抗革兰氏阳性细菌疫苗中的Cna_B结构域的制作方法
【专利摘要】本发明提供可用于疫苗组合物中以诱导抵御革兰氏阳性细菌，特别是无乳链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌和马链球菌的保护作用的保护性抗原。
【专利说明】抗革兰氏阳性细菌疫苗中的Cna_B结构域
[0001]本发明专利申请是国际申请号为PCT/IB2010/050110，国际申请日为2010年I月12日，进入中国国家阶段的申请号为201080011865.8，名称为“抗革兰氏阳性细菌疫苗中的Cna_B结构域”的发明专利申请的分案申请。
[0002]本申请要求2009年I月12日提交的US61/143，859的优先权，其全部内容通过引用纳入本文。
【技术领域】
[0003]本发明涉及免疫学和疫苗学领域。具体地说，本发明涉及衍生自革兰氏阳性细菌的抗原及其在免疫中的应用。 【背景技术】
[0004]革兰氏阳性细菌包括最具毒力的人和动物病原体中的一些，它们导致许多严重的疾病和随之的后遗症。暴露于不断需要有效的疫苗来抵御革兰氏阳性细菌感染。
【专利附图】
【附图说明】
[0005]图1A.与侧接结构域("Fb信号")克隆在一起的酿脓链球菌(S.pyogenes)蛋白Cpa_M18(Spy_M18_0126)的 Cna_B 结构域(〃Cna_B_Fb〃)的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。图1B.所克隆结构域的图示。参见实施例1。
[0006]图2.含有纯化的重组His-标记的Cna_B_Fb结构域的SDS-聚丙烯酰胺凝胶。参见实施例1。
[0007]图3A-D.证明酿脓链球菌Cpa_M18 (Spy_M18_0126) Cna_B_Fb结构域是免疫原性的和Cna_B-Fb结构域抗血清识别酿脓链球菌各种M菌株的Cpa和F2 (MGAS2096_Spy0119)蛋白质(图3A-C)以及无乳链球菌(S.agalactiae)(图3C-D)和肺炎链球菌(S.pneumoniae)(图3D)的菌毛组分的蛋白质印迹。参见实施例1。
[0008]图4A-B.比较Cna_B_Fb抗血清(图4A)与Cpa_M18抗血清(图4B)的反应性的蛋白质印迹。参见实施例1。
[0009]图5.图示了利用重组Cna_B_Fb产生的抗血清(参见实施例1)和分化HL-60细胞进行无乳链球菌菌株515和JM的调理吞噬试验结果。参见实施例2。
[0010]图6.图示了无乳链球菌突变型菌株R13(缺乏菌毛岛2)及其含有酿脓链球菌菌毛Ml或酿脓链球菌菌毛M6的互补菌株的调理吞噬试验结果。参见实施例2。
[0011]图7.各种酿脓链球菌菌株的Cpa蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_Cpa_M5_Manfredo(Spy_M5_0104;SEQ ID NO:18)，SEQ ID NO:2;Cna_B_Cpa_M28(M28_Spy0107,SEQ ID NO:19),SEQ ID NO:3;Cna_B_Cpa_M12(MGAS2096_Spy0113, SEQ IDNO:20), SEQ ID NO:4;Cna_B_Cpa_Ml(M5005_Spy_0107, SEQ ID NO:21), SEQ ID N0:5;Cna_B_Cpa_M3(SpyM3_0098, SEQ ID NO:22), SEQ ID N0:6;Cna_B_Cpa_M18(spyM18_0126, SEQ IDNO:23)，SEQ ID NO:7;Cna_B_Cpa_M6(M6_Spy0159, SEQ ID NO:24)，SEQ ID N0:8;Cna_B_Cpa_M4_C(MGAS10750_Spy0115, SEQ ID NO:25), SEQ ID NO:9;Cna_B_Cpa_M2(MGAS10270_SpyO113, SEQ ID NO:26), SEQ ID NO:10。
[0012]图8.各种无乳链球菌的菌毛蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_GBS_52(SAG0646, SEQ ID NO:45)，SEQ ID NO:27;Cna_B_GBS_150(SAL1482, SEQ IDNO:26), SEQ ID NO:28;Cna_B_GBS_104_l(SAG0649, SEQ ID NO:47), SEQ ID N0:29;Cna_B_GBS_67(SAL1487, SEQ ID NO:48), SEQ ID NO:30;Cna_B_GBS_1523(SAN1518, SEQ IDNO:49), SEQ ID NO:31;Cna_B_GBS_1524(SAN1519, SEQ ID NO:50), SEQ ID N0:32;Cna_B_GBS_80(SAG0645, SEQ ID NO:51), SEQ ID NO:33;Cna_B_GBS_104_2(SAG0649, SEQ IDNO:47)，SEQ ID NO:34;和 Cna_B_GBS_1521(SAN1516, SEQ ID NO:52)，SEQ ID NO:35。
[0013]图9.GBS岛I菌毛组分与菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_GBS_80 (SAG0645, SEQ ID NO: 51)，SEQ ID N0:33;Cna_B_GBS_52(SAG0646, SEQ ID NO:45), SEQ ID NO:27;Cna_B_GBS_104_2(SAG0649, SEQ IDNO:47), SEQ ID NO:34;Cna_B_GBS_104_l(SAG0649, SEQ ID NO:47), SEQ ID N0:29;和Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23), SEQ ID N0:7。[0014]图10.GBS岛2菌毛组分与菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23), SEQ ID N0:7;Cna_B_GBS_150(SAL1482, SEQ ID NO:46), SEQ ID NO:28;Cna_B_GBS_67(SAL1487, SEQ IDNO:48), SEQ ID NO:30;和 Cna_B_GBS_59(SAL1486, SEQ ID NO:102)，SEQ ID NO:103。
[0015]图11.GBS岛3菌毛组分与菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23), SEQ ID N0:7;Cna_B_GBS_1524(SAN1519, SEQ ID NO:50), SEQ ID NO:32;和 Cna_B_GBS_1523(SAN1518, SEQ IDNO:49), SEQ ID NO:31。
[0016]图12.肺炎链球菌菌毛TIGR4组分与菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B 结构域的氨基酸序列比对。Cna_B_CPA_M18 (Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23)，SEQ IDN0:7;RrgB(SP0463, SEQ ID NO:63), SEQ ID NO:53;RrgAl(SP0462, SEQ ID NO:64), SEQ IDN0:54;RrgC2(SP0464, SEQ ID NO:65), SEQ ID NO:56;RrgA2(SP0462, SEQ ID NO:64), SEQ IDNO:57;和 RrgCl(SP0464, SEQ ID NO:65), SEQ ID NO:58。
[0017]图13.包含Cna_B结构域的金黄色葡萄球菌(S.aureus)蛋白与菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列比对。Ser-Asp rich (富含)2 (SdrD MW0517, SEQID NO:72), SEQ ID NO:66;Ser-Asp rich3(SdrD MW0517,SEQ ID NO:72), SEQ IDNO:67;CBP(MW2612，SEQ ID NO:73), SEQ ID NO:68;和 Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQID NO:23)，SEQ ID NO:7。
[0018]图14.证明Cna_B抗血清识别猪链球菌(S.suis)重组蛋白的蛋白质印迹。Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23), SEQ ID NO:14;Cna_B_Bkb3(DUFll)89/1591(SEQID NO:83), SEQ ID N0:75:Cna_B BbklSSU05_047405AYH33(SEQ ID NO:82), SEQ ID N0:76。
