价结合模式会阻止R/BBB的细胞内分选发生变化。
[0072] 术语"表位"包括能够特异性结合抗体的任何多肽决定簇。在某些实施方案中，表 位决定簇包括分子的化学活性表面分组（groupings)，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰 基，且在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征，和或特定的带电特性。表位是被 抗体结合的抗原区域。
[0073] "转铁蛋白受体"（"TfR"）是一种跨膜糖蛋白（具有约180, 000的分子量），其由 参与脊椎动物中的铁摄取的两个二硫键键合的亚基（各自的表观分子量为约90, 000)组 成。在一个实施方案中，本文中的TfR是人TfR,其包含例如在Schneider等.Nature 311: 675-678(1984)中的氨基酸序列。
[0074] 本文中使用的"神经疾病"是指影响CNS和/或具有在CNS中的病因的疾病或病 症。示例性的CNS疾病或病症包括、但不限于：神经病、淀粉样变性、癌症、眼的疾病或病症、 病毒或微生物感染、炎症、缺血、神经变性疾病、癫痫发作、行为疾病和溶酶体贮积病。为了 本申请的目的，将理解CNS包括眼，其通常通过血液-视网膜屏障与身体的其它部分隔离。 神经疾病的具体例子包括、但不限于：神经变性疾病（包括、但不限于，雷维小体病（Lewy body disease),脊髓灰质炎后综合征（postpoliomyelitis syndrome),夏伊-德雷格综合 征（Shy-Draeger syndrome)，撤揽体脑桥小脑萎缩（olivopontocerebellar atrophy)，帕 金森病（帕金蛋白son' s disease),多系统萎缩（multiple system atrophy),纹状体 黑质变性（striatonigral degeneration), Tau 病变（tauopathy)(包括、但不限于，阿尔 茨海默病（Alzheimer disease)和核上性麻搏（supranuclear palsy))，|元病毒病（prion disease)(包括、但不限于，牛海绵状脑病（bovine spongiform encephalopathy)，痒病 (scrapie)，克-雅综合征（Creutzfeldt-Jakob syndrome)，库鲁病（kuru)，格-施-沙 病（Gerstmann-Straussler-Scheinker disease),慢性消耗性疾病（chronic wasting disease),和致命性家族性失眠症（fatal familial insomnia)),延髓性麻搏（bulbar palsy),运动神经兀病（motor neuron disease),和 heterodegenerative 疾病（包括、 但不限于卡纳范病（Canavan disease)，亨廷顿病（Huntington' s disease)，神经兀 錯样脂褐素沉积症（neuronal ceroid-lipofuscinosis)，亚历山大病（Alexander' s disease),图雷特综合征（Tourette' s syndrome),门克斯扭结发综合征（Menkes kinky hair syndrome),科凯恩综合征（Cockayne syndrome),哈勒沃登-施帕茨综合 征（Halervorden-Spatz syndrome),拉福拉病（lafora disease),雷特综合征（Rett syndrome),肝豆状核变性（hepatolenticular degeneration),莱施-奈恩综合征 (Lesch-Nyhan syndrome),和翁-隆综合征（Unverricht-Lundborg syndrome))，痴呆（包 括、但不限于，皮克病（Pick' s disease),和脊髓小脑性共济失调（spinocerebellar ataxia))，癌症（例如CNS和/或脑的癌症，包括源自身体其它位置的癌症的脑转移灶）。
[0075] "神经疾病药物"是治疗一种或多种神经疾病的药物或治疗剂。本发明的神经疾病 药物包括，但不限于，小分子化合物，抗体，肽，蛋白质，一种或多种CNS靶标的天然配体，一 种或多种CNS靶标的天然配体的修饰形式，适体，抑制性核酸（即，小的抑制性RNA(siRNA) 和短发夹RNA (shRNA))，核酶，和小分子，或上述中任何一种的活性片段。本发明的示例性神 经疾病药物描述于此并且包括、但不限于：抗体，适体，蛋白质，肽，抑制性核酸和小分子和 上述中任何一种的活性片段，它们是它们本身或特异性识别和/或作用于（即，抑制，活化， 或检测）CNS抗原或靶标分子如，但不限于，淀粉样蛋白前体蛋白或其部分，淀粉样蛋白3， 3 -分泌酶，Y -分泌酶，tau，a -突触核蛋白，帕金蛋白，亨廷顿蛋白，DR6,早老蛋白，ApoE, 神经胶质瘤或其它CNS癌症标志物，和神经营养因子。神经疾病药物的非限制性例子以及 可以使用它们治疗的对应疾病：脑衍生的神经营养因子（BDNF)，慢性脑损伤（神经发生）， 成纤维细胞生长因子2 (FGF-2)，抗-表皮生长因子受体脑癌，（EGFR)-抗体，神经胶质细胞 系衍生的神经因子，帕金森病（⑶NF)，脑衍生的神经营养因子（BDNF)，肌萎缩性侧索硬化， 抑郁症，溶酶体酶，脑的溶酶体贮积疾病，睫状神经营养因子（CNTF)，肌萎缩性侧索硬化，神 经调节蛋白-1，精神分裂症，抗-HER2抗体（例如曲妥珠单抗），来自HER2-阳性癌症的脑 转移。
[0076] "成像剂"是这样的化合物：其具有允许它的存在和/或位置被直接或间接检测到 的一种或多种性质。这样的成像剂的例子包括蛋白和小分子化合物，其掺入使检测成为可 能的标记实体。
[0077] "CNS抗原"或"脑靶标"是在CNS (包括脑）中表达的抗原和/或分子，其可以被抗 体或小分子所靶向。这样的抗原和/或分子的例子包括、但不限于4 -分泌酶1 (BACE1)、 淀粉样蛋白0 (AP )、表皮生长因子受体（EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、Tau、载脂 蛋白E4(ApoE4)、a-突触核蛋白、⑶20、亨廷顿蛋白、朊病毒蛋白（PrP)、富含亮氨酸的重复 序列激酶2(LRRK2)、帕金蛋白、早老蛋白1、早老蛋白2、Y分泌酶、死亡受体6(DR6)、淀粉 样蛋白前体蛋白（APP)、p75神经营养因子受体（p75NTR)和胱天蛋白酶6。在一个实施方 案中，所述抗原是BACE1。
[0078] 本文中的"天然序列"蛋白质是指包含在自然中发现的蛋白质的氨基酸序列的蛋 白质，包括所述蛋白质的天然存在的变体。本文中使用的该术语包括从其天然来源分离的 蛋白质或重组制备的蛋白质。
[0079] 术语"抗体"在本文中以最宽的含义使用，并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗 体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体（例如、双特异性抗体）和抗体片段，只要它 们表现出期望的生物活性即可。
[0080] "抗体片段"在本文中包括保持结合抗原的能力的完整抗体的一部分。抗体片段的 例子包括Fab、Fab '、F (ab') 2和Fv片段；双体；线性抗体；单链抗体分子例如单链Fab、 scFv和由多个抗体片段形成的多特异性抗体。"单链Fab"形式例如描述在Hust M.等.BMC Biotechnol. 2007 年 3 月 8 日；7 :14 中。
