罗汉果甜甙v的制备方法
【专利摘要】本发明属于罗汉果加工领域，具体地说是一种罗汉果甜甙V的制备方法。该制备方法利用成熟罗汉果鲜果为起始原料，经破碎、提取、澄清除杂、过滤、大孔吸附树脂吸附、洗脱、二次离子交换树脂吸附、浓缩、干燥、乙醇精制得到罗汉果甜甙V，在提取中采用无毒乙醇代替传统甲醇，在提取过程中引入新型天然中药澄清剂去除果胶、纤维、蛋白质等杂质，在洗脱过程中采用两种不同的吸附树脂吸附。本发明利用乙醇代替传统甲醇，减少了溶剂对人体健康的危害程度，经过澄清剂除杂、两次上柱吸附提纯后产品纯度提高至97%以上。
【专利说明】罗汉果甜Wt V的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于罗汉果加工领域，具体地说是一种罗汉果甜甙V的制备方法。
【背景技术】
[0002]罗汉果为多年生蔓植物，主要栽培在中国的广西北部。其干燥果实为椭圆或圆形，外壳棕褐色或烟熏色并有大量细小黑色细毛。在中国人们利用其甜味和作为中药已有数世纪的历史。在加工后，罗汉果可作为治疗感冒和润肺的药物。现代罗汉果一般被当做果汁饮料或饮料中的低热甜味剂使用或被制作成可口的饮料。目前对于罗汉果的研究与开发主要集中在甜甙上，其中罗汉果甜甙V是甜甙中主要甜味成分。甜甙的甜度为糖的300倍且热含量低。是糖尿病患者稳定且无发酵性的理想添加剂。作为一种通用的天然甜味剂是代替人工甜味剂如阿斯巴甜等得理想代替品。在饮料，烘烤食品，营养食品，低热食品或其它需要低或无碳水化合物味甜或需要低或无热量食用食品中可充分发挥其作用。烹饪或烘烤并不会影响其风味或甜度。
[0003]目前，提取罗汉果甜甙V的方法及报道很多，但都是以新鲜罗汉果为原料，通过水提酶解上柱纯化、水提薄膜浓缩提取等工艺来生产。罗汉果甜甙V的制备方法研究，如专利CN200710050255.9，公开一种高纯度罗汉果甜甙V的制备方法，其步骤如下:1)取罗汉果甜甙溶于甲醇中，过滤，得滤液；2)在所得滤液中加入丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；4)吸附好的正相硅胶柱，用低碳链酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；5)回收洗脱液中的洗脱剂，结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V，该发明需要采用价格 昂贵的正相硅胶柱，并且甜甙V的洗脱需要依托低碳链酯，使得该工艺生产成本高。如专利CN201010223923.5，公开了一种从干罗汉果中提取高含量罗汉果甜甙V的方法，提取工艺包括如下步骤:提取、浓缩、过滤、吸附、脱色、浓缩干燥得含罗汉果甜甙V产品，其在提取步骤中采用乙醇为溶剂，但该发明并未对提取过程中进行除杂，得到的产品中存在纤维、蛋白、果胶一类的杂质，产品纯度不高。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有罗汉果甜甙V提取工艺存在提取除杂难、浸取有机溶液甲醇有毒，设备利用率低、产品纯度低、生产成本高等问题，提供一种罗汉果甜甙V的制备方法。
[0005]本发明的方案是通过这样实现的:一种罗汉果甜甙V的制备方法，选取新鲜无霉烂的成熟罗汉果，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=2~8L:1kg，提取时间为31小时，得到提取液。
[0006]步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05、.1kg:1L，搅拌均匀后，静置25~40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液。
[0007]步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度1.5^2米，提取溶液吸附流速l-4BV/hr，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.3^0.6L: 1L，收集洗脱液I。
[0008]步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.1~0.4L: 1L，收集洗脱液II。
[0009]步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为30(T800rpm、温度为3(T37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
[0010]作为本发明的进一步限定，所述的提取步骤中采用回流提取时，回流提取分2~3次进行，每次2小时；所述的提取剂为40-80%的乙醇水溶液、纯水中任一种。
[0011]作为本发明的进一步限定，所述的澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为乙醇或水溶液中的任一种。
[0012]作为本发明的进一步限定，所述的步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%。
[0013]作为本发明的完整方案，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂60%乙醇水溶液回流提取破碎后的罗汉果3次，提取剂与罗汉果的比例=6L:1kg，每次提取时间为2.5小时，得到提取液。
[0014]步骤2)澄清 除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05、.1kg:1L，搅拌均匀后，静置25~40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液。
[0015]步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度2米，提取溶液吸附流速2.5BV/hr,吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.5L:1L，收集洗脱液I。
[0016]步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.2L: 1L，收集洗脱液II。
[0017]步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为500rpm、温度为37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量(10%,再用60%乙醇水溶液完全溶解甜甙V后过滤除去沉淀，再浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，得到甜甙V产品。
[0018]本发明实现的技术原理是:利用成熟罗汉果鲜果为起始原料，经破碎、提取、澄清除杂、过滤、大孔吸附树脂吸附、洗脱、二次离子交换树脂吸附、浓缩、干燥、乙醇精制得到罗汉果甜甙V，在提取中采用无毒乙醇代替传统甲醇，减少有机溶剂对工人的伤害，并在提取过程中引入新型天然中药澄清剂，有效去除果胶、纤维、蛋白质等杂质，在洗脱过程中采用两种不同的吸附树脂吸附，提高了产品的纯度。
[0019]本发明具备以下良好效果:
(I)本发明在提取液中加入新型天然中药澄清剂，絮凝沉淀除去了提取液中的果胶、纤维、蛋白质等杂质，使提取纯化得到了纯化，解决了该产品提取液过滤技术的难题，提高了设备使用率，降低了设备使用成本、缩短了过滤时间同时使提取液中的大部分杂质得到有效去除。
[0020](2)通过不同吸附树脂的吸附及不同洗脱液的两次不同吸附柱层析洗脱，使产品的纯度得到大幅度提高，纯度达到97%以上。[0021](3)本发明采用乙醇代替甲醇进行精制，减少了有机溶剂对人体健康的危害程度。
【专利附图】
【附图说明】
图1是本发明制备方法流程图。
【具体实施方式】
[0022]以下结合实施例和附图描述本发明一种罗汉果甜甙V的制备方法，这些描述并不是对本
【发明内容】
作进一步的限定。
[0023]实施例1
一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=8L:1kg，提取时间为5小时，得到提取液；
步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.1kg:1L，搅拌均匀后，静置40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度1.8米，提取溶液吸附流速4BV/hr，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.5L:1L，收集洗 脱液I ；
步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.3L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为600rpm、温度为37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%,再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
[0024]提取步骤中采用回流提取时，回流提取分3次进行，每次2小时；所述的提取剂为80%的乙醇水溶液。
[0025]澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为乙醇。
[0026]步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%。
[0027]本实施例得到产品纯度达97.5%。
[0028]实施例2
一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=2L:1kg，提取时间为8小时，得到提取液；
步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05kg:1L，搅拌均匀后，静置25min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度2米，提取溶液吸附流速3BV/hr，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.3L:1L，收集洗脱液I ;
步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.1L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为300rpm、温度为30°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
[0029]提取步骤中采用回流提取时，回流提取分2次进行，每次2小时；所述的提取剂为40%的乙醇水溶液。
[0030]澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为乙醇。
[0031]步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%。
[0032]本实施例得到产品纯度达98.5%。
[0033]实施例3 一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=6L:1kg，提取时间为3小时，得到提取液；
步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.08kg:1L，搅拌均匀后，静置25min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度1.5米，提取溶液吸附流速lBV/hr，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.3L:1L，收集洗脱液I ;
步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.1L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为300rpm、温度为35°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
[0034]提取步骤中采用回流提取时，回流提取分3次进行，每次2小时；所述的提取剂为60%的乙醇水溶液。
[0035]澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为水溶液。
[0036]步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%。
[0037]本实施例得到产品纯度达98.2%。
[0038]实施例4
一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=4L:1kg，提取时间为5小时，得到提取液；
步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05kg:1L，搅拌均匀后，静置25~40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度1.6米，提取溶液吸附流速2.5BV/hr,吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.45L:1L，收集洗脱液I ；
步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.25L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为600rpm、温度为30°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%,再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
[0039]提取步骤中采用回流提取时，回流提取分3次进行，每次2小时；所述的提取剂为纯水。
[0040]澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为乙醇。
[0041]步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%。
[0042]本实施例得到 产品纯度达97.8%。
[0043]实施例5