[0019]图15.证明Cna_B抗血清识别马链球菌(S.suis)重组蛋白的蛋白质印迹。Cna_B_CPA_M18(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23), SEQ ID NO:14;BKB SEQ0936(SEQ ID NO:88), SEQID NO: 77;辅助蛋白 SEQ0935 (SEQ ID NO:87), SEQ ID NO: 78。
[0020]图16.酿脓链球菌 Cpa 蛋白(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23)的 Cna_B 结构域(SEQ ID NO:7)与两种猪链球菌蛋白的&^_8结构域的比对。Cna_B自转运蛋白(Cna_B_AUTOTRANSPORTER)(SEQ ID NO:82)，SEQ ID NO:80;Cna_B_(SEQ ID NO:83), SEQ ID NO:81。
[0021]图 17.酿脓链球菌 Cpa 蛋白(Spy_M18_0126, SEQ ID NO:23)的 Cna_B 结构域(SEQID NO:7)与两种马链球菌蛋白的Cna_B结构域的比对。Cna_B bkb (SEQ ID NO:88), SEQID N0:86;Cna_B apl(SEQ ID NO:87), SEQ ID NO:84;Cna_B_ap2(SEQ ID NO:87), SEQ IDN0:85。
[0022]图18.GAS Cna_B血清与所选GBS菌株的FACS分析。
[0023]图19.图示了实施例4所述的ELISA试验的结果。
[0024]图20.蛋白质印迹证明抗Cna_B结构域抗原的抗血清识别GBS蛋白质提取中的GBS菌毛。〃 a -GAS_Cna_B_M18〃是用Cna_B_Fb_M18免疫的小鼠的抗血清，如实施例1所述。
[0025]图21.该图证明在GAS皮下感染模型中，用Cna_B结构域抗原免疫的小鼠显示皮肤病损面积减小。参见实施例6。 [0026]图22.该图证明用金黄色葡萄球菌攻击时，Cna_B结构域抗原免疫的小鼠显示鼻咽定殖率(colonization rate)降低。参见实施例7。
[0027]图23.该图证明用金黄色葡萄球菌攻击时，Cna_B结构域抗原免疫的小鼠显示鼻咽定殖率降低。参见实施例9。
[0028]图24.该图证明用嵌合型Cna_B结构域抗原免疫时,用嵌合型Cna_B结构域抗原免疫的母鼠产下的小鼠的存活率高于对照。参见实施例1。
[0029]图25.该图证明在GAS皮下感染模型中，用嵌合型Cna_B结构域抗原免疫的小鼠显示皮肤病损面积减小。参见实施例6。
[0030]图26A-B.金黄色葡萄球菌金黄色亚种NCTC8325的SdrD蛋白的图示和氨基酸序列(SEQ ID N0:132)(图26A);同一 Cna_B结构域抗原的图示及其氨基酸序列(SEQ IDNO: 132)，标出 7 Cna_B 结构域(图 26B)。
[0031]图27A-C.Cna_B结构域的克隆、表达和纯化。图27A，SdrD的克隆Cna_B结构域(SEQ ID N0S: 134-138)的图示。图27B，克隆的结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO: 133)。图27C，含有纯化的Cna_B结构域的SDS-聚丙烯酰胺凝胶。
[0032]图28.图示了小鼠模型中，Cna_B_SdrD赋予抵御金黄色葡萄球菌菌株USA300感染的保护作用。
【具体实施方式】
[0033]“Cna_B结构域”首先在金黄色葡萄球菌胶原_结合表面蛋白中描述为不介导胶原结合的区域。重复B-区域的结构构成β夹心结构。据认为，该区域形成将配体结合域呈递远离细菌细胞表面的金黄色葡萄球菌胶原结合蛋白中的茎。含有&^_8结构域的蛋白存在于各种革兰氏阳性病原性细菌中，包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌(GBS)、酿脓链球菌(GAS)、马链球菌、猪链球菌、产气荚膜梭菌(C.perifringens)、单核细胞增多性李司特菌(L.monocytogenes)、苏芸金芽胞杆菌(B.thuringiensis)、没食子酸居泥杆菌(P.acidigallici)、屎肠球菌(E.faceium)、腊样芽胞杆菌(B.cereus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、幾肠球菌(E.faecalis)、艰难梭菌(C.difficile)、白喉棒状杆菌(C.diphtheriae)、格氏链球菌(S.gordonii)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)、和破伤风梭菌(C.tetani)。
[0034]如以下具体实例所述，酿脓链球菌Cpa蛋白(Spy_M18_0126，SEQ ID NO:23)的Cna_B结构域(SEQ ID NO: 7)是免疫原性的。用其产生的特异性抗体识别酿脓链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、猪链球菌和马链球菌的重组蛋白。GAS_Cpa_M18蛋白血清中所含约一半的抗体是Cna_B结构域特异性的,用菌株M18的酿脓链球菌Cpa蛋白的Cna_B结构域产生的抗血清(“抗_Cna_B结构域”)在蛋白质印迹中检测到用完整蛋白(〃GAS_M18_cpa〃)产生的抗血清检测不到并介导无乳链球菌的吞噬细胞杀伤作用的蛋白质。Spy_M18_0126的Cna_B结构域还在GBS-攻击小鼠中介导主动保护作用。因此，优选用链球菌Cna_B结构域或其它革兰氏阳性细菌蛋白(例如，金黄色葡萄球菌)的Cna_B结构域产生抗体。
[0035]本发明提供可用于疫苗组合物中以诱导抵御革兰氏阳性细菌，特别是金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌(GBS)、酿脓链球菌(GAS)、马链球菌和猪链球菌中一种或多种的保护作用的Cna_B结构域抗原。本发明还提供利用Cna_B结构域抗原诱导抗体和治疗或保护免遭革兰氏阳性细菌感染的方法，包括各种链球菌和/或葡萄球菌种类之间的交叉保护作用。
[0036]Cna_B 结构域
[0037]任何革兰氏阳性细菌蛋白的Cna_B结构域可用于本发明的组合物和方法。各种金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、酿脓链球菌、猪链球菌和马链球菌蛋白的Cna_B结构域的氨基酸序列示于图7-13、16和17，并在序列表中显示为SEQ ID NO: 2_10、27_35、53-57、66、67、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126 和 134-138。含有 Cna_B 结构域的其它蛋白质的例子示于SEQ ID N0:89-102和132。Cna_B结构域通常含有图7_16所示一条或多条序列作为“G盒”。图7-13所示G盒的共有序列氨基酸序列示于SEQ ID N0:74。
[0038]变体
[0039]在一些实施方式中，本发明Cna_B结构域的变体具有的氨基酸序列与SEQ IDN0:2-10、27-35、53-57、66、67、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126 和 134-138 中任一条有至少90%相同、至少95%相同、至少96%相同、至少97%相同、至少98%相同、或至少99%相同。Cna_B结构域的氨基酸序列与Cna_B结构域变体的氨基酸序列之间的任何差异通常是一个或多个保守性氨基酸取代所致(通常是1、2、3、4、5、6、7或8个取代)。然而，氨基酸缺失或插入也可能。
[0040]在一些实施方式中，保守性氨基酸取代基于化学性质，包括用一个带正电荷的氨基酸取代另一个带正电荷的氨基酸(例如，H、K、R)、用一个带负电荷的氨基酸取代另一个带负电荷的氨基酸(例如，D、E)、用一个疏水性很高的氨基酸取代另一个疏水性很高的氨基酸(例如，C、F、1、L、M、V、W)、用一个疏水性较低的氨基酸取代另一个疏水性较低的氨基酸(例如，A、G、H、P、S、T、Y)、用一个部分疏水性的氨基酸取代另一个部分疏水性的氨基酸(例如，K、R)、用一个脂族氨基酸取代另一个脂族氨基酸(例如，A、1、L、M、P、V)、用一个极性氨基酸取代另一个极性氨基酸(例如，A、D、E、G、H、K、N、P、Q、R、S、T、Y)、用一个芳族氨基酸取代另一个芳族氨基酸(例如，F、H、W、Y)以及用一个小氨基酸取代另一个小氨基酸(例如，D、N、T)。