[0081] 本文中使用的术语"单克隆抗体"是指从一群基本上同质的抗体中获得的抗体， 即除了可能的变体（该变体可以在产生单克隆抗体的过程中出现，此类变体通常少量存 在）外，构成群体的个体抗体是相同的和/或结合相同的表位。相比于通常包括针对不同 决定簇（表位）的不同抗体的多克隆抗体制备物，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定 簇。除它们的特异性外，单克隆抗体的优势在于它们不受其它免疫球蛋白的污染。修饰 语"单克隆"表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定 方法来生产抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可通过最先由Kohler等，Nature, 256 :495(1975)描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法（参见，例如，美国 专利号4, 816, 567)制备。"单克隆抗体"也可以使用例如在Clackson等，Nature, 352 : 624-628(1991)和 Marks 等，J. Mol. Biol.，222 :581-597 (1991)中所述的技术从噬菌体抗 体文库分离。本文中的单克隆抗体的具体实例包括嵌合抗体、人源化抗体和人抗体，包括 它们的抗原结合片段。单克隆抗体在本文中具体地包括："嵌合"抗体（免疫球蛋白），其 中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相 应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类 的抗体中的相应序列相同或同源；以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活 性（美国专利号4,816,567以〇1'1^8〇11等，？1'〇(3.似七4〇3(1.5(^^54(美国国家科学院学 报）81:6851-6855 (1984))。本文感兴趣的嵌合抗体包括"灵长类源化（primatized)"抗 体，该抗体包含来源于非人灵长类动物（例如旧大陆猴（Old World Monkey),如狒狒、恒河 猴（rhesus)或食蟹猴（cynomolgus monkey))的可变结构域抗原-结合序列以及人恒定区 序列（美国专利号5, 693, 780)。
[0082] 非人（例如鼠）抗体的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的 序列的嵌合抗体。在大部分情况中，人源化抗体是人免疫球蛋白（受体抗体），其中受体高 变区的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种（供体抗体）（诸如小鼠、大鼠、 兔或非人灵长类动物）的高变区残基替换。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区（FR) 残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有 发现的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含基本 上全部的至少一个、典型地两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变区对应于非人免 疫球蛋白的高变区，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的那些，不同之处在于如 上所述的FR置换。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋 白恒定区典型地是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节见例如Jones等，自然（Nature)321 : 522-525(1986) ;Riechmann 等，自然（Nature)332:323-329(1988) ; &Presta，Curr. Op.Struct. Biol. 2 :593_596(1992)。
[0083] "人抗体"在本文中是包含这样的氨基酸序列结构的抗体，所述氨基酸序列结构与 可获得自人B细胞的抗体的氨基酸序列结构对应，并且包括人抗体的抗原结合片段。可以 通过多种技术鉴定或制备这样的抗体，所述技术包括、但不限于：通过在免疫后能够在不存 在内源免疫球蛋白生产的情况下生产人抗体的转基因动物（例如，小鼠）生产（参见，例 如，Jakobovits 等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA，90 :2551 (1993) ;Jakobovits 等，Nature, 362 :255_258 (1993) ;Bruggermann 等，Year in Tmmuno. , 7 :33 (1993);和美国专利号 5, 591，669, 5, 589, 369和5, 545, 807));从表达人抗体或人抗体片段的噬菌体展示文库选 择（参见，例如，McCafferty等，Nature 348:552-553(1990) ;Johnson等，Current Opinion in Structural Biology 3:564-571(1993) ;Clackson 等，Nature, 352:624-628 (1991); Marks等，J.Mol.Biol. 222 :581-597(1991) ;Griffith等，EMBO J. 12:725-734(1993);美国 专利号5, 565, 332和5, 573, 905);通过体外活化的B细胞生成（参见美国专利5, 567, 610 和5, 229, 275);和分离自生产人抗体的杂交瘤。
[0084] "多特异性抗体"在本文中是对至少两个不同的表位具有结合特异性的抗体。示例 性多特异性抗体可以结合R/BBB和脑抗原两者。多特异性抗体可以被制备成全长抗体或抗 体片段（例如F(ab' )2双特异性抗体）。也预期有改造的具有两个、三个或更多个（例如 四个）功能性抗原结合位点的抗体（参见，例如，美国申请号US 2002/0004587 Al，Miller 等）。多特异性抗体可以被制备成全长抗体或抗体片段。
[0085] 本文中的抗体包括具有改变的抗原结合或生物学活性的"氨基酸序列变体"。这样 的氨基酸变化的例子包括具有增强的对抗原的亲和力的抗体（例如"亲和力成熟"抗体）， 和具有改变的Fc区（如果存在的话）的抗体，例如具有改变的（增加或减小的）依赖抗体 的细胞介导的细胞毒性（ADCC)和/或依赖补体的细胞毒性（CDC)的抗体（参见，例如，W0 00/42072, Presta，L.和W0 99/51642, Iduosogie等）；和/或具有增加的或减小的血清半 衰期的抗体（参见，例如，W000/42072, Presta，L.)。
[0086] "亲和力修饰的变体"具有一个或多个被置换的亲本抗体的高变区或框架残基（例 如亲本嵌合、人源化或人抗体的），其改变（增加或减小）亲和力。在一个实施方案中，根据 本发明，所得的被选用于进一步开发的变体将具有减小的对R/BBB的亲和力。产生这种置 换变体的简便方式是使用噬菌体展示。简言之，将若干个高变区位点（例如6-7个位点） 突变以在每个位点产生所有可能的氨基置换。因此产生的抗体变体以单价形式从丝状噬菌 体颗粒展示为与包装在每个颗粒内的M13的基因III产物的融合体（fusion)。然后对噬菌 体展示的变体的生物学活性（例如结合亲和力）进行筛选。为了鉴定用于修饰的候选高变 区位点，可以进行丙氨酸扫描诱变以鉴别显著有助于抗原结合的高变区残基。可替换地，或 另外地，可能有利的是分析抗原-抗体复合物的晶体结构从而鉴别抗体及其靶标间的接触 点。根据本文所述的技术，这样的接触残基和邻近残基是置换的候选物。在这样的变体产 生后，对一组变体进行筛选，并且可以选择具有改变的亲和力的抗体用于进一步的开发。 [0087] 本文中的抗体可以是"糖基化变体"以使与Fc区相连的任何糖（如果存在的 话）被改变。例如，具有缺乏与抗体的Fc区偶联的岩藻糖的成熟糖结构的抗体描述于美 国专利申请号 US 2003/0157108 (Presta，L.)中。也参见 US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co. , Ltd)。在与抗体的Fc区连接的糖中具有平分型N-乙酰葡糖胺（GlcNAc)的 抗体引用在 W0 2003/011878(Jean-Mairet 等）和美国专利号 6,602,684(Umana 等）中。 