一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法【专利摘要】本发明公开了一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)烯酸水解：称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4％的盐酸50ml，再加入水，定容至100ml；在温度80℃～90℃的条件下，酸解5～7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；(2)pH值调整：使用浓度为0.5～lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至5～7；(3)蛋白酶水解：向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量1％的蛋白酶，在温度50℃～60℃的条件下，酶解18～20h，使得水解液的氮游离率达到42～46％。【专利说明】一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法【
技术领域：
】[0001]本发明涉及一种蛋白酶提取工艺，尤其涉及一种采用酸酶结合法水解黄酒糟的方法。【
背景技术：
】[0002]在酿制黄酒所选的原料中，大米中蛋白质含量8%左右，黄酒酿造用曲中的原料小麦，其蛋白质含量也高达12%左右。而黄酒糟在酿造的过程中，只是用了原料中的糖分，其余的蛋白质却没有被利用，因此可以说是一种丰富的蛋白质资源。大米和小麦蛋白的生物价(BV)和蛋白质效用比(PER)在植物蛋白中几乎是最好的，可以与动物蛋白媲美。大米蛋白被公认为优质的食用蛋白，因其氨基酸组成配比合理，与FA0/WH0推荐的蛋白质氨基酸最佳配比模式相近。[0003]酸水解植物蛋白所得的产品，在欧美被称为HVP(HydrolizedVegetableprotein)0酸水解法生产调味品，起源于日本。日本味之素公司于20世纪20年代开始采用酸水解脱脂大豆，并把水解液添加到传统酱油中，提高传统酱油的风味。酸水解植物蛋白具有氨基酸含量高、鲜味浓厚、原料利用率高、生产周期短、设备投资少、价格低廉、经济效益显著等优点，因此获得了十分广泛的应用。[0004]近年来,一些企业片面追求经济效益,一味追求水解液中高氨基酸含量，水解中使用的盐酸浓度高，用量大，水解温度高，水解液未经处理，造成水解蛋白液中强致癌物氯丙醇MCP(2-氣-1，3-丙二醇,3-氣-1,2-丙二醇)和DCP(1,3-二氣-2-丙醇，2,3-二氣_1-丙醇)超标。[0005]采用高酸、高温水解，水解时往往生成较多的类黑精,水解液颜色较深,水解副产物也较多。蛋白酶酶解，水解条件温和，不生成色素，水解液颜色浅，且风味蛋白酶可以有效降低苦为物质的释放，无氯丙醇产生。【
发明内容】[0006]针对现有技术的不足，本发明提供一种解决上述问题的酸酶结合法水解黄酒糟的方法。[0007]本发明为实现上述目的而采用的技术方案为:[0008]一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0009](I)烯酸水解[0010]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度80°C~90°C的条件下，酸解5~7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0011]⑵pH值调整[0012]使用浓度为0.5~lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至5~7；[0013](3)蛋白酶水解[0014]向步骤⑵中加入占步骤⑵总重量1%的蛋白酶，在温度50°C~60°C的条件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游离率达到42~46%。[0015]所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0016]⑴烯酸水解[0017]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水分，定容100mL;在温度85°C的条件下，酸解6h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0018]⑵pH值调整[0019]使用浓度为lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6.5；[0020](3)蛋白酶水解[0021]向步骤⑵中加入占步骤⑵总重量I%的蛋白酶，在温度55°C的条件下，酶解18h,使得水解液的氮游离率达到44.9%。[0022]所述步骤(3)中的蛋白酶，，其为风味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种与风味蛋白酶的组合，或者三者组合。[0023]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0024](31)胰蛋白酶的制备[0025](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入5~7倍体积的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0026](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0027](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到50~80%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至4.0~5.5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固体硫酸铵,抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0028]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0029]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。[0030]所述的步骤(332)中采用的超滤膜为3k~IOk的超滤膜。[0031]本发明的有益效果为:[0032]1、酸梅结合法水解黄酒糟，由于酸浓度低，水解液颜色浅；水解中使用的风味蛋白酶有效的减少了苦味物质的释放，因此不需要进行脱苦脱色处理。[0033]2、本发明采用酸酶法水解进行蛋白提取，其中酸采用烯酸，所以条件温和、副反应少、不会带来或产生有害物质，因而可保留营养成分。[0034]3、本发明合理对烯酸水解的水解温度、时间、酸浓度、以及料液比进行限定，以及对蛋白酶水解的温度、时间、用量进行限定，得出了最佳的用料，节省了原材料的同时，得到最佳的提取率。【具体实施方式】[0035]实施例1:[0036]本发明提供的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0037](I)烯酸水解[0038]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度80°C~90°C的条件下，酸解5~7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0039](4)pH值调整[0040]使用浓度为0.5~lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至5~7；[0041](5)蛋白酶水解[0042]向步骤⑵中加入占步骤⑵总重量1%的蛋白酶，在温度50°C~60°C的条件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游离率达到42~46%。[0043]所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0044](I)烯酸水解[0045]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水分，定容100mL;在温度85°C的条件下，酸解6h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0046](2)pH值调整[0047]使用浓度为lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6.5；[0048](3)蛋白酶水解[0049]向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量I%的蛋白酶，在温度55°C的条件下，酶解18h,使得水解液的氮游离率达到44.9%。