[0041]在一些实施方式中，采用BL0SUM62表确定保守性氨基酸取代。所述BL0SUM62表是从蛋白质序列区段的约2000个局部多次比对得到的氨基酸取代矩阵，显示超过500组相关蛋白质的高度保守区域(Henikoff和Henikoff, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:10915, 1992)。BL0SUM62取代频率可用于确定可引入Cna_B结构域的氨基酸序列的保守性氨基酸取代。在这些实施方式中，保守性取代优选指由大于-1的BL0SUM62值代表的取代。例如，如果氨基酸取代的特征为BL0SUM62值为O、1、2或3，则所述氨基酸取代是保守的。根据该系统，优选的保守性氨基酸取代的特征为BL0SUM62值至少为I (例如，1、2或3)，而更优选的保守氨基酸取代的特征为BL0SUM62值至少为2 (例如，2或3)。
[0042]可通过比对图7-13中所示Cna_B结构域来鉴定具体氨基酸取代或改变。包括此类选择的任何组合在内的Cna_B结构域抗原(下述的)属于本发明的范围。
[0043]Cna_B结构域抗原
[0044]“Cna_B结构域抗原”包含一个或多个上述Cna_B结构域，还可在N末端、C末端或两端包含或不包含额外的氨基酸。在一些实施方式中，Cna_B结构域抗原由SEQ ID NO: 1、10、27、-35、53、-57、66、-68、75、76、80、81、84、-86、110、-117、122、-126、133 和-138 中任一条构成。在其它实施方式中，Cna_B结构域抗原包含Cna_B结构域以及天然细菌(例如,链球菌或葡萄球菌)蛋白中不与&^_8结构域直接毗邻的其它氨基酸序列。即，在此类抗原中，Cna_B结构域的N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然细菌(例如，链球菌或葡萄球菌)蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或Cna_B结构域的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白，例如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌(GBS)、酿脓链球菌(GAS)、马链球菌或猪链球菌的蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。“天然”革兰氏阳性细菌蛋白是在革兰氏阳性细菌中发现它们天然存在的蛋白；“天然”链球菌或葡萄球菌蛋白是在链球菌或葡萄球菌中分别发现它们天然存在的蛋白。
[0045]在还有其它实施方式中，Cna_B结构域抗原由Cna_B结构域以及该结构域的N和/或C末端的额外氨基酸构成，只要Cna_B结构域抗原不由全长细菌(例如，链球菌或葡萄球菌)蛋白构成(参见表1-32)。
[0046]在其它实施方式中，Cna_B结构域抗原由下式所示多肽构成:
[0047]A(LB)n
[0048]式中A是第一 Cna_B结构域；B是第二 Cna_B结构域；n是整数(通常是1_10 ;例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10) ;L独立为不存在或是氨基酸接头。此类抗原中的Cna_B结构域可以相同、不同或一些相同而一些不同的&^_8结构域的混合物(即，所有的Cna_B结构域可以不同或者两种或更多种Cna_B结构域可以相同)。例如，Cna_B结构域可以是两种或更多种不同革兰氏阳性蛋白，特别是革兰氏阳性球菌蛋白，例如链球菌蛋白、葡萄球菌蛋白或两种或更多种类或菌株(例如，无乳链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌和/或马链球菌)的蛋白的结构域。
[0049]如果任何Cna_B结构域之间存在氨基酸接头，其通常含有6_12个氨基酸(例如，
6、7、8、9、10、11或12个)。GSGGGG(SEQ ID NO:79)是有用接头的例子。Cna_B结构域抗原中的接头可以相同或不同。
[0050]式A(LB)n所示Cna_B结构域抗原的例子包括含有SEQ ID NO: 108或由其构成的蛋白质。从N到C末端，SEQ ID勵:108包含5八60645的(:的_8结构域(SEQ ID NO: 112)、氨基酸序列 VDS、第一氨基酸接头(SEQ ID N0:79)、SAN1518 的 Cna_B 结构域(SEQ ID NO: 113)、第二氨基酸接头(SEQ ID N0:79)、SAL1487的第一 Cna_B结构域(SEQ ID NO: 110)、氨基酸序列 NSG、SAL1487 的第二 Cna_B 结构域(SEQ ID NO: 111)和氨基酸 KQI。
[0051]式A(LB)n所示Cna_B结构域抗原的其它例子包括含有SEQ ID NO: 109或由其构成的蛋白质。从N到C末端，SEQ ID勵:109包含5八60645的(:的_8结构域(SEQ ID NO: 112)、氨基酸序列VDS、第一氨基酸接头(SEQ ID N0:79)、SAN1518的Cna_B结构域(SEQ IDNO: 113)、第二氨基酸接头(SEQ ID N0:79)、SAL1486 的第一Cna_B 结构域(SEQ ID NO: 114)、氨基酸序列LPL、SAL1486的第二 Cna_B结构域(SEQ ID NO: 115)和氨基酸DIE。
[0052]式A(LB)n所示Cna_B结构域抗原的其它例子包括含有以下序列或由其构成的蛋白质:SEQ ID N0:127、128、129、130、131、133、134、135、136、137或 138 ;参见实施例8和 10。
[0053]在上述Cna_B结构域抗原中，包含氨基酸序列VDS、NSG、KQ1、LPL和DIE，从而不截短β折叠片。本领域普通技术人员熟知本发明Cna_B结构域抗原中可包含其它此类氨基酸序列以帮助保留Cna_B结构域的三级结构。
[0054]式A(LB)n所示Cna_B结构域抗原的其它例子包含:
[0055]a.酿脓链球菌 Spy_M18_0126(例如，SEQ ID NO: 7)和 M6_Spy0159)(例如，SEQ IDN0:8)及MGAS2096_Spy0119(例如，SEQ ID NO: 121)的 Cna_B 结构域；这些包括含有 SEQ IDN0:121的5个Cna_B结构域(SEQ ID NO: 122-126)的融合体的Cna_B结构域抗原。Spy0159的(:的_8结构域的编码序列示于SEQ ID Ν0:120<^ρY0119的编码序列示于SEQ ID NO: 119。SEQ ID NO: 121 的核苷酸 181-390、1576-1797、1915_2127、2281_2496 和 2716-2916 分别编码SEQ ID NO: 122-126所示的Cna_B结构域。
[0056]b.金黄色葡萄球菌 SdrD (例如，SEQ ID NO: 134-138; SEQ ID NO: 66 和 / 或 67; SEQID NO: 139)和 Cna_B_cap(例如，SEQ ID NO:68)的 Cna_B 结构域。
[0057]c.肺炎链球菌 SP0463)(例如，SEQ ID NO: 53)、Cna_B_RrgA(SP0462)(例如，SEQID NO: 54 和 / 或 56)和 Cna_B_RrgC (SP0464)(例如，SEQ ID NO: 55 和 / 或 57)的 Cna_B 结构域。
[0058]d.Spy_M18_0126(例如，SEQ ID NO: 7)、SAG0645 (SEQ ID NO: 33)、RrgB (SP0463)(例如，SEQ ID NO: 53)和 SdrD (例如，SEQ ID NO: 134-138; SEQ ID NO: 66 和 / 或 67; SEQID NO: 139)的 Cna_B 结构域。
[0059]本发明的Cna_B结构域抗原还可包含上述任何Cna_B结构域抗原。在这些实施方式的一些中，Cna_B结构域的N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然细菌(例如，链球菌或葡萄球菌)蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或Cna_B结构域的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然细菌(例如，链球菌或葡萄球菌)蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。
[0060]在一些实施方式中，一个或多个本发明的Cna_B结构域抗原是包含另一细菌抗原，优选另一细菌(例如，链球菌或葡萄球菌)抗原的融合多肽的一部分。例如，W099/05447、W002/03477U W004/018646, W005/028618, W005/032482, W006/042027 和W006/078318中公开了合适的抗原。
[0061]包含一个或多个Cna_B结构域和其它结构域,例如von Willenbrand因子A (vWFA)结构域(例如，SEQ ID N0:105、106、107)的融合多肽也属于本发明的范围，例如:
[0062]a.Spy_M18_0126) 的 Cna_B 结构域(例如，SEQ ID NO: 7)和 vffFA_cpa_M6 (M6_Spy0159)(例如，SEQ ID NO: 105);和