在与抗体的Fc区连接的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体在W0 1997/30087, Patel 等中被报道。也参见 W0 1998/58964(Raju，S.)和 W0 1999/22764(Raju，S.)，其涉及具 有改变的与其Fc区连接的糖的抗体。也参见US 2005/0123546 (Umana等），其描述了具 有修饰的糖基化的抗体。术语"高变区"当在本文中使用时是指抗体的负责抗原结合的 氨基酸残基。高变区包含来自"互补决定区"或"CDR"的氨基酸残基（例如轻链可变结 构域中的残基24-34 (L1)、50-56(L2)和89-97 (L3)和重链可变结构域中的31-35 (H1)、 50_65(H2)和95-102 (H3) ;Kabat 等，免疫学感兴趣的蛋白的序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第 5 版?公众健康服务（Public Health Service)，国立卫 生研究所（National Institutes of Health)，Bethesda，MD. (1991))和/或来自"高变环" 的那些残基（例如轻链可变结构域中的残基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重链 可变结构域中的26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3) ;Chothia和Lesk，分子生物学杂志 (J. Mol. Biol.) 196 :901-917 (1987))。"框架"或"FR"残基是不同于本文所定义的高变区残 基的那些可变结构域残基。
[0088]"全长抗体"是这样的抗体，其包含抗原-结合可变区以及轻链恒定结构域（CL)和 重链恒定结构域，CH1，CH2和CH3。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域（例如人天然序 列恒定结构域）或其氨基酸序列变体。
[0089]"裸抗体"是没有缀合异源分子（如细胞毒性实体、聚合物或放射性标记）的抗体 (如本文所定义的）。
[0090] 抗体"效应子功能"指那些可归因于抗体的Fc区（天然序列Fc区或氨基酸序列 变体Fc区）的生物学活性。抗体效应子功能的例子包括：Clq结合，补体依赖性细胞毒性 (CDC)，Fc受体结合，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)等。在一个实施方案中，本文 中的抗体基本上缺少效应子功能。
[0091] 术语"抗体依赖性的细胞的细胞毒性（ADCC) "是指在有效应细胞存在下抗体对人 靶细胞的裂解。术语"补体依赖性的细胞毒性（CDC)"指由补体因子Clq与大多数IgG抗 体亚类的Fc部分结合而起始的过程。Clq与抗体的结合由在所谓的结合位点的定义的蛋 白-蛋白相互作用所导致。这样的Fc部分结合位点是现有技术中已知的。这些Fc部分结 合位点例如特征在于氨基酸L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329 (根据 Kabat的EU索引编号）。亚类IgGl、IgG2和IgG3的抗体通常显示包括Clq和C3结合的补 体激活，而IgG4不激活补体系统并且不结合Clq和/或C3。
[0092] 取决于其重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将全长抗体分配到不同的"类别"。 有五个主要类别的全长抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的数个可以进一步被 划分为"亚类"（同种型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类别的 抗体的重链恒定结构域分别被称为a、S、 e、Y和y。不同类别的免疫球蛋白的亚基结 构和三维构型是已知的。术语"重组抗体"，当在本文中使用时，是指这样的抗体（例如嵌 合、人源化或人抗体或其抗原结合片段），该抗体由包含编码所述抗体的核酸的重组宿主细 胞表达。用于生产重组抗体的"宿主细胞"的例子包括：（1)哺乳动物细胞，例如，中国仓 鼠卵巢（CH0)、C0S、骨髓瘤细胞（包括Y0和NS0细胞），幼仓鼠肾细胞（BHK)，Hela细胞和 Vero细胞；（2)昆虫细胞，例如，sf9, sf21和Tn5 ; (3)植物细胞，例如属于烟草属（genus Nicotiana)的植物（例如烟草（Nicotiana tabacum)) ;(4)酵母细胞，例如，属于酵母属 (genus Saccharomyces)的那些（例如酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae))或属于曲 霉属（genus Aspergillus)的那些（例如黑曲霉（Aspergillus niger)) ; (5)细菌细胞，例 如大肠杆菌（Escherichia, coli)细胞或枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)细胞等。
[0093] 本文中使用的"特异性结合"或"特异地结合"是指抗体选择性地或优先地结合抗 原。通常使用标准测定，如斯卡查德分析或表面等离子共振技术（例如使用B1ACORE? )确定结合亲和力。
[0094] 与参照抗体"结合相同表位的抗体"是指这样的抗体，其在竞争测定中阻断50%以 上的所述参照抗体与其抗原的结合，反之，参照抗体在竞争测定中阻断50%以上的该抗体 与其抗原的结合。
[0095] 术语"细胞毒性剂"用在本发明中指抑制或防止细胞功能和/或引起细胞 死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括、但不限于：放射性同位素（例如，At211，1131， 1125, Y90, Rel86, Rel88, Sml53, Bi212, P32, Pb212 和 Lu 的放射性同位素）；化疗剂或 药物（例如，甲氨蝶呤（methotrexate),阿霉素（adriamicin)，长春花生物碱（vinca alkaloids)(长春新喊（vincristine)，长春喊（vinblastine)，依托泊苷（etoposide)), 多柔比星（doxorubicin),美法仑（melphalan)，丝裂霉素（mitomycin) C，苯丁酸氮芥 (chlorambucil),柔红霉素（daunorubicin)或其它嵌入剂）；生长抑制剂；酶及其片段如核 酸水解酶；抗生素；毒素如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物起源的酶促活性毒素，包 括其片段和/或变体。
[0096] 试剂例如药物制剂的"有效量"是指在需要的剂量和时间阶段有效获得所需的治 疗或预防结果的量。
[0097] 术语"Fc区"在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区域，所述区域包含恒定 区的至少一部分。Fc区包含免疫球蛋白的CH2和CH3结构域。该术语包括天然序列Fc区 和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或Pr 〇230延伸至重链的羧 基端。但是，Fc区的C端赖氨酸（Lys447)可以存在或可以不存在。除非另外说明，Fc区 或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，其也被称为EU索引，如在Kabat等， Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫学感兴趣的蛋白质的序列）， 第5版.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD，1991 中 所述。"框架"或"FR"是指除高变区（HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR 通常由以下四个FR结构域组成：FR1，FR2, FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常以下列顺 序出现在 VH(或 VL)中：FR1-H1 (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。