[0050]所述步骤(3)中的蛋白酶，，其为风味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种与风味蛋白酶的组合，或者三者组合。[0051]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0052](31)胰蛋白酶的制备[0053](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入5~7倍体积的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0054](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0055](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到50~80%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至4.0~5.5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固体硫酸铵,抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0056]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0057]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。[0058]所述的步骤(332)中采用的超滤膜为3k~IOk的超滤膜。[0059]实施例2:[0060]本实施例提供的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其与实施例1基本相同，其不同之处在于:[0061]一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0062](I)烯酸水解[0063]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度83°C的条件下，酸解5h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0064](6)pH值调整[0065]使用浓度为0.7mol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6；[0066](7)蛋白酶水解[0067]向步骤⑵中加入占步骤⑵总重量I%的蛋白酶，在温度55°C的条件下，酶解19h,使得水解液的氮游离率达到45%。[0068]所述步骤(3)中的蛋白酶，，其为风味蛋白酶。[0069]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0070](31)胰蛋白酶的制备[0071](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入6倍体积的三氯乙酸提取液，提取IOh;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0072](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0073](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到70%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节PH值至3，在溶液中加入固体硫酸铵，抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0074]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0075]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。所述的步骤(332)中采用的超滤膜为5k的超滤膜。[0076]实施例3:[0077]本实施例提供的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其与实施例1、2基本相同，其不同之处在于:[0078]一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0079](I)烯酸水解[0080]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度80°C~90°C的条件下，酸解5~7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0081](8)pH值调整[0082]使用浓度为0.5~lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至5~7；[0083](9)蛋白酶水解[0084]向步骤⑵中加入占步骤⑵总重量1%的蛋白酶，在温度50°C~60°C的条件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游离率达到42~46%。[0085]所述步骤(3)中的蛋白酶，，其为中性蛋白酶与风味蛋白酶的组合。[0086]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0087](31)胰蛋白酶的制备[0088](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入5倍体积的三氯乙酸提取液，提取12h;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0089](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0090](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到80%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至4.0;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节PH值至5.0，在溶液中加入固体硫酸铵，抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0091]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0092]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。[0093]所述的步骤(332)中采用的超滤膜为3k的超滤膜。[0094]实施例4:[0095]本实施例提供的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其与实施例1、2、3基本相同，其不同之处在于:[0096]一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0097](I)烯酸水解[0098]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度90°C的条件下，酸解7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0099](10)pH值调整[0100]使用浓度为lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6；[0101](11)蛋白酶水解[0102]向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量I%的蛋白酶，在温度60°C的条件下，酶解18h,使得水解液的氮游离率达到46%。[0103]所述步骤(3)中的蛋白酶，，其为胰蛋白酶与风味蛋白酶的组合。[0104]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0105](31)胰蛋白酶的制备[0106](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入7倍体积的三氯乙酸提取液，提取Ilh;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0107](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0108](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到50~80%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至5.5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节PH值至2.0，在溶液中加入固体硫酸铵，抽滤；取沉淀物，干燥，即得膜蛋白酶。