[0063]b.SAG0645 的 Cna_B 结构域(例如，SEQ ID NO: 33)和 vffFA_SAL_1487 (例如，SEQID NO:106)。
[0064]此类融合多肽可在各种融合伴侣和/或各融合伴侣的侧接序列之间包含接头序列，可从下表1-37和43-48公开的那些中选择。
【权利要求】
1.一种Cna_B结构域抗原，其包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1_10、27_35、53-57、66-68、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126 和 134-144，其中所述氨基酸序列的 N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或所述氨基酸序列的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。
2.如权利要求1所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述抗原包含选自下组的两条氨基酸序列:SEQ ID N0:l-10、27-35、53-57、66-68、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126和 134-144。
3.如权利要求1所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述抗原包含氨基酸序列SEQID NO:1。
4.如权利要求1所述的Cna_B结构域抗原,其特征在于,所述抗原由氨基酸序列SEQIDNO:1构成。
5.一种Cna_B结构域抗原，其包含第一革兰氏阳性细菌蛋白的第一 Cna_B结构域和第二革兰氏阳性细菌蛋白的第二 Cna_B结构域，其中所述第一和第二革兰氏阳性蛋白是不同的蛋白质。
6.如权利要求5所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述第一革兰氏阳性细菌蛋白是链球菌蛋白。
7.如权利要求5所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述第一革兰氏阳性细菌蛋白是葡萄球菌蛋白。
8.如权利要求5所述的Cna_B结构域抗原,其特征在于,所述第一Cna_B结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:74。
9.如权利要求5所述的Cna_B结构域抗原,其特征在于,所述第一Cna_B结构域是选自下组的氨基酸序列:SEQ ID N0:l-10、27-35、53-57、66-68、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126 和 134-144。
10.一种Cna_B结构域抗原,该抗原包含两个相同的Cna_B结构域。
11.一种Cna_B结构域抗原，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 74，其中所述氨基酸序列的N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或所述氨基酸序列的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。
12.—种Cna_B结构域抗原，其由选自下组的氨基酸序列构成: (a)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:1的N末端处的SEQ ID NO: 18的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:1的C末端处的SEQ ID NO: 18的0-282个额外的毗连氨基酸； (b)SEQID NO: 2和SEQ ID NO: 2的N末端处的SEQ ID NO: 18的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 2的C末端处的SEQ ID NO: 18的0-390个额外的毗连氨基酸； (c)SEQID NO: 3和SEQ ID NO: 3的N末端处的SEQ ID NO: 19的0-294个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 3的C末端处的SEQ ID NO: 19的0-390个额外的毗连氨基酸； (d)SEQID NO: 4和SEQ ID NO: 4的N末端处的SEQ ID NO: 20的0-297个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID N0:4的C末端处的SEQ ID NO:20的0-396个额外的毗连氨基酸； (e)SEQID NO:5和SEQ ID NO: 5的N末端处的SEQ ID NO: 21的0-310个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 5的C末端处的SEQ ID NO: 21的0-380个额外的毗连氨基酸； (f)SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:6的N末端处的SEQ ID NO: 22的0-288个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:6的C末端处的SEQ ID NO:22的0-393个额外的毗连氨基酸； (g)SEQID NO: 7和SEQ ID NO: 7的N末端处的SEQ ID NO: 23的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 7的C末端处的SEQ ID NO: 23的0-392个额外的毗连氨基酸； (h)SEQID NO:8和SEQ ID NO: 8的N末端处的SEQ ID NO: 24的0-906个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:8的C末端处的SEQ ID NO:24的0_58个额外的毗连氨基酸； (i)SEQID NO:9和SEQ ID NO:9的N末端处的SEQ ID NO: 25的0-654个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:9的C末端处的SEQ ID NO:25的0-646个额外的毗连氨基酸；(j) SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 10的N末端处的SEQ ID NO: 26的0_51个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 10的C末端处的SEQ ID NO: 26的0-768个额外的毗连氨基酸；(k)SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO: 27 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 45 的 0-169 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 27的C末端处的SEQ ID NO: 45的0_52个额外的毗连氨基酸； (I)SEQ ID NO:28 和 SEQ ID NO:28 的 N 末端处的 SEQ ID NO:46 的 0-160 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 28的C末端处的SEQ ID NO: 46的0_75个额外的毗连氨基酸；(m)SEQ ID NO: 29和SEQ ID NO: 29的N末端处的SEQ ID NO:47的0_51个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 29的C末端处的SEQ ID NO:47的0-778个额外的毗连氨基酸；(n) SEQ ID Ν0:30和SEQ ID NO:30的N末端处的SEQ ID NO:48的0_52个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 30的C末端处的SEQ ID NO:48的0-786个额外的毗连氨基酸；