[0098] 本文中使用的术语"CH2-CH3 Ig实体"是指从免疫球蛋白CH2或CH3结构域衍生 出的蛋白实体。"CH2-CH3 Ig实体"包含2个形成二聚体的"CH2-CH3"多肽。所述免疫球 蛋白可以是186、1§4、1 §0、1§￡或1§11。在一个实施方案中，所述〇12-〇13以实体衍生自 IgG免疫球蛋白，且在本文中被称作"CH2-CH3 IgG实体"。该术语包括CH2-CH3结构域的 天然序列和变体CH2-CH3结构域。在一个实施方案中，所述"CH2-CH3 Ig实体"衍生自人 重链CH2-CH3 IgG结构域，所述结构域从Cys226或从Pr〇230延伸至重链的羧基端。但是， Fc区的C-端赖氨酸（Lys447)可以存在或可以不存在。除非在本文中另外说明，CH2-CH3 结构域区域或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，其也被称为EU索引，如在 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫学感兴趣的蛋白质 的序列），第 5版.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda， MD，1991中所述。
[0099] "缀合物"是与一个或多个异源分子缀合的本发明的融合蛋白，所述异源分子包 括、但不限于标记、神经疾病药物或细胞毒性剂。
[0100] 本文中使用的"接头"是指化学接头或单链肽接头，其将血脑屏障穿梭体和/或融 合蛋白和/或本发明的缀合物的不同实体共价地连接。例如，所述接头将脑效应物实体与 单价结合实体连接。例如，如果单价结合实体包含CH2-CH3 Ig实体和针对血脑屏障受体的 sFab，那么所述接头将sFab与CH3-CH2 Ig实体的C-末端连接。将脑效应物实体与单价结 合实体连接的接头（第一接头）和将sFab与CH2-CH3 Ig结构域的C-末端连接的接头（第 二接头）可以相同或不同。
[0101] 可以使用单链肽接头，其包含1-20个通过肽键连接的氨基酸。在某些实施方案 中，所述氨基酸选自2种天然存在的氨基酸。在某些其它实施方案中，所述氨基酸中的一个 或多个选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。在其它实施方案中，所 述接头是化学接头。在某些实施方案中，所述接头是具有至少25个氨基酸长度的氨基酸序 列的单链肽，优选地具有32-50个氨基酸的长度。在一个实施方案中，所述接头是（GxS)n， 其中G =甘氨酸，S =丝氨酸（x = 3、n = 8、9或10且m = 0、l、2或3)或（x = 4和n = 6、7或8且m = 0、1、2或3),优选地，其中x = 4，n = 6或7且m = 0、1、2或3,更优选地， 其中x = 4，n = 7且m=2。在一个实施方案中，所述接头是（G4S)4(Seq. Id. No. 17)。在一 个实施方案中，所述接头是（G4S)6G2(Seq. Id.No. 13)。
[0102] 可以使用多种化学接头进行缀合。例如，使用多种双功能的蛋白偶联剂诸如N-琥 珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫）丙酸酯（STOP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基） 环己烷-1-甲酸酯（SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷（IT)、亚胺酯的双功能衍生物（诸如己二亚 氨酸二甲酯HC1)、活性酯（诸如辛二酸二琥珀酰亚胺酯）、醛（诸如戊二醛）、二-叠氮基化 合物（诸如双（对叠氮基苯甲酰基）己烷二胺）、二-重氮鎗衍生物（诸如二_(对重氮鎗 苯甲酰基）_乙二胺）、二异氰酸酯（诸如甲苯2,6_二异氰酸酯）和双活性的氟化合物（诸 如1，5-二氟-2,4-二硝基苯），可以缀合单价结合实体或融合蛋白和脑效应物实体。所述接 头可以是"可切割的接头"，从而促进效应物实体在递送至脑以后的释放。例如，可以使用酸 不稳定的接头、肽酶敏感的接头、光不稳定的接头、二甲基接头或含有二硫键的接头（Chari 等，Cancer Res. 52 :127-131 (1992);美国专利号 5, 208, 020)。
[0103] 共价缀合可以直接进行或通过接头进行。在某些实施方案中，直接缀合通过构建 蛋白融合体进行（即，通过编码针对R/BBB的单价结合实体和效应物实体的两种基因的基 因融合并且表达为单一蛋白）。在某些实施方案中，直接缀合通过在针对R/BBB的单价结 合实体的两部分之一上的反应基团与脑效应物实体上的对应基团或接受体之间形成共价 键进行。在某些实施方案中，直接缀合通过将要缀合的两种分子中的一种进行修饰（即基 因修饰）而进行，从而包括在适当条件下形成与要缀合的其它分子的共价连接的反应基团 (作为非限制性例子，巯基或羧基）。作为一个非限制性例子，可以引入具有期望的反应基 团（即，半胱氨酸残基）的分子（即，氨基酸），例如，引入到针对R/BBB抗体的单价结合实 体中，并且与神经药物形成二硫键。使核酸与蛋白共价缀合的方法也是本领域已知的（即， 光交联，参见，例如，Zats印in等? Russ. Chem. Rev?(俄罗斯化学综述）74 :77-95 (2005))。 还可以使用多种接头进行缀合。例如，使用多种双功能的蛋白偶联剂诸如N-琥珀酰亚胺 基-3_(2-吡啶基二硫）丙酸酯（STOP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基）环己 烷-1-甲酸酯（SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷（IT)、亚胺酯的双功能衍生物（诸如己二亚氨酸 二甲酯HC1)、活性酯（诸如辛二酸二琥珀酰亚胺酯）、醛（诸如戊二醛）、二-叠氮基化合 物（诸如双（对叠氮基苯甲酰基）己烷二胺）、二-重氮鎗衍生物（诸如二_(对重氮鎗苯 甲酰基）_乙二胺）、二异氰酸酯（诸如甲苯2,6_二异氰酸酯）和双活性的氟化合物（诸 如1，5-二氟-2,4-二硝基苯），可以缀合单价结合实体和效应物实体。也可以使用包含通 过肽键连接的1-20个氨基酸的肽接头。在某些这样的实施方案中，氨基酸选自20种天然 存在的氨基酸。在某些其它这样的实施方案中，一个或多个氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯 氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。接头可以是"可切割的接头"，从而促进效应物实体在 递送至脑后的释放。例如，可以使用酸不稳定的接头、肽酶敏感的接头、光不稳定的接头、 二甲基接头或含有二硫键的接头（Chari等，Cancer Res. 52 :127-131 (1992);美国专利号 5, 208, 020)。
[0104] "标记"是与本文中的融合蛋白偶联并被用于检测或成像的标志物。这样的标记的 例子包括：放射性标记、荧光团、生色团或亲和标签。在一个实施方案中，标记是用于医疗成 像的放射性标记，例如tc99m或1123,或用于核磁共振（NMR)成像（也被称为磁共振成像， mri)的自旋标记，如又有碘-123,碘-131，铟-111，氟-19,碳-13,氮-15,氧-17,钆，锰，铁 等。"个体"或"受试者"是哺乳动物。哺乳动物包括、但不限于，家养动物（例如，牛，羊，猫， 狗和马），灵长类动物（例如，人和非人灵长类动物如猴），兔，以及啮齿类动物（例如，小鼠 和大鼠）。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