一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂60%乙醇水溶液回流提取破碎后的罗汉果3次，提取剂与罗汉果的比例=6L:1kg，每次提取时间为2.5小时，得到提取液；步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05kg:1L，搅拌均匀后，静置25min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度2米，提取溶液吸附流速2.5BV/hr,吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.5L:1L，收集洗脱液I ；
步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.2L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为500rpm、温度为37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，再用60%乙醇水溶液完全溶解甜甙V后过滤除去沉淀，再浓缩干燥至甜甙V产品含水量(10%，得到甜甙V产品。
[0044]本实施例得到产品纯度达98.9%。
[0045]实施例6
一种罗汉果甜甙V的制备方法，该方法步骤包括:
步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂60%乙醇水溶液回流提取破碎后的罗汉果3次，提取剂与罗汉果的比例=6L:1kg，每次提取时间为2.5小时，得到提取液；步骤2)澄清除杂:在步骤I)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.1kg:1L，搅拌均匀后，静置40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液；
步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度2米，提取溶液吸附流速2.5BV/hr,吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.5L:1L，收集洗脱液I ；步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.2L:1L，收集洗脱液II ；
步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为500rpm、温度为37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量< 10%，再用60%乙醇水溶液完全溶解甜甙V后过滤除去沉淀，再浓缩干燥至甜甙V产品含水量(10%，得到甜甙V产品。
[0046]本发明上述实施例方案仅是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求中指出了本发明产品组成成分、成分比例、制备方法参数的范围，而上述的说明并未指出本发明参数的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应当认为是包括在权利要求书的范围内。
[0047]本发明是经过多位罗汉果甜甙V的制备方法的研究人员长期工作经验积累，并通过创造性劳动创作而出 ，产品纯度达97%以上。
【权利要求】
1.一种罗汉果甜甙V的制备方法，其特征在于，该方法步骤包括: 步骤1)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂逆流提取或回流提取破碎后的罗汉果，提取剂与罗汉果的比例=2~8L:1kg，提取时间为31小时，得到提取液； 步骤2)澄清除杂:在步骤1)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05、.1kg:1L，搅拌均匀后，静置25~40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液； 步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度1.5^2米，提取溶液吸附流速l_4BV/hr，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.3^0.6L: 1L，收集洗脱液I ; 步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.f0.4L:lL，收集洗脱液II ； 步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为30(T800rpm、温度为3(T37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%，再经过乙醇精制，得到甜甙V产品。
2.根据权利要求1所述的罗汉果甜甙V的制备方法，其特征在于，所述的提取步骤中采用回流提取时，回流提取分2~3次进行，每次2小时；所述的提取剂为40-80%的乙醇水溶液、纯水中任一种。
3.根据权利1~2任一项所述的罗汉果甜甙V的制备方法，其特征在于，所述的澄清除杂步骤中的澄清剂为天然中药澄清剂KBT-ZTC ;所述步骤3)和4)中用到的洗脱剂为乙醇或水溶液中的任一种。
4.根据权利要求3所述的罗汉果甜甙V的制备方法，其特征在于，所述的步骤5)中的乙醇精制为利用乙醇完全溶解干燥后得到的甜甙V，过滤除去沉淀物，再次浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%。
5.根据权利要求1所述的罗汉果甜甙V的制备方法，其特征在于，该方法步骤包括: 步骤I)提取:取成熟罗汉鲜果进行破碎，用提取溶剂60%乙醇水溶液回流提取破碎后的罗汉果3次，提取剂与罗汉果的比例=6L:1kg，每次提取时间为2.5小时，得到提取液；步骤2)澄清除杂:在步骤1)得到的提取液中加入澄清剂，澄清剂与提取液的比例=0.05、.1kg:1L，搅拌均匀后，静置25~40min，过滤除去沉淀，得到除杂后的溶液； 步骤3)上柱吸附:将步骤2)得到除杂后的溶液通过大孔吸附树脂吸附，树脂装填高度2米，提取溶液吸附流速2.5BV/hr,吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.5L:1L，收集洗脱液I ； 步骤4) 二次上柱吸附:将步骤3)得到的洗脱液I通过离子交换树脂吸附，吸附完成后用洗脱溶剂洗脱，洗脱剂与提取溶液比例=0.2L:1L，收集洗脱液II ； 步骤5)浓缩干燥精制:将步骤4)得到的洗脱液II采用真空离心浓缩干燥，在抽真空的情况下，离心速度为500rpm、温度为37°C的条件下，浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%，再用60%乙醇水溶液完全溶解甜甙V后过滤除去沉淀，再浓缩干燥至甜甙V产品含水量≤10%，得到甜甙V产品。
【文档编号】C07J17/00GK103980335SQ201410192274
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月8日 优先权日:2014年5月8日
【发明者】徐大鹏 申请人:徐大鹏