(o)SEQ ID Ν0:31 和 SEQ ID NO: 31 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 49 的 0-365 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 31的C末端处的SEQ ID NO: 49的0_50个额外的毗连氨基酸；(p)SEQ ID Ν0:32 和 SEQ ID NO:32 的 N 末端处的 SEQ ID NO:50 的 0-1290 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 32的C末端处的SEQ ID NO: 50的0_62个额外的毗连氨基酸；(q) SEQ ID N0:33 和 SEQ ID NO:33 的 N 末端处的 SEQ ID NO:51 的 0-394 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 33的C末端处的SEQ ID NO: 51的0_65个额外的毗连氨基酸；(r) SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 35的N末端处的SEQ ID NO: 52的0_98个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 35的C末端处的SEQ ID NO: 52的0_36个额外的毗连氨基酸；(s)SEQ ID N0:53 和 SEQ ID NO: 53 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 63 的 0-459 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 53的C末端处的SEQ ID NO: 63的0_68个额外的毗连氨基酸；(t)SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 54的N末端处的SEQ ID NO: 64的0_60个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 54的C末端处的SEQ ID NO:64的0-762个额外的毗连氨基酸；(u)SEQ ID N0:55 和 SE Q ID NO: 55 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 65 的 0-271 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 55的C末端处的SEQ ID NO: 65的0_41个额外的毗连氨基酸；(v)SEQ ID N0:66 和 SEQ ID NO: 66 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 72 的 0-703 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:66的C末端处的SEQ ID NO: 72的0-473个额外的毗连氨基酸；
(w)SEQ ID N0:67 和 SEQ ID NO: 67 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 72 的 0-924 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:67的C末端处的SEQ ID NO: 72的0-353个额外的毗连氨基酸；
(x)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO: 68 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 73 的 0-344 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:68的C末端处的SEQ ID NO: 73的0-761个额外的毗连氨基酸；(y) SEQ ID NO: 34 和 SEQ ID NO: 34 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 47 的 0-748 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 34的C末端处的SEQ ID NO: 47的0_62个额外的毗连氨基酸；(z)SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO: 57 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 65 的 0-161 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 57的C末端处的SEQ ID NO:65的0-141个额外的毗连氨基酸；
(aa)SEQ ID N0:80 和 SEQ ID NO:80 的 N 末端处的 SEQ ID NO:82 的 0-348 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:80的C末端处的SEQ ID NO:82的0_53个额外的毗连氨基酸；
(bb)SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:81 的 N 末端处的 SEQ ID NO:83 的 0-358 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 81的C末端处的SEQ ID NO: 83的0-124个额外的毗连氨基酸；
(cc)SEQ ID N0:84 和 SEQ ID NO:84 的 N 末端处的 SEQ ID NO:87 的 0-350 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 84的C末端处的SEQ ID NO: 87的0-244个额外的毗连氨基酸；
(dd)SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:85 的 N 末端处的 SEQ ID NO:87 的 0-539 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ I D NO:85的C末端处的SEQ ID NO:87的0_55个额外的毗连氨基酸；
(ee)SEQ ID NO:86 和 SEQ ID NO:86 的 N 末端处的 SEQ ID NO:88 的 0-336 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:86的C末端处的SEQ ID NO:88的0_74个额外的毗连氨基酸；
(ff) SEQ ID NO: 122 和 SEQ ID NO: 122 的 N末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-59 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 122的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-1030个额外的毗连氨基酸；
(gg) SEQ ID NO: 123 和 SEQ ID NO: 123 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-524 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 123的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-561个额外的毗连氨基酸；
(hh)SEQ ID NO: 124 和 SEQ ID NO: 124 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-637 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 124的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-451个额外的毗连氨基酸；
(ii)SEQ ID NO: 125 和 SEQ ID NO: 125 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-759 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 125的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-328个额外的毗连氨基酸；
(jj)SEQ ID NO: 126 和 SEQ ID NO: 126 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-904 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 126的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-188个额外的毗连氨基酸；(kk) SEQ ID NO: 134 和 SEQ ID NO: 134 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-591 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 134的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-683个额外的毗连氨基酸；