[0105] "分离的"抗体是这样的抗体，其已经与其天然环境的组分分离。在某些实施方 案中，将抗体纯化至超过95%或99%纯度，如通过例如电泳（例如，SDS-PAGE，等电聚焦 (IEF)，毛细管电泳）或层析（例如，离子交换或反相HPLC)确定的。对于用于评估抗体纯 度的方法的综述，参见，例如，Flatman 等，J. Chromatogr. B 848 :79_87 (2007)。
[0106] 术语"包装说明书"用于指常规地包含在治疗性产品的商业包装中的说明书，其含 有关于适应症、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌症和/或关于使用此类治疗性产品的警告 的信息。
[0107] 术语"药物制剂"指这样的制剂，其以允许包含在其中的活性成分的生物学活性 有效的形式存在，并且不包含对被施用所述制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外的成 分。
[0108] "药用载体"是指药物制剂中不同于活性成分的成分，其对受试者是无毒的。药用 载体包括、但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
[0109] 本文中使用的"治疗（treatment)"（及其语法变化如"治疗（treat)"或"治疗 (treating) "）指在尝试改变待治疗的个体的天然进程中的临床干预，并且可以为了预防或 在临床病理学的进程中进行。治疗的理想效果包括、但不限于防止疾病发生或复发，缓和征 状，消除疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，降低疾病进展速率，改善或减轻疾 病状态，和征状缓解或改善的预后。在某些实施方案中，将本发明的抗体用于延缓疾病的发 生或减缓疾病的进展。
[0110] 组合物和方法
[0111] 本发明的方法和制品使用，或包括，结合R/BBB的血脑屏障穿梭体和/或融合蛋 白。要用于生产或筛选单价结合实体的R/BBB抗原可以是，例如，包含所需表位的可溶形式 的或其部分（例如胞外结构域）。可替换地，或另外地，在其细胞表面表达BBB-R的细胞可 以用于产生或筛选单价结合实体。可用于生产单价结合实体的R/BBB的其它形式对于本领 域技术人员将是明显的。本文中的R/BBB的例子包括转铁蛋白受体（TfR)、胰岛素受体、胰 岛素样生长因子受体（IGF-R)、低密度脂蛋白受体相关的蛋白1(LRP1)和LRP8和结合肝素 的表皮生长因子样生长因子（HB-EGF)。
[0112] 根据本发明，选择针对R/BBB的"单价结合"实体（例如针对TfR的单价结合实 体），这基于本文中证实此种单价结合实体显示提高的CNS(例如，脑）摄取的数据。为 了鉴别此种结合实体，用于测量单价结合模式的多种测定是可用的，其包括、但不限于： Scatchard测定和表面等离子体共振技术（例如使用B1ACORE? )和本文描述的体内研 究。
[0113] 因而，本发明提供了制备可用于将脑效应物实体（例如神经疾病药物）运输穿过 血脑屏障的单价结合实体的方法，所述方法包括：从针对R/BBB的单价结合部分集合中选 择单价结合实体，因为它具有对R/BBB的单价结合模式。所述单价结合模式确保某些R/BBB 的有效BBB穿过，但是不会干扰受体正常细胞内筛选。
[0114]对于神经病疾病，可以选择作为镇痛药的神经药物，包括、但不限于，麻 醉药/阿片类镇痛药（即，吗啡，芬太尼（fentanyl)，丙碘酮（hydrocodone)，哌 替陡（meperidine)，美沙酮（methadone)，轻吗啡酮（oxymorphone)，喷他佐辛 (pentazocine)，丙氧芬（propoxyphene)，曲马朵（tramadol)，可待因（codeine)和 轻可酮（oxycodone))，非留类抗炎药（NSAID)(即，布洛芬（ibuprofen)，萘普生 (naproxen)，双氯芬酸（diclofenac)，二氟尼柳（diflunisal)，依托度酸（etodolac)， 非诺洛芬（fenoprofen)，氟比洛芬（flurbiprofen)，卩引哚美辛（indomethacin)，酮 咯酸（ketorolac)，甲芬那酸（mefenamic acid)，美洛昔康（meloxicam)，萘 丁美酮 (nabumetone)，奥沙普秦（oxaprozin)，卩比罗昔康（piroxicam)，舒林酸（sulindac)和托 美丁（tolmetin))，皮质类甾醇（即，可的松（cortisone)，泼尼松（prednisone)，泼尼松 龙（prednisolone)，地塞米松（dexamethasone)，甲泼尼龙（methylprednisolone)和去 炎松（triamcinolone))，抗偏头痛剂（即，sumatriptin，阿莫曲普坦（almotriptan)，夫 罗曲普坦（frovatriptan)，舒马普坦（sumatriptan)，利扎曲普坦（rizatriptan)，依来 曲普坦（eletriptan)，佐米曲普坦（zolmitriptan)，双氢麦角胺（dihydroergotamine)， 依来曲普坦（eletriptan)和麦角胺（ergotamine))，醋氨酚（acetaminophen)，水杨酸 盐（即，阿司匹林（aspirin)，水杨酸胆碱（choline salicylate)，水杨酸镁（magnesium salicylate)，二氟尼柳（diflunisal)和双水杨酯（salsalate))，抗惊厥药（S卩，卡 马西平（carbamazepine)，氯硝西泮（clonazepam)，加巴喷丁（gabapentin)，拉莫三嗪 (lamotrigine)，普瑞巴林（pregabalin)，噻加宾（tiagabine)和托卩比酯（topiramate))， 麻醉药（g 卩，异氟醚（isoflurane)，三氯乙烯（trichloroethylene)，氟焼（halothane)， 七氣焼（sevof lurane)，苯佐卡因（benzocaine)，氣普鲁卡因（chloroprocaine)， 可卡因（cocaine)，环美卡因（cyclomethycaine)，二甲卡因（dimethocaine)，丙 氧卡因（propoxycaine)，普鲁卡因（procaine)，奴佛卡因（novocaine)，丙美卡因 (proparacaine)，丁卡因（tetracaine)，|5可替卡因（articaine)，布 t匕卡因（bupivacaine)， 卡替卡因（carticaine)，辛可卡因（cinchocaine)，依替卡因（etidocaine)，左布比 卡因（levobupivacaine)，利多卡因（lidocaine)，甲脈卡因（mepivacaine)，脈罗 卡因（piperocaine)，丙胺卡因（prilocaine)，罗脈卡因（ropivacaine)，三甲卡因 (trimecaine)，始鮮毒素（saxitoxin)和河膝毒素（tetrodotoxin))，和 cox-2-抑制 剂（即，塞来昔布（celecoxib)，罗非昔布（rofecoxib)和伐地考昔（valdecoxib))。对 于伴有眩晕的神经疾病，可以选择作为抗眩晕剂的神经药物，其包括、但不限于，美克 洛嗪（meclizine)，苯海拉明（diphenhydramine)，异丙嗪（promethazine)和地西泮 (diazepam)。对于伴有恶心的神经疾病，可以选择作为抗恶心剂的神经药物，其包括、但不 限于，异丙嗪（promethazine)，氯丙嗪（chlorpromazine)，丙氯拉嗪（prochlorperazine)， 曲美节胺（trimethobenzamide)和甲氧氯普胺（metoclopramide)。对于神经变性疾病， 可以选择是生长激素或神经营养因子的神经药物；实例包括、但不限于脑源性神经营养 因子（BDNF)，神经生长因子（NGF)，神经营养因子-4/5,成纤维细胞生长因子（FGF)-2和 其它FGF，神经营养因子（NT)-3,促红细胞生成素（EP0)，肝细胞生长因子（HGF)，表皮生 长因子（EGF)，转化生长因子（TGF)-a，TGF-爲，血管内皮生长因子（VEGF)，白介素-1 受体拮抗剂（IL-lra)，睫状神经营养因子（CNTF)，神经胶质源性神经营养因子（GDNF)， neurturin，血小板源性生长因子（PDGF)，调蛋白（heregulin)，神经调节蛋白，artemin， persephin，白介素，胶质细胞源性神经营养因子（GFR)，粒细胞集落刺激因子（CSF)，粒细 胞-巨嗤细胞-CSF，导蛋白（netrin)，心肌营养蛋白-1，刺猬分子（hedgehogs)，白血病 抑制因子（LIF)，中期因子，多效营养因子，骨形成蛋白（BMP)，导蛋白，皂化蛋白，脑信号 蛋白和干细胞因子（SCF)。