[0109]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0110]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。所述的步骤(332)中采用的超滤膜为IOk的超滤膜。[0111]实施例5:[0112]一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其包括如下步骤:[0113](I)烯酸水解[0114]称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度85°C的条件下，酸解6.5h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；[0115](12)pH值调整[0116]使用浓度为0.8mol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6.2；[0117](13)蛋白酶水解[0118]向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量1%的蛋白酶，在温度56°C的条件下，酶解18.5h，使得水解液的氮游离率达到45.5%。[0119]所述步骤⑶中的蛋白酶，，其为风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶的三者组合。[0120]所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:[0121](31)胰蛋白酶的制备[0122](331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入6.5倍体积的三氯乙酸提取液，提取11.5h;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;[0123](332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A280值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；[0124](333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到65%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节PH值至3.5，在溶液中加入固体硫酸铵，抽滤；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0125]所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。[0126]所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%、40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。所述的步骤(332)中采用的超滤膜为7k的超滤膜。[0127]本发明的有益效果为:[0128]1、酸梅结合法水解黄酒糟，由于酸浓度低，水解液颜色浅；水解中使用的风味蛋白酶有效的减少了苦味物质的释放，因此不需要进行脱苦脱色处理。[0129]2、本发明采用酸酶法水解进行蛋白提取，其中酸采用烯酸，所以条件温和、副反应少、不会带来或产生有害物质，因而可保留营养成分。[0130]3、本发明合理对烯酸水解的水解温度、时间、酸浓度、以及料液比进行限定，以及对蛋白酶水解的温度、时间、用量进行限定，得出了最佳的用料，节省了原材料的同时，得到最佳的提取率。[0131]上述的实施例并不是本发明的所有的实施例，说明书记载的组份范围，均可以实现本发明。[0132]如本发明实施例所述，采用与本发明相同或相似的步骤及组分，及其所列明的范围内，所得到的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，均在本发明的保护范围之内。【权利要求】1.一种酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:其包括如下步骤:(1)烯酸水解称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水，定容至100mL;在温度80°C~90°C的条件下，酸解5~7h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；(2)pH值调整使用浓度为0.5~lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至5~7;(3)蛋白酶水解向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量1%的蛋白酶，在温度50°C~60°C的条件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游离率达到42~46%。2.根据权利要求1所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:其包括如下步骤:(1)烯酸水解称取10.0g的黄酒糟，加入浓度为4%的盐酸50ml，再加入水分，定容100mL;在温度850C的条件下，酸解6h，水解液变成黄色，黄酒糟变成糊状；(2)pH值调整使用浓度为lmol/L的NaOH溶液进行pH值的调节，使得pH值调节至6.5；(3)蛋白酶水解向步骤(2)中加入占步骤(2)总重量1%的蛋白酶，在温度55°C的条件下，酶解18h，使得水解液的氮游离率达到44.9%。3.根据权利要求1所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:所述步骤(3)中的蛋白酶，其为风味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种与风味蛋白酶的组合，或者三者组合。4.根据权利要求1所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:所述的步骤(3)，其还包括如下步骤:(31)膜蛋白酶的制备(331)取动物胰脏，进行组织破碎，加入5~7倍体积的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的样品进行离心，收集上清液体；再加入盐析沉淀剂进行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即为粗酶原I;(332)用磷酸缓冲液溶解粗酶原I，用超滤膜超滤，从超滤开始随时监测透过液A28tl值，至A28(i〈0.5时停止超滤，浓缩样品至提取剂体积的1/10左右，得到粗酶原II；(333)滤液中加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到50~80%，静置，过滤，留取滤饼；所得滤饼加水溶解，加入饱和硫酸铵溶液，调节PH值至4.0~5.5;溶液静置至有针状糜蛋白酶结晶析出；离心，调节pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固体硫酸铵,抽滤；取沉淀物,干燥，即得胰蛋白酶。5.根据权利要求4所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:所述的步骤(331)中的盐析沉淀剂，其为溶解度超过200g/L的无机盐，或pH〈3的酸。6.根据权利要求4所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:所述的步骤(331)为采用盐析沉淀剂，进行分级沉淀处理，该分级沉淀处理为在上清液中依序加入20%,40%浓度的盐析沉淀剂进行分级沉淀。7.根据权利要求4所述的酸酶结合法水解黄酒糟的方法，其特征在于:所述的步骤(332)中采用的超滤膜为3k~IOk的超滤膜。【文档编号】C07K1/12GK103966296SQ201410149246【公开日】2014年8月6日申请日期:2014年4月14日优先权日:2014年4月14日【发明者】雷泉申请人:雷泉