(Il)SEQ ID NO: 135 和 SEQ ID NO: 135 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-703 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 135的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-572个额外的毗连氨基酸；
(mm) SEQ ID NO: 136 和 SEQ ID NO: 136 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-814 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 136的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-461个额外的毗连氨基酸；
(nn)SEQ ID NO: 137 和 SEQ ID NO: 137 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-924 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 137的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-351个额外的毗连氨基酸；
(00)SEQID NO: 138 和 SEQ ID NO: 138 的 N末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-1035 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 138的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-241个额外的毗连氨基酸；和
(pp)SEQ ID NO: 139 和 SEQ ID NO: 134 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-598 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 134的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-225个额外的毗连氨基酸。
13.如权利要求12所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述抗原由选自下组的氨基酸序列构成:SEQ ID N0:l-10、27-35、53-57、66-68、75、76、80、81、84-86、110-117 和139-144。
14.一种Cna_B结构域抗原，其包含选自下组的氨基酸序列: (a)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:1的N末端处的SEQ ID NO: 18的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:1的C末端处的SEQ ID NO: 18的0-282个额外的毗连氨基酸； (b)SEQID NO: 2和SEQ ID NO: 2的N末端处的SEQ ID NO: 18的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 2的C末端处的SEQ ID NO: 18的0-390个额外的毗连氨基酸； (c)SEQID NO: 3和SEQ ID NO: 3的N末端处的SEQ ID NO: 19的0-294个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 3的C末端处的SEQ ID NO: 19的0-390个额外的毗连氨基酸； (d)SEQID N0:4和SEQ ID NO: 4的N末端处的SEQ ID NO: 20的0-297个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID N0:4的C末端处的SEQ ID NO:20的0-396个额外的毗连氨基酸； (e)SEQID N0:5和SEQ ID NO: 5的N末端处的SEQ ID NO: 21的0-310个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 5的C末端处的SEQ ID NO: 21的0-380个额外的毗连氨基酸； (f)SEQ ID N0:6和SEQ ID NO:6的N末端处的SEQ ID NO: 22的0-288个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID N0:6的C末端处的SEQ ID NO:22的0-393个额外的毗连氨基酸； (g)SEQID NO: 7和SEQ ID NO: 7的N末端处的SEQ ID NO: 23的0_70个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 7的C末端处的SEQ ID NO: 23的0-392个额外的毗连氨基酸； (h)SEQID N0:8和SEQ ID NO: 8的N末端处的SEQ ID NO: 24的0-906个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID N0:8的C末端处的SEQ ID NO:24的0_58个额外的毗连氨基酸； (1)SEQID N0:9和SEQ ID NO:9的N末端处的SEQ ID NO: 25的0-654个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID N0:9的C末端处的SEQ ID NO:25的0-646个额外的毗连氨基酸； (j) SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 10的N末端处的SEQ ID NO: 26的0_51个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 10的C末端处的SEQ ID NO: 26的0-768个额外的毗连氨基酸；(k)SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO: 27 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 45 的 0-169 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 27的C末端处的SEQ ID NO: 45的0_52个额外的毗连氨基酸；
(I)SEQ ID NO:28 和 SEQ ID NO:28 的 N 末端处的 SEQ ID NO:46 的 0-160 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 28的C末端处的SEQ ID NO: 46的0_75个额外的毗连氨基酸；(m)SEQ ID NO: 29和SEQ ID NO: 29的N末端处的SEQ ID NO:47的0_51个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 29的C末端处的SEQ ID NO:47的0-778个额外的毗连氨基酸；(n) SEQ ID Ν0:30和SEQ ID NO:30的N末端处的SEQ ID NO:48的0_52个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 30的C末端处的SEQ ID NO:48的0-786个额外的毗连氨基酸；(o)SEQ ID Ν0:31 和 SEQ ID NO: 31 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 49 的 0-365 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 31的C末端处的SEQ ID NO: 49的0_50个额外的毗连氨基酸；(p)SEQ ID Ν0:32 和 SEQ ID NO:32 的 N 末端处的 SEQ ID NO:50 的 0-1290 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 32的C末端处的SEQ ID NO: 50的0_62个额外的毗连氨基酸；