对于癌症，可以选择是化疗剂的神经药物。化疗剂的例子包括 焼基化试剂，如塞替哌（thiotepa)和环磷酰胺（cyclosphosphamide) (CYTOXAN?); 焼基磺酸酯（alkyl sulfonates)如白消安（busulfan)，英丙舒凡（improsulfan) 和哌泊舒凡（piposulfan) ; B丫丙陡类（aziridines)如苯佐替派（benzodopa)、卡 波醌（carboquone)、美妥替哌（meturedopa)和乌瑞替哌（uredopa);乙撑亚胺类 (ethylenimines)和甲基蜜胺类（methylamelamines)，包括六甲蜜胺（altretamine)、曲 他胺（triethylenemelamine)、三亚乙基憐酉先胺（triethylenephosphoramide)、三乙烯 硫代憐酸胺（triethylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺（trimethylomelamine); 聚乙酸类（acetogenins)(特别是布拉他辛（bullatacin)和布拉他辛酮 (bullatacinone)) ; A-9-四氢大麻酌?（delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酷 (dronabinol)、MAR1NOL? ); 6 -拉帕醌（beta-lapachone);拉帕醇（lapachol); 秋水仙喊（colchicines);禅木酸（betulinic acid);喜树喊（camptothecin) (包括合成的类似物托泊替康（topotecan) (HYCAMTIN⑧)、CPT-11 (伊立替康 (irinotecan) CAMP10SAR? )、乙酉先喜树喊（acetylcamptothecin)、东莫菪亭 (scopolectin)和 9_ 氨基喜树喊（9-aminocamptothecin));苔藓抑素（bryostatin);海 绵多烯酮类化合物（callystatin) ;CC-1065(包括其阿多来新（adozelesin)、卡折来新 (carzelesin)和比折来新（bizelesin)合成类似物）；鬼臼毒素（podophyllotoxin);鬼 臼酸（podophyllinic acid);替尼泊苷（teniposide);隐藻素类（cryptophycins)(特别 是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀（dolastatin);倍癌霉素（duocarmycin)(包括合成 的类似物、KW-2189 和 CB1-TM1);艾植素（eleutherobin);水鬼蕉碱（pancratistatin); 匍枝珊瑚醇（sarcodictyin);海绵素（spongistatin);氮芥（nitrogen mustards)如苯 丁酸氮芥（chlorambucil)、萘氮芥（chlornaphazine)、胆憐酸胺（chlorophosphamide)、 雌莫司汀（estramustine)、异环憐酸胺（ifosfamide)、氮芥（mechlorethamine)、盐 酸氧氮芥（mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑（melphalan)、新氮芥 (novembichin)、苯芥胆留醇（phenesterine)、泼尼莫司汀（prednimustine)、曲憐胺 (trofosfamide)、尿啼陡氮芥（uracil mustard);亚硝基脈类（nitrosoureas)如卡莫 司汀（carmustine)、氯脲菌素（chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀 (lomustine)、尼莫司汀（nimustine)和雷莫司汀（ranimnustine);抗生素如烯二炔类 (enediyne)抗生素（例如加利车霉素（calicheamicin)，尤其是加利车霉素Y II和加 利车霉素 coil (参见例如 Agnew，Chem. Intl.Ed.Engl.，33 :183-186(1994));烯二炔蒽 环类抗生素（dynemicin)，包括烯二炔蒽环类抗生素A;埃斯波霉素（esperamicin);以 及新制癌菌素（neocarzinostatin)生色团和相关色素蛋白烯二炔类抗生素生色团）、 阿克拉霉素（aclacinomysins)、放线菌素（actinomycin)、蒽霉素（authramycin)、偶氮 丝氨酸（azaserine)、博来霉素（bleomycins)、放线菌素 C(cactinomycin)、carabicin、 洋红霉素（carminomycin)、嗜癌霉素（carzinophilin)、色霉素（chromomycins)、 放线菌素 D(dactinomycin)、柔红霉素（daunorubicin)、地托比星（detorubicin)、 6_ 重氮-5-氧代-L-正亮氨酸（6-diaz〇-5-〇x〇-L_norleucine)、ADR1AMYCIN? 多柔比星（doxorubicin)(包括吗啉代-多柔比星（morpholino-doxorubicin)、 氰基吗啉代-多柔比星（cyanomorpholino-doxorubicin)、2_卩比咯啉-多柔比 星（2-pyrrolino-doxorubicin)和脱氧多柔比星（deoxydoxorubicin))、表柔比 星（epirubicin)、依索比星（esorubicin)、伊达比星（idarubicin)、马塞罗霉素 (marcellomycin)、丝裂霉素类（mitomycins)如丝裂霉素 C、麦考酌?酸（mycophenolic acid)、诺拉霉素（nogalamycin)、橄榄霉素（olivomycins)、培洛霉素（peplomycin)、 紫菜霉素（porfiromycin)、卩票呤霉素（puromycin)、三铁阿霉素（quelamycin)、罗多比 星（rodorubicin)、链黑霉素（streptonigrin)、链佐星（streptozocin)、杀结核菌素 (tubercidin)、乌苯美司（ubenimex)、净司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin);抗 代谢物如甲氨碟呤（methotrexate)和5-氟尿啼陡（5-fluorouracil) (5-FU);叶酸类似物 如二甲叶酸（denopterin)、甲氨碟呤、碟罗呤（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate); 口票呤类似物如氟达拉滨（fludarabine)、6_巯卩票呤（6-mercaptopurine)、硫咪卩票呤 (thiamiprine)、硫鸟卩票呤（thioguanine);啼陡类似物如安西他滨（ancitabine)、 阿扎胞苷（azacitidine)、6_氮尿苷（6-azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷 (cytarabine)、双脱氧尿苷（dideoxyuridine)、去氧氟尿苷（doxif luridine)、依诺他 滨（enocitabine)、氟尿苷（floxuridine);雄激素类，诸如卡鲁睾酮（calusterone)、 丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate)、环硫雄醇（epitiostanol)、美雄焼 (mepitiostane)、睾内酯（testolactone);抗肾上腺药（anti-adrenals)如氨鲁米特 (aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦（trilostane);叶酸补偿剂如亚 叶酸（frolinic acid);醋葡醒内酯（aceglatone);轻醒磷酰胺配糖（aldophosphamide glycoside) ;5_ 氨基酮戊酸（aminolevulinic acid);恩尿啼陡（eniluracil);安 R丫陡 (amsacrine) ;bestrabucil ; t匕生群（bisantrene);依达曲沙（edatraxate) ;defofamine ; 秋水仙胺（demecolcine);地卩丫醌（diaziquone) ;elfornithine ;依利醋铵（elliptinium acetate);埃坡霉素（epothilone);依托格鲁（etoglucid);硝酸嫁（gallium nitrate); 轻基脲（hydroxyurea);香燕多糖（lentinan);氯尼达明（lonidainine);美登木素生 物喊类（maytansinoids)如美登素（maytansine)和安丝菌素（ansamitocins);米托 胍腙（mitoguazone);米托蒽醌（mitoxantrone);莫哌达醇（mopidanmol);尼曲卩丫陡 (nitraerine);喷司他丁（pentostatin);异丙嗪（phenamet);批柔比星（pirarubicin); 洛索蒽醌（losoxantrone) ;2_ 乙基酉先餅（2-ethylhydrazide);丙卡巴餅（procarbazine); PSK? 多糖复合物（JHS Natural Products (JHS 天然产品），Eugene，OR);雷佐生 (razoxane);利索新（rhizoxin);西佐喃（sizofiran);错螺胺（spirogermanium);细 交链孢菌酮酸（tenuazonic acid);三亚胺醌（triaziquone) ;2, 2'，2' -三氯三乙胺 (2,2'，2"-trichlorotriethylamine);单端抱霉烯族化合物（trichothecenes)(特 别是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素（anguidine));乌 拉坦（urethan);长春地辛（vindesine) (ELD1SINE?、F1LDES1N?):达卡巴嗪 (dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露酉享（mitobronitol);二溴卫 矛醇（mitolactol);哌泊溴焼（pipobroman) ;gacytosine ;阿糖胞苷（arabinoside) ("Ara-C"）；塞替哌（thiotepa);紫杉焼类化合物（taxoid)，例如TAXOL?紫 杉醇（paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology， Princeton， N.J.)、不含 Cremophor 的 ABRAXANETM(ABRAXANETM Cremophor-free)，紫杉醇的白蛋白改造的 纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners， Schaumberg， Illinois)和 TAXOTERE? 多西他塞（docetaxel) ( Rlidne-Poillenc Rorer，Antony，法国））； 苯丁 酸氮芥（chloranbucil);吉西他滨（gemcitabine) (GEMZAR?); 6_ 硫鸟 P票呤（6-thioguanine);巯卩票呤（mercaptopurine);甲氨碟呤；钼类似物如顺钼 (cisplatin)和卡钼（carboplatin);长春喊（vinblastine) (VELBAN?);钼；依托泊 苷（etoposide) (VP-16);异环磷酰胺（ifosfamide);米托蒽醌（mitoxantrone);长春新碱 (vincristine) (ONCOVIN?);與沙利钼（oxaliplatin);亚叶酸（leucovorin);长春 瑞滨（vinorelbino) (NAVELB丨NE?);诺安托（novantrone);依达曲沙（edatrexate); 道诺霉素（daunomycin);氨基碟呤（aminopterin);伊班膦酸盐（ibandronate);拓扑异 构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸（difluoromethylornithine)(DMFO);类视黄酸类 (retinoids)如视黄酸（retinoic acid);卡培他滨（capecitabine) (XELODA?);以上 任何一种的药用盐、酸或衍生物；以及以上各项中的两个以上的组合，CHOP，即环磷酰胺、多 柔比星、长春新碱、和泼尼松龙（prednisolone)的组合疗法的缩写；以及F0LF0X，即与5-FU 和亚叶酸（leucovorin)组合的奥沙利钼（oxaliplatin) (ELOXATINTM)的治疗方案的缩写。
[0115] 同样包括在对化疗剂的该定义中的是抗激素剂，其作用为调节、降低、阻断或抑制 可促进癌生长的激素效果，并且通常为系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。实例 包括抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类（SERM)，包括，例如，他莫昔芬（tamoxifen) (包括NOLVADEX?他莫昔芬），EV1STA⑧雷洛昔芬（raloxifene)，屈洛昔芬 (droloxifene)，4_ 轻基他莫西芬，曲沃昔芬（trioxifene), keoxifene，LY117018,奥那司 酮（onapristone)，和FARESTON?托瑞米芬（toremifene));抗黄体酮；雌激素受体下 调剂（ERDs);起作用抑制或关闭卵巢的药剂，例如，促黄体生成激素释放素（leutinizing hormone-releasing hormone) (LHRH)激动剂如 LUPRON? 和 EL1G.ARD? 醋酸亮 丙立德（leuprolide acetate),醋酸戈舍瑞林（goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林 (buserelin acetate)和tripterelin;其它抗雄激素类，如氟他胺（flutamide)、尼鲁米 特（nilutamide)和比卡鲁胺（bicalutamide);和抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上 腺中的雌激素生产，诸如例如，4(5)-咪唑、氨鲁米特（3111；[11(^11^61:11；[1111(16)、1\4￡0八8巳? 醋酸甲地孕酮（megestrol acetate)、AROMAS1N?依西美坦（exemestane)、福美坦 (formestanie)，法倔唑（fadrozole)、RIVISOR? 伏氯唑（vorozole)、FEMARA? 来曲唑（letrozole)和AR1M丨DEX?阿那曲唑（anastrozole)。此夕卜，对化疗齐 的这种定义包括二膦酸盐类（bisphosphonates)如氯膦酸盐（clodronate)(例如， BONEFOS? 或 OSTAC? )、DIDROCAL? 依替膦酸盐（etidronate)、NE-58095、 ZOMETA?唑来膦酸（zoledronic acid)/唑来膦酸盐（zoledronate)、FOSAMAX? 阿仑膦酸盐（alendronate)、AREDIA? 帕米膦酸盐（pamidronate)、SKELID? 替 鲁膦酸盐（tiludronate)或ACTONEL?利塞膦酸盐（risedronate);以及曲沙他滨 (troxacitabine) (1，3_二氧戊环核苷胞啼陡类似物）；反义寡核苷酸，特别是抑制在涉 及异常细胞增殖的信号传导途径中基因的表达的那些，诸如例如，PKC-a、Raf、H-Ras 和表皮生长因子受体（EGF-R);疫苗诸如THERATOPE?疫苗和基因治疗疫苗、例如， ALLOVECT1N?疫 m、LEUVECT1N?疫 m和 VAX1D?疫苗；LURTOTECAN?拓 扑异构酶 1 抑制剂；ABARELIX?:rmRH;托西拉帕替尼（lapatinib ditosylate) (ErbB-2 和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也已知为GW572016);和以上任何一种的药用盐、酸 或衍生物。
