用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法
【专利摘要】本发明提供了一种用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法,其步骤是将地黄根用10倍量的水超声提取或水煎煮提取3次，每次1小时，提取液减压浓缩成浸膏，浸膏溶解后上活性炭色谱柱，先以重蒸水、5%乙醇溶液、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱除去单糖、二糖及四糖，再以15%乙醇溶液洗脱4-5倍柱体积，收集15%乙醇洗脱液，减压冷冻干燥或减压低温加热干燥15%乙醇洗脱液，即得甘露三糖单体。本发明简单快速，具有分离效率高、环保、经济等优点，解决了现有技术问题。用活性炭色谱柱分离、重蒸水和不同浓度乙醇梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体成分的纯度达99%，提取率达到3.2%（g/g）。
【专利说明】用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从玄参科植物地黄中分离纯化制备甘露三糖单体的方法，即利用 活性炭柱色谱法从地黄中分离纯化制备高纯度的甘露三糖单体的方法。
【背景技术】
[0002] 地黄为玄参科植物地黄Wwiifliosa Libosch.)的新鲜或干燥块根。地 黄是我国常用的大宗中药，2010版《中国药典》收载的90多种成方制剂中有地黄，占收载 成方制剂三分之一，如经典名方"六味地黄丸"、"金匮肾气丸"等。
[0003] 现代研究表明地黄中含有复杂的化学成分，包括糖类、环烯醚萜苷类、苯乙醇苷 类、紫罗兰酮类、黄酮类、地黄脑苷类、留乙醇类、氨基酸类等近百种，其中含量最高的是糖 类成分。现代药理研究表明，地黄中的药效物质基础之一甘露三糖具有促进造血细胞的增 殖、提高免疫力、降血糖等作用。
[0004] 地黄市场需求量一直很大，市场行情上涨，但是《中国药典》目前不能有效地质控 地黄，为了有效地保证地黄质量，必须进一步明确地黄的活性成分，得到不同成分单体。
[0005] 1971年Tomoda等采用鲜地黄，用热乙醇和热水提取，以阳离子交换树脂和阴离子 交换树脂交换得到中性部分，水苏糖含量达到64. 9 %，但没有得到甘露三糖单体的报道。
[0006] 目前文献报道，地黄中甘露三糖的分离纯化方法有水提醇析法、水苏糖水解反应 法、酶催化水解反应法。
[0007] 水提醇析法：加4倍水，沸水浸提6 h，提取2次，将水提液进行70 %醇析处理 后水苏糖的含量大大降低，有利于甘露三糖的分离，为甘露三糖的精制提供了有效的工 艺参数。（郭威，温学森，王少云，赵宇."地黄中活性成分甘露三糖提取工艺研究"，ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI, 2007, 21 (6) :32-35) 水苏糖水解反应法：先用鲜地黄制备得到水苏糖，在PH2. 5、90 °C和24 h条件下，水苏 糖水解成为甘露三糖，90. 63 %的水苏糖可以水解。水苏糖降解生成三糖的方式有两种：一 是生成半乳糖和棉子糖，二是生成果糖和甘露三糖。（武卫红，温学森，赵宇."甘露三糖的 制备及其工艺优化"，中药材，2007,30 (7):848-853)。
[0008] 酶催化水解反应法：使用β -D-呋喃糖苷酶水解水苏糖，得到白色粉末状的甘露 三糖，酶催化水解反应具有专属性高，条件温和，但需严格控制pH条件、酶的纯度，否则无 法得到纯度很高的单体。（TomodaM, et al. Water soluble constituents of Rehmanniae Radix, Cabohydrates and acids of Rehmannia glutinosa， hueingensis. Cheml Pharml Bull，1971，19 ( 7) :1455 ;姚新生，等·天然药物化学·北京：人民卫生出版社，2001: 831) 综观上述，从地黄中直接分离制备甘露三糖单体难度大，存在制备繁琐、甘露三糖单体 纯度低等问题。如何快速、高效从地黄药材中分离纯化得到甘露三糖单体成分是目前地黄 研究热点。
【发明内容】
[0009] 为此，本发明另僻蹊径，其目的旨在提供一种用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露 三糖单体的 方法。该方法具有简便、快速、低成本的特点。
[0010] 本发明的目的可以通过以下技术方案来实现： 一种用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法，包括如下步骤： (1) 称取地黄根，清洗干净，粉碎； (2) 用干净地黄根量的10倍量的水超声提取或水煎煮提取，每次1 h，合并所得药液，滤 过； (3) 滤液减压浓缩干燥，得干浸膏； (4) 活性炭做为色谱柱固定相，取活性炭用水拌匀，湿法装柱，所用柱内径为3. 5 cm， 柱长40 cm ; (5) 称取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常压下在1- 6 ml/min的流速下上活性炭色谱 柱，色谱柱中活性炭的重量为浸膏重量的1 -12倍； (6) 待上样完毕，在3- 8 ml/min的流速下，先用重蒸水冲洗至无色，再用5 %、10 %、20 %、 15 %乙醇梯度洗脱4倍-5倍量柱体积，收集15 %乙醇流份； (7) 将15 %乙醇洗脱溶液在压力-5. 7 MPa，温度-70 °C减压冷冻干燥；或压力为，温度 30 °C，减压低温加热干燥得甘露三糖单体产品。
[0011] 甘露三糖单体分子结构式为：
【权利要求】
1. 一种用活性炭梯度洗脱从地黄提取甘露三糖单体的方法，包括如下步骤： a. 称取地黄根，清洗干净，粉碎； b. 用干净地黄根量的10倍量的水超声提取或水煎煮提取，每次1 h，合并所得药液，滤 过； c. 滤液减压浓缩干燥，得干浸膏； d. 活性炭做为色谱柱固定相，取活性炭用水拌匀，湿法装柱，所用柱内径为3. 5 cm， 柱长40 cm ; e. 称取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常压下在1- 6 ml/min的流速下上活性炭色谱 柱，色谱柱中活性炭的重量为浸膏重量的1 -12倍； f. 待上样完毕，在3- 8 ml/min的流速下，先用重蒸水冲洗至无色，再用5 %、10 %、20 %、 15 %乙醇梯度洗脱4倍-5倍量柱体积，收集15 %乙醇流份； g. 将15 %乙醇洗脱溶液在压力-5. 7 MPa，温度-70 °C减压冷冻干燥；或压力为-0· 070 MPa，温度30 °C，减压低温加热干燥得甘露三糖单体产品。
【文档编号】C07H1/08GK104059111SQ201410209371
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年5月19日 优先权日:2014年5月19日
【发明者】邱建国, 李茂星, 贾正平, 张汝学, 张泉龙 申请人:邱建国, 李茂星, 贾正平