(q) SEQ ID N0:33 和 SEQ ID NO:33 的 N 末端处的 SEQ ID NO:51 的 0-394 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 33的C末端处的SEQ ID NO: 51的0_65个额外的毗连氨基酸；(r) SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 35的N末端处的SEQ ID NO: 52的0_98个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 35的C末端处的SEQ ID NO: 52的0_36个额外的毗连氨基酸；(s)SEQ ID N0:53 和 SEQ ID NO: 53 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 63 的 0-459 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 53的C末端处的SEQ ID NO: 63的0_68个额外的毗连氨基酸；(t)SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 54的N末端处的SEQ ID NO: 64的0_60个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 54的C末端处的SEQ ID NO:64的0-762个额外的毗连氨基酸；(u)SEQ ID N0:55 和 SEQ ID NO: 55 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 65 的 0-271 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 55的C末端处的SEQ ID NO: 65的0_41个额外的毗连氨基酸；(v)SEQ ID N0:66 和 SEQ ID NO: 66 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 72 的 0-703 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:66的C末端处的SEQ ID NO: 72的0-473个额外的毗连氨基酸；
(w)SEQ ID NO: 67 和 SEQ ID NO: 67 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 72 的 0-924 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:67的C末端处的SEQ ID NO: 72的0-353个额外的毗连氨基酸；
(x)SEQ ID NO: 68 和 SEQ ID NO: 68 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 73 的 0-344 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:68的C末端处的SEQ ID NO: 73的0-761个额外的毗连氨基酸；(y) SEQ ID NO: 34 和 SEQ ID NO: 34 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 47 的 0-748 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 34的C末端处的SEQ ID NO: 47的0_62个额外的毗连氨基酸；(z)SEQ ID N0:57 和 SEQ ID NO: 57 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 65 的 0-161 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 57的C末端处的SEQ ID NO:65的0-141个额外的毗连氨基酸；
(aa)SEQ ID N0:80 和 SEQ ID NO:80 的 N 末端处的 SEQ ID NO:82 的 0-348 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:80的C末端处的SEQ ID NO:82的0_53个额外的毗连氨基酸；
(bb)SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:81 的 N 末端处的 SEQ ID NO:83 的 0-358 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 81的C末端处的SEQ ID NO: 83的0-124个额外的毗连氨基酸；
(cc)SEQ ID N0:84 和 SEQ ID NO:84 的 N 末端处的 SEQ ID NO:87 的 0-350 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 84的C末端处的SEQ ID NO: 87的0-244个额外的毗连氨基酸；
(dd)SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:85 的 N 末端处的 SEQ ID NO:87 的 0-539 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:85的C末端处的SEQ ID NO:87的0_55个额外的毗连氨基酸；
(ee)SEQ ID NO:86 和 SEQ ID NO:86 的 N 末端处的 SEQ ID NO:88 的 0-336 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO:86的C末端处的SEQ ID NO:88的0_74个额外的毗连氨基酸；
(ff) SEQ ID NO: 122 和 SEQ ID NO: 122 的 N末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-59 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 122的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-1030个额外的毗连氨基酸；
(gg) SEQ ID NO: 123 和 SEQ ID NO: 123 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-524 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 123的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-561个额外的毗连氨基酸；
(hh)SEQ ID NO: 124 和 SEQ ID NO: 124 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-637 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 124的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-451个额外的毗连氨基酸；
(ii)SEQ ID NO: 125 和 SEQ ID NO: 125 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-759 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 125的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-328个额外的毗连氨基酸；
(jj)SEQ ID NO: 126 和 SEQ ID NO: 126 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 121 的 0-904 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 126的C末端处的SEQ ID NO: 121的0-188个额外的毗连氨基酸；
(kk) SEQ ID NO: 134 和 SEQ ID NO: 134 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-591 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 134的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-683个额外的毗连氨基酸；