[0116] 可以被选作用于癌症治疗或预防的神经药物的另一组化合物是抗癌症免疫球蛋 白（包括、但不限于，曲妥珠单抗（trastuzumab)，贝伐珠单抗（bevacizumab)，阿仑单抗 (alemtuxumab)，西妥昔单抗（cetuximab)，吉妥珠单抗（gemtuzumab ozogamicin)，替尼莫 单抗（ibritumomab tiuxetan)，帕尼单抗（panitumumab)和利妥昔单抗（rituximab))。在 一些情况中，与有毒的标记结合的抗体可以用于靶向并杀死目的细胞（即，癌症细胞），所 述抗体包括、但不限于，具有放射性标记的托西莫单抗（tositumomab)。
[0117] 对于眼疾病或病症，可以选择是以下各项的神经药物：抗新生血管眼科试剂 (即，贝伐珠单抗（bevacizumab)，兰尼单抗（ranibizumab)和培加尼布（pegaptanib))， 眼科青光眼药（即，卡巴胆碱（carbachol)，肾上腺素（epinephrine)，地美溴铵 (demecarium bromide)，阿可乐定（apraclonidine)，溴莫尼定（brimonidine)，布林 唑胺（brinzolamide)，左布诺洛尔（levobunolol)，噻吗洛尔（timolol)，倍他洛尔 (betaxolol)，多佐胺（dorzolamide)，比马前列素（bimatoprost)，卡替洛尔（carteolol)， 美替洛尔（metipranolol)，地匹福林（dipivefrin)，曲伏前列素（travoprost)和拉 坦前列素（latanoprost))，碳酸酐酶抑制剂（即，醋甲唑胺（methazolamide)和乙酰 唑胺（acetazolamide))，眼科抗组胺剂（S卩，萘甲唑啉（naphazoline)，去氧肾上腺素 (phenylephrine)和四氢唑啉（tetrahydrozoline))，眼用润滑剂，眼科甾类化合物（即， 氟米龙（fluorometholone)，泼尼松龙（prednisolone)，氯替泼诺（loteprednol)，地塞 米松（dexamethasone)，二氟泼尼酯（difluprednate)，利美索龙（rimexolone)，醋酸 氟轻松（fluocinolone)，甲轻松（medrysone)和去炎松（triamcinolone))，眼科麻醉 剂（即，利多卡因（lidocaine)，丙美卡因（proparacaine)和 丁卡因（tetracaine))， 眼科抗感染剂（即，左氧氟沙星（levofloxacin)，加替沙星（gatifloxacin)，环丙沙星 (ciprofloxacin)，莫西沙星（moxifloxacin)，氯霉素（chloramphenicol)，杆菌肤 / 多粘 菌素 b (bacitracin/polymyxin b)，横胺醋酸（sulfacetamide)，妥布霉素（tobramycin)， 阿奇霉素（azithromycin)，贝西沙星（besifloxacin)，诺氟沙星（norfloxacin)，横 胺异 恶唑（sulfisoxazole)，庆大霉素（gentamicin)，碘苷（idoxuridine)，红霉素 (erythromycin)，那他霉素（natamycin)，短杆菌肽（gramicidin)，新霉素（neomycin)， 氧氟沙星（of loxacin)，曲氟尿苷（trifluridine)，更昔洛韦（ganciclovir)，阿糖腺 苷（vidarabine))，眼科抗炎剂（S卩，奈帕芬胺（nepafenac)，酮咯酸（ketorolac)， 氟比洛芬（flurbiprofen)，舒洛芬（suprofen)，环孢菌素（cyclosporine)，去炎松 (triamcinolone)，双氯芬酸（diclofenac)和溴芬酸（bromfenac))，和眼科抗组胺剂或 解充血药（即，酮替芬（ketotifen)，奥洛他定（olopatadine)，依匹斯汀（epinastine)， 萘甲唑啉（naphazoline)，色甘酸钠（cromolyn)，四氢唑啉（tetrahydrozoline)，卩比啼 司特（pemirolast)，贝他斯汀（bepotastine)，萘甲唑啉（naphazoline)，去氧肾上腺 素（phenylephrine)，奈多罗米（nedocromil)，洛度沙胺（lodoxamide)，去氧肾上腺素 (phenylephrine)，依美斯汀（emedastine)和氮卓斯汀（azelastine))。对于发作疾病，可 以选择是抗惊厥药或抗癫痫药的神经药物，其包括、但不限于，巴比妥酸盐（barbiturate) 抗惊厥药（即，扑米酮（primidone)，美沙比妥（metharbital)，甲苯比妥（mephobarbital)， 阿洛巴比妥（allobarbital)，异戊巴比妥（amobarbital)，阿普比妥（aprobarbital)， 苯烯比妥（alphenal)，巴比妥（barbital)，溴烯比妥（brallobarbital)和苯巴比妥 (phenobarbital))，苯并二氮卓类（benzodiazepine)抗惊厥药（即，地西泮（diazepam)， 氯硝西泮（clonazepam)和劳拉西泮（lorazepam))，氨基甲酸酯（carbamate)抗惊厥药 (即非尔氨酯（felbamate))，碳酸酐酶（carbonic anhydrase)抑制剂抗惊厥药（即，乙 酰唑胺（acetazolamide)，托卩比酯（topiramate)和唑尼沙胺（zonisamide))，二苯并氮 卓（dibenzazepine)抗惊厥药（即，卢非酸胺（rufinamide)，卡马西平（carbamazepine) 和奥卡西平（oxcarbazepine))，脂肪酸衍生物抗惊厥药（即，双丙戊酸钠（divalproex) 和丙戊酸（valproic acid))，y-氨基丁酸类似物（即，普瑞巴林（pregabalin)，加巴 喷丁（gabapentin)和氨己烯酸（vigabatrin))，Y-氨基丁酸再摄取抑制剂（即，噻加 宾（tiagabine))，Y-氨基丁酸转氨酶抑制剂（即，氨己烯酸（vigabatrin)，乙内酰脲 抗惊厥药（即苯妥英（phenytoin)，乙苯妥英（ethotoin)，磷苯妥英（fosphenytoin)和 美芬妥英（mephenytoin))，杂类抗惊厥药（即，拉科酰胺（lacosamide)和硫酸镁），孕 酮类（S卩，黄体酮（progesterone))，P恶唑焼二酮（oxazolidinedione)抗惊厥药（即， 甲乙双酮（paramethadione)和三甲双酮（trimethadione))，卩比咯焼抗惊厥药（SP，左乙 拉西坦（levetiracetam))，琥拍酰亚胺抗惊厥药（即，乙琥胺（ethosuximide)和甲琥按 (methsuximide))，三嗪抗惊厥药（即，拉莫三嗪（lamotrigine))，和尿素抗惊厥药（即，苯 乙酰脲（phenacemide)和苯丁酰脲（pheneturide))。
[0118] 对于溶酶体贮积病，可以选择这样的神经药物，其自身或以其它方式模拟在疾病 中受损的酶的活性。用于治疗溶酶体贮积病的示例性重组酶包括、但不限于在例如美国专 利申请
【发明者】贝恩德·博尔曼, 佩尔-奥拉·弗雷斯克加德, 彼得·迈尔, 延斯·尼韦纳, 阿兰·蒂索-达盖特, 爱德华·乌里希 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司