(Il)SEQ ID NO: 135 和 SEQ ID NO: 135 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-703 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 135的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-572个额外的毗连氨基酸；
(mm) SEQ ID NO: 136 和 SEQ ID NO: 136 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-814 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 136的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-461个额外的毗连氨基酸；
(nn)SEQ ID NO: 137 和 SEQ ID NO: 137 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-924 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 137的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-351个额外的毗连氨基酸；
(oo)SEQ ID NO: 138 和 SEQ ID NO: 138 的 N末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-1035 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 138的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-241个额外的毗连氨基酸；和
(pp)SEQ ID NO: 139 和 SEQ ID NO: 139 的 N 末端处的 SEQ ID NO: 132 的 0-598 个额外的毗连氨基酸和/或SEQ ID NO: 139的C末端处的SEQ ID NO: 132的0-225个额外的毗连氨基酸； 其中所述氨基酸序列的N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或所述氨基酸序列的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。
15.—种由下式构成的Cna_B结构域抗原:
A(LB)n 式中: A是第一 Cna_B结构域； B是第二 Cna_B结构域； η是1-1O ;和 L独立为不存在或是氨基酸接头。
16.如权利要求15所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述抗原包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 127-131 和 133-144。
17.如权利要求15 所述的Cna_B结构域抗原,其特征在于,所述第一Cna_B结构域和至少一个第二 Cna_B结构域是两种不同革兰氏阳性细菌蛋白的结构域。
18.如权利要求17所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述两种不同革兰氏阳性细菌蛋白来自两种不同种类的链球菌。
19.如权利要求17所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述革兰氏阳性细菌蛋白中的至少一种来自选自下组的细菌:无乳链球菌(S.agalactiae)、酿脓链球菌(S.pyogenes)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、马链球菌(S.suis)和猪链球菌(S.equi)。
20.一种Cna_B结构域抗原，其包含下式:
A(LB)n 式中: A是第一 Cna_B结构域； B是第二 Cna_B结构域； η是1-1O ;和 L独立为不存在或是氨基酸接头；和 其中所述第一 (:1^_8结构域的N末端氨基酸的氨基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的羧基相连和/或所述第二 Cna_B结构域的C末端氨基酸的羧基不经肽键与天然革兰氏阳性细菌蛋白中其所连的氨基酸的氨基相连。
21.—种Cna_B结构域抗原，其基本上由选自下组的氨基酸序列构成:SEQ IDNO:卜10、27-35、53-57、66-68、75、76、80、81、84-86、110-117、122-126 和 133-144。
22.—种融合多肽,其包含: 权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原；和 细菌抗原。
23.偶联于载体蛋白的权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原或权利要求22所述的融合多肽。
24.一种核酸分子，其编码权利要求1-21中任一项所述的分离的Cna_B结构域抗原或权利要求22所述的融合多肽。
25.如权利要求24所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子是表达载体。
26.—种包含表达载体的宿主细胞，所述表达载体编码权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原或权利要求22所述的融合多肽。
27.—种产生Cna_B结构域抗原或融合多肽的方法，包括: 在表达载体表达所述Cna_B结构域抗原或融合多肽的条件下培养权利要求26所述的宿主细胞；和 回收所述Cna_B结构域抗原或融合多肽。
28.一种选择性结合一个或多个Cna_B结构域的分离的抗体，其中各Cna_B结构域包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID N0:l-10、27-35、53-57、66-68、74-76、80、81、84-86、110-117,122-126 和 134-144。
29.如权利要求28所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体结合包含氨基酸序列SEQID NO:1的多肽。
30.如权利要求28或29所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体。
31.如权利要求28-30中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体诱导至少30%的GBS菌株515的调理吞噬作用。
32.一种组合物，其包含: 选自下组的活性剂: 权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原； 权利要求22所述的融合多肽； 权利要求24所述的核酸分子；和 权利要求28所述的分离的抗体；以及 药学上可接受的载体。
33.一种试剂盒，其装有: (a)装有如权利要求32所述组合物的容器；和 (b)利用所述组合物产生抵御包含Cna_B结构域的革兰氏阳性细菌蛋白的免疫应答的使用说明书。
34.用于治疗革兰氏阳性细菌所致感染的权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原或权利要求22所述的融合多肽。
35.如权利要求34所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述革兰氏阳性细菌选自下组:无乳链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、马链球菌和猪链球菌。
36.一种减轻革兰氏阳性细菌所致感染的方法，包括给予有此需要的个体有效量的权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原或权利要求22所述的融合多肽。
37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述革兰氏阳性细菌选自下组:无乳链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、马链球菌和猪链球菌。
38.如权利要求1-21中任一项所述的Cna_B结构域抗原，其特征在于，所述抗原是分离的抗 原。
【文档编号】C07K19/00GK103897045SQ201410097910
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2010年1月12日 优先权日:2009年1月12日
【发明者】A·曼尼蒂, I·马格里特伊若斯, G·格兰迪 申请人:诺华股份有限公司